Wu y Bazer Revista de Ciencia Animal y Biotecnología (2019) 10:28

https://doi.org/10.1186/s40104-019-0337-6

REVISIÓN Acceso abierto

La aplicación de las nuevas biotecnologías para la mejora de la

producción de carne de cerdo y la nutrición porcina

Guoyao Wu * y Fuller W. Bazer

Abstracto

Satisfacer la creciente demanda de proteína de cerdo de alta calidad requiere no sólo de dietas mejoradas, sino también para generar la cría porcina con rasgos deseados de

producción basadas en la biotecnología. La biotecnología puede ser clasificado como la clonación de animales con una composición genética idéntica o ingeniería genética (a

través de la tecnología del ADN recombinante y la edición de genes) para producir animales o microorganismos modificados genéticamente. Clonación ayuda a especies y

razas de conserva, en particular los que tienen excelentes características biológicas y económicas. la tecnología del ADN recombinante combina materiales genéticos de

fuentes múltiples en células individuales para generar proteínas. edición (genoma) génica consiste en la deleción, inserción o el silenciamiento de genes para producir: (a) los

cerdos modificados genéticamente con importantes rasgos de producción; o (b) microorganismos sin una capacidad de resistir a sustancias antimicrobianas. herramientas de

genes de edición actual incluyen el uso de nucleasa dedo de zinc (ZFN), del tipo activador de la transcripción efector nucleasa (TALEN), o agrupados palindrómicas cortas

espaciadas regularmente repeticiones asociadas nucleasa-9 (CRISPR / Cas9) como editores. ZFN, TALEN, o CRISPR / Cas9 componentes se entregan en las células diana a

través de la transfección (agentes basados ​en lípidos, electroporación, nucleofection, o microinyección) o bacteriófagos, dependiendo del tipo de célula y el plásmido. En

comparación con el ZFN y TALEN, CRISPR / Cas9 ofrece una mayor facilidad de diseño y una mayor flexibilidad en la ingeniería genética, pero tiene una mayor frecuencia de

efectos fuera de objetivo. Hasta la fecha, cerdos modificados genéticamente se han generado para expresar la hormona bovina del crecimiento, fitasa bacteriana, carbohidrasas

fúngico, vegetal y herramientas de genes de edición actual incluyen el uso de nucleasa dedo de zinc (ZFN), del tipo activador de la transcripción efector nucleasa (TALEN), o

agrupados palindrómicas cortas espaciadas regularmente repeticiones asociadas nucleasa-9 (CRISPR / Cas9) como editores. ZFN, TALEN, o CRISPR / Cas9 componentes se

entregan en las células diana a través de la transfección (agentes basados ​en lípidos, electroporación, nucleofection, o microinyección) o bacteriófagos, dependiendo del tipo de

célula y el plásmido. En comparación con el ZFN y TALEN, CRISPR / Cas9 ofrece una mayor facilidad de diseño y una mayor flexibilidad en la ingeniería genética, pero tiene

una mayor frecuencia de efectos fuera de objetivo. Hasta la fecha, cerdos modificados genéticamente se han generado para expresar la hormona bovina del crecimiento, fitasa

bacteriana, carbohidrasas fúngico, vegetal y herramientas de genes de edición actual incluyen el uso de nucleasa dedo de zinc (ZFN), del tipo activador de la transcripción efector nucleasa (TALEN), o

palabras clave: Biotecnología, Enfermedad crecimiento, la salud, la producción de carne, cerdos

Introducción
Carne de cerdo proporciona proteína animal de alta calidad para el consumo humano, y
es un alimento popular en China y muchos otros países, incluyendo los Estados Unidos,
Canadá, Japón y Europa. En cuanto a cualquiera de las especies animales de granja, el
rendimiento de la producción (por ejemplo, tasa de crecimiento, eficiencia de
alimentación, tamaño de la camada, y calidad de la carne) de la especie porcina
depende de genes (unidades funcionales a lo largo de la molécula de ADN, materiales
genéticos), los factores ambientales (por ejemplo, nutrición, ambient temperatura,
toxinas, y la enfermedad), y sus interacciones (Fig. 1 ). Los genes (genotipos) son la base
para el crecimiento, la lactancia, la reproducción y otras características de producción de
cerdos. Sin embargo, los genes se pueden expresar de manera óptima a
producir fenotipos deseables sólo bajo condiciones ambientales favorables, tales
como provisión óptima de nutrientes de la dieta (energía, aminoácidos, ácidos
grasos, carbohidratos, vitaminas y minerales), las temperaturas ambientales
deseables, aire de alta calidad, y el agua potable. Un objetivo importante de la
producción de carne de cerdo es para realizar completamente el potencial
genético de la especie porcina para la reproducción, la lactancia, el crecimiento
(incluyendo la acumulación de proteínas en el músculo esquelético), y resistencia
a la enfermedad, mientras que la prevención de la acumulación excesiva de tejido
adiposo blanco y la reducción de la excreción de desechos (nitrógeno y minerales)
en el medio ambiente [ 1 ]. En los últimos 60 años, la eficiencia de la producción de
carne de cerdo se ha mejorado enormemente debido a los avances en la cría de
animales, nutrición y manejo. Por ejemplo, Boyd y Cady [ 2 ] Informó de que en los
Estados Unidos, el alimento: ganancia (kg de alimento consumido / kg

* Correspondencia: g-wu@tamu.edu
Departamento de Ciencia Animal y el Centro de Biotecnología Animal y Genómica, Universidad de Texas
A & M University, College Station, TX 77843-2471, EE.UU.

© El Autor (es). 2019 Acceso abierto En este artículo se distribuye bajo los términos de la Licencia Internacional 4.0 Creative Commons ( http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
), Que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que se dé crédito apropiado al autor original (s) y la fuente, proporcionar un
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) Se aplica a los datos puestos a disposición en este artículo, a menos que se indique lo contrario.
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cromosoma
materno

Genes (segmento de ADN)

Transcripción

cromosoma paterno
ARNm
Los factores ambientales (por ejemplo, la
La energía, los AA
Traducción nutrición, la temperatura ambiente, las
y minerales
toxinas, el ruido, el polvo y la

enfermedad)
Proteína

reproducción, la inmunidad, y la supervivencia

Metabolismo y las respuestas fisiológicas

El crecimiento, el desarrollo, la lactancia, la

Figura 1 Papel de los genes en el crecimiento, el desarrollo, la lactancia, la reproducción y la salud de los cerdos. El cerdo domesticado tiene 19 pares de cromosomas (un total de 38 cromosomas),
con un juego de cromosomas de cada padre. Un cromosoma contiene segmentos de la molécula de ADN que son llamados genes. Un rasgo es controlado por dos formas variantes de un gen
(llamado un alelo) situado en la misma posición (locus genético) en el par de cromosomas, con un alelo heredado de cada padre. La expresión de genes a través de los procesos de transcripción y
traducción a producen proteínas se ve afectada por factores ambientales (incluyendo la nutrición, la temperatura ambiente y la enfermedad) de una manera células específicas

carcasa vestidos) de cerdos en crecimiento se redujo en un 33% a partir de biotecnologías comprensión. Las células animales y bacterias contienen la membrana plasmática,

6,6 en 1959 a 4,4 en 2009 y que la huella de carbono (kg CO 2 e / lb. de carcasa el citoplasma, y ​el núcleo, mientras que la mayoría de las células animales también contienen

vestido) se redujo en un 35% durante este período de 50 años. Sin embargo, la mitocondrias. La conversión de nutrientes de la dieta en energía biológica en animales requiere

industria porcina todavía se enfrenta a muchos desafíos. En primer lugar, las altas tanto en el citoplasma y las mitocondrias (la principal central eléctrica), mientras que este proceso

tasas de pérdidas embrionarias, restricción del crecimiento intrauterino, y la mortalidad se produce sólo en el citoplasma a través de la glucólisis en las bacterias. El suministro de

pre-destete ocurrir en cerdos [ 3 ]. En segundo lugar, la energía de la dieta se reparte energía es vital para la integridad y función celular. El núcleo es el sitio de: (a) la síntesis de ADN

fácilmente hacia la acumulación espontánea y rápida de tejido adiposo blanco y el almacenamiento; (B) cromosomas (un portador de moléculas largas de ADN y proteínas

subcutáneo en el cultivo de acabado de cerdos [ 4 ]. En tercer lugar, los cerdos tienen asociadas); (C) la síntesis de ARN dirigida por ADN; y (d) el control de la síntesis de proteínas y

una capacidad subóptima para digerir planta-fuente de proteínas, minerales y fibras. el crecimiento celular. Así, este orgánulo es altamente significativa para el desarrollo de nuevas

En cuarto lugar, los cerdos (en particular durante gestación, lactancia, biotecnologías para alterar la producción de proteínas (incluyendo enzimas y componentes

crecimiento-acabado, y los períodos de cría) exhiben una alta susceptibilidad al estrés celulares) y péptidos (incluyendo vacunas y antimicrobianos). El cerdo domesticado tiene 38

por calor y las enfermedades infecciosas. En quinto lugar, se necesitan urgentemente cromosomas dispuestos en 19 pares (2 cromosomas por par, con un cromosoma de cada padre),

alternativas a los antibióticos de alimentación en la producción porcina [ 5 ]. Por lo tanto, incluyendo un par de cromosomas llamados cromosomas sexuales (XX para las hembras y XY

la mejora de la eficiencia de utilización del alimento y reduciendo los costos de para los hombres). Cada cromosoma contiene diferentes segmentos (unidades de herencia,

producción se requieren continuamente para aumentar la rentabilidad de la industria genes) de ADN para la célula a las proteínas de sintetizar, controlando de este modo el

porcina mundial. Un enfoque importante para la solución de estos problemas es el uso funcionamiento del organismo. Las moléculas de ADN de doble hélice consisten en azúcares

de las nuevas biotecnologías, desoxirribosa, fosfatos y bases nitrogenadas [adenina (A), citosina (C), guanina (G), y timina (T)]

organizados en pares (AT y GC) a través de enlaces iónicos. Todo el conjunto de cromosomas

para el El cerdo domesticado tiene 38 cromosomas dispuestos en 19 pares (2 cromosomas por

incluyendo la clonación, niería genética par, con un cromosoma de cada padre), incluyendo un par de cromosomas llamados

niería (producción de animales transgénicos), edición de gen, producción cromosomas sexuales (XX para las hembras y XY para los hombres). Cada cromosoma contiene

de vacunas, y la fermentación microbiana de piensos. diferentes segmentos (unidades de herencia, genes) de ADN para la célula a las proteínas de

sintetizar, controlando de este modo el funcionamiento del organismo. Las moléculas de ADN de

doble hélice consisten en azúcares desoxirribosa, fosfatos y bases nitrogenadas [adenina (A),

Conceptos básicos de cromosomas, genes y alelos relacionados con citosina (C), guanina (G), y timina (T)] organizados en pares (AT y GC) a través de enlaces

la biotecnología animal iónicos. Todo el conjunto de cromosomas para el El cerdo domesticado tiene 38 cromosomas

El conocimiento de la célula, que es la unidad básica del animal, planta y dispuestos en 19 pares (2 cromosomas por par, con un cromosoma de cada padre), incluyendo

microorganismo, es necesario para un par de cromosomas llamados cromosomas sexuales (XX para las hembras y XY para los hombres). Cada cromosoma
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cerdo contiene todos sus genes (llamado el genoma). Un rasgo (o
característica) está controlada por dos formas variantes de un gen
(llamado un alelo) situado en la misma posición (locus genético) en el par
de cromosomas, con un alelo heredado de cada padre. Dominante y
alelos recesivos son los factores determinantes para un solo rasgo. Esto
proporciona la base para la conservación de materiales genéticos en los
cerdos y la inserción de un nuevo gen en un cerdo.
A rasgos cuantitativos locus (QTL) es una sección de ADN que se
correlaciona con la variación en el fenotipo de una población de organismos (por
ejemplo, tasa de crecimiento, tamaño de la camada, y la producción de leche).
QTL se asignan mediante la identificación de marcadores moleculares que [tales
como polimorfismos de nucleótido único (SNPs)] se correlacionan con un rasgo
observado. Un marcador genético es una secuencia de ADN que se une a un
gen que afecta a un rasgo, y es de importancia económica en la producción
porcina. Por ejemplo, Andersson et al. [ 6 ] Informó de la presencia de un QTL en
el cromosoma 4 para controlar el crecimiento desde el nacimiento hasta 70 kg,
la longitud del intestino delgado, y deposición de grasa en cerdos (jabalí
Europea × gran cruz blanca). Además, un QTL en el cromosoma cerdo
8 era identificado como secretada
fosfoproteína-1 para la supervivencia prenatal y tamaño de la camada [ 7 ], Y
esta proteína es ahora conocido para regular transporte de iones y agua por
la placenta cerdo [ 8 ]. Hasta la fecha, con el ARN-Seq (secuenciación de ARN;
también llamada siguiente secuenciación generación) la tecnología, la
genómica biología ha extendido más allá de la secuenciación genómica
tradicional a definir todo el transcriptoma de un organismo [ 9 ]. En la
investigación, el ARN-Seq se puede utilizar para determinar la presencia y
cantidad de ARN (incluyendo ARNm, ARNt, y ARN micro) en una muestra
biológica. Este método revolucionario ahora se utiliza cada vez más para
analizar la expresión génica y descubrir SNPs en los animales. Genomas que
son resistentes o susceptibles a ciertas enfermedades, o animales que tienen
alta versus baja rendimiento de la producción (por ejemplo, la producción de
leche, la tasa de crecimiento del músculo, la eficiencia de alimentación) se
pueden comparar y identificados, con el objetivo de mejorar el rendimiento de
la salud y la producción de la especie porcina en diferentes etapas de su ciclo
de vida.
Las biotecnologías en la nutrición y la producción porcina
Por definición, las biotecnologías son tecnologías que se utilizan en la
investigación y aplicaciones biológicas. En un término amplio, las biotecnologías
pueden clasificarse como clonación de animales (a través de transferencia
embrionaria de células nuclear y la transferencia nuclear de células somáticas) y la
ingeniería genética [ADN recombinante (ADNr) tecnologías, edición de genes, y la
producción de animales transgénicos] [ 10 ]. Clonación de animales se refiere a la
producción de genéticamente idénticos
individuos
a través de la reproducción asexual para la conservación de materiales genéticos.
Esto puede ocurrir de forma natural en el nacimiento
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de gemelos idénticos. La clonación se puede realizar también a través de escupir
embrión mediante la transferencia de hasta cuatro blastómeros individuales de un
embrión de 4 células en cuatro madres receptoras diferentes. En contraste, las
biotecnologías que añadir, quitar, o ADN rearrange para modificar fenotipos se
llaman ingeniería genética o la transferencia de genes. La clonación y la
ingeniería genética son dos técnicas diferentes, pero se pueden combinar para
producir animales individuales (por ejemplo, cerdos modificados genéticamente
con α- 1,3-galactosiltransferasa gen knock-out para el trasplante de órganos).
Clonación de animales
procedimientos
El uso más común del término “ clonación ” se refiere a la producción de
un animal a partir de sus propias células. Cuando las células donantes
(por ejemplo, fibroblastos) son a partir de embriones de etapa temprana,
la clonación se conoce como transferencia nuclear de células
embrionarias (ECNT). Por ejemplo, Prather et al. [ 11 ] Informó de la
primera clonación de cerdos mediante el uso de células embrionarias
como donante. Cuando las células donantes (por ejemplo, células de la
piel) son de fetos, jóvenes o maduran animales, la clonación se llama
transferencia nuclear de células somáticas (SCNT). Esencialmente, la
clonación implica la transferencia de un núcleo de una célula donante en
un ovocito maduro enucleado (un ovocito cuyo propio núcleo ha sido
eliminado) (Fig. 2 ). En la práctica, la transferencia nuclear puede llevarse
a cabo mediante: (a) fusión (micromanipulación de núcleo en el espacio
perivitelino dentro de la zona pelúcida, seguido por electrofusión de las
dos células); (B) microinyección directa del núcleo, el núcleo más parte
del citoplasma, o incluso toda la célula donante en el ovocito receptor; o
(c) la eliminación de la zona pelúcida del ovocito receptor por
micromanipulación o enzimáticos métodos, seguido por la fusión de la
célula donante a través de métodos químicos o eléctricos [ 10 ]. En
cualquier forma, el ovocito se desarrolla en un embrión en fase inicial en
la placa de cultivo y después se implanta en el útero de una hembra
adulta. En última instancia, la hembra adulta da a luz a un animal que
tiene la misma composición genética como el animal que donó el núcleo
de una célula embrionaria o somática. Este animal joven se conoce como
un clon cuando se derivan de células parentales genéticamente
idénticos. científicos de los animales tienen aproximadamente 40 años de
experiencia con la clonación. El año de 1979 fue testigo de la primera
producción de ratones genéticamente idénticos por embriones división de
ratón en el tubo de ensayo y luego implantar los embriones resultantes
en úteros de ratones hembra adulta. Después de 276 intentos, 12 ]. Al
inyectar directamente los núcleos de fibroblastos fetales porcinos en
oocitos enucleados, seguido por el desarrollo inducido a través de
electroactivación, Onishi et al. [ 13 ] Transfirieron 110 embriones clonados
a cuatro cerdas sustitutas, resultando en
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Núcleo de células
Embrión o
donantes (por ejemplo,
adulto cerdo
fibroblastos o células de
la piel)
cerdo sin fertilizar
hembra adulta ovocito
ovocitos
lechones Implantado en el útero
clonados de cerda sustituto
Figura 2 Esquema de la clonación de cerdo a partir de células donantes embrionarias o adultas. An, oocito fertilizado enucleado de un cerdo hembra adulta se fusiona con el núcleo de una célula donante
embrionario o adulto a través de impulso eléctrico para formar una nueva célula. Esta nueva división sufre de células en un tubo de ensayo (medio de cultivo) en un embrión etapa temprana, que se implanta en el
útero de una cerda. En última instancia, la cerda da a luz a los lechones que tienen la misma composición genética como el animal que donó la célula embrionaria o somática
el nacimiento de un lechón mujer aparentemente normal. Además, Polejaeva et
al. [ 14 ] Fueron capaces de generar cerdos clonados a partir de células somáticas
adultas a través del método de transferencia nuclear.
Utilizando la técnica de SCNT, Betthauser et al. [ 15 ] Produjo cuatro lechones
machos sanos de dos cerdas sustitutas. De nota, genéticamente animales
idénticos pueden no ser fenotípicamente idénticas, ya sea para la descendencia
nacida naturalmente o las progenies que son producidos por clonación [ 10 ].
Esto es principalmente porque los factores epigenéticos y los factores
ambientales (por ejemplo, la nutrición, la temperatura ambiente, y la calidad del
aire) la expresión génica influencia en las células [ dieciséis ].
Ventajas y aplicaciones
Una clara ventaja de la clonación es a razas de conserva o especies (particularmente
aquellos que son peligro de extinción), manteniendo de esta manera o aumentando la
diversidad genética en la población [ 10 ]. La clonación también puede permitir de
machos castrados que poseen buenas características (por ejemplo, carne de alta
calidad, así como inusualmente altas tasas de crecimiento de tejido magro y eficiencia
de la alimentación) para pasar sus rasgos genéticos a la descendencia. En la
agricultura animal, el uso principal de la clonación es producir animales de cría. La
Administración de Alimentos y Medicamentos de Estados Unidos [ 17 ] Publicó un
artículo afirmando que
“ carne y leche de clones de ganado vacuno, porcino (cerdos), y cabras, y el linaje de
los clones de cualquier especie que se consumen tradicionalmente como alimento,
como son seguros para el consumo como alimento de animales criados
convencionalmente ”. Como se señaló anteriormente, existe un creciente interés en la
clonación de cerdos para proporcionar órganos especiales para el trasplante en
pacientes humanos con ciertas enfermedades [ 18 ]. Por lo tanto, la clonación es útil
no sólo para la investigación biomédica y agrícola, sino también la producción de
productos farmacéuticos y conservación genética natural.
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activación (por ejemplo, eléctrica
legumbres)
fusionadas través de la
Fusión de células
enucleado
Núcleo de
División celular
embrión etapa
temprana
desventajas
La SCNT sigue siendo un procedimiento técnicamente difícil y costoso [ 19 ].
Las principales desventajas de la clonación de animales son una eficiencia
muy baja a la descendencia productos, así como la mala salud y una baja
tasa de supervivencia de las crías. Esto puede ser el resultado de: (a) la
reprogramación inapropiado del ADN nuclear de los donantes a fenotipos
metabólicamente normales; y (b) interacción inapropiada entre el embrión /
feto y el útero de la madre destinatario. Es de destacar que en el ganado
porcino y vacuno, sólo el 1% y el 20% de los embarazos continúan plazo;
25% de los receptores embarazadas desarrollan hidropesía (siendo
hidropesía fetal una condición en la que el feto que se caracteriza por una
acumulación de líquido, o edema, en al menos dos compartimentos fetales;
hidropesía alantoides o hidropesía amnios ser una acumulación de exceso
de líquido dentro de la alantoideo o membranas amnióticas,
respectivamente); 20 - 25% de las crías tienen anormalidades en el
desarrollo; y altas tasas de mortalidad neonatal (por ejemplo, 30 - 40% de los
terneros mueren antes de los 150 días de edad) [ 10 , 13 , 15 ]. Aunque el
proceso de clonación es sencillo, los resultados no siempre son predecibles
debido a una variedad de factores complejos que implican la fusión celular,
el desarrollo embrionario, y la función uterina materna. Debido a su baja
eficiencia, la clonación es poco probable que sea útil para la producción
económica de una gran cantidad de carne para el consumo humano.
Ingeniería genética
Tecnologia de ADN recombinante
molécula Un ADNr es una molécula de ADN formada a través de métodos de
laboratorio de materiales genéticos derivados de dos o más fuentes [ 20 ]. Las
secuencias de ADN utilizados en la construcción de moléculas de ADNr
pueden proceder de cualquier especie (incluyendo bacterias, plantas y
animales). Las moléculas de ADNr se denominan a veces de ADN quimérico,
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porque pueden ser hechos a menudo de material genético de dos especies
diferentes (por ejemplo, cerdos y bacterias). Los difiere de la tecnología de ADNr de
recombinación genética en que los primeros resultados de métodos artificiales en
un tubo de ensayo, mientras que el último es un proceso biológico normal que
conduce a la remezcla de secuencias de ADN existentes en las células. La
estrategia básica de las tecnologías de ADNr es insertar un fragmento de ADN de
interés (por ejemplo, un ADN porcino) en un portador vector (una molécula de ADN
o un plásmido) que es capaz de replicación independiente en una célula huésped
(por ejemplo, E. coli).
Además de los plásmidos (moléculas de ADN circular que se originaron a
partir de bacterias), otros vectores más comúnmente utilizados (no
cromosómico ADN) son virus, y células de levadura [ 21 - 23 ]. Dentro de la
célula huésped (por ejemplo, E. coli.), el rDNA que lleva un inserto de ADN
cerdo puede replicar rápidamente junto con las bacterias para generar
millones de copias del ADN plásmido, que dirige la síntesis de una proteína o
polipéptido de interés (Fig. 3 ).
Ventajas y aplicaciones
La tecnología del ADN recombinante ofrece muchas ventajas. Por ejemplo,
se puede modificar un solo locus del gen posiblemente sin perturbar el resto
del genoma y es de gran valor para la investigación básica, la medicina y la
agricultura. Este biotecnología es la base para la producción de animales
transgénicos (incluyendo cerdos; véase la siguiente sección) [ 24 ]. Además,
los científicos pueden utilizar tecnologías de ADNr para producir proteínas
(incluyendo interferón tau, hormonas y enzimas para alimentación animal),
péptidos, vacunas, aminoácidos, ácidos grasos y vitaminas por bacterias,
tales E. coli
[ 25 - 35 ], Tal como se resume en la Tabla 1 . Los costos son bajos y los
beneficios son enormes. Por ejemplo, la disponibilidad
ADN del plásmido
bacteriano (vector)
Enzima Enzima
restrictiva restrictiva
Un segmento de
ADN (insertar)
de ADN de plásmido Pig
ligasa La unión de moléculas de ADN de
inserción y vector
introducción en
E. coli
El ADN recombinante
Fig. 3 Tecnologia de ADN recombinante. Con la acción de enzimas de restricción, un segmento de ADN (inserto) se aísla de un ADN de cerdo y un plásmido de ADN bacteriano se escinde. Catalizada por una
ligasa, un inserto de ADN se une a la plásmido abierto para crear un plásmido de ADN recombinante, que se introduce a continuación en E. coli para producir una proteína o polipéptido de interés. El plásmido
y las bacterias se replican rápidamente para generar una gran cantidad de la proteína o polipéptido
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de piensos de la categoría aminoácidos pueden reducir sustancialmente el
contenido de proteína en la dieta, lo que disminuye la excreción de nitrógeno en el
medio ambiente. Una reducción en el contenido de proteínas de la dieta por una
unidad de 1% (por ejemplo, del 16% al 15% de proteína cruda) puede disminuir la
excreción de nitrógeno total (en la orina más heces) a partir de cerdos en
crecimiento por 8,5% [ 36 ]. Además, las tecnologías de ADNr también pueden
modificar genomas bacterianos a: (a) generar enzimas para la fermentación de
alimentación [ 34 ]; (B) eliminar la resistencia bacteriana a los antibióticos mediante
la producción de enzimas para eliminar las moléculas que median [ 35 ]; y (c)
desarrollar vacunas a través de la separación de los antígenos de proteínas
usando anticuerpos monoclonales específicos, la síntesis de antígenos de
proteínas por los genes clonados y la síntesis de péptidos a utilizar como vacunas [ 37
].
desventajas
Debido a la investigación inadecuada, algunas personas están preocupados por la
seguridad de la biotecnología de proteínas (por ejemplo, bovino recombinante
hormona del crecimiento) o potenciales subproductos generados por la tecnología de
ADNr. La inserción de un gen en, o deleción de un gen a partir de, el genoma de los
animales puede afectar la función o la estabilidad de los genes existentes en los
organismos [ 37 ]. Finalmente, en condiciones de cultivo in vitro pueden no ser
óptimas para altas tasas de transcripción y traducción de genes recombinantes en
las nuevas células. Se requiere más trabajo para abordar estas cuestiones
importantes.
Los animales genéticamente modificados
De línea germinal y no germinales línea de animales transgénicos se pueden producir
mediante el uso de las nuevas biotecnologías. la transferencia de ADN ectópico (no
germinales línea transgénica) se refiere a la directa
La replicación del
plásmido y
bacterias
Bacteria con un gen
porcino funcional
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tabla 1 El uso de tecnología de ADN recombinante en la producción de proteínas, vacunas, aminoácidos y vitaminas por bacterias

Producto Función Referencia

la hormona del crecimiento porcino (somatotropina) Mejora el crecimiento de tejido magro Chung et al. [ 25 ]

La insulina humana Regula el metabolismo; diabetes trata Keen et al. [ 26 ]

vacunas Previene bacterianas y enfermedades virales EMITIR [ 27 ]

Los anticuerpos Controles de virus (por ejemplo, virus porcina africana) EMITIR [ 27 ]

fitasas Hidroliza fitato en plantas; aumenta la digestión de proteínas y Pandey et al. [ 28 ]

minerales en las dietas

carbohidrasas Hidroliza los carbohidratos en las dietas Rosano y Ceccarelli [ 29 ]

enzimas para alimentación animal con alta óptima hidroliza Hidroliza carbohidratos de la dieta y las proteínas en las dietas Adrio y Demain [ 21 ]
carbohidratos de la dieta Adrio y Demain

temperaturas

antimicrobianos Matar las bacterias patógenas; mejora el crecimiento animal y la eficiencia de la Diez et al. [ 30 ]
alimentación

Aminoácidos (por ejemplo, Arg, Glu, Gln, Lys, Thr, y Trp) crecimiento de los animales mejora la eficiencia de la alimentación y Ma y Chen [ 31 ]

Vitaminas (tanto el agua y soluble en lípidos) crecimiento de los animales mejora la eficiencia de la alimentación y Vandamme et al. [ 32 ]

Enzimas para la fermentación de alimentación Digiere carbohidratos complejos y proteínas; produce pequeños Opazo et al. [ 33 ]
péptidos y aminoácidos Demirci et al. [ 34 ]

Las enzimas degradantes de mediadores AMR crecimiento de los animales mejora la eficiencia de la alimentación y da Costa et al. [ 35 ]

AMPERIO Resistencia antimicrobiana

administración de construcciones de ADN o células madre transgénicas en
los tejidos no reproductivos de fetos o animales vivos para producir animales
transgénicos, pero sus rasgos transgénicos no se transmiten a las
generaciones futuras a través de los gametos [ 10 ]. Germ line transgénesis
será el enfoque de este artículo (Fig. 4 ). En esencia, la producción de
animales transgénicos se basa en reacciones bioquímicas, de biología
celular, cultivo celular, transferencia de embriones, y el crecimiento y
desarrollo fetal en madres receptoras. Un animal transgénico es un animal
que lleva un gen extraño insertado deliberadamente en su genoma. El gen
extraño está construido in vitro utilizando la tecnología de ADNr.

Microinyección en
pronúcleos
Óvulo in vitro
recién transformado blastocisto
fecundado óvulo
receptora in vitro Transferencia
de embrión
método I
descendencia Desarrollar hembra
Padres transgénica
biológicos El ADN de plásmido Transferencia
(que contiene el gen de de embrión
interés)
Padres
celular interna
biológicos blastocistos masa
La inyección en

método II
células madre células madre Seleccionar las células
embrionarias La transfección embrionarias que expresan el gen de
establecidas in vitro transformadas interés

La Fig. 4 Producción de animales transgénicos a través de la inyección del ADN recombinante en el pronúcleo de un huevo fertilizado (Método I) o la inyección de células madre embrionarias
transformadas que contienen el ADN recombinante en un blastocisto (Método II). En la primera y más común método utilizado para especies de ganado, un óvulo se recoge quirúrgicamente poco después
de su fertilización, y un ADN recombinante (por ejemplo, el plásmido de ADN de interés) es entonces microinyectado a través de una aguja muy fina en el pronúcleo del óvulo fertilizado . El óvulo
transformado se desarrolla en un blastocisto in vitro y el embrión se transfiere entonces en una madre sustituta para el desarrollo a término. En el segundo método, establecido las células madre
embrionarias (preparados a partir de un embrión de preimplantación) que expresan el gen de interés en su genoma son transfectadas con un ADN recombinante. Transformadas de manera estable células
ES se seleccionan y se inyectan a continuación en la masa celular interna de un blastocisto receptor. Después de un corto período de cultivo, el embrión que contiene el gen recombinante en su genoma
se transfiere en una madre sustituta para el desarrollo a término. En ambos métodos, las madres de alquiler producen descendencia transgénica, pero el origen de los difiere blastocisto
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El ADN plásmido contiene no sólo el gen de interés sino también otras
secuencias de ADN, incluyendo un segmento del promotor (a la expresión
génica tiempo y orientar el gen a un tejido específico), secuencias
potenciadoras (para amplificar la función de genes), y un gen marcador (a
detectar la incorporación del ADN en el genoma del animal). La
construcción de ADN
se incorpora entonces en el animal ' s
genoma de la línea germinal por uno de los dos métodos establecidos: (a) la
inyección del rDNA (también conocida como una construcción de ADN) en el
pronúcleo de un huevo fertilizado (Método I); y (b) la inyección de células
madre embrionarias transformadas que contienen el ADNr en un blastocisto
(Método II). Debido a la falta de una línea celular porcina establecida de
verdaderas células madre embrionarias, sólo el Método I (modificaciones
genéticas en las células somáticas y SCNT) se ha utilizado para generar
cerdos ingeniería genética [ 38 ]. Además, los elementos de transposición
(transposones) [ 39 ] y vectores de retrovirus [ 40 ] Se puede utilizar para
generar y manipular animales transgénicos.
En la primera y más común método, un óvulo se recoge quirúrgicamente poco
después de su fertilización, y un ADNr (por ejemplo, el plásmido de ADN de
interés) es entonces microinyectado a través de una aguja muy fina en el
pronúcleo del óvulo fertilizado [ 24 ]. Alternativamente, un óvulo recibe una
inyección intracitoplasmática de espermatozoides transfectadas con un plásmido
de ADN de interés [ 41 ]. El óvulo transformado se desarrolla en un blastocisto in
vitro y el blastocisto se transfiere después en una hembra sustituto para el
desarrollo a término. Algunos de los descendientes (transgénico) contienen ADNr
que se ha integrado en su propio genoma. Debido a que el gen extraño está
presente tanto en las células germinales y las células somáticas, que puede ser
heredada por la cría de nueva progenie [ 24 ]. Tenga en cuenta que en el caso de
la combinación de técnicas de clonación y de transferencia de genes, las células
somáticas del donante pueden modificarse por ingeniería genética a través de
electroporación o vectores virales, seguido por la producción de descendencia
transgénica a través de SCNT.
En el segundo método, un gen se introduce en animales a través de las células
madre embrionarias (ES). células ES, derivados de la preimplantación de
embriones, pueden tanto auto-renovación y retener características pluripotenciales
para permitir la orientación de genes y la contribución a la línea germinal después de
la transferencia en el embrión temprano [ 19 ]. Brevemente, las células ES se aisló a
partir de un embrión temprano para el cultivo para establecer líneas celulares,
seguido por la introducción de un ADNr (por ejemplo, el plásmido de ADN de interés)
en su genoma a través de la transfección de células. Transformadas de manera
estable células ES se seleccionan y se inyectan a continuación en la masa celular
interna de un blastocisto receptor para participar en el desarrollo del blastocisto en
un embrión temprano. En cuanto al primer método, el embrión que contiene el gen
recombinante en su genoma se transfiere en una hembra sustituto para el desarrollo
a término. descendencia transgénica heterocigótica se aparean para producir una
cepa transgénica homocigótica.
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Ventajas y aplicaciones
tecnología de animales transgénicos permite la introducción de un gen extraño en la
línea germinal de un animal para establecer un rasgo deseable (por ejemplo, altas
tasas de ganancia de tejido magro y eficiencia de la alimentación) y una nueva
capacidad (por ejemplo, la síntesis de una proteína con aplicaciones nutricionales )
en una línea de cría de ganado. El resultado es el éxito de la producción de animales
transgénicos,
incluyendo cerdos, ratones, ratas, ganado vacuno,
conejos, ovejas, pollos y peces [ 10 ]. Esto puede complementar las técnicas
de reproducción tradicionales para mejorar la eficiencia de la producción de
ganado mediante la mejora de: (a) la digestión, absorción y utilización de
nutrientes de la dieta, (b) resistencia a enfermedades metabólicas e
infecciosas; y (c) la adaptación a las condiciones de vida [ 18 , 42 , 43 ].
Además,
cerdos transgénicos [por ejemplo, α- 1,3-galactosiltransferasa
locus ( GGTA1) ronda porcina producido a través de la transferencia nuclear
mediante el uso de fibroblastos de genes orientados] puede proporcionar órganos
para xenotrasplantes en
biomedicina [ 44 ].
Los animales transgénicos pueden producir ácidos grasos nutricionalmente
esenciales [ 45 ], y los aminoácidos, proteínas terapéuticas [ 25 , 26 , 31 ], proteínas
nutricionalmente importantes [ 46 ], y enzimas para eliminar los factores
anti-nutricionales [ 47 ]. Este último enfoque puede mejorar la eficiencia de la
utilización de nutrientes para reducir el número de animales en granjas, así
como la contaminación del medio ambiente de nitrógeno y fósforo. Los animales
transgénicos producen: lisozimas (a) que tienen propiedades bacteriostáticas
contra las bacterias causantes de mastitis [ 48 ], (B) proteínas de la lactoferrina
bovina que tienen una actividad antimicrobiana de amplio espectro [humana y 46 ],
y (c) las vacunas (por ejemplo, vacunas de malaria eficaces) en la leche [ 49 ].
Como principio de prueba de, cerdos transgénicos que expresan hormona de
crecimiento humana fueron creados hace más de 33 años por Hammer et al. [ 24 ].
Pocos años después, cerdos transgénicos se generaron que la hormona de
crecimiento bovino expresado sobre-o la hormona de crecimiento factor de
liberación de aumentar su tasa de crecimiento y eficiencia de la alimentación,
mientras que la reducción del contenido de los niveles de grasa corporal y
colesterol en el plasma [ 50 , 51 ]. Sin embargo, estos rasgos beneficiosos fueron
compensados ​por los efectos negativos, incluyendo la capacidad reproductora
reducida, la aparición de enfermedades (por ejemplo, la artritis, las úlceras
gástricas, dermatitis, y enfermedad renal) y muerte prematura [ 50 ]. Estos efectos
no deseados de la transgénesis en animales se producen debido a una
comprensión incompleta de: condiciones (a) (por ejemplo, la composición de
nutrientes tales como aminoácidos, glucosa, minerales y vitaminas en el medio)
para el cultivo de embriones, (b) reguladora elementos responsables de los
patrones normales de expresión, (c) el sitio de integración de ADN extraño, y (d)
las funciones fisiológicas de productos génicos específicos. Mucha investigación
se justifica para hacer frente a estas áreas de investigación para permitir la
producción económica y ética de los animales transgénicos.
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Uno de los resultados prometedores de la transgénesis animal es la
producción de cerdos que pueden sintetizar ácidos grasos poliinsaturados
esenciales. Por ejemplo, Saeki et al. [ 52 ] Introducido un gen vegetal Δ 12 ácido
graso desaturasa en el tejido adiposo blanco de los cerdos. Esta enzima
desatura el ácido oleico (C18: 1, ω 9) en C12 para producir el ácido linoleico
(C18: 2, ω 6), un ácido graso poliinsaturado nutricionalmente esencial en
cerdos [ 4 ]. El ácido linoleico es un precursor para la síntesis de ácido
araquidónico (C20: 4, ω 6), que también es un ácido graso poliinsaturado
nutricionalmente esencial en cerdos. Además, el ácido linoleico es beneficioso
para la salud cardiovascular de los seres humanos y cerdos. También hubo
cerdos transgénicos que expresan una C. elegans gen de ácido graso
desaturasa que puede convertir el ácido linoleico en una ω 3 ácidos grasos
poliinsaturados [ 53 ]. En comparación con sus homólogos de tipo salvaje, los
cerdos transgénicos tenían mayores concentraciones de cuatro ω 3 ácidos
grasos poliinsaturados:
α- ácido linolénico (C18: 3, ω 3), ácido eicosapentaenoico (C20: 5, ω 3), ácido
docosapentanoico (C22: 5, ω 3), y ácido docosahexaenoico (C22: 6, ω 3). Estos
resultados son muy significativos, porque cuando los cerdos transgénicos
pueden sintetizar ω 6 y ω 3 ácidos grasos poliinsaturados, el uso de aceites de
plantas de código (por ejemplo, aceite de soja, aceite de girasol, y aceite de
cacahuete) y aceite de pescado en las dietas se pueden reducir o posiblemente
eliminadas para disminuir los costos de producción porcina. Otro de los
resultados prometedores de la biotecnología moderna es la producción de
cerdos transgénicos que expresan una fitasa microbiana en la glándula salival.
Una línea de cerdos Yorkshire transgénicos (la línea Cassie) se generó primero
para liberar fitasa microbiana en la saliva [ 54 ]. Esta línea de cerdos tenía una
mayor capacidad para digerir fitato de alimentación. Por ejemplo, cuando
alimentados con dietas comerciales típicas sin fósforo suplementario (P), jabalíes
transgénicos y cerdas jóvenes crecieron y utilizar alimentan a tasas similares a
las de los homólogos convencionales, de la misma edad alimentados con las
dietas similares con suplementario P. Además, túmulos transgénicos
alimentados con una dieta baja en P sin P suplementario retenida 25 - 40%, 77 - 91%,
y 27 - 56% más P, respectivamente, durante el destete, crecimiento y acabado
fases que Yorkshire convencional Barrows alimentados con dietas similares sin
suplementario P. Más recientemente, Zhang et al.
[ 46 ]
cerdos transgénicos producidos que expresan, en sus glándulas salivales,
tanto fitasa y carbohidrasas (xilanasa más dos tipos de β- glucanasa),
basado en el aislamiento de los genes de bacterias y hongos. El cerdo
transgénico puede empezar a fitatos hidrolizar y polisacáridos no amiláceos
en la boca, y producir hasta 24% menos de nitrógeno y 44% menos de
desechos, en comparación con los cerdos no transgénicos alimentados con
la misma dieta. Las diferencias cuantitativas entre estos estudios pueden
ser debido a diferencias en los niveles de expresión de los transgenes y la
composición de los nutrientes (incluyendo Ca, P, y la proteína) en las dietas
[ 54 -
56 ]. Potencialmente, los cerdos que expresan planta o genes microbianos para
la síntesis de amino nutricionalmente esencial
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ácidos pueden permitir la alimentación de las dietas bajas en P y baja en proteínas
sin la necesidad de la suplementación dietética con P o aminoácidos cristalinos.
Uno de esos aminoácidos es treonina [ 57 ], Que es baja en los piensos planta de
código con respecto al crecimiento de los lechones [ 58 ].
desventajas
Los métodos originales de la transgénesis animal (por inyección pronuclear y
virus que se integran) tenían una eficiencia muy baja, mientras que resulta en el
silenciamiento de genes, la mala regulación de la expresión génica, y una gran
variabilidad debido a la integración aleatoria de genes [ 19 ]. Otra importante
desventaja de la tecnología de animales transgénicos es la aparición de altas
tasas de mortalidad prenatales y antes del destete en especies de ganado,
incluyendo cerdos. Esto puede ser el resultado de la integración aleatoria de
genes en el genoma huésped que da como resultado mutagénesis insertational.
Por ejemplo, Zhang et al.
[ 47 ] Informó de que después de 4008 embriones reconstruidos
fueron transferidos a 16 cerdas receptores, nacieron sólo 33 lechones
vivos, con la eficiencia de desarrollo embrionario a ser término <1%.
Entre los 33 lechones nacidos vivos, 25 de ellos fueron positivos para un
transgén, con 20 lechones que tiene el casete de expresión de
transgenes intactos. Desafortunadamente, sólo 9 cerdos transgénicos
sobrevivieron a destete. Estos problemas, junto con muy altos costos,
deben superarse antes se usan cerdos transgénicos en la producción
agrícola. En la actualidad, transgénico
la investigación se centra en el ganado de nutrientes
utilización [ 52 - 56 ], Resistencia a enfermedades [ 59 - 64 ], Y aplicaciones
biomédicas, tales como el xenotrasplante de órganos sin el α- gen
1,3-galactosiltransferasa que
es responsable de la respuesta de rechazo hiperagudo [ 18 , 19 , sesenta
y cinco , 66 ].
Método II para la producción de animales transgénicos no tiene éxito para
el ganado ya que no hay ningún informe de ES o inducidos madre
pluripotentes (iPS) células que pueden soportar las modificaciones genéticas
y aún contribuir a la línea germinal [ 19 ]. Esta es una deficiencia crítica de
modelos de cerdo o posiblemente todo el ganado. La modificación genética
de células somáticas, seguido de la SCNT había sido la única opción para
generar cerdos por ingeniería genética que lleva las alteraciones específicas
de sitio hasta que la inyección directa del genoma de la edición de sistema
en embriones en desarrollo [ 18 , 63 - 66 ].
Gen (genoma) de editar para producir animales modificados
genéticamente con genes knock-out o knockin
Los métodos iniciales utilizados para generar ganado transgénico resultaron en
inserción del transgén aleatorio [ 10 ]; por lo tanto, se necesitan nuevas
tecnologías para permitir una mejor orientación de genes con una mayor
eficiencia en el ganado. Aunque es conceptualmente simple para entregar ADN
en un huevo fertilizado a través de inyección pronúcleos, este método es
técnicamente
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desafiante y la construcción de ADN inyectado se integra aleatoriamente en
el genoma, lo que resulta en los perfiles de expresión del transgén
impredecibles. Además, la microinyección puede dañar el cigoto y requiere
un equipo costoso. Estos cortos-idas se pueden superar en parte por el
desarrollo de genes (genoma) edición de enfoque, que utiliza una nucleasa
de diseño (como un par de tijeras moleculares) para generar una rotura de
doble cadena (DSB) en el ADN en un locus genómico deseada (Fig . 5 ).
Después de esto, uno de los dos mecanismos de reparación endógenos
puede reparar el DSB de ADN: de extremos no homólogos (NHEJ) y la
reparación de homología dirigida (HDR) [ 38 ]. En la vía NHEJ propenso a
errores, los dos extremos de la DSB de ADN se juntan y se ligaron sin una
plantilla homóloga para la reparación, que a menudo inserciones o
eliminaciones nucleótidos (indeles). Si un indel resultados en una mutación
por cambio de marco, el gen diana puede perder la función (knockout). La
vía de HDR requiere la provisión de una plantilla de ADN exógeno junto con
un genoma específico de sitio de edición nucleasa para reparar el DSB de
ADN, haciendo así que el knock-in de una secuencia deseada de ADN en
el genoma de un embrión o células animales [ 67 ]. En la práctica, la
modificación de un gen objetivo se consigue comúnmente por la
microinyección, en un embrión obtenido por fecundación in vitro
o transferencia intracitoplasmática, un sistema de edición gen que consiste en una
guía de ARN y la Cas9 endonucleasa, y, si es necesario, una plantilla de
reparación del ADN [ 68 ]. El ARN guía proporciona especificidad de secuencia
para objetivo la Cas9
endonucleasa a un sitio complementario en el genoma para crear un
OSD.
Una nucleasa diseñador anterior era nucleasas con dedos de zinc (ZFN; la
primera herramienta de edición de gen), y una nucleasa diseñador
posteriormente descubierto es la transcripción del tipo activador de efector
nucleasa (TALEN, la segunda herramienta de edición de gen), ambos de los
cuales son proteínas modulares que contienen un adaptable dominio de unión a
ADN. El método ZFN implica la ingeniería de una proteína que contiene tanto un
dominio de unión a ADN de dedos de cinc y un dominio de endonucleasa de
restricción. El enfoque TALEN utiliza enzimas que contienen un dominio de unión
a ADN y un dominio de ADN de escisión independiente de ingeniería. En los
últimos años, CRISPR (CLUSTERED despegadas regularmente repeticiones
palindrómicas cortas) -asociado nucleasa-9 (CRISPR / Cas9) se ha utilizado
como una nucleasa diseñador para proporcionar una, más versátil, y una
herramienta más eficiente, más precisa más robusto simple en genómica
Ingenieria [ 19 , 62 ]. componentes ZFN, TALEN, o CRISPR / Cas9 se entregan en
las células diana a través de la transfección (agentes basados ​en lípidos,
electroporación,

ADN de doble hélice

nucleasa diseñador (ZFN, TALEN o CRISPR

/ Cas9)

roturas en el ADN de doble

cadena

NHEJ HDR (reparación homología

(No homóloga dirigida)
extremo de unión) Single-hebra o
ADN plásmido

interrupción del gen Introducción de un nuevo gen

(gen knock-out) (Knock-in)

o
Inyección a través de SCNT o CPT Clonado en células animales

Embrión Inyección a través de

Transferencia de embrión SCNT o ECNT

descendencia gen-editado hembra receptora Embrión

La Fig. 5 Gen (genoma) edición de los animales utilizando el ZFN, TALEN o técnica CRISPR / Cas9. una nucleasa diseñador (ZFN, TALEN o CRISPR / Cas9) escinde una molécula de
ADN para generar una rotura de doble cadena (DSB) en un locus genómico deseado. Después de esto, uno de los dos mecanismos de reparación endógenos puede reparar el DSB de
ADN: de extremos no homólogos (NHEJ) y la reparación de homología dirigida (HDR). En la vía NHEJ, los dos extremos de la DSB de ADN se juntan y se ligaron sin una plantilla
homóloga para la reparación, que a menudo inserciones o eliminaciones de nucleótidos (indeles) a la interrupción causa gen (knockout). La vía de HDR requiere la provisión de una
plantilla de ADN exógeno junto con una nucleasa edición genoma específica de sitio para reparar el DSB de ADN, haciendo así que el knock-in de una secuencia deseada de ADN en el
genoma de un embrión o células animales.
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nucleofection, o microinyección) o bacteriófagos, dependiendo del tipo de Ventajas y aplicaciones

célula y el plásmido [ 69 - 71 ]. Talens y CRISPR / Cas9 primero se utilizaron
con éxito en cerdos en 2013 [ 72 ] Y 2014 [ 59 , 73 ], Respectivamente. Durante
los últimos 5 años, CRISPR / Cas9 ha ganado rápidamente impulso a medida
que el editor gen favorecido para las especies de ganado. El sistema de
CRISPR-Cas9 fue descubierta en 2007 en bacterias (por ejemplo, un género
de cocos gram-positivos o bacterias esféricas) y arqueas, y se utiliza de forma
natural para defenderse contra virus invasores (bacteriófagos). En respuesta
a una infección viral, la CRISPR bacteriano / Cas9 es guiado por un
fragmento de ARN corto conocido como un ARN guía para cortar un trozo de
ADN viral, creando un OSD en su loci objetivo [ 68 ]. La guía de ARN es
complementaria a un segmento del genoma del organismo específico, de
modo que la nucleasa Cas9 escindirá ADN con un alto grado de
especificidad. De nota, el reconocimiento del ADN diana por Cas9 es
dependiente de la presencia de una secuencia corta protospacer adyacente
motivo (PAM) situado directamente aguas abajo en la cadena de ADN no
directo [ 38 ]. Por lo tanto, el sistema de CRISPR se compone de dos
componentes (una endonucleasa de Cas9 y una guía de ARN) como una
ribonucleoproteína. Experimentalmente, el ARN guía puede diseñarse
utilizando herramientas de biología molecular en el laboratorio para dirigir
Cas9 a una secuencia de ADN específica para la escisión en prácticamente
cualquier locus genómico. Los hitos para el uso de CRISPR / Cas9 en la
producción porcina genes editado se muestran en la Tabla 2 .
ganadería tradicional está plagado de problemas tales como ciclos de
reproducción largos y las limitaciones de los recursos genéticos. Por el
contrario, el genoma de herramientas de edición pueden proporcionar
soluciones más preciso, más específico, más predecibles y más rápidos para
resolver estos problemas a un costo relativamente asequibles [ 38 ]. Así,
además de la anulación de la función de genes, CRISPR se puede emplear
para eliminar grandes fragmentos de ADN del genoma de un animal.
Además, un gen de editar técnica requiere menos pasos y tiene una
eficiencia mayor que los métodos anteriores de la transgénesis animal. Por
ejemplo, los estudios con cigotos de ganado han mostrado una frecuencia de
edición de 30% con ZFN, TALEN y CRISPR / técnicas Cas9 [ 19 , 72 -
77 ]. En comparación con otras técnicas de silenciamiento génico, tales como
RNAi y ARN antisentido, CRISPR / Cas9 ofrece una eficiencia superior, una
capacidad de escindir loci metilado, mayor facilidad de diseño, y una mayor
flexibilidad [ 68 ]. Debe tenerse en cuenta que knockout de un gen proporciona
un fenotipo más limpio que su caída y que la producción de cerdos knockout no
requiere necesariamente la aplicación de un sistema de edición genoma.
Varios laboratorios han informado de éxito con la producción de cerdos de
genes-editado, que potencialmente pueden servir como donantes de órganos,
modelos de enfermedad, biorreactores, la inactivación de porcino endógeno
retrovirus en cerdos o animales fundadores de líneas genéticas con
productividad mejorada (por ejemplo, crecimiento muscular) o enfermedad
rasgos de resistencia [ 59 - 64 ]. Por lo tanto, el gen

Tabla 2 Los hitos en el uso de técnicas de edición gen para la producción porcina gen-editado

Gene editor de gen reparación de DSB de ADN Ruta de inyección gen Año Referencia

PPAR γ ZFN NHEJ SCNT 2011 Yang et al. [ 74 ]

LDLR TALEN NHEJ SCNT 2012 Carlson et al. [ 75 ]

RELA ZFN NHEJ IPC 2013 Lillico et al. [ 72 ]

RELA TALEN NHEJ IPC 2013 Lillico et al. [ 72 ]

APC TALEN HDR SCNT 2013 Tan et al. [ 76 ]

vWF CRISPR / Cas9 NHEJ IPC 2014 Hai et al. [ 73 ]

CD163 CRISPR / Cas9 NHEJ SCNT 2014 Whitworth et al. [ 59 ]

CD163 CRISPR / Cas9 NHEJ SCNT 2016 Whitworth et al. [ 60 ]

OTR CRISPR / Cas9 HDR SCNT 2016 Lai et al. [ 77 ]

La miostatina TALEN NHEJ SCNT 2016 Rao et al. [ 78 ]

PERVs CRISPR / Cas9 NHEJ SCNT 2017 Niu et al. [ 62 ]

UCP1 CRISPR / Cas9 HDR SCNT 2017 Zheng et al. [ 79 ]

CD163 una CRISPR / Cas9 NHEJ SCNT 2017 Wells et al. [ 61 ]

CD163 CRISPR / Cas9 NHEJ SCNT 2018 Yang et al. [ 64 ]

CD163 si CRISPR / Cas9 NHEJ SCNT 2018 Burkard et al. [ 63 ]

APC poliposis adenomatosa coli (un gen del cáncer de colon), CD163 Grupo de diferenciación 163 (que codifica para una proteína que es el receptor scavenger alta afinidad para el complejo hemoglobina-haptoglobina), IPC inyección
citoplasmática, CRISPR / Cas9 CLUSTERED regularmente interspaced corto palindrómicas asociadas repite nucleasa-9,
OSD Una rotura de doble cadena, HDR reparación de homología dirigida, LDLR receptor de lipoproteína de baja densidad, NHEJ Recombinación no homóloga, OTR Oct4-td-tomate gen indicador, PERVs retrovirus endógenos porcinos,
RELA factor de p65 transcripción (también conocido como factor nuclear NF-kappa-B subunidad p65), SCNT Somática transferencia nuclear de células, TALEN tipo activador de transcripción nucleasa efector, UCP1 proteína-1
desacoplante, vWF factor de von Willebrand y ZFN Nucleasa dedo de zinc
una Sustitución de porcino CD163 scavenger receptor rica en cisteína dominio 5 con una CD163-como homólogo
si CD163 con el exón 7 suprimido
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editar aumenta los éxitos en un solo gen y modificaciones multi-alélicas
del genoma de granja, así como en la introducción específica de sitio de
genes extraños durante
embriogénesis.
Hay muchos ejemplos para el genoma producción editingbased de cerdos
transgénicos con importantes características de producción y de resistencia a
enfermedades, incluyendo la utilización de nutrientes y la producción de
carne, así como resistencia a las infecciones virales y trastornos metabólicos
(Tabla 3 ). En primer lugar, la interrupción de la miostatina (un regulador
negativo de la miogénesis) de genes utilizando TALEN como un editor crea
correctamente cerdos miostatina-knockout, que exhibe un fenotipo de doble
musculoso, mayor peso corporal, una mayor masa muscular longissimus, y
un aumento del 100% en el número de fibras musculares que los cerdos de
tipo salvaje [ 78 ]. En segundo lugar, la utilización de la tecnología CAJONES /
Cas9, Zheng et al. [ 79 ] Cerdos con una proteína de desconexión funcional 1
(UCP1) producido. UCP1 se expresa en el tejido adiposo marrón de muchas
especies animales y es responsable de termogénesis sin escalofríos,
la masa de grasa, y un aumento del rendimiento de la canal magra [ 79 ]. En
tercer lugar, CRISPR gen / Cas9 focalización y tecnologías SCNT se han
utilizado para crear cerdos sin el gen CD163 que codifica un receptor celular
para el porcino síndrome reproductivo y respiratorio virus-1 (PRRSV-1, también
conocida como “ enfermedad de la oreja azul ” virus) [ 59 ]. Whitworth et al. [ 60 ]
Informó de que los cerdos con el CD163 knock-out eran completamente
resistentes a la PRRSV-1 (cepa Europea) y PRRSV-2 (cepa norteamericana).
Resultados similares fueron observados por Burkard et al. [ 63 ] Tanto contra
PRRSV-1 y PRRSV-2, y por Yang et al. [ 64 ] Frente a una cepa altamente
patógena de PRRSV (perteneciente a la cepa norteamericana) aislado en el sur
de China. Curiosamente, Wells et al. [ 61 ] Encontró que cerdos modificados
genéticamente, que se producen a través de la sustitución de porcino CD163
scavenger receptor rica en cisteína dominio 5 con una CD163-como homólogo,
fueron resistentes a PRRSV-1 pero no a PRRSV-2. Los machos y las hembras
se pueden utilizar como las poblaciones de cría para producir generaciones de
descendientes PRRSV resistente.

de este modo

jugando un papel crucial en la protección contra el frío y la regulación de la desventajas

homeostasis energética. Sin embargo, los cerdos modernos carecen de genes Aunque el método ZFN proporcionó el primer avance en la edición de
UCP1 funcionales y son por lo tanto susceptibles a estrés por frío, dando como genes específicos de sitio, tiene algunas limitaciones,
resultado una alta tasa de mortalidad neonatal, y también la acumulación tales como corte fuera del objetivo de el ADN,
espontánea de una gran cantidad de tejido adiposo blanco en el cuerpo, dando citotoxicidad, costoso, consume tiempo, la baja eficiencia (por lo tanto
lugar a un rendimiento de producción reducida [ 3 ]. De la nota, la inserción del gen solamente una edición genómica a la vez), y los desafíos técnicos para
de adiponectina-UCP1 ratón en la endógeno porcino UCP1 locus CRISPR a través preparar herramientas eficaces ZFN [ 38 ]. En comparación con el editor
de la / Cas9 como un editor puede generar cerdos UCP1-knockin que exhiben una ZFN, la técnica TALEN es más flexible en la ingeniería genética, ya que su
capacidad mejorada para mantener la temperatura corporal, una disminución de dominio de unión a ADN puede dirigirse a una gama más amplia de
blanco secuencias de ADN. Aunque el editor TALEN es más fácil

Tabla 3 La producción de cerdos transgénicos con una producción importante y rasgos de resistencia a enfermedades

Gene tejido característica de producción Referencia

diana

hormona de crecimiento tejidos Aumenta el crecimiento de tejido magro y la eficiencia de alimentación; reduce el contenido de grasa de todo el cuerpo y la Pursel et a1. [ 50 ]
bovina (knock-in) concentración de colesterol en la sangre Solomon et al. [ 51 ]

Espinacas Δ 12 FAD El tejido Desatura el ácido oleico (18: 1, ω 9) en C12 para producir ácido linoleico (18: 2, ω 6) en Saeki et al. [ 52 ]
(knock-in) adiposo animales
blanco

C. elegans FAD El tejido Desatura ácido linoleico (18: 2, ω 6) para producir ω 3 ácidos grasos poliinsaturados en los Lai et al. [ 53 ]
(knock-in) adiposo animales
blanco

La fitasa microbiana Glándula Hidroliza fitato en los ingredientes de la planta de código; aumenta la utilización de fosfato de la Golovan et al. [ 54 ]
(knock-in) salival dieta, otros minerales, y proteínas

Fitasa y otras enzimas una ( knock-in)

Glándula Hidroliza fitato y carbohidratos complejos en ingredientes planta de código; aumenta la Zhang et al. [ 47 ]
salival utilización de fosfato de la dieta, otros minerales, y proteínas

La miostatina Músculo Aumenta el número de fibras del músculo esquelético, la masa muscular esquelética, la deposición de proteínas, y Rao et al. [ 78 ]
(knock-out) esquelético la ganancia de: relación de alimentación (eficiencia de la alimentación)

proteína desacoplante 1 tejidos Los aumentos termogénesis y la supervivencia de los lechones; disminuye la acumulación de tejido Zheng et al. [ 79 ]
(knock-in) adiposo blanco; contenido de tejido magro aumentos de carcasa

CD163 (knock-out) tejidos Resistente a virus porcino síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRS, “ enfermedad de la Burkard et al. [ 63 ]; Wells et al. [ 61 ]; Whitworth et al. [ 59
oreja azul “) , 60 ]; Yang et al. [ 64 ]

MODA Ácido graso desaturasa, GH Hormona de crecimiento

una Xilanasa más dos tipos de β- glucanasa (bacteriana y genes fúngicos)
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el diseño de la ZFN, el método TALEN es costoso y técnicamente difícil
cuando el objetivo es hacer simultáneamente múltiples ediciones en el
genoma [ 68 ]. Además, la entrega de la Cas9 gen-editando directamente a
los embriones mediante microinyección sigue siendo un proceso difícil, y la
microinyección en sí puede dañar los embriones. En comparación con el
ZFN y TALEN, CRISPR / Cas9 se sabe que tiene una mayor frecuencia de
efectos fuera de objetivo [ 80 ]. Otro obstáculo importante para el uso de la
tecnología de CRISPR / Cas9 para la generación de animales con genes
editado es el problema de mosaicismo (la presencia de más de un genotipo
en un individuo) que es común en animales fundadores [ 68 ]. Además,
para todos gen de edición disponibles en la actualidad
métodos, las tasas de mortalidad prenatal en fetos de genes-editado son mucho
mayores que las de los fetos controles. Hasta la fecha, la eficiencia de la edición
de gen en el ganado, incluyendo cerdos, sigue siendo subóptima. Los
procedimientos para la edición gen debería ser más fácil y más barato, para que
más productores pueden utilizar esta técnica innovadora en sus propias granjas
para la mejora de la cría de animales.
Biotecnología para la comprensión de resistencia a los antibióticos en los
animales y el desarrollo de alternativas a los antibióticos en el pienso para la
alimentación porcina
Desde el descubrimiento de la penicilina en 1928, los antibióticos se han utilizado
para tratar infecciones bacterianas en humanos y animales. Desde la década de
1950, los niveles de sub-terapéutica de los antibióticos se han incluido en las
dietas convencionales para mejorar el rendimiento de crecimiento de cerdos y
aves de corral. Sin embargo, debido al desarrollo y propagación de bacterias
resistentes a los antibióticos,
antibióticos de alimentación han sido
prohibido en muchos países (por ejemplo, la Unión Europea)
y están siendo eliminadas en algunas de las principales naciones productoras de
porcinos (por ejemplo, Estados Unidos y China). Algunas bacterias son resistentes a
una clase de antibióticos, y otras son resistentes a múltiples antibióticos, lo que
plantea un serio problema de salud mundial [ 81 ]. Para garantizar la eficacia óptima de
los antibióticos en el tratamiento de infecciones bacterianas en animales y seres
humanos, existe una creciente preocupación en todo el mundo sobre la resistencia
antimicrobiana (AMR), que se puede definir como la capacidad de las bacterias para
resistir los efectos de un agente antimicrobiano (por ejemplo, antibióticos). Los genes
de resistencia antimicrobiana en bacterias pueden ser heredados de madre a las
células hijas por división, así como de una cepa a otra a través de la transferencia de
plásmido. Curiosamente, los plásmidos (moléculas pequeñas de DNA que son
independientes de los ADN cromosómicos) en bacterias llevan a menudo la
información que puede beneficiar a su propia supervivencia a través de la resistencia
a los antibióticos producidos por ellos mismos o por otros organismos en su medio
ambiente [ 82 ]. En 2007, un análisis de una colistina resistente E. coli aislado en China
reveló un plásmido con 19 genes de resistencia a antibióticos. Cuando un antibiótico
problemático no se utiliza durante un período prolongado de tiempo, los niveles de
resistencia en las bacterias disminuyen, pero puede aumentar de nuevo cuando el
antibiótico se utiliza de nuevo [ 83 ]. Por lo tanto, existe una necesidad urgente de
identificar nuevas alternativas a los antibióticos en la alimentación a nivel mundial la
producción porcina. Esto se puede facilitar en gran medida por el uso de la
biotecnología para entender cómo se produce AMR.
Hay mucha evidencia que muestra que las bacterias adquieren naturalmente
nuevos genes (incluyendo genes resistentes a los antimicrobianos) para sobrevivir en
un nuevo entorno o host [ 84 ]. los
genes resistentes a los antimicrobianos producen enzimas (por ejemplo, de espectro
extendido β- lactamasa en E. coli) a d o destruirlos

Las bacterias

adquisición Natural

Nuevos genes resistentes a los antibióticos

La expresion genica

Enzimas (por ejemplo, lactamasa de espectro extendido)

Las bacterias Los antibióticos (por productos de degradación inactivos

ejemplo, penicilina) (Por ejemplo, estar abierto tórica)

otros
organismos
Resistencia de las bacterias
de antibióticos
Las bacterias

La Fig. 6 Mecanismos responsables para el desarrollo de resistencia a los antibióticos en las bacterias. Las bacterias adquieren naturalmente nuevos genes (incluyendo genes resistentes a los antimicrobianos) para

sobrevivir en un entorno nuevo o host. Los genes resistentes a los antimicrobianos producen enzimas (por ejemplo, extendedspectrum β- lactamasa en E. coli) para destruir o inactivar los antibióticos. Por ejemplo, las

bacterias resistentes a la penicilina sintetizan β- lactamasas, que se desglosa de la β- anillo de lactama de la penicilina a un producto de degradación inactivo. A través de este mecanismo, las bacterias no se pueden matar

por la penicilina, lo que lleva a la resistencia antimicrobiana en los animales infectados y los seres humanos. El signo (X) indica una incapacidad para matar las bacterias
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bacteriófago Eliminación de antibiótico

genes resistentes
DNA

Bacteriófago sin su propio DNA

expresión de silenciamiento
de objetivo genes
CRISPR-Cas9 o
sistema Cas3 (ADN CRISPR-Cas9 sistema
que codifican Cas9 o (ADN que codifican
Cas3 plus guía de inactivado Cas9 plus
ARN) guía de ARN)

Las bacterias
Las bacterias

sistema de CRISPR-Cas9 (ADN

La expresion genica que codifican Cas9
además de guía de ARN)
Cas9 o Cas3 plus guía de ARN)
La interrupción del antibiótico
genes resistentes
ADN bacteriano Cleave (gen knock out)

Autodestrucción bacterias bacterias Re desensibilizar

de bacterias Kill de antibióticos

La Fig. 7 La utilización del sistema de CRISPR como una nueva alternativa a los antibióticos. El sistema de CRISPR-cas tiene una capacidad de secuencias de ADN específica diana
selectivamente y, por lo tanto, se puede distinguir fácilmente entre especies bacterianas patógenas o comensales. Los bacteriófagos pueden ser utilizados para entregar la carga
CRISPR-cas en bacterias a través de recibir ya sea un ADN diseñado que codifica una guía de ARN y Cas9 o un ARN guía y Cas3 para cortar las moléculas de ADN bacteriano en múltiples
sitios, causando la autodestrucción de la bacteria. Alternativamente, el sistema CRISPR-Cas9 se puede utilizar para noquear a genes responsables de la resistencia antimicrobiana y re
sensibilizar a las bacterias resistentes a múltiples fármacos, por lo que serán destruidas por los antibióticos. Finalmente,

antibióticos inactivar (Fig. 6 ). Por ejemplo, las bacterias penicillinresistant (por
ejemplo, Los estafilococos aureus y E. coli)
Sintetizar β- lactamasas, que se desglosa de la β- anillo de lactama de la
penicilina a una sustancia inactiva. A través de este mecanismo, las bacterias
no se pueden matar por la penicilina, dando lugar a AMR. Ahora, se están
desarrollando métodos basados ​en CRISPR para matar las bacterias
resistentes a los antibióticos, porque CRISPR-cas posee su capacidad de
secuencias de ADN específica diana selectivamente y, por lo tanto, fácilmente
distinguir entre las especies bacterianas patógenas o comensales [ 82 , 85 ]. De
particular interés, bacteriófagos (generalmente seguro para animales y
humanos) se han utilizado para entregar el sistema de CRISPR-cas en
bacterias [ 84 ]. Por ejemplo, los bacteriófagos sin su propio ADN reciben un
ADN diseñado que codifica una guía de ARN y Cas9 [ 70 ]. Los bacteriófagos
son entonces transfectados en resistente a los antibióticos
bacterias (por ejemplo, Clostridium difficile), donde Cas9 es guiado por el RNA guía
para cortar el ADN bacteriano en sitios específicos, la activación de las bacterias a
la autodestrucción (Fig. 7 ). Del mismo modo, un sistema de CRISPR-Cas3 ha sido
entregado a través de bacteriófagos en bacterias tanto Gram-positivas y
Gram-negativas a moléculas de ADN cortados en múltiples sitios, conduciendo de
ese modo la muerte celular programada [ 86 ]. Además, Kim et al. [ 82 ] Se utiliza el
sistema de Cas9 CRISPR para noquear a los genes responsables de AMR y volver
a sensibilizar a las bacterias resistentes a múltiples fármacos, por lo que están
destruidas por los antibióticos. Finalmente, el sistema CRISPR-Cas9, que se
construye como una interferencia CRISPR (CRISPRi) plásmido vector que porta
una secuencia de ADN para inactivado Cas9 y una guía de ARN, se ha utilizado
para eliminar proteínas virulentas unida a la membrana (por ejemplo, coagulasa A y
tipo enterotoxina C) y genes resistentes a los antibióticos (por ejemplo, β- lactamasas)

en

Tabla 4 La utilización del sistema de CRISPR-Cas9 como nuevas alternativas al uso de antibióticos

Sistema Vector gen diana bacterias resistentes a antibióticos Referencia

CRISPR-Cas9 Los bacteriófagos múltiples sitios de ADN Clostridium difficile Bikard et al. [ 70 ]
(auto-destrucción)

CRISPR-Cas3 Los bacteriófagos múltiples sitios de ADN Las bacterias gram-positivas y negativas Reardon [ 86 ]
(auto-destrucción)

CRISPR-Cas9 Los plásmidos genes resistentes a los antibióticos Escherichia coli Kim et al. [ 82 ]
(knock out)

CRISPR-Cas9 plásmidos CRISPRi genes y proteínas de membrana resistente a los Los estafilococos aureus y otras bacterias Sato ' O et al. [ 87 ];
antibióticos (silenciamiento de la expresión Gram-positivas Greene [ 84 ]
génica)

CRISPR / Cas3 Agrupado regularmente interspaced corto palindrómicas asociadas repite nucleasa-3, CRISPR / Cas9 CLUSTERED regularmente interspaced corto palindrómicas asociadas repite nucleasa-9, CRISPRi la
interferencia de CRISPR
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Los estafilococos aureus ( bacterias Gram-positivas) [ 87 ]. En este método, dos
dominios en la inactivado Cas9 están mutados, y esta proteína sólo tiene una
actividad de unión a ADN, pero puede ADN no cleave. La unión de los interfiere
inactivadas Cas9 (dCas9) con la expresión de genes en bacterias mediante la
prevención de su maquinaria de transcripción de acceder al gen diana,
silenciando de este modo su expresión. Por lo tanto, las tecnologías
CRISPR-Cas9, que implican bacteriófagos o plásmidos, son prometedores para
matar las bacterias y la eliminación de las enzimas de las bacterias, incluyendo
bacterias resistentes a los antimicrobianos, en el tracto gastrointestinal de los
animales (Tabla 4 ). Una aplicación práctica de esta tecnología sería para mitigar
AMR y desarrollar alternativas a los antibióticos en el pienso en la producción
porcina. Tal enfoque de ingeniería genética, junto con la fermentación de piensos
y la preparación de péptidos antimicrobianos a partir de proteínas de
alimentación [ 88 ], Se espera para maximizar la eficiencia de la utilización de
nutrientes y sostener la industria en todo el mundo cerdo.
Conclusión
Las demandas de las unidades de proteína de carne de alta calidad de la industria
porcina mundial para aumentar su productividad, al tiempo que reduce las
emisiones de carbono y la excreción de residuos. Para lograr este objetivo, ha
habido un progreso revolucionario en biotecnología animal durante los últimos 35
años para producir proteínas recombinantes (incluyendo enzimas) y nutrientes
orgánicos (incluyendo aminoácidos y vitaminas), clones de cerdos y cerdos
modificados genéticamente para ambos biomédica y agrícola propósitos. En los
últimos años, las tecnologías de genes (genoma) edición basada en ZFN, TALEN y
CRISPR / Cas9 como editores se han hecho disponibles para borrar, insertar, o
modificar el genoma de animales (incluyendo cerdos) y bacterias en los sitios
específicos de secuencias de ADN. En comparación con los editores y ZFN
TALEN, CRISPR / Cas9 ofrece una mayor facilidad de diseño y una mayor
flexibilidad en la ingeniería genética, pero tiene una mayor frecuencia de efectos
fuera de objetivo. Por lo tanto, con mejoras continuas, esta biotecnología
representa una gran promesa en la conservación de las diversas razas de cerdos,
aumentando la producción de la eficiencia alimenticia y cerdo, y el desarrollo de
alternativas a los antibióticos en el futuro.
abreviaturas
AMR: Resistencia antimicrobiana; CRISPR / Cas9: clúster interspaced regularmente corto palindromic repite-asociados
nucleasa-9; CRISPRi: CLUSTERED despegadas regularmente corto interferencia repeticiones palindrómicas; DSB: Una
rotura de doble cadena; ECNT: transferencia nuclear de células embrionarias; ES: Embryonic tallo; HDR: reparación de
homología-dirigida; NHEJ: recombinación no homóloga; PRRSV-1: síndrome reproductivo y respiratorio porcino del
virus-1; QTL: locus de rasgos cuantitativos; ADNr: DNA recombinante; SCNT: transferencia nuclear de células somáticas;
SNPs: polimorfismos de nucleótido único; TALEN: tipo activador de transcripción nucleasa efector; UCP1: proteína
desacoplante 1; ZFN: Zinc nucleasa dedo
Expresiones de gratitud
Este documento se basa en la charla invitada de GW en la Sociedad Americana de Nutrición Porcina Conferencia
Ciencia-Gentech Animal (Shanghai, China) los días 24-25 de octubre de 2018. Agradecemos a nuestros colegas
para la colaboración en investigación, así como nuestros estudiantes graduados y postdoctorantes para
contribuciones a nuestros programas de investigación.
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Fondos
El trabajo en nuestros laboratorios con el apoyo de la Iniciativa de Investigación de Alimentos y Agricultura Fondos
Competitivos (2014 - Desde 67.015 hasta 21.770, 2015 - 67015 hasta 23276, 2016 -
67015-24958, y 2018 - 505.706 a 95.720) del Instituto Nacional del USDA de la Alimentación y la
Agricultura, y Texas A & M AgriLife Research (H-8200).
La disponibilidad de datos y materiales
No aplica.
declaraciones
Los autores no tienen nada que declarar.
autores ' contribuciones
GW concibió este proyecto. GW y FWB escribió el manuscrito. GW es el principal responsable por
el contenido del documento. Todos los autores leído y aprobado este manuscrito.
la aprobación ética y el consentimiento para participar
Este artículo revisa los estudios publicados y no requieren la aprobación del uso de animales o
consentimiento para participar.
El consentimiento para la publicación
Todos los autores leyeron y aprobaron el manuscrito final.
Conflicto de intereses
Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.
Recibido: 15 Noviembre 2018 Aceptado: 17 Febrero 2019
referencias
1. Wu G, Bazer FW, Cruz HR. la producción basada en tierra de proteínas de origen animal: impactos, la
eficiencia y la sostenibilidad. Ann NY Acad Sci. 2014; 1328: 18 - 28.
2. Boyd C, Cady R. Una comparación de 50 años de la huella de carbono de la cabaña porcina de Estados Unidos:
1959 - 2009. Londres: Camco; 2012. p. 1 - 29.
3. Ji Y, Wu ZL, Dai ZL, Wang XL, Li J, Wang BG, Wu G. fetal y neonatal programación del crecimiento
postnatal y eficiencia de la alimentación en cerdos. J Anim Sci Biotechnol. 2017; 8: 42.
4. Wu G. Principios de nutrición animal. Boca Raton: CRC Press; 2018.
5. Yu M, Mu C, Zhang C, Yang Y, Su Y, Zhu W. respuesta Marcado en comunidad microbiana y el
metabolismo en el íleon y el ciego de lechones después de la exposición primeros antibióticos.
Frente Microbiol. 2018; 9: 1166.
6. Andersson L, Haley CS, Ellegren H, Knott SA, Johansson M, Andersson K, et al. Mapeo genético de loci de
rasgos cuantitativos para el crecimiento y la gordura en cerdos. Ciencia. 1994; 263: 1771 - 4.
7. Allan MF, Thallman RM, RA Cushman, Echternkamp SE, blanca SN, Kuehn LA, et al. Asociación de un
polimorfismo de nucleótido en SPP1 con características de crecimiento y hermanamientos en una población
bovinos seleccionados para la tasa de hermanamiento. J Anim Sci. 2007; 85: 341 - 37.
8. Johnson GA, Bazer FW, Wu G. Expresión y funciones de osteopontina e integrinas en el transporte de
nutrientes por las placentas. Aminoácidos. 2013; 45: 609.
9. Wickramasinghe S, Cánovas A, Rincón G, Medrano JF. ARN-Secuenciación: Una herramienta para explorar nuevas
fronteras de la genética animal. Livest Sci. 2018; 166: 206 - dieciséis.
10. Bazer FW, Kraemer DC, McHughen A. bienestar, la salud, y la eficacia biológica de los animales a
través de la genética y la biotecnología. En: Pond WG, Bazer FW, Rollin BE, editores. Bienestar
animal en la ganadería: la cría, el cuidado y la sostenibilidad en la producción animal. Boca Raton:
CRC Press;
2012. p. 275 - 90.
11. RS Prather, Sims MM, Primera NL. El trasplante nuclear en embriones de cerdo tempranas. Biol Reprod. 1989;
41: 414 - 8.
12. Wilmut I, Schnieke AE, McWhir J, Kind AJ, Campbell KHS. descendencia viable derivado de células de
mamíferos fetales y adultos. Naturaleza. 1997; 385: 810 - 3.
13. Onishi A, Iwamoto M, Akita T, Mikawa S, Takeda K, Awata T, et al. Pig clonación por microinyección de
núcleos de fibroblastos fetales. Ciencia. 2000; 289: 1188 - 90.
14. Polejaeva IA, Chen SH, Vaught TD, Página RL, Mullins J, Pelota S, et al. cerdos clonados producidos
por transferencia nuclear de células somáticas adultas. Naturaleza. 2000; 407: 86 - 90.
15. Betthauser J, Forsberg E, Augenstein M, Childs L, Eilertsen K, Enos J, et al. La producción de
cerdos clonados de sistemas in vitro. Nat Biotechnol. 2000; 18: 1055 - 9.
Wu y Bazer Revista de Ciencia Animal y Biotecnología (2019) 10:28
16. Cezar AA. reprogramación epigenética de animales clonados. La clonación de las células madre. 2003; 5: 165 - 80.
17. Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA, Estados Unidos). La FDA aprueba su primer biogénico
humano producido por los animales genéticamente modificados. FDA boletín veterinario XXIII (VI). 2018.
18. Prather RS, Lorson M, Ross JW, Whyte JJ, Walters E. genéticamente diseñados modelos de cerdo para
enfermedades humanas. Annu Rev Anim Biosci. 2013; 1: 203 - 19.
19. Tan W, Proudfoot C, Lillico SG, Whitelaw BA. la dirección de genes, genoma de edición: de Dolly a
los editores. Res transgénicos. 2016; 25: 273 - 87.
20. Nagashima H, Matsunari H, Nakano K, Watanabe M, Umeyama K, Nagaya M. Avanzando cerdo
clonación tecnologías hacia la aplicación en la medicina regenerativa. Reprod Domest Anim. 2012;
47 (Suppl 4): 120 - 6.
21. Adrio JL, Demain AL. enzimas microbianas: herramientas en procesos biotecnológicos.
Biomoléculas. 2014; 4: 117 - 39.
22. Bazer FW, Johnson HM. El tipo I CONCEPTUS interferones: el reconocimiento materno de señales de
embarazo y agentes terapéuticos potenciales. Am J Reprod Immun. 1991; 26: 19 - 22.
23. Jazayeri SH, Amiri-Yekta A, Bahrami S, Gourabi H, Sanati MH, MR Khorramizadeh. Vector e ingeniería
línea celular tecnologías hacia la expresión de proteínas recombinantes en líneas de células de
mamífero. Appl Biochem Biotechnol. 2018; 185: 986 - 1003.
24. Hammer RE, Pursel VG, Rexroad CE, Wall RJ, Bolt DJ, Ebert KM, et al. Producción de conejos
transgénicos, ovejas y cerdos por microinyección. Naturaleza. 1985; 315: 680 - 3.
25. Chung CS, Etherton TD, Wiggins JP. Estimulación del crecimiento porcina por la hormona de crecimiento porcina.
J Anim Sci. 1985; 60: 118 - 30.
26. Keen H, Glynne A, Pickup JC, Viberti GC, Bilous RW, Jarrett RJ, et al. La insulina humana producida
mediante tecnología de ADN recombinante: seguridad y potencia hipoglucemiante en hombres sanos.
Lanceta. 1980; 316: 398 - 401.
27. Consejo de Ciencia y Tecnología Agrícola (CAST). El desarrollo de vacunas usando tecnología
de ADN recombinante papel cuestión 38. Ames: Pieza moldeada; 2008.
28. Pandey A, Szakacs G, Soccol CR, Leon JA, Soccol VT. Producción, purificación y propiedades de
fitasas microbianas. Bioresour Technol. 2001; 77: 203 - 14.
29. Rosano GL, Ceccarelli EA. expresión de la proteína recombinante en Escherichia coli:
avances y desafíos. Frente Microbiol. 2014; 5: 1 - 17.
30. Diez B, E Mellado, Rodríguez M, R Fouces, Barredo JL. microorganismos recombinantes para la
producción industrial de antibióticos. Biotechnol Bioeng. 1997; 55: 216 - 26.
31. Ma Q, estrategias de ingeniería metabólica Chen N. sistemas para la producción de amino ácidos.
Synth Syst Biotechnol. 2017; 2: 87 - 96.
32. Vandamme EJ. La producción de vitaminas, coenzimas y bioquímicos relacionados por procesos
biotecnológicos. J Chem Tech Biotechnol. 1992; 53: 313 - 27.
33. Opazo R, Ortúzar F, Navarrete P, Espejo R, Romero J. Reducción de la harina de soja polisacáridos
no amiláceos y α- galactósidos por fermentación en estado sólido utilizando bacterias celulolíticas
obtenidos de diferentes entornos. Más uno. 2012; 7 (9): e44783.
34. Demirci A, Izmirlioglu G, Ercan D. Fermentación y enzimas tecnologías en el procesamiento de alimentos. En:
Clark S, S Jung, Lamsal B, editores. procesamiento de alimentos: principios y aplicaciones. 2ª ed. Nueva
York: Wiley; 2014. p. 107 - 36.
35. Un da ​Costa, Pereira AM, CA Gomes, Rodríguez-Cabello JC, Casal M, Machado
R. La producción de hepcidina bioactivo mediante el etiquetado de ADN recombinante con un elastina-como
recombinamer. Nature Biotechnol. 2018; 46: 45 - 53.
36. Lenis NP, Jongbloed AW. Las nuevas tecnologías en dietas de los cerdos bajo de contaminación: manipulación
de la dieta y el uso de aminoácidos sintéticos, fitasa y la alimentación por fases para la reducción de nitrógeno
y la excreción de fósforo y la emisión de amoniaco. Asiático-Aust J Anim Sci. 1999; 12: 305 - 27.
37. tecnología de ADN recombinante U. Nagaich: una perspectiva revolucionando. J Adv Pharm Res Technol.
2015; 6 (4): 147.
38. Ryu J, Prather RS, Lee K. El uso de la tecnología de genes de edición para introducir modificaciones en los
cerdos dirigidos. J Anim Sci Biotechnol. 2018; 9: 5. https: // doi. org / 10.1186 / s40104-017-0228-7 .
39. Largaespada DA. Generar y manipular animales transgénicos utilizando elementos
transponibles. Reprod Biol Endocrinol. 2003; 1: 80.
40. Nagano M, Brinster CJ, Orwig KE, Ryu, Avarbock MR, Brinster RL. ratones transgénicos producidos por
transducción retroviral de células madre de línea germinal masculina. Proc Natl Acad Sci EE.UU..
2001; 98: 13090 - 5.
41. Lai L, Sun Q, Wu G, Murphy CN, Kühholzer B, Parque KW, et al. Desarrollo de embriones de cerdo y las
crías después de la inyección intracitoplasmática de espermatozoides con liposoma esperma transfectadas
no transfectadas o en madurados in vitro de ovocitos. Cigoto. 2001; 9: 339 - 46.
Página 15 de 16
42. Shoji W, Sato-Maeda M. Aplicación de promotor de choque térmico en el pez cebra transgénico. Difieren Dev
crecimiento. 2008; 50: 401 - 6.
43. animales Tiley L. transgénicas resistentes a enfermedades infecciosas. Rev Sci Tech. 2016; 35: 121 - 32.
44. Kolber-Simonds D, Lai LX, Watt SR, Denaro M, Arn S, Augenstein ML, et al. Produccion de α- 1,3-galactosiltransferasa
cerdos nula por medio de la transferencia nuclear con fibroblastos pérdida de mutaciones de heterocigosidad
cojinetes. Proc Natl Acad Sci EE.UU.. 2004; 101: 7335 - 40.
45. Pai VJ, Wang B, Li X, Wu L, Kang JX. Los ratones transgénicos que convierten los hidratos de carbono a los ácidos
grasos esenciales. Más uno. 2014; 9 (5): e97637.
46. ​Wang M, Sun Z, Yu T, Ding F, Li L, Wang X, et al. La producción a gran escala de lactoferrina humana
recombinante a partir de alta expresión, vacas clonadas transgénicas libres de marcadores. Sci Rep 2017; 7
(1):. 10.733.
47. Zhang X, Li Z, Yang H, Liu D, Cai G, Li G, et al. cerdos transgénicos novela con mayor crecimiento y
reducción del impacto ambiental. eLife. 2018; 7: e34286.
https://doi.org/10.7554/eLife.34286 .
48. Lu D, Liu S, Shang S, Wu F, Wen X, Li Z, et al. La producción de cerdos transgeniccloned que expresan
grandes cantidades de lisozima humana recombinante en la leche. Más uno. 2015; 10 (5): e0123551.
49. Stowers AW, Chen LH, Zhang Y, Kennedy MC, Zou L, Lambert L, et al. Una vacuna
recombinante expresada en la leche de ratones transgénicos protege monos Aotus de un
desafío letal con Plasmodium falciparum. Proc Natl Acad Sci EE.UU.. 2002; 99: 339 - 44.
50. Pursel VG, Pinkert CA, Miller KF, Bolt DJ, Campbell RG, Palmiter RD, et al. La ingeniería
genética de ganado. Ciencia. 1989; 244: 1281 - 8.
51. Salomón MB, Pursel VG, Paroczay EW, Bolt DJ. Composición lipídica de tejido de carcasa de cerdos
transgénicos que expresan un gen de la hormona de crecimiento bovina. J Anim Sci. 1994; 72: 1242 - 6.
52. Saeki K, Matsumoto K, Kinoshita M, Suzuki I, Tasaka Y, Kano K, et al. La expresión funcional de un graso
Delta12 gen de la desaturasa del ácido de la espinaca en cerdos transgénicos. Proc Natl Acad Sci EE.UU..
2004; 101: 6361 - 6.
53. Lai L, Kang JX, Li R, Wang J, Witt WT, Yong HY, et al. Generación de cerdos transgénicos
clonados rico en omega-3 ácidos grasos. Nature Biotechnol. 2006; 24: 435 - 6.
54. Golovan SP, Meidinger RG, Ajakaiye A, Cottrill M, Wiederkehr MZ, Barney DJ, et al. Los cerdos que
expresan la fitasa productos estiércol baja en fósforo salivales. Nat Biotechnol. 2001; 19: 741 - 5.
55. Forsberg CW, Meidinger RG, Liu M, Cottrill M, Golovan S, Phillips JP. Integración, la estabilidad y la
expresión de la E. coli transgén fitasa en la línea de Cassie de Yorkshire Enviropig ™. Res
transgénicos. 2013; 22: 379 - 89.
56. Meidinger RG, Ajakaiye A, Fan MZ, Zhang J, Phillips JP, Forsberg CW. utilización digestiva de fósforo de
las dietas a base de plantas en la línea de Cassie de cerdos Yorkshire transgénicos que la fitasa
secrete en la saliva. J Anim Sci. 2013; 91: 1307 - 20.
57. Zhang YR, Dai ZL, Wu G, Zhang R, Li N. Expresión de genes threoninebiosynthetic en
células de mamíferos y ratones transgénicos. Aminoácidos. 2014; 46: 2177 - 88.
58. Wu G. Aminoácidos: bioquímica y nutrición. Boca Raton: CRC Press; 2013.
59. Whitworth KM, Lee K, Benne JA, Beaton BP, Spate LD, Murphy SL, et al. El uso del sistema CRISPR /
Cas9 para producir cerdos de ingeniería genética a partir de oocitos y embriones in vitro derivados.
Biol Reprod. 2014; 114: 121723.
60. Whitworth KM, Rowland RR, Ewen CL, Trible BR, Kerrigan MA, Cino-Ozuna AG, et al. cerdos
Gene-editado están protegidos de virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino. Nat
Biotechnol. 2016; 34: 20 - 2.
61. Wells KD, Bardot R, Whitworth KM, Trible BR, Fang Y, Mileham A, et al. Sustitución de porcino CD163
scavenger receptor rica en cisteína dominio 5 con una CD163-como confiere resistencia homólogos de
los cerdos con el genotipo 1, pero no el genotipo 2 porcino virus del síndrome reproductivo y
respiratorio. J Virol. 2017; 91: e01521 - dieciséis.
62. Niu D, Wei HJ, Lin L, George H, Wang T, Lee IH, et al. La inactivación del retrovirus endógeno porcino en
cerdos utilizando CRISPR-Cas9. Ciencia. 2017; 357: 1303 - 7.
63. Burkard C, Opriessnig T, Mileham AJ, Stadejek T, Ait-Ali T, Lillico SG, Whitelaw CBA, Archibald AL. Los
cerdos que carecen del dominio cysteinerich receptor scavenger 5 de CD163 son resistentes a la
infección por PRRSV-1. J Virología. 2018.
https://doi.org/10.1128/JVI.00415-18 .
64. Yang H, Zhang J, Zhang X, Shi J, Pan Y, Zhou R, et al. CD163 knockout cerdos son completamente resistentes
a la altamente patógena y reproductivo porcino virus del síndrome respiratorio. Res antivirales. 2018; 151:
63 - 70.
sesenta Fischer
y cinco. K, Kind A, Schnieke A. Montaje de múltiples transgenes xenoprotective en
cerdos. El xenotrasplante. 2018; 25 (6): 12.431.
Wu y Bazer Revista de Ciencia Animal y Biotecnología (2019) 10:28 Página 16 de 16

66. Kang JT, Kwon DK, Parque AR, Lee EJ, Yun YJ, Ji DY, et al. Produccion de α- 1,3galactosyltransferase
dirigido cerdos utilizando tipo activador de la tecnología de edición genoma mediada por nucleasa efector
transcripción. J Vet Sci. 2016; 17: 89 - 96.
67. Liu M, Rehman S, Tang X, Gu K, Fan Q, Chen D, et al. Las metodologías para mejorar la eficiencia
de HDR. Frente Genet. 2019; 9: 691.

68. Mehravar M, Shirazi A, Nazari M, Banan M. mosaicismo en la edición genoma CRISPR /

Cas9mediated. Dev Biol. 2019; 445: 156 - 2.
69. Bamford RA, Zhao ZY, Hotchin NA, Estilos IB, Nash GB, Tucker JHR, et al. La electroporación y
microinyección entregar con éxito ADN de cadena única y doble cara en las células vivas como se
detecta por mediciones FRET. Más uno. 2014; 9 (4): e95097.

70. Bikard D. Explotando CRISPR-cas nucleasas para producir antimicrobianos secuencia-específicos. Nat
Biotechnol. 2014; 32: 1146 - 50.
71. Kim TK, Eberwine JH. transfección de células de mamíferos: el presente y el futuro. Anal
Bioanal Chem. 2010; 397: 3173 - 8.

72. Lillico SG, Proudfoot C, Carlson DF, Stverakova D, Neil C, Blain C, et al. Los cerdos vivos producidos a

partir del genoma cigotos editados. Sci Rep 2013; 3:. 2847.

73. Hai T, Teng F, Guo R, Li W, Zhou Q. generación de un solo paso de cerdos knockout por inyección cigoto de
sistema CRISPR / Cas. Cell Res. 2014; 24: 372.
74. Yang D, Yang H, Li W, Zhao B, Ouyang Z, Liu Z, et al. Generación de PPAR γ
cerdos knockout mono-alélicas vía nucleasas dedo de cinc y la clonación de transferencia nuclear. Cell Res.

2011; 21 (6): 979.

75. Carlson DF, Garbe JR, Tan W, Martin MJ, Dobrinsky JR, Hackett PB, et al. Las estrategias para la selección
transgénesis porcina sin marcador utilizando el sistema de bella durmiente transposón. Res
transgénicos. 2011; 20: 1125 - 37.
76. Tan W, Carlson DF, Lancto CA, Garbe JR, Webster DA, Hackett PB, et al. Eficiente introgresión
alelo nonmeiotic en el ganado utilizando endonucleasas personalizados. Proc Natl Acad Sci
EE.UU.. 2013; 110: 16526 - 31.
77. Lai S, Wei S, Zhao B, Ouyang Z, Zhang Q, Fan N, et al. Generación de ronda en cerdos que
llevan Oct4-td-tomate informador a través de la ingeniería del genoma CRISPR / Cas9mediated.
Más uno. 2016; 11 (1): e0146562.
78. Rao S, Fujimura T, Matsunari H, Sakuma T, Nakano K, Watanabe M, et al. modificación eficaz del gen
de la miostatina en las células somáticas porcinas y la generación de los lechones knockout. Mol
Reprod Dev. 2016; 83: 61 - 70.
79. Zheng Q, Lin J, Huang J, Zhang H, Zhang R, Zhang X, et al. La reconstitución de UCP1 usando CRISPR /
Cas9 en el tejido adiposo blanco de cerdos disminuye la deposición de grasa y mejora la capacidad
termogénica. Proc Natl Acad Sci EE.UU.. 2017; 114: E9474 - 82.

80. Roy B, Zhao J, Yang C, Luo W, Xiong T, Li Y, et al. CRISPR / Cascade genoma Edición-desafíos y
oportunidades 9-mediada. Frente Genet. 2018; 9: 240.
81. Koch BJ, Hungate BA, LB. Precio la producción de alimentos de origen animal y de la propagación de la resistencia a

los antibióticos: el papel de la ecología. Frente Ecol Environ. 2017; 15: 309 - 18.

82. Kim JS, Cho DH, Parque M, Chung WJ, Shin D, Ko KS, et al. mediada por Cas9 CRISPR / re-sensibilización de

resistente a los antibióticos Escherichia coli la acogida extendedspectrum β- lactamasas. J Microbiol Biotechnol.

2016; 26: 394 - 401.

83. Dutil L, Irwin R, Finley R, Ng LK, Avery B, Boerlin P, et al. resistencia Ceftiofur en Salmonella enterica serotipo
Heidelberg de la carne y el pollo seres humanos, Canadá. Emerg Infect Dis. 2010; 16: 48 - 54.

84. Greene AC. antibacterianos a base de CRISPR: la transformación de la defensa bacteriana en la ofensiva. Trends

Biotechnol. 2018; 36: 127 - 30.

85. Choi KR, Lee SY. CRISPR tecnologías para sistemas bacterianos: logros actuales y futuras
direcciones. Biotechnol Adv. 2016; 34: 1180 - 209.
virus 86. Reardon S. modificados entregan muerte a las bacterias resistentes a los antibióticos: microbios modificados

se convierten respuesta inmune de una bacteria contra sí mismo utilizando CRISPR. Naturaleza. 2017; 546:

586 - 7.

87. Sato'o Y, Hisatsune J, Yu L, Sakuma T, Yamamoto T, hecho a medida Sugai M. silenciamiento de genes

de Staphylococcus aureus los aislados clínicos de interferencia CRISPR. Más uno. 2018; 13 (1):

e0185987.

88. Hou Y, Wu Z, Dai Z, Wang G, Wu G. Los hidrolizados de proteínas en la alimentación animal: la producción
industrial, péptidos bioactivos, y significado funcional. J Anim Sci Biotechnol. 2017; 8: 24. https://doi.org/10.1186/s40104-017-0153-9
.