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Monografia Validacion Microbioloica PDF
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MICROBIÓLOGAS INDUSTRIALES
“La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus
alumnos en sus trabajos de tesis. Solo velará porque no se publique nada
contrario al dogma y la moral católica y porque la tesis no contenga ataques
personales contra persona alguna, antes bien se vea en ellas el anhelo por
buscar verdad y justicia”.
DISEÑO Y ELABORACIÓN DE UNA GUÍA PARA LA VALIDACIÓN
DE MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS ESTANDAR
APROBADO
_____________________ _____________________
Dra. LORENA VALENCIA Dr. SAUL PEÑARANDA
Directora Codirector
_____________________ _____________________
NADENKA MELO ANDRES OTALORA
Jurado Jurado
DISEÑO Y ELABORACIÓN DE UNA GUÍA PARA LA VALIDACIÓN
DE MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS ESTANDAR
APROBADO
_________________________ _____________________________
Dra ANGELA UMAÑA MUÑOZ, Dra. JANETH ARIAS PALACIOS
M. Phil Bacterióloga M.Sc-M Ed.
Decano Académico Facultad de Ciencias Director Carreras de Microbiología
A Dios por guiarme siempre por el mejor camino. A mi mamá por ser mi mejor ejemplo de lucha y constancia. A mi
hermana por impulsarme a ser cada vez mejor. A toda mi familia por apoyarme en mis decisiones y estar conmigo
siempre que los necesito. A mis amigos por su incondicional apoyo. A todos mil Gracias.
GRACIAS a Dios por ser mi luz y mi fuerza cada día y por permitirme culminar esta etapa junto a las personas
que más amo. A mi mamá por brindarme lo mejor de sus días. A mi papá por cuidarme en cada instante de mi vida. A
mi hermana por enseñarme que la lucha constante nos hace grandes triunfadores. A mis hermanos porque son mi
alegría y mi compañía. Les quiero decir que son mi mayor motivo en la vida, lo más importante e indispensable para
mi. A Sergio Muñoz porque su amor me ha ayudado a superar los más difíciles obstáculos. A mis amigos por crecer
conmigo y enseñarme cada día cosas nuevas. A Maria Andrea por querer cumplir este gran logro junto a mi.
Dios los bendiga.
A la Dra. Lorena Valencia por todo su apoyo y dedicación y por compartir todos sus
conocimientos para sacar este trabajo adelante.
Al Dr. Saúl Peñaranda por la paciencia y todo su aporte durante el desarrollo del
trabajo.
A todas las personas que de una u otra forma con su colaboración y amistad
incondicional participaron de la elaboración de este trabajo.
1
TABLA DE CONTENIDO
INTRODUCCIÓN
1. MARCO TEORICO 9
1.1 ANTECEDENTES 9
1.2 TIPOS DE VALIDACIÓN SEGÚN SU OBJETIVO 14
1.2.1 Validación Primaria 14
1.2.2 Validación Secundaria 15
1.3 PARAMETROS ANALÍTICOS PARA LA VALIDACIÓN DE
UNA TÉCNICA O MÉTODO 16
1.3.1 Selectividad 16
1.3.2 Especificidad 16
1.3.3 Calibrado y Linealidad 17
1.3.4 Precisión 17
1.3.5 Solidez y Robustez 18
1.3.6 Exactitud 19
1.3.7 Estabilidad 19
1.3.8 Limite de Detección 19
1.3.9 Límite de Cuantificación 20
1.3.10 Sensibilidad 20
1.4 MÉTODOS DE ENSAYO MICROBIOLÓGICOS 20
1.4.1 Métodos de Ensayo Microbiológicos Cualitativos 23
1.4.2 Métodos de Ensayo Microbiológicos Cuantitativos 24
1.5 MEDICIÓN Y ERRORES 25
1.6 MATERIAL DE REFERENCIA 26
1.6.1 Cultivos de Referencia 26
1.6.2 Cepas de Referencia 26
2
1.7 REPRESENTATIVIDAD Y CANTIDAD SUFICIENTE DE
MUESTRAS 27
1.7.1 Recuperación del Analito 28
1.7.2 Material de Ensayo 29
1.7.3 Detectores 30
1.8 SISTEMAS DE GESTIÓN DE CALIDAD EN LABORATORIOS
DE ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO 32
1.8.1 Aseguramiento de la Calidad de los Resultados/ Control de
Calidad 33
1.8.2 Acreditación 36
2. FORMULACIÓN Y JUSTIFICACIÓN DEL PROBLEMA 38
2.1 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA 38
2.2 JUSTIFICACIÓN 39
3. OBJETIVOS 41
3.1 OBJETIVO GENERAL 41
3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS 41
4. MATERIALES Y MÉTODOS 42
4.1 TIPO DE INVESTIGACIÓN 42
4.2 POBLACIÓN ESTUDIO DE MUESTRA 42
4.3 RECOPILACIÓN Y REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA 42
4.4 DOCUMENTACIÓN DE PARÁMETROS DE VALIDACIÓN PARA
MÉTODOS Y ENSAYOS EN MICROBIOLOGÍA ESTÁNDAR 43
4.5 DESPLIEGUE MODELO MATEMÁTICO PRELIMINAR PARA
VALIDACIÓN DE PRUEBAS MICROBIOLÓGICAS ESTÁNDAR 43
5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 45
5.1 REVISIÓN BIBLIOGRAFICA 45
5.2 MODELO MATEMÁTICO PRELIMINAR BÁSICO PARA LA
VALIDACIÓN DE MÉTODO MICROBIOLÓGICOS ESTÁNDAR 51
6. CONCLUSIONES 55
7. RECOMENDACIONES 56
3
8. REFERENCIAS 57
ANEXOS
4
LISTA DE FIGURAS
LISTA DE TABLAS
5
RESUMEN
Para llevar a cabo esta guía, se realizó una extensa revisión y recopilación
bibliográfica para obtener la mayor información posible sobre cómo validar técnicas
microbiológicas y poder abstraer un modelo preliminar de validación de los ensayos
estándar que se realizan en microbiología. A partir de la búsqueda, se inicio una
comparación de toda la información obtenida para diseñar el protocolo. Después de
la obtención del esquema práctico que incluye desde la toma de la muestra (muestreo)
hasta el procesamiento de la misma, se procedió a la consulta y diseño de un modelo
estadístico preliminar para determinar parámetros y variables a tener en cuenta para
llevar a cabo una validación.
Como resultado se obtuvo una guía en donde de forma clara, práctica y concisa se
orienta a la aplicación de conceptos básicos de la microbiología estándar y
herramientas estadísticas para determinar variables preliminares para la validación de
un ensayo estándar en microbiología.
6
INTRODUCCION
7
microbiológicas, lo cual se traduce en la exactitud de los resultados emitidos y la
fiabilidad de sus pruebas.
8
1. MARCO TEÓRICO
1.1 ANTECEDENTES
Se requieren métodos analíticos fiables para cumplir con las normativas nacionales e
internacionales en todas las áreas de análisis. Por lo tanto, está admitido
internacionalmente que un laboratorio deba tomar las medidas pertinentes para
asegurarse de que es capaz de producir, y de que lo hace efectivamente, datos con el
nivel necesario de calidad. Dichas medidas comprenden:
Otros aspectos de lo anteriormente dicho han sido tratados por el Grupo de Trabajo
Interdivisional de la IUPAC sobre Armonización de Métodos de Garantía de Calidad
para Laboratorios Analíticos, en particular mediante la elaboración de protocolos
sobre los estudios de rendimiento de los métodos, ensayos de aptitud, y control
interno de calidad (OENO, 2005).
9
En los sistemas de calidad y en general en los sistemas de aseguramiento, lo que se
busca es que los laboratorios cumplan con los requerimientos mínimos necesarios
para asegurar que sus resultados ofrezcan confiabilidad y que las técnicas y/o ensayos
utilizados sean realizados de manera correcta, hecho que minimiza totalmente las
posibilidades de error. Como consecuencia se obtienen procesos controlados que
conllevan a resultados con calidad. Esto indica que la organización, en este caso
puntual, los laboratorios de microbiología trabajan con enfoques científicos
reconocidos, de consenso general y que cualquier desviación en estos puede ser
sustentada con fundamentos (validación) considerados aceptables por los expertos en
el área. Para llegar a obtener esos resultados confiables, debemos hablar de validación
de pruebas y/o ensayos que permitan que esos resultados sean reales y fiables.
(http://www.ideam.gov.co/temas/calidad/Descripci%C3%B3n%20Gral.%20Norma%
20ISO-IEC%2017025.pdf)
10
servicios que poseerán las características de calidad predefinidas (WHO Technical
Report Series, No. 823, 1992).
11
Dentro de un proceso de validación se deben validar:
Por otro lado, se deben tener en cuenta algunos requisitos relacionados con el proceso
de trazabilidad, tales como la confirmación de qué tan adecuada es la especificación
del método. La validación del método debe suministrar una prueba razonable de la
condición y la ecuación de medición. En un caso ideal dentro de un laboratorio
individual incluiría las siguientes actividades: (Baracaldo, R)
12
e. Estudios adicionales sobre fuentes posibles de errores sistemáticos, incluyendo
spiking y recuperación
13
1.2 TIPOS DE VALIDACIÓN SEGÚN SU OBJETIVO
14
4. Si es posible, expresiones de la incertidumbre dentro de los límites fiables
especificados
5. Rango de aplicación y limitaciones.
Por regla general, la validación secundaria utiliza los mismos modos operativos que
la validación primaria pero bajo formas seleccionadas y simplificadas, aunque
posiblemente extendidas a lo largo de un periodo de tiempo mayor. Las muestras
naturales son los materiales de ensayo óptimos y el trabajo necesario se refiere
exclusivamente a que el modo operativo se inscriba dentro de los límites
operacionales definidos en la validación primaria. (WHO Technical Report Series,
No. 823, 1992).
Para llevar a cabo una validación se debe tener clara la metodología analítica, la cual
va de lo general a lo particular, se inicia con la valoración de la técnica, que es el
principio científico que puede ser útil para suministrar información sobre la
composición de una muestra; seguida del método que es la adaptación de la técnica
para un propósito específico, que para ser utilizado correctamente debe ir descrito en
un procedimiento y finalmente a partir de la información recopilada se obtiene el
protocolo en donde se suministran una serie de direcciones precisas y definitivas que
15
deben seguirse si se quiere que los resultados analíticos se acepten, esta es la
evidencia objetiva de la validación. (WHO Technical Report Series, No. 823, 1992).
1.3.1 Selectividad Un método selectivo aporta resultados exactos para todos los
analitos de interés, mientras que uno específico produce resultados exactos para un
analito, al tiempo que los otros analitos de interés pueden interferir los unos con los
otros. (WHO Technical Report Series, No. 823, 1992).
16
1.3.3 Calibrado y Linealidad Se refiere a la proporcionalidad entre la concentración
del analito y su respuesta, es decir si la técnica o método produce resultados directa o
indirectamente proporcionales a la concentración o cantidad del analito, dentro de un
intervalo determinado. En algunos casos se requiere una transformación matemática
de la respuesta. (WHO Technical Report Series, No. 823, 1992).
17
procedimiento que varía durante una ejecución, incluidas las contribuciones
procedentes de errores gravimétricos y volumétricos conocidos, de la heterogeneidad
del material de prueba y de la variación en las etapas de tratamiento del análisis, y se
observa fácilmente en la dispersión de los análisis replicados. El efecto de ejecución
se explica por las variaciones cotidianas en el sistema analítico, como los cambios de
analistas o de lotes de reactivos, el recalibrado de los instrumentos y el entorno del
laboratorio (ej.: cambios en la temperatura) (RESOLUCION OENO 8/2005).
18
La robustez en un método es finalmente, el grado de reproducibilidad de los
resultados obtenidos para las mismas muestras bajo variadas condiciones (diferentes
experimentadores, diferentes lotes de reactivos). Se realiza un diseño experimental
con varios factores y se aplica análisis de varianza (Useche, B)
19
Aquella concentración de analito que proporciona una señal significativamente
diferente de la señal de fondo. Es similar en muchos aspectos al nivel crítico. Se
estableció como 1.645 veces la desviación estándar del blanco de análisis. (Useche,
B. )
1.3.9. Limite de cuantificación Corresponde a la más baja cantidad del analito que
puede determinarse cuantitativamente con precisión y exactitud aceptables. (WHO
Technical Report Series, No. 823, 1992).
Es la concentración de analito que produce una señal más grande que el blanco y que
puede ser detectada dentro de los límites aceptados por los laboratorios. Se estableció
que es la concentración que produce una señal 10 desviaciones estándar del blanco.
(Useche, B.)
20
Los laboratorios de análisis tienen como principal objetivo reportar resultados
altamente confiables, por eso deben controlar y asegurar la calidad de sus resultados,
entendiéndose calidad, como el conjunto de propiedades y características óptimas de
un producto o servicio que prueban su actitud para satisfacer necesidades específicas
e implícitas. El mejoramiento de la calidad en el laboratorio consiste en implementar
un programa completo que vale el resultado final emitido por el laboratorio
proporcionando resultados útiles. Este mejoramiento, no solo incluye los conceptos
más tradicionales de control de calidad, como el mejoramiento y la evaluación
externa de la calidad que tiene como propósito mantener en cualquier proceso un
rendimiento a niveles aceptables según los estándares, sino que también incluye el
mejoramiento continúo de la calidad bajo el concepto de “calidad total”. (Cuesta, A).
Las técnicas mencionadas anteriormente se constituyen como las más utilizadas para
el control de calidad de alimentos y aguas. La validación y verificación de estas
técnicas es importante para que el laboratorio pueda elaborar, desarrollar y generar
resultados confiables y seguros, como requisito parcial para dar cumplimiento a las
21
normas oficiales vigentes tales como la ISO-NTC 17025. (ROMERO, Maria., et al,
2003).
Para decidir si un método es apropiado o no, se debe tener en cuenta: si ese método es
aplicable al analito a analizar, la cantidad de muestra necesaria para el ensayo, el
límite inferior del método (para ensayos cuantitativos), si usando esta metodología se
puede evaluar el cumplimiento de las exigencias requeridas para el analito. Cuando el
muestreo es llevado a cabo por el laboratorio, este debe usar procedimientos
documentados y técnicas estadísticas apropiadas para seleccionar las muestras. (Ver
Capítulo 6. Muestreo. Requisitos de la Norma 17025). La precisión, la especificidad,
22
la sensibilidad, el límite de cuantificación y/o de detección, los efectos matriciales y
facilidad de uso, son características que deben tenerse en cuenta antes de seleccionar
un determinado método de ensayo. El laboratorio debe elegir los métodos que mejor
se adecuen a sus objetivos, y debe documentarlos debidamente. (GUARNIZO,
Juliana. 2005).
Es necesario aplicar dos métodos en paralelo sobre las mismas muestras cuando se
está desarrollando un método interno, y también cuando se está recopilando
información justificativa del uso de un método alternativo (ISO/ TR 13843:2000).
El método que presente la tasa de recuperación más elevada para los organismos
buscados es obviamente el mejor, salvo que precise siempre de confirmación para su
utilización en rutina. Un método que permita obtener una tasa de recuperación algo
inferior, pero que no precise confirmación resulta preferible. Si no pueden corregirse
tasas elevadas de falsos positivos o de falsos negativos observadas en la validación
primaria por medio de una definición más detalladas de las colonias objetivo, es
conveniente considerar el método como no valido (ISO/TR 13843:2000).
23
Las diferencias debidas a las matrices deben tenerse muy en cuenta al analizar
diferentes tipos de muestras. Los resultados deben evaluarse utilizando métodos
estadísticos apropiados. (Cuesta, A).
24
aparatos, la evaluación de métodos de medición o para signar valores a materiales.
Los materiales de referencia certificados son un material acompañado de un
certificado, uno o más de los valores asignados a sus propiedades se certifican
mediante un procedimiento que establece su trazabilidad a una realización exacta de
la unidad en la cual el valor de la propiedad se expresa y para la cual cada valor
certificado se acompaña de una incertidumbre a un nivel declarado de confianza.
(Hernández, A.)
Los errores asociados a las mediciones pueden dividirse en dos grandes clases: a)
errores sistemáticos, y b) errores aleatorios. Los errores sistemáticos, tal como su
nombre lo indica, se cometen de una misma manera cada vez que se mide. Muchos
errores sistemáticos pueden eliminarse aplicando correcciones muy simples. Estos
errores son llamados también errores corregibles o determinados, a fines de
distinguirlos de los errores aleatorios, los cuales se encuentran en toda medición y
están fuera del control del observador.
25
varias. En consecuencia, estos errores son particularmente serios y peligrosos, y
pueden eliminarse sólo después de realizar cuidadosas calibraciones y análisis de
todas las posibles correcciones. Algunas veces, los errores sistemáticos se manifiestan
como un corrimiento en valores medidos consecutivamente o como un cambio en el
valor experimental medido cuando se cambia la técnica experimental de medición.
26
Según la "ISO 11133-1:2000", son:
Asimismo, toda cepa adquirida por una vía que no sea la propia colección, no podrá
mencionarse utilizando el número que tienen en esa colección, sino únicamente como
derivada de la cepa de colección. (ISO/IEC 17025).
27
ensayos de funcionamiento de métodos microbiológicos. Las técnicas estadísticas, de
utilizarse, se convierten en meras líneas directrices. (ISO/TR 13843:2000).
Para ser convincente, el número y variedad de las muestras a examinar debe ser
suficiente. Sin la ayuda de la estadística no hay ninguna manera de precisa de tomar
una decisión. En ciertos casos, la primera muestra estudiada puede indicar ya que el
método no es suficientemente bueno. Pero, una sola muestra generalmente no basta.
A veces, se necesita un millar de muestras para “demostrar” que dos métodos P/A no
son equivalentes. Seleccionar una cantidad insuficiente de ejemplos puede constituir
una pérdida de tiempo.
28
En el medio ambiente, e incluso en las muestras de laboratorio, la distribución de
partículas no es homogénea. La varianza de muestreo no es una característica del
método, mientras que la varianza debido a la toma de alícuotas de la muestra de
laboratorio sí que puede considerarse como una característica. Puede resultar
imposible utilizar métodos de homogenización suficientes para asegurar el perfecto
mezclado del contenido de la muestra sin ninguna pérdida de células viables. La
varianza intramuestra con frecuencia es considerable y da problemas en la validación.
Será necesario definir el funcionamiento para matrices diferentes, en particular en lo
que se refiere a la precisión y a los límites de trabajo superiores. (ISO/TR
13843:2000).
La variación aleatoria debido a una muestra no homogénea de las partículas entre dos
muestras paralelas, incluso en suspensiones perfectamente mezcladas, es una
característica de los métodos microbiológicos. La variación aleatoria básica es
inevitable y no tiene nada que ver con la competencia técnica o con el equipamiento.
Esta variación obedece a una ley matemática conocida, la distribución de Poisson, y
por lo tanto puede calcularse.
1.7.2 Material de Ensayo Está generalmente aceptado que la validación debe simular
en la mayor medida posible el proceso de rutina. Por lo tanto, las muestras naturales
con concentraciones naturales de microorganismos deberían ser los principales
materiales de ensayo. Hay excepciones en algunas circunstancias concretas. Los
materiales artificiales (materiales de referencia certificados y muestras enriquecidas)
se utilizan en sistemas de aseguramiento de la calidad internos y externos para
asegurar la competencia técnica básica de los laboratorios que participan en los
ejercicios de validación de métodos. (ISO/TR 13843:2000).
29
Puede ser útil e incluso necesario efectuar adición o enriquecimiento en la validación
secundaria, siempre que sea difícil conseguir muestras naturales con el
microorganismo buscado. El personal de laboratorio deberá ser capaz de
familiarizarse con los microorganismos buscados. Es conveniente limitar la
utilización de muestras negativas (blancos) a las operaciones de aseguramiento de la
calidad interna. Su inclusión entre las muestras estudiadas para ver la equivalencia de
métodos puede producir la impresión falsa de una buena correlación entre métodos.
Si es posible saber de antemano que muestras naturales no contienen ninguno de los
organismos objetivo, éstas podrían ser una buena elección para verificar los falsos
positivos en los ejercicios reales de validación.
30
Para la mayor parte de los métodos de recuento de colonias, es posible desarrollar un
líquido equivalente de la misma composición química pero desprovisto de matriz
sólida (agar, membrana filtrante). El efecto del entorno sólido puede evaluarse
comparando los recuentos de colonias con la estimación equivalente NMP, siempre
que la reacción para la identificación del microorganismo buscado sea la misma para
los dos tipos de detectores y que el número de tubos paralelos sea suficiente para
obtener un final de precisión adecuado. Es posible evaluar la sensibilidad de los
detectores P/A procediendo a comparaciones líquido-sólido similar. (ISO/TR
13843:2000).
31
1.8. SISTEMA DE GESTIÓN DE CALIDAD EN LABORATORIOS DE
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO
32
1.8.1 Aseguramiento de la calidad de los resultados/control de Calidad Según el
apartado 5.9 de la NTC ISO 17025 el control de calidad se divide en:
El intervalo entre estos controles dependerá del diseño del programa y del número de
ensayos realizados. Es recomendable que, en la medida de lo posible, los ensayos
incluyan controles para evaluar sus resultados. En circunstancias especiales, un
laboratorio puede estar acreditado para realizar un ensayo que rara vez se demanda.
Se reconoce que, en tales casos, un programa continuo de control interno de la
calidad no siempre será apropiado, siendo preferible un sistema que se realice en
paralelo al ensayo y que demuestre que los resultados son satisfactorios. (G-ENAC-
04).
33
válidos. Es necesario proceder a un control de calidad analítico (AQC) en relación
con los análisis de rutina cotidianos. Este control permite verificar la capacidad de
utilizar satisfactoriamente un método. El AQC es un proceso continuo. Los gráficos
de guía cuyos límites se han deducido a partir de las especificaciones del método (a
partir de la validación primaria), o a partir de consideraciones teóricas, son las
herramientas principales. (ISO/TR 13843:2000) (AOAC INTERNATIONAL)
34
Control de calidad externo (ensayos de aptitud) Los laboratorios deben participar
regularmente en ensayos de aptitud relacionados con el alcance de su acreditación,
dando preferencia a los programas de ensayos de aptitud que utilicen matrices
apropiadas. En algunos casos concretos, esta participación puede ser obligatoria. Los
laboratorios deben utilizar el control externo de la calidad no sólo para detectar
desviaciones en los resultados obtenidos, sino también para verificar la validez de
todo el sistema de calidad. (G-ENAC-04).
Los estudios que sobre materiales “homogéneos” en los que participan, de forma
colaborativa, varios laboratorios se consideran ensayos esenciales para el
funcionamiento del método, pero también para el de los propios laboratorios. (Una
vez identificados y eliminados los valores rechazables, se considera que los restantes
datos aportan la información necesaria sobre el funcionamiento y la eficiencia del
método). Hoy en día, los estudios colaborativos, constituyen una herramienta de
amplia aplicación para evaluar las características de precisión de los métodos
químicos. Parece algo prematuro recomendar la puesta en práctica de este tipo de
ensayos en microbiología. Se admite en efecto, que todos los laboratorios
35
participantes tienen varios años de experiencia en lo que concierne a los métodos
sometidos a ensayo y demostrada su capacidad para aplicarlos. Actualmente, la
experiencia demuestra que los estudios colaborativos encaminados a la evaluación del
funcionamiento de un método tienden a convertirse en ensayos de aptitud del
laboratorio y en ejercicios de formación.
El método que presenta la tasa de recuperación más elevada para los organismos
buscados es obviamente el mejor, salvo que precise siempre de confirmación para su
utilización en rutina. Un método que permita obtener una tasa de recuperación algo
inferior, pero que no precise confirmación resulta preferible. Si no pueden corregirse
tasas elevadas de falsos positivos o de falsos negativos observadas en la validación
primaria por medio de una definición más detalladas de las colonias objetivo, es
conveniente considerar el método como no válido.
36
técnicamente competente para la realización de un ensayo o grupo de ensayos
determinados. (G-ENAC-04).
37
2. FORMULACIÓN Y JUSTIFICACIÓN DEL PROBLEMA
38
2.2 JUSTIFICACIÓN
Con el desarrollo de la guía se pretende facilitar a los laboratorios que llevan a cabo
pruebas microbiológicas la validación de estas, orientándolos de forma clara y
sencilla en la consecución de los objetivos de la ISO 17025, ya que con ello se
sustenta el hecho de presentar al cliente o a la persona interesada resultados
confiables que permitan al mismo tomar decisiones. Se sustenta al mismo tiempo, que
los procedimientos de validación dará lugar a un sin número de beneficios, entre los
cuales está el poder garantizar la competencia de las técnicas realizadas en dichos
laboratorios, el logro y mantenimiento de la calidad de los servicios ofrecidos por
estos, apertura de nuevas oportunidades de mercado, obtención de reconocimiento y
39
de esta forma aumento de la credibilidad y confianza por parte del cliente, así como
competitividad, calidad y garantía de bienestar social, debido al logro de la
sensibilización del personal, el uso de equipos e instrumentos adecuados,
conocimiento de diferentes requisitos normativos, entre otros.
40
3. OBJETIVOS
41
4. MATERIALES Y MÉTODOS
42
Con respecto a la utilización de fuentes primarias, se realizaron entrevistas con
personas involucradas con los laboratorios que llevan a cabo pruebas y/o ensayos
microbiológicos y también con personas conocedoras de temas como la
validación y los modelos matemáticos a nivel microbiológico.
Luego del análisis de las referencias bibliográficas se pudo deducir que los
modelos lineales de la estadística paramétrica no permiten entender de forma
adecuada el crecimiento microbiano debido a la heterogeneidad que este presenta
como consecuencia del sistema físico, bioquímico y micro-ecológico de la
muestra. Debido a esto se hizo necesario profundizar más en otros métodos
estadísticos que permitieran cuantificar las observaciones realizadas en
microbiología estándar con el fin de expresarlas cuantitativamente.
43
Con la estadística no paramétrica se estima la exactitud y la precisión de las
mediciones microbiológicas. Por lo tanto se propuso un conjunto de herramientas
matemáticas propias de este tipo de estadística a través de un modelo de
validación en microbiología de proceso modular, en el cual se planteó la
validación orientada a la muestra (VOM), validación orientada al procedimiento
(VOP) y validación orientada al sistema (VOS), pero se profundizó únicamente
en la VOM.
44
5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
45
Downloaded from http:
//64.55.218.151/pubs/storyarchives/cutlabs.htm. 8/28/2003
Para dar cumplimiento a las políticas planteadas en cuanto a calidad se han venido
brindando los siguientes marcos regulatorios: El estatuto de Protección al
Consumidor y El Sistema Nacional de Normalización, Certificación y Metrología
(SNNCM) a cargo de la Superintendencia de Industria y Comercio (SIC) (Crubellati,
R. 2005). Esta superintendencia es la entidad que acredita a los organismos
evaluadores de la conformidad que operan dentro del SNNCM, el cual de acuerdo
con los lineamientos establecidos en el CONPES 3446 del 30 de octubre de 2006, se
irá transformando en el nuevo Subsistema Nacional de la Calidad. (Organismo
Nacional de Acreditación, 2007)
46
de inspección. A la misma fecha dicha entidad tenía un total de 185 solicitudes de
acreditación en trámite y 16 solicitudes de ampliación del alcance de acreditaciones
ya otorgadas.
47
creado programas como los llamados Interlaboratorios supervisados por la Red de
Laboratorios perteneciente al Laboratorio de Salud Pública, con actividades de
diagnóstico, referencia, contrarreferencia, control de calidad, capacitación,
investigación en apoyo a la vigilancia en salud pública, prevención, control y
seguimiento de enfermedades que se adelanta en atención a las personas y al medio
ambiente, análisis, vigilancia y control sanitario de medicamentos, sustancias
químicas de riesgo para la salud humana, productos biológicos, alimentos, bebidas,
cosméticos, insumos para la salud y productos varios (Secretaría Distrital de Salud:
Prospectiva del Laboratorio Distrital de Salud Pública, 2003)
R E D D E L AB O R AT O R IO S
1 20 C LIN IC O S
A LIM E N TO S 104
C ITO P A TO LO G ÍA
1 00 TA M IZA JE N E O N A TA L
TO XIC O LO G ÍA 82 85
80
60
54
60
40
35
40 25 25
20 20 20 22
20
20 8
0
19 89 19 98 2 000 2 00 1 200 2 200 3
48
Fuente: Secretaría Distrital de Salud: Prospectiva del Laboratorio Distrital de Salud Pública, 2003
También se determinó en conjunto con los diferentes grupos de trabajo y a la luz del
decreto 475 sobre vigilancia de la calidad del agua, establecer con claridad un
muestreo adecuado en las pruebas analíticas de agua, disminuyendo de 9000 a un
promedio de 6000 por año, que garantiza la vigilancia adecuada de la calidad de agua
de consumo humano (Secretaría Distrital de Salud: Prospectiva del Laboratorio
Distrital de Salud Pública, 2003).
49
Menor Riesgo 6042 298 202 413
Bebidas alcohólicas 823 1244 892 822 1272
Control Especial 1714 642 553 1377
Control de Calidad 410 457
Medicamentos 217 55 181 181
Microbiología Ambiental 11
Total 22114 22035 11517 9989 12306
50
El Programa PICCAP ha impulsado la adecuación y el desarrollo de los Laboratorios
de Salud Pública y la estandarización de metodologías para generar resultados
confiables. Actualmente hay 218 laboratorios inscritos, convirtiéndose el PICCAP en
uno de los mejores programas de control de calidad externo de país (Crubellati, R. et
al, 2007).
Esta guía plantea metodologías no solo matemáticas sino practicas ya que especifica
además, la toma de la muestra, el número de muestras tomadas, el método de
muestreo, entre otras variables que podrían o no afectar los resultados de la
validación de un método microbiológico, en caso que no se obtengan resultados
51
adecuados implicaría la realización del proceso nuevamente y esto acarrearía perdida
de tiempo y aumento de los costos de la validación que no es un proceso económico
en su implementación (Ver Anexo 1).
Por otro lado, teniendo en cuenta que los análisis microbiológicos repercuten
directamente en la salud tanto humana como animal, los métodos de ensayo, como
los laboratorios que realizan los análisis deben asegurar los resultados fiables, lo cual
implica que además de reunir los aspectos técnicos que aseguren su validez, se deben
poder reproducir y realizar con una serie de precauciones que conlleven a la
obtención de resultados comparables, independientemente del laboratorio que los
realice.
Para dar cumplimiento al propósito establecido por la ISO/IEC 17025 según la cual
“la validación es la confirmación, a través del examen y el aporte de evidencias
objetivas, de que se cumplen los requisitos particulares para un uso específico
previsto”, se hace necesario el conocimiento de las características de funcionamiento
del método teniendo en cuenta que la validación de los métodos microbiológicos no
puede realizarse igual a la de métodos físicos o químicos debido a la variabilidad que
se puede presentar. Sin embargo, un laboratorio que realice actividades de control de
calidad interno y además participe en actividades interlaboratorios que lleven a cabo
comparaciones, está en la capacidad de obtener información sobre las características
de funcionamiento de los métodos.
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desarrollo de métodos para la validación con el fin de obtener metodologías más
completas, que faciliten al personal la toma de decisiones correctas en el proceso.
Para seguir la metodología planteada por esta guía se discute también no solo la
competencia de las condiciones ambientales sino también de los materiales, así como
la más crítica y de gran importancia, la competencia técnica para desarrollar las
metodologías fuera y dentro del laboratorio (Cuesta, Alicia).
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Al hablar de capacidad técnica y condiciones ambientales favorables para el
desarrollo de la validación, se debe hablar también de la utilización de elementos que
faciliten el proceso; como equipos, reactivos, medios de cultivo y cepas de referencia.
Esta ultima de gran importancia ya que se deben tener cepas de referencia para la
validación de métodos microbiológicos estándar (tema de esta investigación) y
métodos microbiológicos alternos. Por supuesto que la utilización de materiales y
condiciones favorables son indispensables en cualquier proceso de validación, pero
en el caso de esta guía se hablara de cepas de referencia, su conservación,
reconstitución y obtención de cepas de trabajo. (ISO 11133-1. 2000) Ya que del
tratamiento de éstas dependen los resultados de la validación de los ensayos.
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6. CONCLUSIONES
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7. RECOMENDACIONES
56
8. REFERENCIAS
57
CUESTA, Alicia. Guía para la acreditación de laboratorios de microbiología de
alimentos.
58
ISO/TS 11133-1 Microbiology of food and animal feeding stuffs-Guidelines on
preparation and production of culture media-Part 1: General guidelines on quality
assurance for the preparation of culture media in the laboratory.
59
RESOLUCION OENO 8/2005. Recomendaciones armonizadas para la validación
de métodos de análisis en un solo laboratorio. Informe Técnico.
60
RECURSOS ELECTRÓNICOS
http://www.sic.gov.co/Articulos_Pagina_Principal/Conferencias/2006/Sistema_Nacional_
Normalizacion.pdf. SISTEMA NACIONAL DE NORMALIZACIÒN, CERTIFICACION
Y METROLOGIA BASE PARA EL FORTALECIMIENTO DE LA
COMPETITIVIDAD.- Consulta Marzo 16 2007-.
http://www.ideam.gov.co/temas/calidad/Descripci%C3%B3n%20Gral.%20Norma%20ISO
-IEC%2017025.pdf Noviembre 2006
http://www.zmk-wolfen.de/esp/esp_servicios_cal_inform.htm.
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