DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES POR LA

TÉCNICA DE MILLER (DNS).

Bibián L. M. E., Rojas R. M. A.

Resumen
Los azúcares reductores poseer un grupo carbonilo libre formando un grupo hemiacetal
que le confiere la característica de poder reaccionar con otros compuestos. La
determinación de estos azúcares se realizó con el objeto de obtener una curva de calibración
aplicando la técnica de Miller o DNS (ácido dinitrosalicílico), reactivo que tiene la
capacidad de oxidar a los azúcares reductores dando resultados colorimétricos que se
pueden medir con una longitud de onda de 575nm.
Palabras clave: carbohidratos, azucares reductores. Abreviaturas empleadas: DNS, ácido
dinitrosalicílico.

Introducción
Los carbohidratos son moléculas
formadas por carbono, hidrogeno y
oxígeno. Todos los carbohidratos son
azucares pequeños, solubles en agua
(glucosa y fructosa, por ejemplo) o
bien cadenas, como el almidón y la
celulosa, que se elaboran enlazando
subunidades de azúcar. [ CITATION
Aud03 \l 3082 ]
En la naturaleza, los carbohidratos se
presentan como monosacáridos
(azucares simples), oligosacáridos
(contienen de dos a diez unidades
monosacáridas) y polisacáridos
(glúcidos poliméricos más grandes).
Los monosacáridos se clasifican en
aldosas si tienen grupo aldehído y
cetosas si tienen un grupo cetona.
Todos los monosacáridos, aldosas o
cetosas y la mayoría de los
disacáridos son azucares reductores
(excepto la sacarosa) porque uno de
sus dos carbonos anoméricos no está
formando enlace glucosídico.
[ CITATION Bio08 \l 3082 ]
Las pruebas de Fehling y de Benedict,
por ejemplo, se basan en la capacidad
de los azucares reductores de reducir
los iones cúpricos (Cu2+) y aportan un
ensayo sencillo para reconocer
azucares que pueden existir como
aldehído o cetona libre. Los azucares
que reaccionan se llaman azucares
reductores, que pueden unirse de
forma inespecífica a otras moléculas;
los que no lo hacen, azucares no
reductores. [ CITATION Arm82 \l 3082 ]
El método DNS es una técnica
colorimétrica que emplea 3,5-ácido
dinitrosalicílico para la hidrólisis de
polisacáridos presentes en una
muestra, seguido de la determinación
espectrofotométrica a 540nm de los
azúcares reductores. Esta técnica sirve
para cuantificar los azucares
reductores producidos durante una
fermentación o para cuantificar los
productos de una reacción enzimática.
Por lo tanto, se aplicará esta técnica
para la construcción de una curva
patrón de glucosa que será una
referencia para próximos
experimentos.
Método
Reactivo DNS
Se disolvieron 2.5g de DNS, 2.5g de
NaOH, 0.125g de Na2SO4 y 0.5g de
C6H6O en 200mL de agua destilada.
Se aforó a 250mL con agua destilada,
y la solución se en un frasco ámbar
previamente etiquetado.

Solución patrón de glucosa

Se preparó una solución de glucosa
con una concentración de 1.0g/L, para
lo cual se disolvió 0.1g de glucosa en
90mL de agua destilada, y se aforó a
100mL.

Curva patrón
A partir de la solución patrón de
glucosa y agua destilada se prepararon
10 tubos con diferentes
concentraciones como lo indica la
Tabla 1. El trabajo se hizo por
triplicado. A cada uno de los tubos, se
Tabla 1. Se muestra el volumen de
le adicionó 1mL del reactivo DNS y
solución patrón y agua destilada añadidos
se agitó con el Vórtex. Se pusieron en
a cada tubo, así como la concentración
un baño María durante 15 minutos, se
final de cada uno.
dejaron enfriar y se agregaron 8mL de
agua destilada. Utilizando como
blanco una solución de agua con el
reactivo DNS, se determinó la
absorbancia de cada tubo a 575nm.
Resultados
En la Tabla 2 se reportan las absorbancias obtenidas de las tres muestras. Utilizando las
formulas Tabla 3 se obtuvieron la media (Y°) de cada duplicado y la desviación estándar.
Se muestra también la curva patrón obtenida y ajustada con regresión lineal, así como la
ecuación de la curva.

Tabla 2. Se muestran las absorbancias medidas a una longitud de onda de 575nm, así
como el promedio de las tres.

Tabla 3. Fórmulas
Donde:
Media y 1 + y2 + y N N= número de
( y °) N valores
y= Abs 575nm
Donde:
Desviació N N= número de
1 2
n σ =√ ∑ ( y i− y ° ) valores
Estándar N i=1 y i= Abs 575nm
y °= media

Tabla 3. Se enlistan las

fórmulas utilizadas para el cálculo del promedio y la desviación estándar.
 Curva Partrón de Glucosa
0.5
0.45
0.4 f(x) = 0 x − 0.01
R² = 0.99
0.35
0.3
0.25
Absorbancia (575 nm)
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 200 400 600 800 1000 1200

Concentración (mg/L)

Gráfico 1. Se muestra la curva patrón obtenida de glucosa. Se grafica la concentración

en miligramos por litro contra el promedio obtenido de las absorbancias de las tres
muestras. Se observa la ecuación dada por la regresión lineal.