DETERMINACIN DE CARBOHIDRATOS COMO AZUCARES

TOTALES POR EL METODO DE FENOL SULFURICO

OBJETIVOS

Aplicar uno de los procedimientos estudiados en clase.

Conocer el porcentaje de azcares totales en una muestra de
miel.
Calcular la absorbancia de la muestra.

FUNDAMENTO

Los carbohidratos abarcan uno de los mayores grupos de

compuestos orgnicos encontrados en la naturaleza, y juntamente
con las protenas forman los constituyentes principales del
organismo vivo, adems de ser la mas abundante y econmica
fuente de energa para el hombre. La glucosa es el monosacrido
mas importante y constituye la unidad estructural de los
polisacridos de mayor importancia.

El mtodo de Dubois y cols. (1956) fue el utilizado para la

cuantificacin de los azcares totales:

A alcuotas de 0.4 ml de muestra se le aadieron 0.4 ml de fenol al

5% y posteriormente 2 ml de H2SO4 concentrado, agitndose la
mezcla. A los 30 minutos de acabado el proceso se midi la
absorbancia a 490 nm. La recta de calibrado se realiz con
distintas concentraciones de glucosa.

Los cidos urnicos generan una respuesta menor que la glucosa

al test del fenol-sulfrico. Por ello las fracciones enriquecidas en
cidos urnicos daban resultados minusvalorados del contenido en
azcares totales. Para solucionar este problema, especialmente
 importante en las fracciones pcticas, se realiz una curva patrn
con cido galacturnico para el test del fenol-sulfrico y los
resultados se rectificaron del siguiente modo:

Con el contenido en cidos urnicos de la muestra, obtenido por el

mtodo de Blumenkratz y Asboe-Hansen (1973), se calcul la
absorbancia a 490 nm que daran de estar solos en ella. A la
absorbancia a 490 nm de la muestra problema se le resta la que
daran sus urnicos. De este modo obtuvimos la absorbancia de
los azcares neutros, y por lo tanto su contenido. Ahora solo qued
sumar las cantidades de cidos urnicos y azcares neutros para
obtener el total de azcares presentes.

MATERIALES

Muestra de alimento(miel de abeja).

Balanza analtica.
Glucosa anhidra p.a
Agua destilada
Solucin de fenol al 5%(bi destilada).
cido sulfrico concentrado.
Espectrofotmetro.

PROCEDIMIENTO

Se sigue de acuerdo al flujo de preparacin de la muestra mostrado

mas adelante.
Tambin de acuerdo al modelo de la curva padrn que se muestra
para la elaboracin de la muestra.
CURVA PADRN: (MTODO DE FENOL SULFRICO- AZCARES
TOTALES)

A partir del padrn dc glucosa, cuya concentracin es: 0,01 %

(0,1 g/ 1000 ml) (glucosa) se prepara la curva padrn conforme
los datos indicados a bajo.
En forma semejante se hace las lecturas de las absorbancias de
la muestra problema. Para ello se toman alcuotas de 0,1; 0,2 ml
de filtrado y se completa a volumen para 1,0 mL con agua
destilada. Seguidamente se hacen las lecturas a 490 nm.

Nmer Padrn H2O Fenol H2SO Concentraci Absorvanci

o de (ml (5%) 4 n a
de glucos ) (ml) (ml) [ ]g/ml (490nm)
tubo a
1 0.1 0.9 1.0 5.0 100,2100 ?
2 0.2 0.8 1.0 5.0 200,2850 ?
3 0.3 0.7 1.0 5.0 300,4600 ?
4 0.4 0.6 1.0 5.0 400,7500 ?
5 0.5 0.5 1.0 5.0 500,85 ?
6 0.6 0.4 1.0 5.0 ? ?
7 0.7 0.3 1.0 5.0 ? ?
8 0.8 0.2 1.0 5.0 ? 0.189
9 0.9 0.1 1.0 5.0 ? 0.239
10 1.0 0.0 1.0 5.0 ? 0.270
Blanco 0.0 1.0 1.0 5.0 ? ?

Despus de agregar el Fenol, debe adicionarse el H2SO4

Esperar 30 minutos y realizar las lecturas de absorbancia
PREPARACIN DE LA MUESTRA

Pesar 5,0 gr de
muestra

Disolver 100 ml H2O

Bao Mara 5 min.

Filtracin

Completar a 100 ml

Filtrado (lquido) Residuo (descartar)

1/100 ml de
Filtrado

12.5/50 ml

Fenol sulfrico (1
ml)
RESULTADOS Y CLCULOS

Muestra de Miel

Para ello:
Se pes 5.028g, se disuelve en 100ml con H2O.
Luego llevamos a bao mara por 5 minutos.
Se filtra.
Se extrae 1ml y enrasamos a 100; de esta mezcla extraemos
25ml y nuevamente enrasamos a 100ml

Determinamos la concentracin

Entonces: 1000ml 0.1g. glucosa

0.1ml X
X = 0.1 x 0.1
1000
X = 10ug/ml

# de Muestra Muestra Agua Fenol cido

Tub Padrn de Miel Destilada (ml) Sulfrico
o (ml) (ml) (ml) (ml)
1 0.1 0.0 0.9 1.0 5.0
2 0.2 0.0 0.8 1.0 5.0
3 0.3 0.0 0.7 1.0 5.0
4 0.4 0.0 0.6 1.0 5.0
5 0.5 0.0 0.5 1.0 5.0
6 0.6 0.0 0.4 1.0 5.0
7 0.7 0.0 0.3 1.0 5.0
8 0.8 0.0 0.2 1.0 5.0
9 0.9 0.0 0.1 1.0 5.0
10 1.0 0.0 0.0 1.0 5.0
11 0.0 0.0 1.0 1.0 5.0
12 0.0 0.1 0.9 1.0 5.0
13 0.0 0.2 0.8 1.0 5.0
14 0.0 0.5 0.5 1.0 5.0
El tubo # 1 presenta un color claro amarillo.
En el resto del tubo naranja claro de mayor a menor hasta #11.
Luego medimos la absorvancia: a 490nm

Nmer Padrn H2O Fenol H2SO Concentraci Absorvanci

o de (ml (5%) 4 n a
de glucos ) (ml) (ml) [ ]ug/ml (490nm)
tubo a
1 0.1 0.9 1.0 5.0 10 0.110
2 0.2 0.8 1.0 5.0 20 0.220
3 0.3 0.7 1.0 5.0 30 0.355
4 0.4 0.6 1.0 5.0 40 0.375
5 0.5 0.5 1.0 5.0 50 0.550
6 0.6 0.4 1.0 5.0 60 0.590
7 0.7 0.3 1.0 5.0 70 0.680
8 0.8 0.2 1.0 5.0 80 0.189
9 0.9 0.1 1.0 5.0 90 0.239
10 1.0 0.0 1.0 5.0 100 0.270
Blanco 0.0 1.0 1.0 5.0
Obtenemos los valores de:
A = 0.0409
B = 0.0094
R2 = 0.99
Absorvancia de la muestra: del tubo #10 = 0.55
Y = A +Bx
0.55 = 0.0409 + 0.0094x
x = 54.1606383
Para de determinar:
54.16 0.5ml
x 100ml
x = 10832.1ug = 10.8321mg
10.8321 25ml
x 100ml
x = 43.3285mg
43.3285 1ml
x 100
x = 4332.85mg = 4.33285g

Entonces:
4.33285 5.07g
x 100g
Azcares totales = 85.46%
Otra manera:
5.07 100%
4.33285 x
x = 85.46%
En 5 gramos de miel, hay 4.33285 gramos de azcares totales, lo
que representa el 85.46%.
DISCUSIN

La reaccin que se produjo en los tubos de la curva padrn

con los de la muestra fueron exotrmicas, debido al
calentamiento excesivo de estas, teniendo que esperar 10
minutos para su enfriamiento.
El fenol sulfrico deshidrata el azcar formando:

Pentosas Metil furfural

Hexosas Hidroximetil furfural

CONCLUSIONES

Hay que tener cuidado de la cantidad de muestra diluda ya

que esta depende del resultado ptimo de la prctica.
El azcar es deshidratado debido a la presencia del cido
fenol-sulfrico.
La temperatura de las soluciones influye positivamente o
negativamente, segn los otros compuestos.
En la miel se encuentra la fructuosa libre acompaada
siempre de glucosa y sacarosa

BIBLIOGRAFA

Norman Potter, Tecnologa de los alimentos

R. Matissek, F.M. Schnepel, G. Steiner, 1992

Anlisis de los Alimentos, 2da Edicin, Editorial Acribia S.A.
Zaragoza- Espaa.
 www.wikipedia.com