ESPECTRO ELECTROMAGNETICO

ESPECTROFOTOMETRO UV - VISIBLE

Trujillo, 05.10.2016
 INTRODUCCION AL ANALISIS INSTRUMENTAL

La Química Analítica trata acerca de los métodos de

determinación de la composición química de la materia. Un
método cualitativo proporciona información respecto a las
especies atómicas o moleculares o a los grupos funcionales que
existen en la muestra. Un método cuantitativo, por otra parte,
suministra información numérica como, por ejemplo, la
cantidad relativa de uno o varios de estos componentes.
 TIPOS DE MÉTODOS INSTRUMENTALES

Para el estudio, es conveniente describir propiedades físicas

que puedan utilizarse como señales analíticas en el análisis
cualitativo o cuantitativo. La Tabla 1 enumera la mayoría de las
señales analíticas que se suelen utilizar en el análisis
instrumental. Obsérvese que las seis primeras están
relacionadas con la radiación electromagnética. En la primera, el
analito origina la señal radiante; las cinco restantes implican
cambios en el haz de radiación producidos a su paso por la
muestra. Las cuatro siguientes son eléctricas. Por último, cuatro
señales diversas se agrupan conjuntamente. Estas son la razón
masa a carga, la velocidad de reacción, las señales térmicas y
la radiactividad.
 TIPOS DE MÉTODOS INSTRUMENTALES

La segunda columna de la Tabla 1 indica los nombres de los

métodos instrumentales basados en las distintas señales
analíticas.

Algunas técnicas instrumentales son más sensibles que las

técnicas clásicas, pero otras no. Un método instrumental puede
ser más selectivo para ciertas clases de elementos o de
compuestos; para otros, un planteamiento gravimétrico o
volumétrico puede suponer una menor interferencia.
 TIPOS DE MÉTODOS INSTRUMENTALES
Tabla 1. Señales utilizadas en los métodos instrumentales
 INSTRUMENTOS PARA EL ANÁLISIS

En un sentido muy amplio, un instrumento para el análisis químico

convierte una señal analítica que no suele ser detectable ni comprensible
directamente por un ser humano, en una forma que sí lo es. Así, un
instrumento analítico puede considerarse como un dispositivo de
comunicación entre el sistema en estudio y el científico.

Un instrumento para el análisis químico suele estar constituido como

máximo por las siguientes componentes fundamentales. Como se
muestra en la Figura 1, estos componentes son un generador de señales,
un transductor de entrada (denominado detector), un procesador de la
señal y un transductor de salida o dispositivo de lectura. A continuación
se da una descripción general de estos componentes.
Fig 1. Componentes de un instrumento típico
 COMPONENTES FUNDAMENTALES INSTRUMENTO PARA EL ANÁLISIS QUÍMICO ·

1. Generadores de señales
Un generador de señales produce una señal que denota la presencia y, con
frecuencia también. la concentración del analito. En muchos casos, el
generador de señales es simplemente un compuesto o un ión generado a
partir del propio analito. Por ejemplo un análisis por emisión atómica, el
generador de señales son los átomos excitados o los iones del analito que
emiten fotones de radiación. Otro ejemplo en una determinación de pH, la
señal es la actividad del ión hidrógeno de una disolución de la muestra. Sin
embargo, en muchos otros instrumentos el generador de la señal está
considerablemente más elaborado. Así, el generador de señales de un
instrumento de análisis por absorción infrarroja incluye, además de la
muestra, una fuente de radiación infrarroja, un monocromador, un divisor y un
cortador (chop- per) del haz, un atenuador de la radiación y un recipiente de
muestra.
La segunda columna de la Tabla 2 lista unos pocos ejemplos típicos de generadores de señales.
Tabla 2. Algunos ejemplos de componentes de instrumentos
 COMPONENTES FUNDAMENTALES INSTRUMENTO PARA EL ANÁLISIS QUÍMICO ·

2. Detectores (transductores de entrada)

Un transductor es un dispositivo que convierte un tipo de energía (o señal) en otro.
Como ejemplos, pueden mencionarse el termopar, que convierte una señal de calor
radiante en un voltaje eléctrico; la fotocélula, que convierte la luz en una corriente
eléctrica; o el brazo de una balanza, que convierte una diferencia de masa en un
desplazamiento del brazo de la balanza respecto a la horizontal. Los transductores
que actúan sobre una señal química se denominan detectores. La mayor parte de
los detectores convierten las señales analíticas en un voltaje o corriente eléctricos
que se amplifican o modifican fácilmente para accionar un dispositivo de lectura. Sin
embargo, hay que tener en cuenta que los dos últimos detectores de la Tabla 2
originan señales no eléctricas.
Los modernos instrumentos analíticos generalmente emplean uno o varios
dispositivos electrónicos sofisticados, tales como amplificadores operacionales,
circuitos integrados, convertidores analógico-digitales y digital-analógicos,
contadores, microprocesadores y ordenadores..
 COMPONENTES FUNDAMENTALES INSTRUMENTO PARA EL ANÁLISIS QUÍMICO ·

3. Procesadores de señales

El procesador de señales modifica la señal transducida procedente del detector de

tal forma que se adecue al funcionamiento del dispositivo de lectura.

Una señal puede definirse como la salida de un transductor respondiendo al sistema

químico de interés. La señal puede dividirse en dos partes:
 una causada por el (los) analito (s) y
 la otra por los componentes de la matriz de la muestra, y por la instrumentación
analizada en la medición.
Esta última parte de la señal se conoce como ruido.
 COMPONENTES FUNDAMENTALES INSTRUMENTO PARA EL ANÁLISIS QUÍMICO ·

3. Procesadores de señales
Los dos métodos principales de acentuación de la señal son
1) el uso de dispositivos electrónicos, tales como filtros para reducir el ruido; la
amplificación (un proceso en el cual la señal se multiplica por una constante
mayor que la unidad); se atenúan (proceso en el cual la señal se multiplica por
una constante menor que uno); se integran, se derivan ó se aumentan
exponencialmente; o algoritmos de programas computacionales equivalentes
para procesar señales a partir de la medición mientras pasan a través del
instrumento, y

2) el tratamiento matemático de los datos, posterior a la medición. Entre los

métodos posteriores a la medición más útiles están las técnicas estadísticas; a
demás de la acentuación de la señal, estas técnicas ayudan a identificar las
fuentes de error y a determinar la precisión, a la vez que proporcionan un método
de comparación objetiva de los resultados
 COMPONENTES FUNDAMENTALES INSTRUMENTO PARA EL ANÁLISIS QUÍMICO ·

4. Dispositivos de lectura

Un dispositivo de lectura es un transductor que convierte una

señal procesada en una señal que puede ser entendida por un
observador humano. Por lo general, la señal transducida toma la
forma de la posición de una aguja en un medidor de escala, de
una salida de un tubo de rayos catódicos, de un trazo en un
registrador de papel, de una serie de números en una pantalla
digital, o del ennegrecimiento de una placa fotográfica. En algunas
ocasiones, el dispositivo de lectura da directamente la
concentración de analito.
 COMPONENTES DEL ESPECTROFOTÓMETRO

El esquema que se presenta a continuación describe la interrelación de

los diversos componentes de un espectrofotómetro. Los más importantes
son los siguientes:
1. La fuente luminosa
2. El monocromador
3. El portador de muestras
4. El sistema detector
5. El sistema de lectura
Se recuerda que los componentes mencionados corresponden a los
básicos o generales de este instrumento y no a los que hayan sido
incorporados por diversos fabricantes como consecuencia del avance
tecnológico. Una breve explicación de los mismos se encuentra a
continuación del esquema.
COMPONENTES DEL ESPECTROFOTÓMETRO
 COMPONENTES DEL ESPECTROFOTÓMETRO

Fuente luminosa
Dependiendo del tipo de espectrofotometría, la fuente luminosa puede ser
una lámpara con filamento de tungsteno para luz visible, o una lámpara de
arco de deuterio para luz ultravioleta.
Algunos fabricantes han diseñado espectrofotómetros con lámparas
intermitentes de xenón de alta duración que emiten luz en el rango de la luz
visible y ultravioleta. La lámpara o lámparas vienen montadas de fábrica en
una base que permite asegurar una determinada posición, para que se
mantengan las condiciones de ajuste óptico y enfoque cuando está en
operación o se requiere reemplazarla. La energía radiante típica que emite
una lámpara de tungsteno está entre los 2 600 y los 3 000 °K (grados
Kelvin).
 COMPONENTES DEL ESPECTROFOTÓMETRO

Monocromador

Está compuesto por un conjunto de elementos. En general,

dispone de una rendija o ranura de entrada que limita la radiación
lumínica producida por la fuente y la confina en un área
determinada, un conjunto de espejos para pasar la luz a través
del sistema óptico, un elemento para separar las longitudes de
onda de la radiación lumínica, que puede ser un prisma o una
rejilla de difracción, y una rendija de salida para seleccionar la
longitud de onda con la cual se desea iluminar la muestra. Las
rejillas de difracción tienen la ventaja de eliminar la dispersión no
lineal y son insensibles a los cambios de temperatura.
 COMPONENTES DEL ESPECTROFOTÓMETRO

Portador de muestras
Está diseñado para sostener la muestra que se quiere analizar
dentro del rayo de luz de longitud de onda determinada por el
monocromador. El elemento que contiene la muestra es una celda o
cubeta, por lo general, rectangular. Las celdas o cubetas se fabrican
de vidrio, si se requieren efectuar estudios en el rango de los 340 a
los 1 000 nm y de sílice, si el análisis está en el rango comprendido
entre los 220 y los 340 nm. También hay celdas en materiales
plásticos como estireno o poliestireno. El portador de muestras lo
diseñan los fabricantes de acuerdo al tipo de espectrofotómetro y de
muestra a analizar, por ello se encuentran portadores de muestra
con microceldas, aunque también tubos de ensayo y otras variantes
como las celdas de flujo continuo.
 COMPONENTES DEL ESPECTROFOTÓMETRO

Sistema detector
El sistema de detección puede estar diseñado con fotoceldas,
fototubos, fotodiodos o fotomultiplicadores. Esto depende de los
rangos de longitud de onda, de la sensibilidad y de la velocidad
de respuesta requeridas. El sistema de detección recibe la
energía lumínica proveniente de la muestra y la convierte en una
señal eléctrica proporcional a la energía recibida. La señal
eléctrica puede ser procesada y amplificada, para que pueda
interpretarse a través del sistema de lectura. En la tabla que se
incluye a continuación, se presenta un resumen de las ventajas y
desventajas de los dispositivos normalmente usados en los
sistemas de detección..
 COMPONENTES DEL ESPECTROFOTÓMETRO
Sistema detector
Tabla de ventajas y desventajas dispositivos de detección
 COMPONENTES DEL ESPECTROFOTÓMETRO
Sistema detector
Tabla de ventajas y desventajas dispositivos de detección
 COMPONENTES DEL ESPECTROFOTÓMETRO

Sistema de lectura
La señal que sale del detector recibe diversas transformaciones. Se amplifica
y se transforma para que su intensidad resulte proporcional al porcentaje de
transmitancia/ absorbancia. Existen sistemas de lectura de tipo análogo
(muestra la magnitud leída sobre una escala de lectura) o digital (muestra la
magnitud leída en una pantalla).
Los indicadores de tipo análogo reciben tradicionalmente el nombre de
metros. Su exactitud depende, entre otros factores, de la longitud de la
escala y del número de divisiones que tenga. (Mientras más divisiones, más
exacto). Su principal desventaja es que pueden ser mal leídos, por la fatiga
de los operadores o errores, cuando disponen de varias escalas, al tratar de
identificar las escalas sobre las que deben realizar la lectura.
Los indicadores digitales usualmente presentan los resultados en una
pantalla, en forma de caracteres alfanuméricos luminosos. Esto los hace
menos propensos a que se cometan errores de lectura.
 COMPONENTES DEL ESPECTROFOTÓMETRO

Todos estos componentes se pueden

ensamblar de diversas maneras dependiendo
de varios factores. No obstante, las dos
configuraciones más empleadas son las de
espectrofotómetros de haz sencillo o
espectrofotómetros de doble haz.
 COMPONENTES DEL ESPECTROFOTÓMETRO

Instrumentos con configuración óptica de un solo haz

Los instrumentos de simple haz son aquellos en los cuales el haz de luz sigue una
única trayectoria entre la fuente y el detector. La banda de luz atraviesa la muestra
que se halla contenida en una celda, la luz transmitida por la muestra pasa al
detector originándose una corriente eléctrica que por medio de diferentes circuitos
permite observar una señal, ya sea el movimiento de una aguja o señal digital o un
registro gráfico.
 COMPONENTES DEL ESPECTROFOTÓMETRO

Instrumentos de doble haz

En los instrumentos de doble haz la luz proveniente de la fuente es dividida en dos
haces después de salir del monocromador mediante un sistema de espejos
divisores. Esta división produce dos haces de luz, uno de ellos se dirige a la celda de
referencia, que contiene el blanco, y el otro haz se dirige hacia la celda de muestra.
Los dos haces de luz después de atravesar la celda de referencia y la de muestra
llegan a detectores separados para obtener la señal correspondiente.

Los sistemas de doble haz tienen la ventaja de que cualquier variación en la

intensidad de la fuente, la eficiencia de la red, la reflectividad de los espejos, la
fotosensibilidad del detector, etc., afecta simultáneamente a los dos haces. En
consecuencia, la relación de energía de los dos haces permanece siempre constante.
COMPONENTES DEL ESPECTROFOTÓMETRO

Instrumentos de doble haz

Espectroscopia en el Ultravioleta -Visible
 Espectroscopia en el Ultravioleta -Visible

Conceptos Básicos
Espectroscopia.-
Medición e interpretación de fenómenos de absorción, dispersión o emisión
de radiación electromagnética que ocurre en átomos, moléculas u otras
especies químicas. La absorción o emisión están asociadas a los cambios de
estado energéticos de las partículas actuantes.
 Espectroscopia en el Ultravioleta -Visible

Conceptos Básicos
Espectroscopia Molecular.-

Se refiere exclusivamente a los fenómenos de absorción,

dispersión o emisión, asociados a especies moleculares.

Estos fenómeno simplican cambios energéticos a nivel de

los orbitales de enlace en la capa mas externa, y los
patrones de cambio en los estados de transición suelen
ser de baja energía y de muy poca diferencia entre ellos.
 Espectroscopia en el Ultravioleta -Visible

Conceptos Básicos
Radiación Electromagnética.-
Es la Energía que se transmite por el espacio a enormes velocidades.
Adopta muchas formas(Ejem. Luz, calor, RayosX, Radiación  ,UV , etc.)
 RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA

La espectroscopia estudia las interacciones de la materia con la radiación

electromagnética, ésta se manifiesta por medio de una componente
eléctrica responsable de fenómenos tales como la absorción, reflexión y
otros, y una componente magnética perpendicular responsable de otras
interacciones menos familiares.

Métodos
Radiación Materia espectro
métricos

Radiación
Intensidad
electromagnética
RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA Fuentes
Luz

Calor
UV
radiante

Radiación
EM
Microond
Rayos X
as

Radiofrec Rayos
uencia gamma
 RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA Modelos

Onda Longitud de Onda

Modelo clásico
Fracuencia
Ondulatorio
Amplitud

Radiación
electromagnética

Modelo Corpuscular E=h. v

(Fotones)
 RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA Propiedades Ondulatorias

Una onda electromagnética es una perturbación de campos eléctrico y

magnético que se propaga simultáneamente en el espacio y el tiempo a la
velocidad de la luz.
RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA Parámetros ondulatorios

 Amplitud, A.
 Período, p.
 Frecuencia, v.
 Longitud de
Onda, λ.
 Potencia, P.
 Intensidad, I.
 RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA Parámetros ondulatorios
Amplitud (A):
Máxima intensidad que lanza una onda.
Es el máximo alejamiento de cada partícula con respecto a la posición
de equilibrio.
 RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA Parámetros ondulatorios
Perìodo (T):
El tiempo que tarde una onda en hacer un cicl y es, por tanto, el inverso
de la frecuencia.
1
T
f
 RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA Parámetros ondulatorios
Frecuencia(f):
Es el número de oscilaciones en el campo o ciclos que realiza en cada segundo. Es
inversa a la longitud de onda.
Siendo: c = velocidad de la luz:
Se mide en Hercios
c
f
λ

Por ejemplo, a la frecuencia de la red, que es 50 Hercios, la señal que llega a nuestras casas cambia de
polaridad 50 veces cada segundo y, por tanto, el período es 0,02 segundos, es decir, la señal tarda 2
centésimas de segundo en hacer un ciclo.
 RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA Parámetros ondulatorios
Longitud de Onda(ʎ):
La longitud de onda λ se define como la distancia que recorre una onda
electromagnética en un tiempo igual a un período. Matemáticamente, esto se
traduce en

c

f

siendo c=3.108 m/s la velocidad de la luz en el vacío o en el aire. Así por ejemplo, a la frecuencia de la red (50
Hz) la longitud de onda es λ=6.000 kms. A la frecuencia de los hornos microondas (2,45 GHz) longitud de onda
es de aproximadamente λ=12,2 cms.
 RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA Parámetros ondulatorios

Longitud de onda (λ):

Es la distancia lineal entre dos puntos equivalentes de ondas
sucesivas por ejemplo, sucesivos máximos o mínimos. Esta
distancia se expresa, según el Sistema Internacional de
Unidades (SI), en nanómetros (nm, 10-9 m) Se pueden
encontrar otras unidades, ya obsoletas, que serían angstroms
( A0 ) y milimicras (mu) La relación entre estas medidas es:
1 nm = 1 mu = 10 A0= 10-9 m
 RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA Parámetros ondulatorios
Número de onda (v‾):
Número de onda ‾v , es el inverso de la longitud de onda en cm (1/λ). Por lo tanto,
la unidad para ‾v es cm-1. El número de onda se usa mucho en espectroscopia
infrarroja.
Es útil en espectroscopia porque, al revés que la longitud de onda, es directamente
proporcional a la frecuencia y a la energía de la radiación. Así pues se puede
escribir:

v  kf
donde la constante de
proporcionalidad k depende del
medio y es igual a la inversa de la
velocidad.
 RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA Parámetros ondulatorios
Intensidad (I):
La intensidad de una onda mide la potencia que atraviesa una unidad de superficie
perpendicular a la dirección de propagación de la onda. Se representa por I y sus
unidades en el S.I. son W.m-2

P
I
S

Resulta que la propagación de una onda puede ocurrir en una dirección lineal, en una
superficie, o en un volumen. En cada caso, la energía de la perturbación emitida se
recibe en muchas posiciones diferentes y no siempre se recibe la misma cantidad de
energía, ya que hay que repartirla democráticamente entre todas las posiciones
receptoras.
 RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA Parámetros ondulatorios
Potencia (P):
Es la energía en watts (W) del haz que llega a un área dada por segundo.
La potencia es el cociente entre la energía transportada (emitida o
recibida) y el intervalo de tiempo considerado. Y las unidades son las
usuales.

E
P
Δt
 Espectroscopia en el Ultravioleta -Visible

Conceptos Básicos
Energía.-
Cuando la Radiación Electromagnética interacciona con átomos y moléculas ya no es
posibles explicar sus atributos mediante la Teoría Ondulatoria y es mejor considerarla como
partículas de energía llamadas “Fotones”.
En este caso, se observa que la frecuencia de la radiación electromagnética es proporcional
a la energía del Fotón.
La constante de Proporcionalidad se denomina “Constante de Planck(h)”. Cuantitativamente
esta constante se relaciona con la frecuencia de la siguiente forma:

E = h.n
 Espectroscopia en el Ultravioleta -Visible

Conceptos Básicos
Energía.-
La Energía de los Fotones también se relaciona con la Longitud de Onda de la Radiación.
Como la velocidad de la Luz puede medirse según la ecuación:

c = l.n
Entonces, la energía de un Fotón puede calcularse a partir de la siguiente ecuación:

E = (h.c)/l
(las unidades de energía pueden ser Ergios o Joule.seg)
 Espectroscopia en el Ultravioleta -Visible

Conceptos Básicos
Transformaciones de la Energía.-
Como indica el principio de conservación de la energía:
“La suma de todas las formas de energía que ingresan a una muestra debe
de ser igual a la energía que sale de ella, más la energía que quede en el
material”.
Los resultados de las interacciones de un átomo o molécula con sus
alrededores y con la luz puede representarse por la figura de la derecha.
 Espectroscopia en el Ultravioleta -Visible

Conceptos Básicos
Transformaciones de la Energía.-
La Energía penetra en el átomo y sale de el en
forma de luz, calor y energía cinética de
partículas como los electrones.
Como la luz puede transformarse en calor, la
longitud de onda de la luz emitida puede ser
mas larga (de menor energía) que la longitud
de onda que excita a los átomos, y la energía
restante se empleará para calentar el átomo y
sus alrededores.
 Espectro Electromagnético

Abarca una gran cantidad de longitudes de onda (o frecuencias). Incluye

desde las longitudes de onda largas y poco energéticas en la región de
ondas de radio hasta las más cortas y más energéticas en la región de los
rayos gamma, el ojo humano solamente puede percibir una pequeña
fracción del espectro electromagnético a la que se le denomina región
visible en donde se hallan todos los colores que pueden observarse
simple vista.
 EL ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO
Es el conjunto de todas las radiaciones electromagnéticas conocidas, dispuestas según su
longitud de onda. Se divide en regiones que abarcan intervalos de longitudes de onda más
estrechos, desde los rayos gamma, de longitud de onda corta, hasta las ondas de radio, de
longitud de onda larga.
Este abarca un intervalo muy amplio de energías
(frecuencias) y por tanto, de longitudes de onda.
RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA
VISIBLE
ESPECTRO CONTINUO

4000 Å  7000 Å

VAVAR

Violeta Azul Verde Amarillo Rojo

 C C
Eh

 

Energía de un fotón Frecuencia
h = constante de Planck h = 6.63 x 10-34 J·s
C = velocidad de la luz C = 3 x 1010 cm/s
 = longitud de onda
 2.99792458 x 1010 cm/s
E
Región ultravioleta, de 190 a 320 nm.

En esta región se utilizan lámparas de deuterio, xenón

y de mercurio.

La intensidad de emisión es adecuada para llevar a

cabo espectrometría de absorción en el intervalo de
190 a aproximadamente 320 nm.

Para medidas de fluorescencia puede ser útil una

lámpara de mayor intensidad, ya que la señal
fluorescente es proporcional a la potencia de la fuente.
Para producir esta potencia mayor, se pueden utilizar
lámparas rellenas con xenón o vapor de mercurio a
alta presión.
Región visible, de 320 a 750 nm.
En la región visible apreciamos el color visible de una solución y que corresponde
a las longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El color que
absorbe es el complementario del color que transmite.

Por tanto, para realizar mediciones de absorción es necesario utilizar la longitud

de onda en la que absorbe luz la solución coloreada. La fuente de radiación
visible suele ser una lámpara de tungsteno y no proporciona suficiente energía
por debajo de 320 nm.

Esta región utiliza lámparas de filamentos de tungsteno. La fuente común elegida

para espectrometría de absorción en la región visible es una lámpara
incandescente. Su espectro de radiación es un espectro continuo, de intervalo del
ultravioleta al infrarrojo cercano.
Longitud de onda con relación al color
Métodos espectroscópicos comunes basados en la radiación
electromagnética
 SUPERPOSICIÒN DE ONDAS

Principio de superposición: cuando dos o mas ondas atraviesan la misma región

del espacio, se produce un desplazamiento igual a la suma de los desplazamientos
causados por las ondas individuales.
Cuando dos ondas iguales comienzan al mismo tiempo, se dice que están en fase.
Y sus intervalos (ángulos, grados o radianes) coincidirán.
Eso provoca que una señal se refuerce con la otra, aumentando la amplitud (A).
Al contrario, las ondas que están fuera de fase (desfasadas) se debilitan y
diminuye la amplitud (A).
Casos ideales
•Si dos ondas están en fase (0 grados de diferencia) y tienen la
misma frecuencia, la forma y amplitud se doblarán en
volumen.
•Si dos ondas están en oposición de fase (180 grados de
diferencia) y tienen la misma frecuencia, la forma y la
amplitud se cancelarán entre sí.
 Fenómenos de interacción entre luz y materia
En la espectroscopia se utilizan estas interacciones entre la
luz y la materia a fin de obtener información sobre el analito
presente en una muestra. Esta última puede estimularse ya
sea aplicando energía en forma de calor, de electricidad, de
luz, de partículas o sometiéndola a alguna reacción química.
Antes de aplicar cualquiera de estos estímulos, el analito está
predominantemente en su nivel más bajo de energía o estado
fundamental o estado basal. El estímulo induce una transición
de algunas especies del analito a un estado de energía
superior o estado excitado. Como resultado de esto se
producen, entre otros, fenómenos de absorción o emisión
energética.
a) Proceso de absorción: cuando una partícula, que se encuentra en “estado
de reposo” o “estado fundamental”, interacciona con un haz de luz, absorbe energía, y
pasa a lo que se denomina “estado excitado”. La partícula en estado excitado tiende a
regresar espontáneamente a su estado fundamental, desprendiendo la energía
absorbida en forma de calor. Este fenómeno puede representarse de la siguiente
manera:

Cada especie absorbente (cromógeno) tiene lo que se llama un “espectro de absorción

característico”. Al gráfico que resulta de representar en un eje de coordenadas Absorbancia
(ordenadas) frente a longitud de onda (abscisas), es a lo que llamamos espectro de
absorción. Se necesita una radiación de energía más alta para que se efectúen transiciones
electrónicas (cambios) que la necesaria para que se efectúen transiciones rotacionales o
vibracionales.
b) Proceso de emisión: algunos compuestos tienen la propiedad, tras ser
excitados, de retornar a su estado fundamental, produciendo una emisión
de energía electromagnética. La luz emitida se puede medir, y ello
constituye el principio de algunas técnicas, como la Fotometría de llama, o
la Fluorescencia. Este fenómeno puede representarse de la siguiente
manera:
MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS DE ANÁLISIS

Los métodos de análisis que se basan en la medición de luz y otras

formas de radiación electromagnética son los que más se utilizan en
la química analítica.

La espectroscopia es una ciencia que estudia las interacciones que

suceden entre la radiación y la materia.

Los métodos espectroscópicos de análisis miden la cantidad de

radiación producida o absorbida por las especies atómicas o
moleculares que se analizan. Estos métodos también se clasifican de
acuerdo con la región del espectro electromagnético que se utiliza para
hacer la medición. Estas regiones incluyen los rayos gamma, rayos X,
ultravioleta, visible, infrarrojo, microondas y radiofrecuencias
 MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS DE ANÁLISIS
Selección del método de análisis
Categoría Propiedad Técnica Propiedad física Técnica
física medida medida
Ópticas Emisión de Fluorescencia atómica Refracción de Refractometría
radiación por Espectroscopía de emisión (rayos , radiación Interferometría
átomos rayos X, UV-visible)
Emisión de Fluorescencia (rayos X, UV-visible) Difracción de Difracción de rayos X
radiación por Fosforescencia radiación y de electrones
moléculas Espectroscopía RAMAN
Absorción de Espectroscopía de absorción atómica Rotación de Polarimetría,
radiación por radiación dicroísmo circular,
átomos dispersión óptica
rotatoria
Absorción de Absorción de rayos X
radiación por Espectrofotometría UV-visible
moléculas Espectrofotometría infrarroja
Resonancia magnética nuclear
Resonancia de espín electrónico

Dispersión de Turbidimetría
radiación Nefelometría
Espectroscopía RAMAN
 MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS DE ANÁLISIS
Selección del método de análisis
Categoría Propiedad Técnica Categoría Propiedad Técnica
física medida física medida
ELÉCTRICAS Potencial Potenciometría CLÀSICO Volumen Volumetría
Intensidad Amperometría, polarografía, Masa Gravimetría
voltamperometría
Carga Culombimetría
Conductividad Conductimetría

Categoría Propiedad Técnica

física
medida
VARIOS Relación Espectrometría de masas
masa/carga
Cinéticos Velocidad de reacción
Térmicas Métodos de entalpía, conductividad
térmica
 Transmitancia y absorbancia
Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda de
intensidad I0 incide perpendicularmente sobre una disolución de un
compuesto químico que absorbe luz o cromóforo, el compuesto
absorberá una parte de la radiación incidente (Ia) y dejará pasar el resto
(It), de forma que se cumple:

I0=Ia + It
Transmitancia, T :
La transmitancia de una sustancia en solución es la relación entre la
cantidad de luz transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado
la muestra, It, y la cantidad de luz que incidió sobre ella, I0, y se representa
normalmente en tanto por ciento: I
%T  .100
I0
La transmitancia nos da una medida física de la relación de intensidad
incidente y transmitida al pasar por la muestra. La relación entre %T y la
concentración no es lineal, pero asume una relación logarítmica inversa.
 

P0 P
 Absorbancia, A:
La absorbancia (A) es un concepto más relacionado con la muestra
puesto que nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma, y se
define como el logaritmo de 1/T, en consecuencia:
Es una medida que relaciona en forma logarítmica la radiación incidente y
la que emite la muestra. Esto es:
1 It I0
A  log  logT  log  log
T I0 It
Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales (Io = It), la
transmitancia es del 100% e indica que la muestra no absorbe a una
determinada longitud de onda, y entonces A vale log 1 = 0.
La cantidad de luz absorbida dependerá de la distancia que atraviesa la luz a
través de la solución del cromóforo y de la concentración de éste.
 La relación logarítmica entre A y %T se traduce en dos escalas:

%T → va de 0 a 100
A → va de 2 a 0
En la práctica se emplea, en lugar del valor de Transmitancia,
el de Absorbancia (A), ya que la relación entre la
concentración de una solución y su Transmitancia es inversa y
logarítmica, mientras que la relación entre la Absorbancia y
concentración es directamente proporcional.
En los aparatos que se usan hoy en día, las lecturas de %T son transformadas en
Absorbancias y presentadas así al operador, pero conviene no olvidar que la
absorbancia no es en sí misma una cantidad medible, sino que se obtiene por cálculo
matemático a partir de los datos de Transmitancia que mide el sistema fotométrico.

Si representamos gráficamente en un eje de coordenadas la relación entre la

Absorbancia y concentración, obtenemos una línea recta, y la proporción es directa.
La gráfica resultante de representar %T frente a concentración es una curva, y la
proporción es inversa. Si empleamos papel semilogarítmico, la gráfica de %T frente a
concentración se convierte en una recta.

Figura 3. Representación gráfica de absorbancia y porcentaje de transmitancia frente a concentración:

a) %T escala lineal, b) %T escala logarítmica y c) A en escala lineal
 Ley de absorción
La ley de la absorción, también conocida como Ley de Lambert y Beer, o
simplemente Ley de Beer, da información cuantitativa de cómo es que la
atenuación de la radiación depende de la concentración de las moléculas
que la absorben y de la distancia que recorre el rayo en el medio absorbente.
Cuando la luz atraviesa una solución de analito, la intensidad de la radiación
disminuye como consecuencia de la excitación del analito. Cuanto mayor sea
la trayectoria del rayo en la solución de analito de una concentración dada,
habrá más especies que absorban la radiación y la atenuación será mayor.

Fig. 2 Atenuación de un haz de

radiación por una solución
absorbente
 ley de Lambert y Beer
La relación entre las cantidades de absorbente en una solución y el grado en que esta
solución absorbe la luz, se encuentra regida por las Leyes de absorción.
La ley de la absorción establece la relación entre el grado de Absorbancia de una
solución y otras dos variables: la concentración del absorbente y la longitud del trayecto
que el haz de luz recorre a través de la solución. Según esta ley, la absorbancia de una
solución es directamente proporcional a la concentración y a la longitud del paso de luz:
A= a.b.c A=Є.b.C

Siendo:
A = absorbancia (no tiene unidades es adimensional).
a, Є = coeficiente de absorción o absortividad específica (a ) o absortividad molar (Є).
Es una constante, relacionada con la naturaleza química del soluto, y para un compuesto dado cuando se
fijan condiciones de longitud de onda (Є = 1/mol.cm; a = 1/g.cm).
b = paso óptico o longitud del paso de luz en centímetros.
c, C = concentración de absorbente (c = g/L ; C = mol/L)
 Problema. Una solución de KMnO4 tiene una absorbancia de 0,539 cuando se mide a 540
nm en una celda de 1,0 cm. ¡Càl es la concentración de KMnO4? Antes de determinar la
absorbancia de la solución desconocida, se obtuvieron los siguientes datos de calibración
para el espectrofotómetro.
Concentraciòn de Absorbncia 0.9
KMnO4 (M)
0.8 f(x) = 5.65 x − 0.01
0,0300 0162 0.7 R² = 1
0,0600 0,330 0.6

Absorbancia
0,0900 0,499 0.5
0,120 0,670 0.4
0,150 0,840 0.3
0.2
0.1
A=E*l*C 00.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14 0.16
0,162= E*1*0,0300
E= 5,40 Concentraciòn (M)
A=5,40 L/cm.mol * 1cm* C
0,539=5,40 L/cm.mol*1cm C
C=0,0998 mol/L
 Desviaciones de la ley de Beer

Son desviaciones producidas en la linearidad de la relación entre

concentración y absorbancia. La recta se curva antes de su límite
de linearidad. Pueden causarlas diversos factores:

 Se miden concentraciones muy elevadas de cromógeno. Por lo

cual se trabaja a concentraciones menores a 0,01M.
 La radiación incidente no es monocromática, lo cual es muy
frecuente en la práctica.
 La luz es transmitida por otros mecanismos (luz errática, o luz
monocromática que llega al detector). Esta radiación se
denomina parásita.
 Si hay interferentes (otros cromógenos absorben también a esa
longitud de onda).
 Desviaciones de la ley de Beer
Desviaciones reales.

De todas formas, en la práctica, para concentraciones inferiores a 10-3 M puede

prescindirse de la influencia de este factor, al ser el índice de refracción
esencialmente constante.
 Desviaciones de la ley de Beer
Desviaciones instrumentales
La necesidad de contar con fuentes de radiación monocromática y evitar la radiación
parásita son algunos de los factores prácticos que restringen la aplicación de la ley de Beer.
Estrictamente, esta ley se aplica sólo cuando las mediciones se hacen con una fuente de
radiación monocromática. Sin embargo, en la práctica, se emplean las fuentes de radiación
policromática junto con una rejilla o un filtro para aislar una banda de longitudes de onda
que sea más o menos simétrica en torno a la longitud de onda que se va a utilizar. Si la
banda seleccionada corresponde a una región en que el analito muestra una absortividad
casi constante, las desviaciones de la ley de Beer serán mínimas. Para evitar estas
desviaciones, es conveniente seleccionar una banda de longitudes de onda cercana a la
longitud de onda donde la absorción sea máxima y la absortividad del analito cambie muy
poco con la longitud de onda.
La radiación parásita se define como la radiación debida al instrumento y que está fuera de
la banda de longitud de onda seleccionada para hacer las mediciones. Este tipo de radiación
proviene a menudo de la dispersión y reflexión de las superficies de las rejillas, lentes o
espejos, filtros y ventanas. La luz parásita frecuentemente provoca que la absorbancia
aparente sea mucho menor que la verdadera absorbancia.
 Desviaciones de la ley de Beer
Desviaciones químicas.

Moléculas estables en disolución y partículas en suspensión.

No se cumple cuando el analito se asocia, disocia o reacciona con el
disolvente para dar lugar un producto que presenta un espectro de
absorción diferente.

Influencia del equilibrio.

Cuando la sustancia problema interviene o forma parte de un sistema
en equilibrio con otras especies, el desplazamiento del equilibrio
implica una modificación en la concentración, y, en consecuencia, en
la absorbancia.
 Desviaciones de la ley de Beer
Influencia del disolvente.
Como consecuencia de las interacciones soluto–disolvente se originan
con frecuencia desplazamientos espectrales, ensanchamientos de bandas
y otros fenómenos que pueden provocar desviaciones en la ley de Beer.
En este sentido, no es posible hacer predicciones de forma general.
Únicamente se menciona algunos términos relacionados con los
desplazamientos espectrales: desplazamiento batocrómico o
desplazamiento hacia el rojo, consiste en un desplazamiento del
máximo de absorción hacia longitudes de onda mayores (este efecto
suele producirse en disolventes de alta constante dieléctrica).
Desplazamiento hipsocrómico o desplazamiento hacia el azul, es el
desplazamiento hacia longitudes de onda más cortas.
 Desviaciones de la ley de Beer

Influencia de la temperatura.

La temperatura puede influir modificando el equilibrio

químico de algunos sistemas, así como, en ocasiones, dar lugar
a desplazamientos batocrómicos. De todas formas, la
temperatura no suele ser un factor a considerar en la mayor
parte de los sistemas absorbentes sencillos.
 Desviaciones de la ley de Beer

Presencia de impurezas en los reactivos.

Muchos métodos espectrofotométricos son lo suficientemente sensibles

como para detectar cantidades a nivel de trazas, por lo que la presencia
de impurezas absorbentes en los mismos reactivos pueden originar
errores considerables. Debido a ello, en la práctica analítica ordinaria,
las medidas espectrofotométricas se llevan a cabo frente a un blanco
constituido por la propia celda, el disolvente y los reactivos. En este
sentido interesa que la absorbancia del blanco sea pequeña, pues si es
grande, un pequeño error en su medida puede implicar un gran error
relativo en el resultado final.
 Desviaciones de la ley de Beer
Interacciones entre especies absorbentes.

Cuando en una disolución existen varias especies absorbentes, la ley de

Beer se cumple para cada una de ellas, si todas actúan
independientemente. Sin embargo, la interacción entre ellas puede
producir alteraciones en la distribución de cargas, como consecuencia
de lo cual puede modificarse la energía requerida para la absorción y, en
consecuencia, variaciones en la posición, forma y altura de las bandas
de absorción. Por otra parte, estas alteraciones en la distribución de
cargas también pueden ser originadas por la presencia de sales inertes,
con el consiguiente aumento de la fuerza iónica de la disolución.
 Desviaciones de la ley de Beer

Interacciones soluto–radiación electromagnética.

Aunque en sentido estricto no son factores de tipo

químico, también deben considerarse otros tipos de
interacción entre la radiación y la materia, distintos de
los que intervienen en el proceso de absorción. Así, la
posible emisión de resonancia y la presencia de
fenómenos fluorescentes y fosforescentes pueden
originar desviaciones aparentes en la ley de Beer.
 Desviaciones de la ley de Beer
Errores personales.
En este sentido, los mayores errores suelen cometerse por el uso inadecuado de las
cubetas de absorción. Resultan de utilidad las recomendaciones siguientes:
 Es necesario asegurarse de que las cubetas están perfectamente limpias, no rayadas
y exentas de huellas o adherencias en las paredes por las que ha de pasar la radiación.
 Las cubetas de vidrio y cuarzo pueden limpiarse con ácido nítrico o con agua regia
en frío, pero no con mezcla crómica.
 Una vez limpias, las cubetas deben enjuagarse con agua destilada y con varias
porciones de la disolución a medir.
 No deben secarse interiormente, mientras que el exterior debe secarse con papel
suave, comprobando, además, que, una vez llena con la disolución problema, no
contiene burbujas de aire.
 Aunque se debe trabajar con cubetas idénticas para la muestra y la referencia
(blanco), es buena práctica utilizar siempre la misma disolución en cada una de ellas.
 Medición de la transmitancia y de la absorbancia
La transmitancia y la absorbancia, no pueden medirse directamente en el
laboratorio, porque la solución de analito debe colocarse en alguna clase
de recipiente transparente, o cubeta. Además, la atenuación del haz
puede producirse por dispersión debida a moléculas grandes, y a veces
por absorción en las paredes del recipiente. Para evitar interacciones por
parte del solvente o de la cubeta, y considerar así sólo la absorción del
compuesto de interés, hay que hacer una primera medida con una
solución de referencia o blanco, que contiene todos los posibles
compuestos que participan en la lectura, menos el compuesto a medir.

Todas las medidas que se hagan con posterioridad serán referidas a esta
medida inicial y se deben hacer en la misma cubeta que se utilizó para la
medida del blanco.
El ajuste del 100 % de T se realiza con el obturador abierto y con el
disolvente o blanco de reactivos en la trayectoria de la luz. Este ajuste se
lleva a cabo de tal forma que dé exactamente una lectura en la escala del
100 % de T. En efecto, esta etapa sirve para ajustar a 100 el valor de P0.

Por lo tanto, cuando la cubeta del disolvente se reemplaza por una

conteniendo la muestra, la escala indica la forma directa el tanto por
ciento de transmitancia. En el dispositivo de la lectura se puede marcar
también una escala de absorbancia que va de 0 a 2. Tal escala no será
lineal a menos que la señal de salida se transforme en una función
logarítmica. Los instrumentos modernos traen escalas lineales de
absorbancia y algunos tienen una computadora que calcula la
absorbancia a partir de las mediciones.
Absorción de radiación.
Cuando la radiación atraviesa una capa de un sólido, un líquido o un gas,
ciertas frecuencias pueden eliminarse selectivamente por absorción, un
proceso en el que la energía electromagnética se transfiere a los átomos,
iones o moléculas que componen la muestra. La absorción provoca que estas
partículas pasen de su estado normal a temperatura ambiente, o estado
fundamental, a uno o más estados excitados de energía superior.
De acuerdo con la teoría cuántica, los átomos, moléculas o iones sólo tienen
un número limitado de niveles de energía discretos; de modo que para que se
produzca la absorción de la radiación, la energía de los fotones excitadores
debe coincidir exactamente con la diferencia de energía entre el estado
fundamental y uno de los estados excitados de las especies absorbentes.
Como estas diferencias de energía son características para cada especie, el
estudio de frecuencias de la radiación absorbida proporciona un medio para
caracterizar los componentes de una muestra.
Absorción molecular.

Los espectros de absorción de las moléculas poliatómicas,

especialmente en estado condensado, son considerablemente más
complejos que los espectros atómicos, ya que el número de estados
de energía de las moléculas es generalmente enorme si se compara
con el de los átomos aislados. La energía, asociada a las bandas de
una molécula, está formada por tres componentes: energía
electrónica (proviene de los estados energéticos de sus distintos
electrones enlazantes), energía vibracional (energía total asociada al
elevado número de vibraciones interatómicas presente en las especies
moleculares) y energía rotacional (debido a distintos movimientos
rotacionales dentro de la molécula)
Absorción por los compuestos orgánicos.
La absorción de la radiación ultravioleta y visible por las moléculas orgánicas se
debe a la excitación de dos tipos de electrones: los electrones compartidos por
varios átomos y que participan directamente en los enlaces, y los electrones
externos no compartidos que se localizan principalmente en los átomos de oxígeno,
halogenuros, azufre y nitrógeno.
La longitud de onda en la que absorbe una molécula orgánica va a depender de la
fuerza con la que se sujeten sus electrones. Los que se comparten en enlaces
sencillos, como los de carbono-carbono o carbono-hidrógeno, están unidos con tal
fuerza que sólo es posible la absorción con fotones más energéticos que los UV
normales. Los electrones que participan en enlaces dobles y triples se sujetan con
menos fuerza y, por tanto, es más fácil excitarlos. Por esta razón, las especies con
enlaces insaturados suelen absorber en la región UV. Los grupos funcionales
orgánicos insaturados que absorben en la región UV y visible se conocen como
cromóforos. La posición del doble enlace y su absortividad dependerá del
disolvente y de otros detalles estructurales de la molécula.
Absorción por especies inorgánicas.

En general, los iones y complejos de los elementos de

las dos primeras series de transición absorben bandas
amplias de radiación visible por lo menos en uno de
sus estados de oxidación y, por consiguiente, son
coloreados. A parte de estas especies, hay muchos
compuestos inorgánicos que absorben en la región UV
y visible. Entre estos figuran los iones de nitrato,
nitrito y cromato que exhiben una absorción
característica en la región UV y visible.
Absorción por transferencia de carga.

Este tipo de absorción es especialmente importante en

el análisis cuantitativo debido a que las absortividades
molares son particularmente grandes y se logra una
sensibilidad alta. Muchos complejos orgánicos e
inorgánicos exhiben este tipo de absorción, de ahí que
se les conozca como complejos de transferencia de
carga.
 ANÁLISIS CUANTITATIVO.

La espectrofotometría UV y visible es una de las

herramientas más poderosas y útiles para el análisis
cuantitativo. Las principales características de este
método son; su amplia aplicación en sistemas
orgánicos y bioquímicos; su sensibilidad razonable,
sus límites de detección relativamente altos; su
selectividad moderada a alta; su exactitud y precisión
razonables, así como su rapidez y conveniencia.
 ANÁLISIS CUALITATIVO.

La espectroscopia UV y visible tiene pocas aplicaciones en el análisis

cualitativo debido a que los espectros de muchos compuestos en solución se
componen de una o, a lo sumo, unas cuantas bandas anchas, y en las que
no se aprecia la estructura fina indispensable para la identificación precisa de
un compuesto. Aun así, la posición espectral de una banda de absorción
puede dar cierta información sobre las características estructurales de una
molécula, o indicar si ésta posee o no determinados grupos funcionales; tales
como los grupos fenilo, nitrilo o dobles enlaces conjugados. Los espectros de
absorción en la región UV y visible se han catalogado para compararlos con
el espectro de absorción de un compuesto puro ya conocido.

Normalmente, en el análisis cualitativo sólo se utiliza la espectroscopia de

absorción UV y visible para confirmar la identidad de un compuesto que se
ha analizado con una técnica cualitativa más poderosa.
Aplicaciones:
- Sustancias orgánicas que contienen uno o dos grupos cromóforos (responsables del color). Doble
ligadura alternada. Ej. compuestos aromáticos; el benceno, alquenos , alquinos, grupos carbonilos,
carboxilo, amido, azo, nitro, nitroso, nitrato.
- Especies no absorbentes se pueden transformar en absorbentes haciéndolas reaccionar con reactivos
cromógenos.
- Reactivos inorgánicos: SCN- para hierro, cobalto y molibdeno., agua oxigenada para titanio y cromo y
yoduro para bismuto y paladio.
- Reactivos orgánicos del tipo quelantes: 1-10 fenantrolina paracatión ferroso; dimetilglioxima para
niquel, dimetiltiocarbazona para plomo y dimetiltiocarbamato para cobre.
- Compuestos aromáticos carácter cancerígeno,alimentos, bebidas, cigarrillos.
- Productos naturales con esteroides y clorofila.
- Sustancias colorantes. Vitaminas (vit. A).
- Estructuras aromáticas quinónicas.
- Investigación de fotosíntesis y tejidos vivos.
- Impurezas en muestras orgánicas, residuos de plantas industriales.
- Determinación de pesticidas en plantas, ríos y animales.
- En medicina: análisis de enzimas, vitaminas, hormonas, esteroides, alcaloides, barbitúricos
(diagnóstico de enfermedades).
- En farmacia: pureza de productos manufacturados.
- Nitritos, Nitratos, ( en agua, carnes).
- Oligoelementos en plantas.
- Conformación de proteínas globulares.
- Determinación enzimática de glucosa en vinos.
APLICACIONES EN EL INFRAROJO
No se utiliza casi en el análisis cuantitativo por desviaciones de la ley de Beer por tener picos muy
estrechos.
Se basa en el comportamiento y características estructurales de las moléculas.
Puesto que las moléculas distintas producen espectros de absorción diferentes, según el tamaño y
forma de los átomos que las componen, es posible identificar muestras desconocidas comparando
sus espectros de absorción con los distintos grupos funcionales. También es posible obtener
información acerca de la geometría molecular.
Identificación y determinación de sustancias orgánicas:
Identificación grupos funcionales.
Impurezas de materias primas - en industria control de calidad laboratorio de investigación
- determinación de parafinas, compuestos aromáticos, olefinas, acetileno, alcoholes, aldehídos,
cetonas, ácidos carboxílicos, fenoles, ésteres, éteres, aminas, compuestos de azufre o haluros .
- determinar compuestos responsables de olor y sabor en alimentos.
- distinguir un polímero de otro.
- distinguir disolvente usado en pinturas.
- ceras de suelos - muebles.
Valioso:
-Caracterizar sustancias puras.
-Caracterizar mezclas de compuestos.
 BUENAS PRÁCTICAS DE USO DEL ESPECTROFOTÓMETRO

1. Efectuar la calibración del espectrofotómetro, cada vez que se realiza el

análisis de un grupo de muestras.
2. Mantener cerrada la tapa del portamuestras durante el proceso de
medición, para asegurar una lectura adecuada.
3. Evitar reutilizar las cubetas desechables.
4. Utilizar únicamente cubetas de cuarzo, para efectuar análisis por debajo
de los 310 nm.
5. Evitar el uso de cubetas plásticas, si se utilizan solventes orgánicos.
6. Utilizar cristalería de boro silicato de alta calidad para preparar los
estándares. Evitar el uso de cristalería de sodio –óxido de sodio– siempre
que sea posible, debido a que el contacto prolongado con los estándares
puede permearla y, en consecuencia, producir resultados erróneos.
 BUENAS PRÁCTICAS DE USO DEL ESPECTROFOTÓMETRO

7. Limpiar cuidadosamente las cubetas de vidrio después de utilizarlas.

Desechar aquellas que presenten rayones en la superficie pulida.
8. Utilizar en lo posible reactivos de alta calidad. Reactivos de baja calidad
pueden causar contaminación incluso en concentraciones muy bajas. Los
diluyentes utilizados –agua o solventes– deberán estar libres de impurezas.
9. Verificar que las muestras o estándares no se han desgasificado dentro
de las cubetas. Este fenómeno produce burbujas sobre la superficie interna
de las cubetas y errores en las lecturas.
10. Tener en cuenta, cuando se pretenda utilizar nuevos procedimientos,
que no todas las sustancias cumplen con la ley de Beer. Efectuar pruebas
de linealidad sobre el rango de concentraciones a ser utilizadas. Se
recomienda preparar un grupo de soluciones fuertes –conocidas– y verificar
los resultados.