DETERMINACIÓN DE CARBOHIDRATOS COMO AZUCARES TOTALES POR

MÉTODO DE FENOL SULFÚRICO

I. OBJETIVOS.-

- Determinación de carbohidratos como azucares totales por

método de fenol sulfúrico.

I. FUNDAMENTO TEÓRICO.-

Los carbohidratos abarcan uno de los mayores grupos de compuestos

orgánicos encontrados en la naturaleza, y juntamente con las proteínas
forman los constituyentes principales del organismo vivo, además de ser
la mas abundante y económica fuente de energía para el hombre. La
glucosa es el monosacárido mas importante y constituye la unidad
estructural de los polisacáridos de mayor importancia.

En la mayoría de las tablas de composición de alimentos, los

carbohidratos son generalmente determinados como “Carbohidratos
Totales” y obtenidos por diferencia.

Entre, los métodos para cuantificar los carbohidratos, esta el método

FENOL SULFÚRICO. Cuando los azucares son tratados con ácido
fuertes, principalmente el ácido sulfúrico concentrado, hay formación de
hidroximetil sulfural por deshidratación que reacciona con una gran
variedad de compuestos(FENOL) dando un color anaranjado que puede
ser cuantificado colorimetricamente.

En algunas ocasiones debe hacerse una clarificación previa a fin de

retirar sustancias interferentes, resultando en una solución clara para el
análisis.

II. EQUIPOS Y MATERIALES.-

- Muestras alimenticias(miel de abeja)

- Balanza analítica
- Glucosa anhidra p. a.
- Agua destilada
- Solución de fenol al 5%(bi destilada)
- Ácido sulfúrico concentrado
- Espectrofotómetro

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II. PROCEDIMIENTOS.-

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA.- (Miel de abeja)

Pesar 5.0g. muestra

Disolver en 50ml
agua

Baño maria x 5 min.

Filtración

Completar a 100ml
en una fiola

Filtrado(liquido) Residuo(descartar)

5/100ml de filtrado

10/100ml

Fenol
sulfúrico(0.2ml)

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CURVA PADRÓN(Método del Fenol Sulfúrico – Azucares Totales).-

A partir del padrón de glucosa, cuya concentración es

0.01%(0.1g/1000ml)(glucosa) se prepara la curva padrón conforme a
datos indicados abajo.

En forma semejante se hace las lecturas de las absorvancias de la

muestra problema, para ello se toman alícuotas de 0.1, 0.2ml de filtrado
y se completa a volumen para 1.0ml con agua destilada. Seguidamente
se hacen las lecturas a 490 nm.

Numero Padrón de H2O(ml) Fenol H2SO4(ml) Concent. Asbs.

de glucosa(ml 5%(ml) (ug/ml) (490
tubos ) nm)
1 0.1 0.9 1.0 5.0
2 0.2 0.8 1.0 5.0
3 0.3 0.7 1.0 5.0
4 0.4 0.6 1.0 5.0
5 0.5 0.5 1.0 5.0
6 0.6 0.4 1.0 5.0
7 0.7 0.3 1.0 5.0
8 0.8 0.2 1.0 5.0
9 0.9 0.1 1.0 5.0
10 1.0 - 1.0 5.0
Blanco - 1.0 1.0 5.0

- Después de agregar el fenol, debe adicionarse el H2SO4.

- Esperar 30 minutos y realizar las lecturas de absorvancia.

- Realizar los mismos pasos de la curva padrón(tabla) con la

muestra a analizar en este caso miel de abeja.

- Realizar los cálculos de acuerdo a las indicaciones dadas en

clases de teorías, expresar los resultados en % de azucares
totales.

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III. CÁLCULOS Y RESULTADOS.-

RESULTADOS.-

- PREPARACIÓN DE LA MUESTRA.-

Miel de
abeja
5.0 g
Muestra disuelta
con 5ml de agua,
en baño Maria

Realizar diluciones, de
5/100ml y 25/100ml en una
fiola.
Obteniendo diluciones de:
 5g/100ml = 5%
 5ml/100ml = 5%
 10m/100ml = 10%

CÁLCULOS.-

- Para la determinación de la concentración de la muestra:

0.1g 1000ml
x 0.1ml

x = 0.00001g

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 x = 0.1mg
x = 10ug

- Análogamente aplicamos el mismo criterio a determinar las otras

concentraciones, como vemos en las tablas:

- Aplicando regresión lineal para obtener los datos de A y B,

ingresamos los datos de concentración y absorvancia de los
rangos de 0.2 – 0.8 nm. Obteniendo:

A = - 0.05028
B = 0.011056
r = 0.991753

Y = A + BX

- Realizando los calculos para:

AZUCARES TOTALES.

 Para muestra 1:

0.3941 = - 0.05028 + 0.011056 X

X = 40.4214

40.4214ug 0.2ml
X1 100ml

X1 = 20210.7ug
X1 = 20.2107mg

202.107mg 10ml
X2 100ml
X2 = 202.107mg
X2 = 0.202g

0.202107g 5ml
X3 100ml

X3 = 4.04g

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 NOTA: A este dato es para una muestra de 5g, a una
concentración del 20% aprox., lo cual dice, que hay 4%
aproximadamene de azucares totales por 100ml de
solucion.

 Para muestra 2:

0.6130 = - 0.05028 + 0.011056 X

X = 59.9927

59.9927ug 0.2ml
X1 100ml
X1 = 29996.35ug
X1 = 29.99635mg

29.99635mg 10ml
X2 100ml
X2 = 299.9635mg
X2 = 0.29935g

0.29999635g 5ml
X3 100ml

X3 = 5.99927g

NOTA: A este dato es para una muestra de 5g, a una

concentración del 30% aprox., lo cual dice, que hay %
aproximadamene de azucares totales por 100ml de
solucion.

CURVA PADRON DE GLUCOSA.-

Numero Padrón de H2O Fenol H2SO4 Concent. Asbs.

de glucosa(ml (ml) 5%(ml) (ml) (ug/ml) (490
tubos ) nm)
1 0.1 0.9 1.0 5.0 10 0.0908
2 0.2 0.8 1.0 5.0 20 0.1860
3 0.3 0.7 1.0 5.0 30 0.2885
4 0.4 0.6 1.0 5.0 40 0.3932
5 0.5 0.5 1.0 5.0 50 0.5046
6 0.6 0.4 1.0 5.0 60 0.5768
7 0.7 0.3 1.0 5.0 70 0.7495
8 0.8 0.2 1.0 5.0 80 0.8259
9 0.9 0.1 1.0 5.0 90 0.8865

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 10 1.0 - 1.0 5.0 100 0.9409
Blanco - 1.0 1.0 5.0 - -

- Para el caso de la muestra con miel de abeja tenemos los

siguientes datos:

Numero Padrón de H2O Fenol H2SO4 Concent. Asbs.

de glucosa(ml (ml) 5%(ml) (ml) (ug/ml) (490
tubos ) nm)
1 0.2 0.8 1.0 5.0 20 0.3941
2 0.3 0.7 1.0 5.0 30 0.6130

CURVA PADRÓN DE LAS MUESTRAS(Ver grafico siguiente)

IV. CONCLUSIONES.-

 Los azúcares reductores están constituidos por el

conjunto de los azúcares con función cetónica o
aldehídica determinados por su acción reductora sobre
la solución cupro-alcalina. El azúcar invertido reduce el
cobre de la solución Fehling (azul) a oxido cuproso
insoluble (rojo).

V. BIBLIOGRAFÍAS.-

- http://www.uepg.br/gtm/PDF3.pdf.
- http://www.unex.es/quianaelec/jimaynar/documentos
%20QE/Resumen%20pr%E1cticas.pdf