ANALISIS INSTRUMENTAL

CROMATOGRAFIA

CROMATOGRAFIA
Definicin:
Es una tcnica capaz de separar compuestos en base a diferencias de su afinidad por una fase estacionaria y una mvil.

Sistema Cromatogrfico:
Fase Estacionaria

Soluto

Fase Mvil

Proceso Cromatogrfico
Proceso fsico - qumico que rige la separacin:

-Adsorcin: El soluto se adsorbe en la superficie de las partculas slidas

de la fase estacionaria. Es un fenmeno superficial, aumentado con la formacin de puentes de hidrgeno.

- Particin o Reparto:
El soluto se equilibra entre el lquido de la fase estacionaria y la fase mvil, por diferencia de solubilidad. Hasta llegar a un equilibrio

- Intercambio Inico:
Los aniones o cationes se unen covalentemente a la fase estacionaria slida

- Exclusin Molecular, Filtracin o Permeacin en Gel:

No existen interacciones entre la fase estacionaria y el soluto. Se separa por tamao de partcula.

Fase

Fase

Tcnica

Proceso

estacionaria mvil cromatogrfica cromatogrfico Adsorcin Capa fina I. Inico Lquida Columna Slida Esc. Molecular Gas Columna Papel Lquida Capa fina Columna Gas Adsorcin

Lquida

Particin

Columna

CROMATOGRAFIA GASEOSA

Princpio Bsico
Separacin de mezclas por interaccin diferencial de los componentes entre una FASE ESTACIONARIA (FE - lquido o slido) y una FASE MVIL (FM - lquido o gas).

Aplicabilidad
Una sustancia cualquiera puede ser arrastada por el flujo de un gas inerte y disolverse por lo menos parcialmente en ese gas

Mezclas cuyos componentes sean

VOLTILES (=evaporables)
DE FORMA GENERAL: CG es aplicable para separacin y anlisis de mezclas cuyos constituyentes tengan PUNTOS DE EBULLICIN de hasta 300oC y que sean termicamente estables. 7

CROMATOGRAFIA GASEOSA

Factores que gobiernan la separacin de los componentes de una muestra: Solubilidad en la FE. Cuanto mayor es la solubilidad de un componente en la FE, es mas lento el avance por la columna Volatilidad. Cuanto mas voltil es la sustancia (o mayor presin de vapor), mas tendencia de permanecer vaporizada y es mas rpido el avance en el sistema.

Tcnica y Ventajas CGL

1. Componentes transportados a travs de la columna por gas inerte. 2. La mezcla se particiona entre el gas portador y el solvente no voltil (FL), depositada sobre el soporte slido (SS). 3. La FL separa selectivamente los componentes de acuerdo a su coeficiente de distribucin. 4. Las bandas son registradas en funcin del tiempo a medida que van saliendo de la columna

Ventajas: La columna es contnuamente regenerada, los componentes

solo estan mezclados con gas inerte y los tiempos de anlisis son cortos: 1. Velocidad: pocos minutos para completar un anlisis. 2. Resolucin: mezclas que solo difieren en el grado de insaturacin. 3. Anlisis Cualitativos: El Tiempo de Retencin es caracterstico de cada sustancia (en FL y T dada) 4. Anlisis Cuantitativos: Area del pico proporcional a concentracin de la sustancia. 5. Sensibilidad: Alta, dependiendo del tipo Detector. 9 6. Simplicidad: Fcil de operar, interpretar y costo bajo

El Cromatgrafo de Gases
1

6 2

5
1 - Reservorio de Gas y Controles de Flujo / Presin. 3 2 - Inyector (Vaporizador) de la Muestra. 3 - Columna Cromatogrfica y Horno de la Columna. 4 - Detector. 5 - Electrnica de Tratamiento (Amplificacin) de Seal. 6 - Registro de Seal (Registrador o Computadora). Observacin: en rojo: temperatura controlada
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FASES ESTACIONARIAS

Caractersticas de una FE ideal

AMPLIO RANGO DE TEMPERATURAS DE USO Mayor
flexibilidad en la optimizacin de la separacin.

BUENA ESTABILIDAD QUMICA Y TRMICA Mayor

durabilidad de la columna, no reaccin con los componentes de la muestra (Reversibilidad del reparto)

POCO VISCOSA Columnas mas eficientes (menor

resistencia a la transferencia del componente entre las fases)

DISPONIBLE EN ELEVADO GRADO DE PUREZA

Columnas reproductibles; ausencia de picos fantasma en los cromatogramas.
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FASES ESTACIONARIAS

FE Slidas: Adsorcin
El fenmemo fsico-qumico responsable de la interacin soluto + FE slida es la ADSORCIN

La adsorcin ocurre en la interface entre el gas de arraste y la FE slida Slidos con grandes reas superficiales (partculas finas, poros) ADSORCIN Solutos polares Slidos con alto nmero de stios activos (hidroxilos, pares de electrones...)

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FASES ESTACIONARIAS

FE Slidas
Caractersticas Generales:
- Slidos finamente granulados - Grandes reas superficiales (entre 50-100 m2/g).

Mas usados:

Polmeros Porosos

Slidos Inorganicos Principales Aplicaciones:

- Separacin de gases - Compuestos livianos - Series homlogas

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FASES ESTACIONARIAS

FE Lquidas: Absorcin
El fenmeno fsico-qumico responsable de la interacin sustrato + FE lquida es la ABSORCIN

La absorcin ocurre en el interior del film de FE lquida (fenmeno INTRAfacial)

Films espesos de FE lquida

Gran superfcie lquida expuesta al gas de arraste Interacin fuerte entre la FE lquida y el sustrato (gran solubilidad)

ABSORCIN

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FASES ESTACIONARIAS

Familias de FE Lquidas
Cuatro grandes grupos estructurales:

SILICONAS (polisiloxanos) Las FE mas empleadas en CG.

Cubren amplio rango de pola-ridades y propiedades qumicas diversas.

PARAFINAS Apolares; alta inercia qumica; practicamente

abandonadas. Principales: esqualano (C30H62), Apiezon (grasas para vaco).

POLISTERES steres de dialcoholes con di-cidos.

Polares; altamente sensibles a humedad y oxidacin; uso en disminucin. Principales: DEGS, DEGA, EGS.

POLIGLICOLES Muy polares; sensibles a humedad y

oxidacin; an muy importantes. Principal: Polietilenglicol (nombres comerciales: Carbowax, DB-Wax, Supelcowax, HP-Wax, 15 etc.)

Columnas Columnas empacadas

Son de acero inoxidable o vidrio, tienen un dimetro de 3 a 6 mm y una longitud de 1 a 5 m. Se rellenan con la fase estacionaria slida o un soporte inerte recubierto con la fase estacionaria

Columnas tubulares abiertas o capilares

Son de slice fundida, son mucho ms finas y mas largas que las empacadas. Tienen mayor resolucin y sensibilidad. Tienen menor tiempo de anlisis y se maneja menor cantidad de muestra
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Columnas: Definiciones Bsicas

soporte slido fase lquida (film 0.2 - 5 m)

tubo de slica fundida (columna)

dimetro externo 0.3 cm ( columna empacada )

dimetro externo ( columna capilar

0.10 - 0.54 mm o WCOT)

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Columnas: Definiciones Bsicas

EMPAQUETADA = 3 a 6 mm L = 0,5 m a 5 m
Rellena con slido pulverizado (FE slida o FE lquida depositada sobre las partculas de relleno)

CAPILAR = 0,1 a 0,5 mm L = 5 m a 100 m

Paredes internas recubiertas con un film fino (fraccin de m) de 18 FE lquida o slida

COLUMNAS EMPAQUETADAS
FE Lquidas: Soporte
La FE lquida debe ser dispuesta sobre un SOPORTE slido
rea superficial entre 0,5 y 10 m2.g-1 microporos regulares (~ 1 m) NO interaccion con la muestra buena resistencia mecanica

Uso casi universal: TIERRA DIATOMEA

Esqueletos fsiles (SiO2 + xidos metlicos) de algas microscpicas

secado calcinado fusin con soda lavado con cido silanizado

Chromosorb Anachrom Supelcoport ...

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Gas de Arraste (Portador)

Fase Mvil en CG: NO interaccin con la muestra solo flujo constante a travs de la columna. Usualmente referido como: GAS DE ARRASTE O GAS PORTADOR

Requisitos:
INERTE: No debe reaccionar con la muestra, fase estacionria, solvente o superfcies del instrumento. Mnima difusin gaseosa. PURO: Debe estar libre de impurezas que puedan degradar la fase estacionaria.
Impurezas tpicas en gases y sus efectos: H2O, O2, hidrocarburos
La eleccin de la fase mvil influye en el funcionamiento de la columna y el detector. Los gases ms utilizados son: H2, He y N2. Los tres producen una A.E.P.T. = 0.3, pero con gastos distintos, mientras que el N2 10 cm/s, el H2 y el He pueden utilizarse a un gasto mayor.
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Inyeccin de la muestra

La muestra se inyecta con un jeringa a travs de un septo de goma y se vaporiza. Generalmente 0.1 a 10 L. Controlar la temperatura del horno de inyeccin. Para columnas tubulares se tienen que manejar con puertos de inyeccin ms elaborados pues no pueden manejarse muestras tan grande.

La inyeccin dividida: Slo el 0.1 a 10 % del volumen de 0.1 a 2 L de muestra inyectada llega a la columna; el resto se elimina.
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Inyector on-column Convencional

1 2
3

1 - Septum (silicona) 2 - Alimentacin de gas portador 3 - Bloque metlico con calentamiento 4 - Punta de columna cromatogrfica

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Horno de la Columna
Caractersticas Deseables de un Horno:

AMPLIO RANGO DE TEMPERATURA DE USO

TEMPERATURA INDEPENDIENTE DE LOS DEMAS MDULOS

TEMPERATURA UNIFORME EN SU INTERIOR FCIL ACCESO A LA COLUMNA

CALENTAMIENTO Y ENFRIAMIENTO RPIDO

TEMPERATURA ESTABLE Y REPRODUCTIBLE

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Programacin Lineal de Temperatura

La temperatura del horno puede ser variada linealmente durante la separacin:
Se consigue buena separacin de los componentes de la muestra en menor tiempo
Parmetros de una programacin de temperatura:
TEMPERATU RA

TINI Temperatura Inicial

TFIN Temperatura Final tINI Tiempo Isotrmico Inicial tFIN Tiempo Final del Programa R Velocidad de Calentamiento

TFIN R

TINI
tINI
TIEMPO

tFIN
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DETECTORES
Un detector es un dispositivo para revelar la presencia de las sustancias eludas a la salida de la columna cromatogrfica. El detector son los "ojos" de un cromatgrafo.

Grfico Seal x Tiempo = CROMATOGRAMA Idealmente: cada sustancia separada aparece

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Detector de Conductividad Trmica

Consiste en un filamento caliente de tungsteno. La resistencia elctrica del filamento aumenta con su temperatura.

Cuando de la columna emerge un soluto, la conductividad trmica de la corriente de gas disminuye, de modo que el filamento se enfra, baja la resistencia y se observa un cambio en la seal de salida.

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Detector de Conductividad Trmica

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Detector de Conductividad Trmica

1- Responde linealmente en cuarto rdenes de magnitud de concentracin del soluto. 2- El H2 y He producen la mayor sensibilidad. Por ser los gases con mayor conductividad trmica. 3- Para aumentar la sensibilidad: a- Se eleva la corriente del filamento b- Se reduce el gasto en el detector c- Se reduce la temperatura en el cuerpo del detector
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Detector por Ionizacin de Llama

PRINCIPIO Formacin de ones cuando un compuesto es quemado en
una llama de hidrogeno y oxigeno

El efluente de la columna es mezclado con H2 y O2 y quemado. Como en una llama de H2 + O2 no existen ones, no hay conduccin de corriente electrica.

Cuando un compuesto orgnico eluye, tambien es quemado. Como en la combustin se forman iones, la llama pasa a conducir corriente electrica
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Detector de Ionizacin de Llama

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Detector de Ionizacin de Llama

1- La seal es proporcional al nmero de carbonos susceptibles Los tomos de carbono de compuestos orgnicos pueden producir radicales CH, los cuales a su vez producen iones CHO+ en la llama CH + O CHO+ + e-

Slo uno de cada 10 000 tomos produce un ion.

2- La respuesta es lineal en siete rdenes de magnitud de concentracin del soluto. 3- La seal de fondo (valor de referencia) es muy estable. 4- La sensibilidad es mas de 100 veces mayor que la del detector de conductividad trmica. Tambin es unas 2 veces mayor cuando el gas portador es N2 que cuando es He. No es sensible a CO2, H2O y NH3
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Otros detectores

Detector de captura de electrones

Detector fotomtrico de llama

Cmo los detectores no responden de la misma manera a todos los solutos, debe medirse un factor de respuesta emprico F
Concentracin del soluto rea del soluto =F Concentracin del patrn rea del patrn
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Tiempo de retencin

tiempo de retencin ajustado = tr = tr - tm retencin relativa = = tr2 / tr1

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Teora de los Platos Tericos

Aunque la cromatografa es un proceso continuo, es posible imaginar que la columna se divide en N segmentos, en cada uno de los cuales se establece un equilibrio. Si la longitud de la columna es L, la altura equivalente de plato terico es:

A.E.P.T. = L / N
No es raro que una columna cromatografica tenga varios miles de platos tericos.

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Teora de los Platos Tericos (2)

Respuesta del detector

tr
Punto de inflexin (parte ms inclinada de la curva)
1/2

W1/2 = 2.35

h W= 4

t=0 (inyeccin)

Tiempo

N=

t2r

16 t2r w2
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Mtodos Analticos Anlisis Cualitativo

Comparar el tiempo de retencin del pico del problema con el de un patrn. Se agrega al problema una muestra conocida. Si el tiempo de retencin es idntico al de un componente del problema, el rea de ese pico aumentar. Se debe identificar en dos o ms tipos de columnas.

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Mtodos Analticos Anlisis Cuantitativo

El rea de un pico es proporcional a la cantidad de ese componente.
1- Los cromatgrafos modernos tienen integradores y computadoras que calculan las reas 2- Planmetro. 3- Para un pico gaussiano, el producto de la altura por el ancho medido a la altura media es igual al 84 % del rea total 4- Puede dibujarse un tringulo con dos lados tangentes a los puntos de inflexin en cada lado del pico. El rea es 96 % del rea de un pico gaussiano.
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CROMATOGAFIA LIQUIDA DE ALTA PERFORMANCE (H.P.L.C.) Jeringa o vlvula

Gases disueltos para la muestra Precolumna Introduccin de la muestra Espacio trmico Desgasificador de solventes Abastecimiento de solvente Filtro Bomba Vlvula de seguridad y purga Descarga

Columna analtica
Medidor de presin Lectura

Amplificador Recoleccin o descarga

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