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Bioquímica y Nutrición (Practica-2017)
Bioquímica y Nutrición (Practica-2017)
GUIA DE PRACTICAS
2017-I
LIMA PERU
NORMAS PARA EL USO Y TRABAJO EN EL LABORATORIO
1. Realizar las prcticas de laboratorio con el debido inters y responsabilidad.
2. Presentarse vestido correctamente con su correspondiente guardapolvo y
distintivo de la Universidad.
3. Poner maletines y mochilas en el estante, llevar a las mesas solo lapiceros
y cuadernos.
4. Est terminantemente prohibido beber o comer dentro del laboratorio.
5. Leer cuidadosamente la gua de prctica y tener en cuenta las indicaciones
de los profesores de prctica sobre el uso del material y equipos de
laboratorio, as como el orden, limpieza y seguridad que debe mantenerse.
6. Por cada prctica de laboratorio cada mesa de trabajo presentar un nico
informe, el cual consta de las siguientes partes:
- Cartula.
- Objetivos.
- Marco Terico.
- Desarrollo Experimental.
- Discusin de los resultados.
- Conclusiones.
- Cuestionario.
- Bibliografa
Dicho informe se presentar en la siguiente prctica en el horario y grupo
Respectivo.
7. El inicio de la prctica es en la hora exacta programada. Se tendr una
tolerancia de 10 minutos, luego de ese lapso de tiempo no se podr
ingresar al laboratorio, por lo tanto se le considerar como una inasistencia
y no tendr derecho a nota de informe de prcticas.
8. Las inasistencias en las prcticas no son recuperables en ninguno de los
grupos, calificndose al alumno con nota cinco (05). Aquel alumno que
acumule 30% de inasistencias no tiene derecho a nota prctica.
9. Cada alumno ser integrante de una mesa de trabajo, a la cual pertenecer
a lo largo del semestre acadmico.
10. Por mesa de trabajo, ser nombrado un responsable que se har cargo del
material y equipos recibidos as como de la presentacin de los informes.
11. En caso de dao, deterioro o prdida del material y/o equipos, el
responsable de mesa informar del hecho al profesor de prcticas, TODO
GRUPO ES RESPONSABLE DEL DAO CAUSADO, y deber repararlo a la
brevedad posible, no ms de una (01) semana despus del incidente.
12. Al final de la prctica, se proceder a limpiar el material usado, con el fin
de entregarlo en las mismas condiciones en las que fueron recibidos, caso
contrario se le descontar un punto en la nota de informe a todo el grupo.
13. Una vez limpio el material, el responsable de mesa lo devolver a la
persona encargada del laboratorio.
14. El laboratorio deber quedar completamente limpio, las mesas secas y
limpias, debiendo arrojar todos los desechos al tacho de basura.
UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
PRACTICA No 1
ESPECTROFOTOMETRIA
GENERALIDADES:
Cuando una haz de luz (luz incidente, Io) atraviesa una solucin, una parte de la
radiacin queda absorbida por las molculas del soluto coloreado, sufriendo una
reduccin de su intensidad (Luz transmitida, I), proporcional a la capacidad de
absorcin de dichas molculas.
Io I
Donde:
Io = Intensidad de la luz incidente.
I = Intensidad de la luz transmitida.
E = Coeficiente de extincin molar, valor constante dependiendo de la
naturaleza de la
Sustancia y de la longitud de onda
I = Espesor del recipiente en cm.
C = Concentracin de la solucin.
A = D.O. = Absorbancia (A) aumenta conforme disminuye la Transmitancia (T)
y la relacin entre ambas es logartmica.
Fc = [ Standard ] / A
Donde:
Fc = factor de calibracin.
A = absorbancia del tubo standard.
[Standard] = concentracin del standard.
[ MP ] = A. Fc
Donde:
Vol = Volumen de la muestra problema tomada para hacer la dilucin.
Vol o = Volumen total.
Para este segundo caso cuando se quiere saber la concentracin de una muestra
problema se proceder usando la siguiente frmula:
[ MP ] = A. Fc. dil
Donde:
A = Absorbancia de la muestra problema.
Fc = Factor de calibracin.
Dil = Factor de dilucin.
[MP] = Concentracin de la muestra.
EXPERIMENTO
3.- Grafique el espectro de luz, tanto en el rango visible como no visible con sus
respectivas longitudes de ondas.
Muestra A........................0.015
Muestra B........................0.125
Muestra C........................0.350
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FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
PRACTICA No 2
FUNDAMENTO BIOQUIMICO:
Una propiedad importante de los aminocidos, consecuencia del hecho de que
todos ellos tienen grupos carboxilo (-COOH) y grupos amino (-NH2) es su conducto
como electrolitos. Es costumbre considerar los grupos COOH como de naturaleza
acdica y los grupos NH2 como de carcter bsico.
Hemos estudiado en las clases tericas el comportamiento de los aminocidos
como iones dipolares y la conducta de ellos durante su titulacin con cido y lcalis
de modo que se comportan como verdaderas sustancias tampones,
amortiguadores buffers, para el sostenimiento del pH del medio interno dentro
de estrechos lmites (7.35 a 7.45). Explicamos tambin el comportamiento
amortiguador del ion dipolar glicina al aadirle iones H+ o al aadirle OH-
impidiendo las variaciones bruscas del pH sanguneo. La representacin de un
aminocido tal como la glicina por la frmula NH2CH2COOH sugiere que se trata de
una sustancia en la que el grupo amino acta como una base conjugada y el grupo
COOH como un cido. Se ha observado, sin embargo, que esta formulacin no es
la correcta del estado inico de un aminocido en solucin acuosa. La verdadera
representacin es aquella que dimos del ion dipolar (A) y que es la siguiente:
(Estructura A)
H H
R C COO- R C COOH
Estructura (A) NH3 Estructura (B) NH2
Cesin de protones
AH A- + H+
PARTE EXPERIMENTAL:
Mezclar los volmenes de CH3-COOH 0.1N y de NaOH 0.1N con agua destilada
sealados en la tabla siguiente, mezclar bien y luego medir el pH en cada uno de
los 11 Beakers con el potencimetro:
pH
ml NaOH aadido
CUESTIONARIO:
1.- Graficar la curva de valoracin del cido actico 0.1N vs. NaOH 0.1N.
2.- Identificar el punto de semi-valoracin y mxima capacidad tampn.
3.- Explique que es un par tampn, como funciona y porqu las protenas
sanguneas son amortiguadores.
4.- Describa las principales sustancias amortiguadoras del organismo
humano.
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FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
PRACTICA No 3
C C'
EXPERIMENTO A
EXPERIMENTO B
2) Mezclar bien los tubos. Hacer un control con la solucin yodada con todos
los cinco tubos de la misma manera que se hizo en el experimento anterior
y leer las absorbancia de dichos controles a 650 nm. Dichas absorbancia se
tomarn como lecturas iniciales.
3) Luego aadir 1 ml de solucin de enzima a cada tubo y colocarlos en el
bao de agua a 37C por 20 minutos.
4) Sacar los tubos y hacer un control con solucin yodada de cada uno. Las
lecturas de absorbancia se tomarn ahora como lecturas finales.
5) Hacer la diferencia:
Actividad enzimtica = Lectura inicial Lectura final
EXPERIMENTO C
CUESTIONARIO:
PRACTICA No 4
1. Evaluacin antropomtrica :
Emplearemos los ndices PESO/TALLA; Circunferencia del Brazo(CB);
Circunferencia Muscular del Brazo (CMB); Espesor del Pliegue Cutneo del Trceps
(EPCT); ndice de Masa Corporal (IMC); entre otros.
2. Evaluacin bioqumica :
Utilizaremos la Protena Total y la Albumina Sricas como ndices de masa
proteica visceral.
El Balance Nitrogenado lo utilizaremos para evaluar los ingesta en relacin
con la excrecin de Nitrgeno.
Como Evaluador Bioquimico-Antropomedico (Mixto) utilizaremos el ndice
Creatinina Urinaria/Talla para la evaluacin de la masa muscular esqueltica.
3.Evaluacion Inmunolgica :
Empleando los TEST de Hipersensibilidad Cutnea Retardada: Tuberculina,
Candidina, etc.
3. Evaluacin Clnica :
Diferenciaremos el Marasmo del Kwashiorkor en sus mas importantes
diferencias Bioqumicas y Clnicas.
EXPERIMENTO A
Los enlaces peptdico de las protenas reaccionan en un medio alcalino con el ion
cprico del reactivo de Biuret, estabilizado por tartrato, para formar un complejo
de color violeta cuya mxima absorcin se da a 540 nm.
NaOH
Cobre + protena Complejo cupro-proteico
El dosaje de protenas totales tiene poco valor como prueba aislada porque la
alteracin en una de las fracciones puede ser balanceada por una alteracin
opuesta de otra fraccin. Por lo tanto, es importante que adicionalmente se
determine la concentracin de albmina.
La albmina tambin va a ser dosada por el mtodo de Biuret, pero previamente al
suero se le hace un tratamiento con sulfato de sodio y eter etlico para lograr la
separacin de las globulinas y permitir solo el dosaje de albminas.
REACTIVOS PROVISTOS:
Reactivo EDTA/Cu: Complejo EDTA/Cu 13 mmol/l en NaOH 875 mmol/l y alquil
aril poli ter (AAP).
Reactivo BCF: Solucin de 3,3,5,5-tetrabromo Cresolsulfon ftalenas (en
polioxietiln lauril ter).
Suero Patrn: Solucin de Albumina y Globulinas en estado nativo con titulo
conocido de protenas (Biuret o Kjeldhal) y Albumina (unin BCF).
P.T.(g/dl)
PROTEINAS TOTALES (g/dl) =--------------------------
S
Alb. (g/dl)
ALBUMINA (g/dl) =------------------------------
S
Albumina (g/dl)
RELACION A/G =---------------------------------------
P.T. (G/DL) Alb. (g/dl)
VALORES NORMALES:
Protenas Totales= 6.1 7.9 g/dl.
Albmina = 3.5 4.8 g/dl.
Relacin A/G = 1,2 a 2,2
CUESTIONARIO.-
PRACTICA No 5
FUNDAMENTO TERICO
MATERIALES Y REACTIVOS
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
Incubar los tres tubos en Bao Mara de 37C por 10 minutos. Mezclar bien la
solucin. Leer las absorbancias en el espectrofotmetro a 505 nm.
CALCULOS
VALORES NORMALES
FUNDAMENTO TEORICO
MATERIALES Y REACTIVOS
Tubos: I II
Orina normal (gotas) 10 gotas ---
Orina DM (gotas) --- 10 gotas
Reactivo de Benedict (ml) 2 ml 2 ml
CUESTIONARIO:
PRACTICA No 6
Definicin de DM
Clasificacin de DM
Diagnstico
FUNDAMENTO TERICO
Las pruebas de tolerancia a la glucosa oral fueron utilizadas por mucho tiempo
para diagnstico de Diabetes Mellitus o intolerancia disminuida, pero ya no se
utilizan de rutina, pero si pueden servir tanto para la Diabetes como para la
intolerancia. Importante es recalcar que los niveles importantes en ambos casos
son los obtenidos a las dos horas, y que la cantidad de glucosa a ingerir debe ser
de 75 gramos. El disolver 75 gramos en por lo menos 300 ml de agua hace la
solucin ms agradable al paladar y por lo tanto tendrn ms aceptacin por parte
del paciente.
MATERIALES Y REACTIVOS
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
Incubar los tubos en Bao Mara de 37C por 10 minutos. Leer las absorbancias
para cada una de los tubos en el espectrofotmetro a 505 nm.
CALCULOS
CUESTIONARIO:
1.- Con los datos de glicemia obtenidos en el experimento construir en un papel milimetrado una
grfica de tiempo vs. Glicemia y apreciar la curva de tolerancia a la glucosa.
2.- Como sera esta curva en el caso de una persona normal, un diabtico y un intolerante a la
glucosa.
4.- Qu son y en que casos se hace un dosaje de pptido C y de insulina en un paciente diabtico.
PRACTICA No 7
PANCREATITIS AGUDA:
PANCREATITIS CRNICA:
Causas:
- Pancreatitis Alcohlica
- Pancreatitis Idioptica
- Pancreatitis Crnica Tropical
- Pancreatitis Hereditaria
- Pancreatitis por Hipoparatiroidismo
- Pancreatitis por Lesiones Traumticas del Conducto Ductal
Experimento A: DETERMINACIN DE AMILASA EN SUERO
MATERIALES Y REACTIVOS:
- Espectrofotmetro.
- Micro pipetas y pipetas capaces de medir los volmenes indicados.
- Tubos de ensayo y cubetas de lectura.
- Bao Mara a 37C.
- Reloj o timer.
- Sustrato: solucin de almidn 500 mg/l, tamponada a pH 7 con buffer
fosfato 0.1 mol/l en NaCl 0.15 mol/l.
- Reactivo de yodo: solucin 0.01 eq/l de yodo en HCl 0.02 mol/l.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
Control Muestra
Sustrato 1 ml 1 ml
Dejar unos minutos en bao de agua a 37C y agregar:
Muestra --- 20 uL
Incubar a 37C. A los 730 exactos, agregar:
Reactivo de yodo 1 ml 1 ml
Mezclar por agitacin suave. Retirar los tubos del bao y agregar:
Agua destilada 8 ml 8 ml
Mezclar por inversin.
Leer en espectrofotmetro a 640 nm, llevando a cero el aparato con agua
destilada.
Experimento B: DETERMINACIN DE AMILASA EN ORINA
Suero Orina
(UA/dl) (UA/hora)
Normal <120 <260
Pancreatitis aguda 300 a 12000 Ms de 900
Pancreatitis crnica Hasta 200 Ms de 300
Parotiditis 200 a 350 350 a 750
Parotiditis con complicacin pancretica Ms de 350 Ms de 750
Procesos abdominales agudos (sin Normal Normal
pancreatitis)
CUESTIONARIO:
PRACTICA N08
CETOACIDOSIS DIABTICA
BASE BIOQUMICA.
CET0ACIDOSIS DIABETICA:
CETOGENESIS:
OBJETIVO DE LA PRACTICA.-
Aprender a interpretar los niveles de bicarbonato srico, pH sanguneo y presencia
de cuerpos cetnicos en la orina en presencia de Cetoacidosis Diabtica.
EXPERIMENTO A:
DOSAJE DE BICARBONATO SRICO
Reactivos y materiales:
HCl 0.01 N
NaOH 0.01 N
Fenolftalena 20 mg% solucin alcohlica
Alcohol Etlico (corriente)
Muestras problemas de bicarbonato para titularlas..
Pipetas de 5 ml graduadas al dcimo
Pipetas de 1 ml graduadas al centsimo
Beakers de vidrio de 100 50 ml
Baguetas de vidrio
Bao Mara de 37C
Reloj de intervalos
Mtodo:
En un Beakers de vidrio colocar:
5 ml de HCl 0.01 N
1 ml de suero
2 gotas de alcohol
Agitar y luego reposo 2 min.
Aadir 3 gotas del indicador fenolftalena.
Colocar a 37 C en Bao Mara por 10 minutos.
Titular con NaOH 0.01N, hasta obtener un color rosado plido.
Anotar la cantidad de NaOH gastado.
Clculos:
(5 - X ml gastados de NaOH en la titulacin) x 10 = mMol/ Litro de HCO3-
Considerar que:
a) 1ml de NaOH 0.01 N equivale 0.01 mEq HCO3
EXPERIMENTO B:
Reactivos:
Procedimiento:
PRACTICA N 9
Sin embargo, actualmente se sabe que es necesario conocer adems la distribucin de las
lipoprotenas encargadas del transporte: HDL (lipoprotenas de alta densidad),
considerada como el factor protector y LDL (lipoprotenas de baja densidad),
consideradas como el verdadero factor de riesgo. Las funciones biolgicas inherentes a
los distintos grupos de lipoprotenas, las variaciones en su composicin y los resultados
de los diversos estudios epidemiolgicos, indican que los valores aislados de colesterol
HDL y colesterol LDL no pueden tomarse como ndices predicativos de riesgo, sino que es
necesario conformar un perfil Lipidico con los valores de colesterol total, colesterol LDL y
colesterol HDL.
Experimento A: DETERMINACIN DE COLESTEROL EN SUERO
Lipasa
Esteres de colesterol colesterol + cidos grasos
CHOD
Colesterol + O2 colesten-3-ona + H2O2
POD
H2O2 + 4-AF 4-(p-benzoquinona monoimino)-fenazona + 4 H2O
REACTIVOS:
PROCEDIMIENTO:
En tres tubos colocar:
VALORES DE REFERENCIA:
Los valores de colesterol en sangre fluctan segn edad, sexo y hbitos de dieta y de
ejercicio. Sin embargo, es preferible no hacer referencia a valores normales, pues la
norma promedio de una poblacin no necesariamente refleja ausencia de riesgo
patolgico en el caso de colesterol.
REACTIVOS:
REACTIVO PRECIPITANTE.- Contiene una solucin de Sulfato de Dextrn y de
Cl2Mg.H2O
PROCEDIMIENTO:
En un tubo medir 0.5 ml de muestra y agregar 0.05 ml (50 ul) de Reactivo Precipitante.
Homogenizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos.
Dejar 30-40 minutos en refrigeracin (4-10C). No colocar en el congelador.
Centrifugar a 3000 rpm. X 03 minutos
Usar el sobrenadante como muestra.
En tres tubos colocar:
Tubos Blanco Standard Muestra
Standard --- 20 ul ---
Muestra Sobrenadante --- --- 100 ul
Reactivo de trabajo 2 ml 2 ml 2 ml
CALCULOS:
VALORES NORMALES:
40 65 mg%
REACTIVOS:
REACTIVO PRECIPITANTE.- Solucin de sulfato de polivinilo disuelto en
polietilenglicol (PM 600).
PROCEDIMIENTO:
En un tubo, colocar 0.2 ml (200 ul) de suero problema y aadir 0.1 ml (100 ul) de
Reactivo Precipitante.
Homogenizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos.
Dejar 15 minutos en un bao de agua a 20-25C.
Centrifugar a 3000 rpm. X 03 minutos
Usar el sobrenadante como muestra.
En tres tubos colocar:
Tubos Blanco Standard Muestra
Standard --- 20 uL ---
Muestra Sobrenadante --- --- 100 uL
Reactivo de trabajo 2 ml 2 ml 2 ml
CALCULOS:
VALORES NORMALES:
CUESTIONARIO:
PRACTICA N10
Los triglicridos forman la mayor parte del peso seco del tejido adiposo, constituyendo
por lo tanto una potente forma de almacenamiento de energa.
El movimiento de cidos grasos entre los distintos compartimientos del organismo, se
produce con gran rapidez en respuesta a diversos estmulos (dieta, actividad fsica,
stress, edad, etc.). Por este motivo es de esperar que los triglicridos (uno de los ms
importantes vehculos para el transporte de cidos grasos) varen tambin su
concentracin en respuesta a estos factores fisiolgicos.
Sin embargo, el equilibrio de estos mecanismos puede verse alterado, conduciendo a
niveles anormales de triglicridos circulantes. La persistencia de esta condicin, se
asocia con numerosas patologas, tales como enfermedad heptica, renal,
Hiperlipidemias esenciales, etc.
Un caso que resulta de particular inters es el aumento de triglicridos en individuos
obesos, en los cuales tiene importancia pronostica, respecto a la probabilidad de
desarrollar enfermedad cardaca coronaria. Alrededor del 50% de los lpidos de las
lesiones ateromatosas que ocurren en las arterias coronarias son triglicridos, por lo
que es posible relacionar a los triglicridos con la patognesis de la arteriosclerosis
coronaria. Este punto de vista est sustentado por el hecho de que un gran porcentaje
de pacientes con infarto de miocardio tambin exhiben Hipertrigliceridemia.
Lipoprotena lipasa
Triglicridos Glicerol + 3 cidos grasos
Glycerol kinasa
Glycerol + ATP Glicerol-1-P + ADP
En una tercera etapa el derivado fosforilado se oxida mediante la glicerol fosfato oxidasa
(GPO), con produccin de agua oxigenada.
GPO
Glicerol-1-fosfato + O2 H2O2 + dihidroxiacetonafosfato
POD
2 H2O2 + 4-AF + clorofenol 4-(p-benzoquinona monoimino) fenazona + 4 H2O
REACTIVOS PROVISTOS:
MATERIAL REQUERIDO:
- Espectrofotmetro.
- Probeta, micro pipetas y pipetas capaces de medir los volmenes indicados.
- Frasco de vidrio color mbar.
- Cubetas espectrofotomtricas.
- Bao de agua a 37C.
- Reloj timer.
PROCEDIMIENTO:
Mezclar.
Incubar 5 minutos en Bao Mara a 37C.
Enfriar y leer en espectrofotmetro a 505 nm llevando el aparato a cero con agua
destilada.
Corregir las lecturas con el blanco y usar las lecturas corregidas para los clculos.
Para hallar la concentracin de triglicridos en el suero problema, se debe utilizar el
mtodo del factor de calibracin.
Triglicridos (mg%) = M x Fc
VALORES DE REFERENCIA:
El panel de expertos del National Cholesterol Education Program (NCEP) provee los
siguientes valores de triglicridos:
CUESTIONARIO:
PRACTICA N 11
REACTIVOS:
Reactivo EDTA/Cu: complejo EDTA/Cu 13 mmol/l en NaOH 875 mmol/l y alquil aril poli
ter (AAP).
Reactivo BCF: solucin de Bromo Cresolsulfon Ftalenas (en polioxietiln lauril ter).
Suero Patrn: solucin de albmina y globulinas en estado nativo con ttulo conocido de
protenas (Biuret Kjeldhal) y albmina (unin BCF).
MATERIAL REQUERIDO:
Espectrofotmetro.
Micro pipetas y pipetas capaces de medir los volmenes indicados.
Tubos de ensayo.
Bao Mara a 37C.
Reloj timer.
Albmina (g/dl)
Relacin A/G = ---------------------------------------
Prot. Tot. (g/dl) - Alb. (g/dl)
VALORES DE REFERENCIA:
REACTIVOS:
Reactivo 1: cido pcrico 41,4 mmol/l.
Reactivo 2: buffer glicina/NaOH 1 mol/l, pH final 12,4.
Standard: solucin de Creatinina 2 mg%
MATERIAL REQUERIDO:
Espectrofotmetro.
Tubos de ensayo.
Micro pipetas y pipetas capaces de medir los volmenes indicados.
Reloj timer.
PROCEDIMIENTO:
Recolectar orina de 24 horas.
Medir la diuresis, tomar una alcuota y efectuar una dilucin 1:50 de la misma.
Luego en tres tubos de ensayo preparar lo siguiente:
M
Creatinina en orina (mg/24 horas) = ------ x 20 mg/l x 50 x V
S
Siendo:
V = volumen de la diuresis expresado en litros/24 horas.
M = Absorbancia neta del tubo muestra.
S = Absorbancia neta del tubo standard.
VALORES DE REFERENCIA:
900 a 1,500 mg/24 horas.
PROMEDIO DESNUTRICIN
POBLACIONAL
Relacin Cr U 24h / Talla Hombres: 830 Hombres: < 660
(mg 24h/m) Mujeres: 680 Mujeres: < 430
Relacin Peso / Talla Hombres: 37 Hombres: < 30
(Kg/m) Mujeres: 34 Mujeres: < 29
Protenas totales (g/dl) 7 <6
Albmina (g/dl) 4 < 3,5
CUESTIONARIO:
1.- Con los datos obtenidos en los experimentos, realizar la valoracin nutricional de
dicha persona sabiendo que es varn, pesa 60 Kg, su talla es 1,56 m y su volumen
urinario en 24 horas fue de 1000 ml.
2.- Como hubiera sido la valoracin nutricional en el caso que la persona hubiera sido
mujer?
3.- Mencione las caractersticas generales de las protenas y su clasificacin.
4.- Qu son las globulinas y cules son sus clases?
5.- Describa los mtodos de dosaje tanto qumicos como enzimticos para protenas
totales, albmina, globulina y Creatinina.
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FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
PRACTICA N 12
METABOLISMO DE LA BILIRRUBINA
Base Bioqumica.-
FUNDAMENTO:
El suero sanguneo es tratado con el reactivo diazoico (Acido Sulfanlico + Nitrito
de sodio) y se produce un complejo coloreado de color rojo violceo debido a la
presencia de bilirrubina conjugada al acido glucurnico (Directa) color que
desarrolla directamente.. La Bilirrubina no conjugada (Indirecta) requiere adems
la presencia de cafena alcohol metlico para que se desarrolle el color. Entonces
para obtener la produccin de color debido a ambas bilirrubinas debemos aadir
cafena metanol y tendremos la produccin de un color debido a la suma de
ambas bilirrubinas que llamamos Bilirrubina Total. Estos colores son comparados
espectrofotomtricamente con el color producido por una solucin standard de
bilirrubina de concentracin conocida.
REACTIVOS NECESARIOS:
- Desarrollador: Solucin acuosa de Benzoato de Cafena 0,13 mol/l
tamponada y estabilizada.
- Nitrito de Sodio: Solucin de Nitrito de Sodio 0,07 mol/l.
- Reactivo Sulfanlico: Solucin de acido Sulfanlico 29 mmol/l y acido
clorhdrico o,17 mol/l
- Bilirrubina Estndar: Para la calibracin peridica del equipo.
- Agua Destilada.
INSTRUCCIONES DE USO.-
METODOLOGIA.-
CALCULOS:
Bilirrubina Total mg% = (T - B) x Factor
Bilirrubina Conjugada (Directa) mg % = (D B) x Factor
Bilirrubina No Conjugada (Indirecta Libre) = (Bilirrubina Total Bilirrubina
Directa)
VALORES DE REFERENCIA:
- Recin nacidos =
Nacidos a trmino Prematuros
Sangre de cordn 2.5 mg%
Hasta las 24 horas 6.0 mg% 8.0 mg%
Hasta las 48 horas 7.5 mg% 12.0 mg%
Del 3 al 5 da 12.0 mg% 24.0 mg%
Loa valores comienzan luego a disminuir para alcanzar el nivel promedio del
adulto al mes del nacimiento.
En los prematuros, los niveles de Bilirrubina tardan ms en alcanzar la
normalidad, dependiendo del grado de inmadurez heptica
CUESTIONARIO:
PRACTICA N13
TRANSAMINACION
IMPORTANCIA CLINICA:
Las transaminasas son enzimas ampliamente difundidas en el organismo, que
catalizan la transferencia de un grupo amino de un aminocido a un cetocido, en
una de las ms importantes reacciones del metabolismo proteico. El inters clnico
est centrado especialmente en dos de ellas: TGO (transaminasa glutmico
oxalactica) y TGP (transaminasa glutmico pirvica).
Estas enzimas tienen accin eminentemente intracelular, por lo que la actividad
srica en condiciones normales es baja o nula. Un aumento de la actividad ser
evidencia de un deterioro de los tejidos en que se encuentran, de los cuales
resultan particularmente importantes corazn e hgado.
Se ha observado que luego de un infarto de miocardio se produce en suero un
marcado aumento de la actividad de la TGO, debido a la liberacin al torrente
sanguneo de esta enzima, tan abundante en msculo cardaco.
En este caso no existir aumento en la actividad srica de TGP ser mnimo.
En hepatitis virales y otras formas de enfermedad heptica que involucren necrosis
de tejido, habr un incremento considerable de la actividad srica de
transaminasas, incluso antes de la aparicin de sntomas clnicos como ictericia.
En este caso, la TGP ser la enzima predominante debida a su gran concentracin
en el tejido heptico.
Una elevada actividad de transaminasas puede detectarse tambin en traumas
accidentales o quirrgicos y en distrofias musculares y miosis.
TGP
L-alanina + -cetoglutarato Piruvato + glutamato
REACTIVOS:
Blanco Muestra
Sustrato (TGO TGP) 0.5 ml 0.5 ml
Antes de utilizar por primera vez el juego de reactivos, preparar una curva de
calibracin para TGO y otra para TGP, de acuerdo a las siguientes indicaciones:
Pipetear en dos series de tubos:
Nota: Utilizar sustrato TGO para la curva de calibracin de TGO y sustrato TGP
para la curva de calibracin de TGP, respectivamente.
CUESTIONARIO:
2.- Que relacin existe entre las transaminasas y las enfermedades hepticas?
3.- Como se encuentran las transaminasas en el infarto agudo de miocardio?
4.- Seale cules son los mtodos de anlisis conocidos para dosaje de
transaminasas?
5.- Existe variacin de transaminasas con la edad?
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FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
PRACTICA N14
BALANCE NITROGENADO
N Ingerido: gr de protenas/6.25
REACTIVOS:
Reactivo 1.- Solucin de cido pcrico 0.05M
Reactivo 2.- Solucin de hidrxido de sodio 0.75N
PROCEDIMIENTO:
Recolectar orina de 24 horas.
Diluir la orina completando a 2000 ml con agua destilada.
Nota: Si el volumen de la orina recolectada durante las 24 horas supera los 2000
ml la prueba debe realizarse sin diluirla, pero en el momento de realizar los
clculos en vez de multiplicar el resultado por 2000, debe multiplicarse por el
volumen total (ml).
Preparar los siguientes tubos:
Mezclar bien.
Despus de transcurridos 20 minutos leer la absorbancia a una longitud de onda
de 530 nm contra el blanco.
CALCULOS:
Abs muestra
Creatinina en orina (mg/24 h) = ------------------ x 2000
Abs standard
Ureasa
Urea + H2O CO2 + 2 NH3
REACTIVOS:
Reactivo 1.- Solucin de fenol y nitro prusiato de sodio.
Reactivo 2.- Solucin de hipoclorito de sodio en NaOH 0.625N
Enzima.- Solucin de ureasa.
PROCEDIMIENTO:
Se diluye la orina a 1:50 con agua destilada.
Preparar los siguientes tubos:
CALCULOS:
Abs muestra
Urea (mg/dl) = --------------------- x 60 x Factor de dilucin
Abs standard
VALORES NORMALES:
Nitrgeno ureico.- 7 a 14 gr/24 hrs.
Urea.- 15 a 30 gr/24 hrs.
CUESTIONARIO:
1.- Con los datos obtenidos en la prctica, calcular el balance nitrogenado del
paciente sabiendo que ingiri 8 gr de protenas en 24 horas .
2.- De donde proviene la Creatinina?
3.- A que se denomina uremia y que consecuencias trae?
4.- A que se llama BUN y que representa?
5.- Para que sirve la depuracin de Creatinina en orina de 24 horas?