Bioqumica

Estructural y Metablica
TEMA 5. Enzimologa
 Bioqumica Estructural y Metablica
TEMA 5. Enzimologa

TEMA 5. Enzimas.

Clasicacin. Principios de la catlisis enzim6ca. Energa de ac6vacin.

Velocidad de reaccin y equilibrio de reaccin. Cin6ca enzim6ca:
ecuacin de Michaelis-Menten. Ecuacin de los dobles recprocos.
Inhibicin enzim6ca. Tipos de inhibicin. Mecanismos de regulacin
de la ac6vidad enzim6ca: alosterismo, modicacin covalente,
proenzimas. Isoenzimas.

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ENZIMAS

Catalizadores de las reacciones biolgicas.

La mayora son protenas aunque hay molculas de RNA con
ac6vidad catal6ca (ribozimas).
Gran poder catal6co.
Alto grado de especicidad.
Actan en soluciones acuosas a 37C y pH neutro.
Su ac6vidad puede regularse.
El 25% de los genes humanos codican enzimas que catalizan
reacciones metablicas.

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IMPORTANCIA DE LOS ENZIMAS

Cada paso de una va metablica est catalizado por un enzima.

La medida de la acKvidad enzimKca en uidos biolgicos o tejidos
es importante para el diagnsKco de muchas enfermedades.
Muchas frmacos son inhibidores de la ac6vidad enzim6ca.
Importancia en la industria de alimentacin y agricultura.

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ENZIMAS: DEFINICIONES
Cofactor: necesario para la ac6vidad enzim6ca. Pueden ser iones
metlicos o una molcula orgnica, denominada coenzima. Si el
cofactor est unido fuertemente al enzima se denomina grupo
prost6co.
Apoenzima: parte proteica del enzima (no ac6va).
Holoenzima: apoenzima + cofactor.

NOMENCLATURA DE LOS ENZIMAS

SUSTRATO + TIPO DE REACCIN + ASA

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UN TERCIO DE LOS ENZIMAS REQUIEREN

ALGN IN METLICO

Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000.
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MUCHAS VITAMINAS SON COFACTORES O

PRECURSORES DE COFACTORES DE ENZIMAS

Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000.
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CLASES DE ENZIMAS

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LOS ENZIMAS ACELERAN LAS REACCIONES

DISMINUYENDO LA ENERGA DE ACTIVACIN

E + S = ES = E + P

Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000.
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LOS ENZIMAS SON ESTEREOESPECFICAS PORQUE FORMAN VARIAS

INTERACCIONES ENTRE AMINOCIDOS DEL CENTRO ACTIVO Y LOS
DISTINTOS GRUPOS DEL SUSTRATO

Mathews & Van Holde. Bioqumica. McGraw-Hill, 1998.

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EL CENTRO ACTIVO DE LOS ENZIMAS ES COMPLEMENTARIO

AL ESTADO DE TRANSICIN DE LA REACCIN CATALIZADA

Progreso de la reaccin

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Encaje
inducido

Cambio conformacional inducido por glucosa en la hexoquinasa

(Hexoquinasa = ATP: glucosa fosfotransferasa = 2.7.1.1 ).

D-Glucosa

Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000.
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LA Vmax SE ALCANZA CUANDO TODOS LOS CENTROS

ACTIVOS ESTN OCUPADOS CON SUSTRATO
Velocidad inicial

1/2 Vmax

Km
Concentracin de sustrato [S]
Garreh, R.H. and Grisham, C.M. Biochemistry. 2 ed. Saunders College Publishing. 1999.
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RELACIN ENTRE Vo y [E]

Vo

[E]

La velocidad inicial es funcin lineal de la concentracin de

enzima, siempre que la concentracin de sustrato sea alta.
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ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN

Vmax (S)
Vo =
Km + (S)

K1 K2
E + S ES P
K1

K2 + K1
Km =
K1

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LA Vmax SE ALCANZA CUANDO TODOS LOS CENTROS

ACTIVOS ESTN OCUPADOS CON SUSTRATO
Velocidad inicial

1/2 Vmax

Km Concentracin de sustrato [S]

Garreh, R.H. and Grisham, C.M. Biochemistry. 2 ed. Saunders College Publishing. 1999.
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CALCULO DE Km Y Vmax POR LA

REPRESENTACIN DE LINEWEAVER-BURK

Garreh, R.H. and Grisham, C.M. Biochemistry. 2 ed. Saunders College Publishing. 1999.
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PARMETROS ENZIMTICOS
1. Km (constante para cada enzima) = concentracin de S a la que la Vo es
1/2 Vmax. Es una medida de la anidad del enzima por S. Cuanto menor
es Km, mayor es la anidad del enzima por S.
2. Kcat (constante para cada enzima) = nmero de recambio = nmero de
molculas de sustrato conver6das en producto por molcula de enzima
y unidad de 6empo, en condiciones de saturacin de sustrato.
3. Vmax = velocidad mxima terica = la velocidad cuando todos los centros
ac6vos estn ocupados con sustrato (nunca alcanzada en la realidad).
4. Unidad de enzima = can6dad de enzima que transforma 1 mol de
sustrato por min = una forma comn de expresar la velocidad.
5. AcKvidad especca = unidades por mg de protena total de la
preparacin enzim6ca. En el caso de enzimas en suero: unidades/L.

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Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000.
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EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Los enzimas poseen grupos qumicos ionizables (carbo-

xilos -COOH; amino -NH2; 6ol -SH; imidazol, etc.) en las
cadenas laterales de sus aminocidos. Segn el pH del
medio, estos grupos pueden tener carga elctrica posi-
6va, nega6va o neutra. Como la conformacin de las pro-
tenas depende, en parte, de sus cargas elctricas, habr
un pH en el cual la conformacin ser la ms adecuada
para la ac6vidad catal6ca. Este es el llamado pH p6mo.

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EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

La mayora de los enzimas son muy sensibles a los cambios

de pH. Desviaciones de pocas dcimas por encima o por
debajo del pH p6mo pueden afectar drs6camente su
ac6vidad. As, la pepsina gstrica 6ene un pH p6mo de 2,
y la tripsina lo 6ene a pH 6.
Ligeros cambios del pH pueden provocar la desnaturali-
zacin de la protena, los seres vivos han desarrollado siste-
mas ms o menos complejos para mantener estable el pH
intracelular: los amor6guadores siolgicos.

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EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

(Garret & Grisham)

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EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA

ACTIVIDAD ENZIMTICA

Los aumentos de temperatura por lo general aceleran las

reacciones qumicas. Las reacciones catalizadas por enzi-
mas siguen esta ley, solo que al ser protenas a par6r de
cierta temperatura se empiezan a desnaturalizar.
Esa temperatura se llama temperatura p6ma y es aquella
en la que la velocidad enzim6ca es mxima.

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VARIACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA EN

FUNCIN DE LA TEMPERATURA

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INHIBICIN ENZIMTICA

Inhibicin irreversible (uniones covalentes entre

inhibidor y enzima. Ejemplo: frmacos).

Inhibicin reversible.
COMPETITIVA.
NO COMPETITIVA.

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INHIBICIN COMPETITIVA
+ Inhibidor
Unin del Inhibidor al centro
ac6vo, compi6endo con S:
Aumenta Km.
No cambia Vmax.

Inhibidor
Sustrato compe66vo

Adaptado de: Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000.

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INHIBICIN NO COMPETITIVA
+ Inhibidor
Unin del Inhibidor a un si6o
del enzima dis6nto del centro
ac6vo: no compite con S:
No cambia Km.
Disminuye Vmax.

Sustrato Sustrato
Inhibidor no
compe66vo

Adaptado de: Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000.

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INHIBICION COMPETITIVA INHIBICION NO COMPETITIVA

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Inhibidor
Sustrato compe66vo

Inhibidor
Sustrato Sustrato acompe66vo
Inhibidor
no compe66vo

Berg, Tymoczko and Stryer. Biochemistry. 5 ed. Freeman and Co, 2002.

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Regulacin de la canKdad de enzima presente en las clulas.

Inhibicin reversible por productos.
Interaccin con moduladores (protenas u otros):
- AcKvacion/inhibicin alostrica:
El modulador alostrico se une a un si6o dis6nto del centro
ac6vo.
La unin del modulador es reversible e implica cambio
conformacional.
Suelen ser enzimas mul6mricas.
Tienen cin6ca sigmoidea.
- Modicacin covalente:
Fosforilacin.
ADP-ribosilacin.
Me6lacin.
AcKvacin proteolKca de pro-enzimas.

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ENZIMAS ALOSTRICOS

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LOS ENZIMAS ALOSTRICOS NO

PRESENTAN CINTICA MICHAELIANA

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+ Modulador alostrico
posi6vo.

El sustrato es modulador
posi6vo.

+ Modulador alostrico
nega6vo.

Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000.
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ACTIVACIN/INACTIVACIN DE ENZIMAS POR FOSFORILACIN

EJEMPLO: GLUCGENO FOSFORILASA

Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000.
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UNA ENZIMA PUEDE TENER VARIOS

MECANISMOS DE REGULACIN

Garreh, R.H. and Grisham, C.M. Biochemistry. 2 ed. Saunders College Publishing. 1999.
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ACTIVACIN DE PROENZIMAS POR PROTELISIS

Auto-ac6vacin
de quimotripsina

Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000.
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1%

3%

18%

45%

33%

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BIBLIOGRAFA

Lehninger Principles of Biochemistry. 5 ed. Freeman, 2009. Cap 6.

Marks Basic Medical Biochemistry. A clinical approach. 3 ed. LWW., 2008. Cap 8.
Devlin. Textbook of Biochemistry with Clinical correla>ons. 7 ed. Wiley, 2010. Cap 10.
Feduchi y cols. Bioqumica: conceptos esenciales. Panamericana, 2011. Cap 8.
Berg, Tymoczko and Stryer. Biochemistry. 7 ed. WH. Freeman, 2011. Caps 8, 9.
Voet and Voet. Biochemistry. 4 ed. Wiley, 2011. Caps 13, 14, 15.
Baynes and Dominiczak. Bioqumica Mdica. 3 ed. Elsevier, 2011. Cap 6.
Garreh and Grisham. Biochemistry. 4 ed. 2009. Caps 13, 14, 15.

Jess Navas Mndez