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CAPÍTULO I INTRODUCCIÓN AL ANÁLISIS INSTRUMENTAL - Sergio R PDF
CAPÍTULO I INTRODUCCIÓN AL ANÁLISIS INSTRUMENTAL - Sergio R PDF
CAPÍTULO I
INTRODUCCIÓN AL
ANÁLISIS
INSTRUMENTAL
1. Métodos clásicos
En los primeros años de la química, la mayor parte de los análisis se realizaban separando
los componentes de interés de una muestra (los analitos) mediante precipitación, extracción o
destilación.
En los análisis cualitativos, los componentes separados se tratan seguidamente con
reactivos originando así productos que podían identificarse por sus colores, sus puntos de
ebullición o de fusión, sus solubilidades en una serie de disolventes, sus olores, sus actividades
ópticas o sus índices de refracción. En los análisis cuantitativos, la cantidad de analito se
determina por medidas gravimétricas o volumétricas. En las primeras se determina la masa del
analito o la de algún compuesto producido a partir del mismo. En los procedimientos volumétricos
se determina el volumen o el peso de un reactivo estándar que reacciona completamente con el
analito.
Estos métodos clásicos para la separación y determinación de analitos se usan en muchos
laboratorios. Sin embargo, su grado de aplicación general está disminuyendo con el paso del
tiempo.
2. Métodos instrumentales
A mediados de los años treinta, o algo antes, los químicos empezaron a explotar otros
fenómenos distintos de los ya descritos, para la resolución de los problemas analíticos. Así, para
el análisis cuantitativo de una gran variedad de sustancias inorgánicas, orgánicas y bioquímicas
se empezaron a utilizar mediciones de las propiedades físicas de los analitos -tales como
conductividad, potencial de electrodo, absorción o emisión de la luz, razón masa a carga y
fluorescencia. Además, algunas técnicas de separación cromatográficas muy eficaces
empezaron a reemplazar a la destilación, extracción y precipitación en la separación de mezclas
complejas como etapa previa a su determinación cualitativa o cuantitativa. A estos métodos más
modernos para separar y determinar especies químicas se les conoce, en conjunto, como
métodos instrumentales de análisis. .
Muchos de los fenómenos en los que se basan los métodos instrumentales se conocen
desde hace más de un siglo. Sin embargo su aplicación por la mayor parte de los químicos se
retrasó por falta de una instrumentación sencilla y fiable. De hecho, el crecimiento de los métodos
instrumentales modernos ha ido paralelo al desarrollo de las industrias electrónica e informática.
señales analíticas que se suelen utilizar en el análisis instrumental. Obsérvese que las seis
primeras están relacionadas con la radiación electromagnética. En la primera, el analito origina la
señal radiante; las cinco restantes implican cambios en el haz de radiación producidos a su paso
por la muestra. Las cuatro siguientes son eléctricas. Por último, cuatro señales diversas se
agrupan conjuntamente. Estas son la razón masa a carga, la velocidad de reacción, las señales
térmicas y la radiactividad.
La segunda columna de la Tabla 1-1 indica los nombres de los métodos instrumentales
basados en las distintas señales analíticas. Debería entenderse que excepto en la cronología,
pocas peculiaridades distinguen a los métodos instrumentales de sus equivalentes clásicos.
Algunas técnicas instrumentales son más sensibles que las técnicas clásicas, pero otras no. Un
método instrumental puede ser más selectivo para ciertas clases de elementos o de compuestos;
para otros, un planteamiento gravimétrico o volumétrico puede suponer una menor interferencia.
Igualmente difíciles de establecer son las generalizaciones basadas en la exactitud, la
conveniencia, o el tiempo empleados. Tampoco es necesariamente cierto que los procedimientos
instrumentales utilicen aparatos más sofisticados o más costosos; en realidad, la moderna balanza
analítica electrónica que se emplea en las determinaciones gravimétricas supone un instrumento
más complejo y refinado que muchos de los usados en los otros métodos mencionados en la
Tabla 1-1.
Como ya se ha comentado anteriormente, además de los numerosos métodos indicados
en la segunda columna de la Tabla 1-1, existe un grupo de procedimientos instrumentales que se
utilizan para separar y resolver compuestos estrechamente relacionados. La mayoría de estos
procedimientos se basan en la cromatografía. Para completar el análisis tras las separaciones
cromatográficas se suele usar alguna de las señales de la Tabla 1-1. Con esta finalidad se han
utilizado la conductividad térmica, la absorción infrarroja y ultravioleta, el índice de refracción y la
conductancia eléctrica.
Métodos cinéticos
Propiedades térmicas Conductividad térmica y métodos de entalpía
Radiactividad Métodos de activación y de dilución isotópica
En un sentido muy amplio, un instrumento para el análisis químico convierte una señal
analítica que no suele ser detectable ni comprensible directamente por un ser humano, en una
forma que sí lo es. Así, un instrumento analítico puede considerarse como un dispositivo de
comunicación entre el sistema en estudio y el científico.
Un instrumento para el análisis químico suele estar constituido como máximo por cuatro
componentes fundamentales. Como se muestra en la Figura 1-1, estos componentes son un
generador de señales, un transductor de entrada (denominado detector), un procesador de la
señal y un transductor de salida o dispositivo de lectura. A continuación se da una descripción
general de estos componentes.
1. Generadores de señales
Un generador de señales produce una señal que denota la presencia y, con frecuencia
también. la concentración del analito. En muchos casos, el generador de señales es simplemente
un compuesto o un ión generado a partir del propio analito. Por ejemplo un análisis por emisión
atómica, el generador de señales son los átomos excitados o los iones del analito que emiten
fotones de radiación. Otro ejemplo en una determinación de pH, la señal es la actividad del ión
hidrógeno de una disolución de la muestra. Sin embargo, en muchos otros instrumentos el
generador de la señal está considerablemente más elaborado. Así, el generador de señales de un
instrumento de análisis por absorción infrarroja incluye, además de la muestra, una fuente de
radiación infrarroja, un monocromador, un divisor y un cortador (chop- per) del haz, un atenuador
de la radiación y un recipiente de muestra.
La segunda columna de la Tabla 1-2 lista unos pocos ejemplos típicos de generadores de
señales.
3. Procesadores de señales
El procesador de señales modifica la señal transducida procedente del detector de tal
forma que se adecue al funcionamiento del dispositivo de lectura.
Una señal puede definirse como la salida de un transductor respondiendo al sistema
químico de interés. La señal puede dividirse en dos partes, una causada por el (los) analito (s) y
la otra por los componentes de la matriz de la muestra, y por la instrumentación analizada en la
medición. Esta última parte de la señal se conoce como ruido.
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Aunque la capacidad para separar las señales - que contienen datos significativos- del
ruido sin sentido siempre ha sido una propiedad deseable en cualquier instrumento, con la
demanda creciente de mediciones más sensibles se ha convertido en algo indispensable. La
cantidad de ruido presente en un sistema instrumental determina la concentración de analito más
pequeña que puede medirse con exactitud, y también fija la precisión de la medición a
concentraciones más grandes.
Los dos métodos principales de acentuación de la señal son 1) el uso de dispositivos
electrónicos, tales como filtros para reducir el ruido; la amplificación (un proceso en el cual la señal
se multiplica por una constante mayor que la unidad); se atenúan (proceso en el cual la señal se
multiplica por una constante menor que uno); se integran, se derivan ó se aumentan
exponencialmente; o algoritmos de programas computacionales equivalentes para procesar
señales a partir de la medición mientras pasan a través del instrumento, y 2) el tratamiento
matemático de los datos, posterior a la medición. Entre los métodos posteriores a la medición más
útiles están las técnicas estadísticas; a demás de la acentuación de la señal, estas técnicas
ayudan a identificar las fuentes de error y a determinar la precisión, a la vez que proporcionan un
método de comparación objetiva de los resultados.
4. Dispositivos de lectura
Un dispositivo de lectura es un transductor que convierte una señal procesada en una
señal que puede ser entendida por un observador humano. Por lo general, la señal transducida
toma la forma de la posición de una aguja en un medidor de escala, de una salida de un tubo de
rayos catódicos, de un trazo en un registrador de papel, de una serie de números en una pantalla
digital, o del ennegrecimiento de una placa fotográfica. En algunas ocasiones, el dispositivo de
lectura da directamente la concentración de analito.
importantes porque algunos de los métodos analíticos de la Tabla 1-1 se aplican a disoluciones
(normalmente acuosas) del analito. Otros se aplican con mayor facilidad a muestras gaseosas,
mientras que unos terceros son adecuados para el análisis directo de sólidos.
Desde un punto de vista económico, una consideración importante es el número de
muestras que se tienen que analizar (pregunta 6). Si este número es elevado, se puede invertir
una cantidad considerable de tiempo y dinero en la instrumentación, en el desarrollo del método y
en la calibración. Además, si el número fuera muy elevado, debería elegirse un método que
precisara del mínimo tiempo de operador por muestra. Por otro lado, si sólo se tienen que analizar
unas pocas muestras, la elección prudente suele ser la de un método más sencillo aunque sea
más largo pero que requiera poco o ningún trabajo preliminar.
Teniendo en cuenta las respuestas a las seis cuestiones anteriores, puede escogerse un
método -siempre que se conozcan las características de funcionamiento de los distintos métodos
instrumentales indicados en la Tabla 1-1.
A. PrecisióN: La precisión de los datos analíticos se define como el grado de concordancia mutua
entre los datos que se han obtenido de una misma forma. La precisión mide el error aleatorio, o
indeterminado, de un análisis. Los parámetros de calidad de la precisión son la desviación
estándar absoluta, la desviación estándar relativa, la desviación estándar relativa de la media, el
coeficiente de variación y la varianza.
Las pendientes de las curvas de calibración se usan para determinar los valores de
sensibilidad (fig. 1.2 y 1.3) Usualmente es deseable maximizar el valor de la sensibilidad, a
menos que se quiera extender el intervalo de la respuesta del instrumento sin diluir la muestra.
La Fig. 2.1 muestra una respuesta lineal (sensibilidad constante) en todo el intervalo de
concentraciones medidas, para las sustancias A y B. De las pendientes de las curvas se ve que la
sensibilidad del método es mucho mayor para la sustancia B que para la A. La respuesta no lineal
en la Fig. 2.2 indica un cambio en el valor de la sensibilidad como función de la concentración. Las
mediciones de sustancia C, como función de la concentración, se van haciendo menos sensibles.
La sensibilidad también puede expresarse como la concentración del analito necesaria para
causar una respuesta dada en el instrumento.
D. Límite de detección: La definición cualitativa más aceptada del límite de detección viene dada
por la concentración o el peso mínimos de analito que pueden detectarse para un nivel de
confianza dado. Este límite depende de la relación entre la magnitud de la señal analítica y el valor
de las fluctuaciones estadísticas de la señal del blanco.
E. Intervalo de concentración aplicable: La Figura 1.4 ilustra la definición del intervalo útil de un
método analítico, que va desde la concentración más pequeña con la que pueden realizarse
medidas cuantitativas (límite de cuantificación, LOQ) hasta la concentración a la que la curva de
calibrado se desvía de la linealidad (límite de linealidad, LOL).
Figura 1.4 intervalo útil de un método analítico LOD = límite de detección LOG = límite de
cuantificación LOL =límite de respuesta lineal
F. Selectividad: La selectividad de un método analítico denota el grado de ausencia de
interferencias debidas a otras especies contenidas en la matriz de la muestra.
Desafortunadamente, ningún método analítico está totalmente inafectado por otras especies y,
con frecuencia, diversas etapas se deben realizar para minimizar los efectos de estas
interferencias.
Para un problema analítico dado, los parámetros de calidad permiten al químico reducir la
elección de los instrumentos a tan sólo unos pocos. La selección entre éstos puede entonces
basarse en los criterios cualitativos de funcionamiento señalados en la Tabla 1-4.
1. Velocidad
2. Facilidad y comodidad
3. Habilidad del operador
4. Coste y disponibilidad del equipo
5. Coste por muestra
EVALUACIÓN DE RESULTADOS
El control de las variables experimentales es usualmente difícil y a menudo imposible. Los
métodos de muestreo, las técnicas de los analistas y las respuestas instrumentales, son las
fuentes potenciales de error. Los métodos estadísticos proporcionan un medio de evaluar,
objetivamente, la fuente y la magnitud del error en los métodos analíticos. La frase común, dentro
del error experimental, carece de sentido si la magnitud del error no es definida mediante el uso
de técnicas estadísticas.
TIPOS DE ERRORES
Para obtener resultados confiables a partir de un método analítico, deben identificarse las
fuentes de error y cada una de ellas debe eliminarse o minimizarse. Los errores pueden ser
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En el análisis cuantitativo es muy raro tener la certeza de que se cumple la ley de Beer, por
lo cual no es justificable utilizar un solo patrón para determinar la absortividad molar, y menos aún
que los resultados se basen en los datos de absortividad molar tomados de la literatura.
En la mayoría de los métodos espectrofotométricos se hace una calibración con el
método de los estándares externos. Un estándar externo es aquel que se analiza separadamente
de la muestra que se está ensayando. Para ello, se prepara una serie de soluciones patrón que
contienen distintas concentraciones conocidas de analito, junto a la matriz que es similar o
idéntica a la de la muestra. Luego se mide su absorbancia y se construye una curva de calibración
de absorbancia frente a concentración.
Los estándares externos pueden usarse para calibrar un procedimiento de medida; cuando
los componentes de la matriz, incluyendo los reactivos que se requieren en el preparado, no
causan interferencias. También pueden usarse para calibrar un análisis en el cual se tiene
suficiente control sobre las condiciones como para que la contribución producida por los
interferentes sobre las medidas puedan mantenerse constantes; así puede realizarse la oportuna
corrección del error determinado por el interferente.
Muchas veces no se pueden eliminar todos los elementos interferentes durante la
preparación de la muestra. A pesar de todo, los estándares, cuidadosamente preparados,
posibilitan la evaluación de los efectos de cualquier elemento interferente y permiten corregir su
influencia sobre los resultados. De otra forma, no se podría hacer ninguna calibración.
Si varía cualquier condición o cualquiera de los pasos de la preparación, los instrumentos
deben ser recalibrados y quizás se tengan que preparar nuevos estándares externos.
Ejemplo 1.
Quiere determinarse la concentración de glucosa en una muestra que leída en el espectrofotómetro obtuvo
una Absorbancia de 0,250. Por otra parte, se prepararon una serie de soluciones patrón de glucosa cuyas
concentraciones se miden en g%mL. Las lecturas obtenidas de esta serie de estándares se presentan en la
tabla 1.
Tabla1. Lectura de soluciones estándar de glucosa de distintas concentraciones.
Una vez obtenida la Curva de calibración con los estándares externos puede determinarse la concentración
de la muestra. Se busca en la gráfica el valor de 0,250 de Absorbancia leído para el analito. Al interceptar en
la curva se puede observar que corresponde a una concentración de 125 g/100 mL de glucosa.
b) Resolución matemática:
Para trazar una recta son suficientes dos puntos, lo buscamos matemáticamente. Estos corresponden a:
- Un patrón de concentración exactamente conocida que llamaremos C p el cual tiene una absorbancia Ap.
- La muestra, de la cual del cual queremos saber su concentración C x y conocemos su absorbancia Ax,
porque la hemos leído en el espectrofotómetro.
Apliquemos la Ley de Lambert – Beer para el problema:
para el patrón: A p = a . b . Cp
para el problema: Ax = a . b . Cx
Como queremos saber la concentración de glucosa en la muestra (C x), los demás datos son conocidos, si
los substituímos:
Ejemplo 2.
Se pipetean alícuotas de 10 mL de una muestra de agua mineral en matraces aforados de 50 mL.
Se adicionan a cada uno 0; 5;10; 15 y 20 mL de una solución estándar 11,1 ppm de Fe +3, con
exceso de SCN- para dar Fe (SCN)63-. Después de diluir a 50 mL las Absorbancias para las 5
diluciones fueron: 0,240; 0,437 ; 0,621 ; 0,809 y 1,009 respectivamente. Se trabajó con un
espesor de cubeta (b) de 0,982 cm.
Calcular por los distintos métodos la concentración de Fe+3 en la muestra de agua.
Este problema aplica el método de la adición estándar que se basa en analizar la muestra
desconocida y luego adicionar a esa muestra una cantidad conocida del material que se quiere
analizar.
El aumento observado en la señal es proporcional a la cantidad conocida del material agregado, y
a partir de éste es posible calcular la cantidad de un material inicialmente presente en la
incógnita.
Tabla 2a. Absorbancias obtenidas luego de adicionar solución estándar de hierro a la muestra de
agua.
Muestra Volumen de absorbancia
estándar
10 mL 0 mL 0,240
10 mL 5 mL 0,437
10 mL 10 mL 0,621
10 mL 15 mL 0,809
10 mL 20 mL 1,009
Así se obtienen todos los valores de concentración que figuran en la tabla 2b:
Tabla 2b. Concentraciones y lecturas obtenidas luego de adicionar solución estándar de hierro a
la muestra de agua.
Muestra Volumen de Concentración Intensidad
estándar
10 mL 0 mL 0 ppm 0,240
10 mL 5 mL 5,55 ppm 0,437
10 mL 10 mL 11,1 ppm 0,621
10 mL 15 mL 16,65 ppm 0,809
10 mL 20 mL 22,2 ppm 1,009
Ax = Absorbancia de la muestra
AT = Absorbancia Total
Cx = Cs Ax . Vs Cx = concentración de la muestra.
(AT - Ax ) Vx Cs = concentración del estándar.
Vs = volúmen del estándar.
Vx = volúmen de la muestra.
b) Resolución Gráfica:
Se emplea un estándar interno para minimizar las diferencias en las propiedades físicas de un
conjunto de soluciones muestra que contiene el mismo analito. En este método, una cantidad fija
de una sustancia pura se añade tanto a las soluciones muestra como a las soluciones estándares,
se determinan luego las respuestas del analito y del estándar interno, cada una corregida por el
fondo y se calcula el cociente de las dos respuestas. Si se controlan los parámetros que afectan
las respuestas medidas, la respuesta de la línea del estándar interno será constante, puesto que
la concentración del estándar interno es fija, sin embargo si varía uno o más de los parámetros
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que afectan las respuestas medidas, dichas respuestas del analito y del estándar interno deben
ser afectadas por igual.
Por lo tanto, el cociente de respuestas (del analito al estándar interno) depende solamente de la
concentración del analito. Una gráfica de la relación o cociente de respuestas como función de la
concentración del analito, da una curva de calibración. El estándar debe añadirse al comienzo de
un análisis para permitir su disolución, mezclado y que ocurra cualquier reacción antes de efectuar
cualquier medición. Todos los equilibrios deben haberse establecido (y algunos pueden ser
dependientes del tiempo). La adición de los estándares a la muestra disuelta puede llevar a una
interpretación deficiente de los resultados si no se consideran las posibles reacciones entre la
sustancia estándar y otros componentes.
El estándar interno debe ser una sustancia similar al analito con una señal fácilmente medible
que no interfiere con la respuesta del analito, debe responder de manera similar a él, para
cualquiera de las variables que pudieran afectar la respuesta del detector. La concentración del
estándar interno tiene que ser del mismo orden de magnitud que la del analito a fin de minimizar el
error al calcular los cocientes de respuestas. Este método se usa ampliamente en los análisis por
cromatografia de gases y por absorción atómica y en menor grado, en las determinaciones
espectroscópicas de infrarrojo y de emisión.
Ejemplo 3.
Se determinó un compuesto Cx en una muestra por fotometría de llama. Se empleó el método del
estándar interno, agregando cantidades crecientes del analito C x y cantidades iguales del
estándar Cs.b Los resultados obtenidos se muestran en la tabla 3. Calcular la concentración de C x
de la muestra cuyas Intensidades fueron 33 para Cx y 9 para Cs.
Tabla 3. Absorbancias obtenidas en distintas soluciones del analito y la muestra luego de añadir
patrón interno.
Volumen Cantidades Cantidad constante Intensidad Intensidad
de muestra crecientes de Cx de patrón interno Cs de Cx de Cs
10 mL 0 ppm 1 ppm 33 9
10 mL 1 ppm 1 ppm 9 9
10 mL 2 ppm 1 ppm 14,3 9,5
10 mL 3 ppm 1 ppm 21,2 8,5
10 mL 4 ppm 1 ppm 34,4 9
2
Relación Ix/Is
0
0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5
ppm de Cx
Figura 1.6. Gráfica de los valores de relación Ix/Is vs. concentración de en ppm
GUÍA TEÓRICA
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1- Teniendo en cuenta las propiedades físicas que se pueden utilizar como señales analíticas en los
métodos instrumentales, complete el siguiente cuadro:
Propiedades físicas Método instrumental
2- Complete el siguiente cuadro teniendo en cuenta los diferentes componentes de los instrumentos.
Generador de Señal Transductor Señal Procesador
Instrumento Lectura
señal analítica de entrada transducida de señal
Fotómetro
Espectrofotó-
metro de
emisión
atómica
Coulombimetr
o
Medidor de pH
Difractómetro
de rayos X
para polvo
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Comparador
de color
Estándar interno
Adición estándar