MANEJO Y USO DEL FOTOCOLORMETRO

DE MERCK SQ 118

Sin laboratorios los hombres de ciencia son

como soldados sin armas.
(Louis Pasteur)

NDICE
I.
II.
III.

INTRODUCCIN..4
OBJETIVOS..4
MARCO TERICO.................5
COLORIMETRA...5
COLORMETRO....5
A. FUNCIONES DEL COLORMETRO..6
B. APLICACIONES DEL COLORMETRO....6
C. PRINCIPIO DE FUNCIONAMIENTO.6

FOTOCOLORIMETRA....7
1. PRINCIPIO DE FOTOCOLORIMETRIA7
2. TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA...7
3. LEYES DE LA ABSORCIN...8
3.1. LEY DE LAMBERT8
3.2. LEY DE BEER...9
3.3. LEY
DE
BEER

LAMBERT....10
4. MTODOS FOTOMTRICOS
10
4.1. ESPECTROFOTOMETRA DE EMISIN10
4.2. FOTOMETRA DE LLAMA..11
4.3. ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN.11
4.4. MTODOS ESPECTROSCPICOS12

ESPECTROFOTMETRO.13
A. FUNCIONAMIENTO13
B. PARTES BSICAS..14
C. COMPONENTES DE UN ESPECTRMETRO..14

FOTOCOLORMETRO DE MERK SQ 118..19

IV.
V.
VI.
VII.
VIII.
IX.
X.

EQUIPOS, MATERIALES Y RACTIVOS..20

PROCEDIMIENTO...23
RESULTADO....24
CONCLUSIONES.....27
RECOMENDACIONES...27
CUESTIONARIO..28
BIBLIOGRAFA.32
2

I. INTRODUCCIN
La colorimetra es una de las tcnicas empleadas con mayor asiduidad
en los laboratorios de Bioqumica. Esta tcnica suministra informacin
cualitativa y cuantitativa sobre sustancias en disolucin. El colormetro es un
instrumento diseado para dirigir un haz de luz paralela monocromtica a
travs de una muestra lquida y medir la intensidad del haz luminoso
emergente.

La fraccin de luz incidente absorbida por una solucin a una longitud de

onda est relacionada con el paso ptico y con la concentracin de la especie
absorbente. Estas dos relaciones estn combinadas en la ley de LambertBeer: Log Io / I = c l

Los espectros de absorcin, grficos que relacionan absorbancia con

longitudes de onda, son frecuentemente utilizados en Bioqumica para la
caracterizacin e identificacin de biomolculas.

En esta prctica se realizar un sencillo anlisis espectrofotomtrico sobre

la concentracin de metales pesados en determinadas bebidas, que pueden
causar ciertas dificultades en la salud humana.

II. OBJETIVOS
Analizar los principios de la tcnica del fotocolormetro.
La calibracin y el manejo adecuado del fotocolormetro.
Determinar la cantidad de metales pesados en bebidas como gaseosas,
cerveza y vino, para luego hacer una comparacin entre las bebidas de
supermercado y las bebidas de dudosa procedencia.

III.

MARCO TERICO

COLORIMETRA
Se conoce como colorimetra a la ciencia encargada de medir los colores para
obtener la cuantificacin de los mismos, favoreciendo as su estandarizacin.
Para llevar a cabo las mediciones colorimtricas es necesario tomar como
punto de comparacin la llamada curva espectral codificada que permite
asignar valores numricos a la respuesta de estmulos de colores. Una vez
asignados los valores se hace una suma de los mismos y se obtiene la
cuantificacin del o los colores.
El fundamento de la colorimetra se basa en que si se pasa luz blanca a travs
de una solucin coloreada, algunas longitudes de onda se absorben con
preferencia sobre las otras.
A lo largo del tiempo las pruebas de colorimetra se han apoyado de los
avances tecnolgicos. Uno de los instrumentos que ayudan a llevar a cabo una
medicin colorimtrica ms precisa es el colormetro.

COLORMETRO
Un colormetro es una herramienta que identifica el color y el matiz para una
medida ms objetiva del color.
El colormetro es un instrumento que permite medir la absorbancia de una
solucin en una especfica frecuencia de luz a ser determinada. Es por eso,
que hacen posible descubrir la concentracin de un soluto conocido que sea
proporcional a la absorbancia.
En sentido literal, colormetro significa medidor de color. Siguiendo este
significado, cualquier instrumento que cuente con la capacidad de identificar un
color para facilitar su medida es un colormetro.
En trminos generales, el colormetro es el dispositivo que permite la
cuantificacin de un color y permite su comparacin con otro. Una vez hecha la
cuantificacin, el valor numrico asignado al color estudiado permitir su
adecuada clasificacin en la escala de colores.

A. FUNCIONES
COLORMETRO

DEL

El colormetro tiene tres

funciones especficas, que son:
1.
Determinar el
valor numrico de un color.
2.
Llevar a cabo
una comparacin entre
colores.
3.
Establecer la intensidad y los matices del color estudiado.

B. APLICACIONES DEL COLORMETRO

Entre las principales aplicaciones del colormetro se encuentran:

Clasificacin de colores.
Pruebas de absorbancia.
Correccin de errores en monitores y pantallas.
Calibracin de colores de impresoras.
Caracterizacin de polmeros en base a su color.
Anlisis de concentraciones qumicas.

C. PRINCIPIO DE FUNCIONAMIENTO
Los colormetros se basan en el principio de que la absorbancia de una
sustancia es proporcional a su concentracin, y es por eso que las
sustancias ms concentradas muestran una lectura ms elevada de
absorbancia. Se usa un filtro en el colormetro para elegir el color de luz
que ms absorber el soluto, para maximizar la precisin de la lectura.
Los sensores miden la cantidad de luz que atraves la solucin,
comparando la cantidad entrante y la lectura de la cantidad absorbida.
Se realiza una serie de soluciones de concentraciones conocidas de la
sustancia qumica en estudio y se mide la absorbancia para cada
concentracin, as se obtiene una grfica de absorbancia respecto a
concentracin. Por extrapolacin de la absorbancia en la grfica se
puede encontrar el valor de la concentracin desconocida de la muestra.

FOTOCOLORIMETRA
1. PRINCIPIO DE FOTOCOLORIMETRIA

Todas las sustancias pueden absorber energa radiante, aun

el vidrio que parece ser completamente transparente absorbe radiacin
de longitudes de ondas que no pertenecen al espectro visible;
el agua absorbe fuertemente en la regin del infrarrojo.
La absorcin de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas
depende de la estructura de las molculas, y es caracterstica para cada
sustancia qumica.
Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es absorbida;
la energa radiante no puede producir ningn efecto sin ser absorbida.
El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas
longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan
pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbidas.
La espectrofotometra ultravioleta-visible usa haces de radiacin del
espectro electromagntico, en el rango UV de 80 a 400 nm,
principalmente de 200 a 400 nm y en el de la luz visible de 400 a 700
nm, por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la
regin
ultravioleta
y
visible
del
espectro.
Al campo de luz uv de 200 a 400 nm se le conoce tambin como rango
de uv cercano, la espectrofotometra visible solamente usa el rango del
campo electromagntico de la luz visible, de 400 a 700 nm.
Adems, no est de ms mencionar el hecho de que la absorcin y
trasmitancia de luz depende tanto de la cantidad de la concentracin
como de la distancia recorrida.
2. TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA
Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda de
intensidad Io incide perpendicularmente sobre una disolucin de un
compuesto qumico que absorbe luz o cromforo, el compuesto
6

absorber una parte de la radiacin incidente (Ia) y dejar pasar el resto

(It), de forma que se cumple: Io = Ia + It
La transmitancia (T) de una sustancia en solucin es la relacin entre la
cantidad de luz transmitida que llega al detector una vez que ha
atravesado la muestra, It, y la cantidad de luz que incidi sobre ella, Io, y
se representa normalmente en tanto por ciento: % T = It/Io x 100
La transmitancia nos da una medida fsica de la relacin de intensidad
incidente y transmitida al pasar por la muestra. La relacin entre %T y la
concentracin no es lineal, pero asume una relacin logartmica inversa.

La absorbancia (A) es un concepto ms relacionado con la muestra

puesto que nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma, y se
define como el logaritmo de 1/T, en consecuencia:
A = log 1/T = -log T = -log It/ Io.
Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales (Io = I t), la
transmitancia es del 100% e indica que la muestra no absorbe a una
determinada longitud de onda, y entonces A vale log 1 = 0.
La cantidad de luz absorbida depender de la distancia que atraviesa la
luz a travs de la solucin del cromforo y de la concentracin de ste.

3. LEYES DE LA ABSORCIN
Cuando un haz pasa a travs de una solucin que absorbe radiacin,
parte del haz es absorbido. La cantidad de luz absorbida se encuentra
bien definida y se ajusta a ciertas leyes fsicas.

3.1.

LEY DE LAMBERT
La ecuacin de la absorbancia constituye la base de la ley de
Lambert (tambin conocida como ley de Bouguer). Para una
solucin de concentracin unidad, la relacin puede ponerse en la
forma: A= ab, donde a es la absortividad del lquido y b la
longitud del recorrido ptico.

La relacin mutua de estas medidas viene dada por:

A= ab = - log(T) = - log (I1/I) = log(I/I1)

Luego Log(I/I1) = ab, entonces I/I1 = (10)ab y I1 = I(10)-ab o bien

I = I1(10)ab
Cada una de estas relaciones es una expresin matemtica de la
ley de Lambert e indican que la cantidad de luz absorbida
depende de la absortividad del lquido y de la longitud del
trayecto ptico a travs de la solucin, en el supuesto de que la
longitud de onda y la muestra permanezcan constantes,
mostrando que existe una relacin logartmica entre la
transmitancia y el recorrido ptico a travs de la muestra. Por tal
razn si y a permanecen constantes A es directamente
proporcional a b (A a b) para resolver la proporcionalidad se
introduce una constante a que recibe el nombre de absortividad
especfica y por lo tanto A= ab.

3.2.

LEY DE BEER
Hay otra relacin similar entre la transmitancia y la concentracin
de la solucin.
Para un trayecto ptico dado, la absorcin vendr dada por: A =
ac, siendo c la concentracin del material absorbente, A la
absorbancia y a la absortividad de la muestra. Al igual que antes
las relaciones son:
A = ac = -log(T) = -log(I1/I) = log(I/I1), adems,
log(I/I1) = ac, entonces, (I/I1) = 10ac , I = I110ac o bien I1 = I10-ac
Estas expresiones, son todas ellas, formas de la Ley de Beer y
muestran la relacin entre el grado de absorcin y la
concentracin para una longitud de onda y espesor dados. Por tal
razn si y a permanecen constantes A es directamente
proporcional a C (A a C), para resolver la proporcionalidad se
8

introduce una constante a que recibe el nombre de absortividad

especfica y por lo tanto A= aC.

3.3.

LEY DE BEER - LAMBERT

La combinacin de las leyes de Beer y Bouguer da lugar a la ley
de Beer-Bouguer, ms conocida como la ley de Beer- Lambert
simplemente Ley de Beer.

La combinacin de las dos relaciones permite escribir que:

A = abc = - logT = - log (I 1/I) = log(I/I1) = log (1/T) = abc

log(I/I1) = abc
Entonces (I/I1) = 10abc o bien I1 = I10-abc

luego

I = I110abc

En conclusin en la ley de Beer A = abc o A = bc

Estas expresiones muestran que existe una relacin lineal entre
la absorbancia A, la concentracin, C, y el espesor de la
trayectoria ptica de una solucin dada, (A C), para resolver la
proporcionalidad se introduce una constante que es igual ab
entonces A = abc, supuestas constantes la longitud del trayecto
ptico y la longitud de onda.

4. MTODOS FOTOMTRICOS

Los mtodos espectroscopios de anlisis se basan en la medida de

la radiacin electromagntica emitida o absorbida por la materia.

4.1.

ESPECTROFOTOMETRA DE EMISIN:
La espectrometra de emisin es una tcnica analtica que hace
uso de la radiacin electromagntica emitida por una muestra
material (slido, lquido o gas) previamente excitada mediante
energa elctrica.
La cantidad de energa requerida para excitar la mayora de las
muestras es muy grande, por lo que se produce la disociacin de
cualquier compuesto qumico en sus elementos. Esto hace que el
9

espectro de emisin sea caracterstico de los tomos presentes

en la muestra. Estar, pues, constituido por un conjunto de lneas
finas y bien definidas, a diferencia de los espectros moleculares
que, como ya se indic, estn constituidos por bandas ms o
menos anchas.

La espectrometra de emisin puede utilizarse con fines analticos

cualitativos y cuantitativos. La variable cualitativa es la longitud de
onda de las lneas emitidas, que permite la identificacin de
elementos, mientras que la variable cuantitativa es la intensidad
de las lneas espectrales.

4.2.

FOTOMETRA DE LLAMA
Es una tcnica de emisin que utiliza una llama como fuente de
excitacin y un fotodetector electrnico como dispositivo de
medida. Se trata principalmente de un mtodo de anlisis
cuantitativo y es uno de los mtodos ms sencillos y precisos para
el anlisis de metales alcalinos, la mayor parte de los metales
alcalinotrreos y algn otro elemento metlico. Tambin es posible
realizar un anlisis cualitativo examinando todas las longitudes de
onda del espectro de emisin (espectrofotometra de llama o
fotometra de llama). Su aplicacin es limitada si se compara con
la espectroscopia de emisin ordinaria, ya que la energa de la
llama permite excitar nicamente de 30 a 50 elementos, siendo
este nmero funcin del tipo de llama utilizada. La muestra debe
estar disuelta.

4.3.

ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN
Es una tcnica muy relacionada con la fotometra de llama ya que
se utiliza una llama para atomizar la disolucin de la muestra de
modo que los elementos a analizar se encuentran en forma de
vapor de tomos. Ahora bien, en absorcin atmica existe una
fuente independiente de luz monocromtica, especfica para cada
elemento a analizar y que se hace pasar a travs del vapor de
tomos, midindose posteriormente la radiacin absorbida.

10

En la siguiente figura se compara un esquema de

espectrofotmetro de emisin de llama (a) y l de absorcin
atmica (b).

4.4.

MTODOS ESPECTROSCPICOS
Se consideran como una de las mejores y ms
utilizadas tcnicas instrumentales a disposicin del cientfico, para
la adquisicin de informacin tanto cuantitativa como cualitativa.
Los mtodos espectroscpicos se clasifican segn la regin del
espectro electromagntico que est implicada; siendo las ms
11

importantes las regiones de rayos X,

infrarroja, microondas y radiofrecuencia.

ultravioleta,

visible,

ESPECTROFOTMETRO
El espectrofotmetro es
un
instrumento
que
permite
comparar
la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad
desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma
sustancia.
Es un instrumento usado en el anlisis qumico que sirve para medir, en funcin
de la longitud de onda, la relacin entre valores de una misma magnitud
fotomtrica relativos a dos haces de radiaciones y la concentracin o
reacciones qumicas que se miden en una muestra. Tambin es utilizado en los
laboratorios de qumica para la cuantificacin de sustancias y microorganismos.
Hay varios tipos de espectrofotmetros, puede ser de absorcin atmica o
espectrofotmetro de masa y visuales.
Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz
monocromtica a travs de una muestra y medir la cantidad de luz que es
absorbida por dicha muestra. Esto le permite al operador realizar dos
funciones:

Dar informacin sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra.

Indicar indirectamente qu cantidad de la sustancia que nos
interesa est presente en la muestra.
A. FUNCIONAMIENTO
El funcionamiento del espectrmetro est basado en la descomposicin
de la luz en las diferentes longitudes de onda que la componen a partir
del fenmeno de refraccin que sucede en un prisma o a partir del
fenmeno de difraccin de la luz que se produce en una red difraccin.
Adems este instrumento mide los ngulos en los cuales se presentan
los mximos del patrn de difraccin. Estos ngulos son diferentes y
12

caracterstica de la naturaleza de la fuente que emite la luz. Las

componentes bsicas de un espectrmetro es un conjunto de lentes, un
colimador, una rejilla de difraccin y un ocular, anteriormente detectar el
espectro se haca a simple vista, pero hoy en da se pueden usar
sensores de luz que marcan los mximos y mnimos o tambin se
pueden fotografiar los espectros.

B. PARTES BSICAS
Este se compone de cuatro componentes bsicos: un foco productor del
haz de radiacin o de partculas que se va a investigar; un analizador
que separa el haz de acuerdo con las propiedades que se desea
analizar; un detector que mide su cantidad y un elemento que registra
los resultados en forma de grfica, diagrama o fotografa.

C. COMPONENTES DE UN ESPECTRMETRO

1. FUENTE DE LUZ
La fuente de luz que ilumina la muestra debe cumplir con las
siguientes condiciones: estabilidad, direccionabilidad, distribucin de
energa espectral continua y larga vida. Las fuentes empleadas son:
lmpara de wolframio (tambin llamado tungsteno), lmpara de
arco de xenn y lmpara de deuterio que es utilizada en los
laboratorios atmicos.
2. MONOCROMADOR

13

El Monocromador asla las radiaciones de longitud de onda deseada

que inciden o se reflejan desde el conjunto, se usa para obtener luz
monocromtica.
Est constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el
elemento de dispersin. El colimador se ubica entre la rendija de
entrada y salida. Es un lente que lleva el haz de luz que entra con
una determinada longitud de onda hacia un prisma el cual separa
todas las longitudes de onda de ese haz y la longitud deseada se
dirige hacia otra lente que direcciona ese haz hacia la rendija de
salida.
3. COMPARTIMIENTO DE MUESTRA
Es donde tiene lugar la interaccin, R.E.M con la materia (debe
producirse donde no haya absorcin ni dispersin de las longitudes
de onda). Es importante destacar, que durante este proceso, se
aplica la ley de Lambert-Beer en su mxima expresin, en base a sus
leyes de absorcin, en lo que concierne al paso de la molcula
de fundamental-excitado.

4. REGISTRADOR
Convierte
el fenmeno
en nmeros proporcionales al analito en cuestin.

fsico,

5. FOTODETECTORES
En los instrumentos modernos se encuentra una serie de 16 fotos
detectores para percibir la seal en forma simultnea en 16
longitudes de onda, cubriendo el espectro visible. Esto reduce el
tiempo de medida, y minimiza las partes mviles del equipo.

14

6. FUENTES DE ENEGIA RADIANTE (FER)

La fuente de energa debe producir un haz de radiacin, cuya
potencia sea suficiente para facilitar la deteccin y mediacin.

6.1. LMPARAS DE FILAMENTO DE TUNGSTENO

Se utilizan para longitudes de onda del espectro visible y el
ultravioleta prximo. Son fuentes de un espectro continuo
de energa radiante entre 320-2500 nm.
6.2.

LMPARAS DE HIDRGENO Y DEUTERIO

Producen un espectro continuo en la regin ultravioleta
entre 175-400 nm.

6.3.

LMPARAS DE VAPORES DE MERCURIO

Emiten un espectro discontinuo o espectro de lneas que se
utilizan para calibracin de longitudes de onda, se emplean
solo para espectrofotmetros y cromatografa HPLC.
15

6.4.

LMPARA INCANDESCENTE DE NERNST

Constituido por filamentos que estn hechos de xidos
metlicos. Operan en un rango de 2 a 15nm.

PRECAUCIONES!
Las subidas y bajadas bruscas de tensin producen
sufrimiento de la lmpara y cambios en las lecturas de la
Absorbancia.
La lmpara tiene una vitalidad limitada y se debe vigilar para
que funcione bien el aparato

7. CELDAS
El recipiente donde se pone la muestra tiene una estructura particular
pues cuenta con dos lados opacos y dos lados transparentes, los
lados opacos sirven para que se pueda coger. Los lados
transparentes son atravesados por la luz monocromtica que al
atravesar el recipiente ir al detector. Es muy importante no ensuciar
los lados transparentes pues si se ensucia el resultado que nos d el
fotocolormetro ser afectado por las huellas digitales que dejemos
en
el
recipiente.
Est hecho de cuarzo y podemos encontrarlo en diferentes tamaos,
el alto se mantiene lo que vara es el largo pues hay de diferentes
capacidades: 1mL, 2mL y 5mL.

8. DETECTOR
El detector es una parte fundamental del fotocolormetro pues esta es
la que registrar la cantidad de luz monocromtica que no es
absorbida al traspasar la muestra, esta es la parte fundamental de
nuestra medicin ya que en base a esto ser que podremos saber
cunta concentracin de sustancia tenemos en nuestra muestra.
Las caractersticas que son relevantes en un el detector es que
tenga: sensibilidad elevada al tipo de rayo con longitud de onda
especfico que se le es disparado, tiempo de respuesta rpida, buena
disponibilidad para la ampliacin.

16

PARTES DEL DETECTOR

A. FOTOTUBO
Los fototubos son un tipo de transductores sensibles a la luz, la
cual se transforma en corriente elctrica. Estn formados por un
tubo que se encuentra al vaco o relleno con algn gas inerte
(argn o similar). Actualmente han sido sustituidos en gran
medida por los fotoresistores y los fotodiodos.
Este dispositivo funciona segn el efecto fotoelctrico: los fotones
inciden sobre un ctodo, dispersando electrones que son atrados
por el nodo. La corriente que se genere en el tubo depende de la
frecuencia (o longitud de onda) y de la intensidad de la luz
incidente. El espectro de radiacin al que responde el ctodo
viene
determinado
por
el
material
de
ste.
El ctodo es un semiconductor que contiene uno o varios de estos
metales alcalinos: sodio, potasio, rubidio o cesio, combinados
qumicamente con bismuto, antimonio u xido de plata. La
superficie del ctodo contiene un exceso crtico del metal alcalino
que disminuye la afinidad de aquella hacia los electrones,
favoreciendo as la emisin fotoelctrica.
B. TERMOPAR
Un termopar es un dispositivo para la medicin de temperatura,
basado en efectos termoelctricos. Es un circuito formado por dos
conductores de metales diferentes o aleaciones de metales diferentes, unidas en sus extremas y entre cuyas uniones existe una
diferencia de temperatura, que origina una fuerza electromotriz
efecto Seebeck.
La fuerza electromotriz generada por el termopar est en funcin
de la diferencia de temperatura entre la unin fra y caliente, pero
ms especficamente, sta es generada como un resultado de los
gradientes de temperatura las cuales existen a lo largo de la
longitud de los conductores.
En nuestro caso este parte del DETECTOR nos ayudara a
identificar la luz infrarroja basndonos en el calentamiento de una
de las uniones. Claro est que usaramos para esto la radiacin
infrarroja.

17

C. AMPLIFICADOR Y LECTURA
El amplificador es una parte culminante de nuestro fotocolormetro
y nos sirve para amplificar la seal dada por el detector debido a
que esta ltima es muy pequea. Solo de esta manera,
amplificando la seal elctrica, ser que podr ser procesada y
para poder interpretarse en un lenguaje numrico.
Un amplificador puede modificar la seal transformndola de
continua en alterna o viceversa; filtrarla de componentes no
deseados. El procesador de seal tambin puede realizar
operaciones matemticas como diferenciacin, integracin o
conservacin logartmica, con el fin de poder mostrarnos los datos
pertinentes de la muestra dada.

FOTOCOLORIMETRO DE MERK SQ 118

Este equipo es un fotmetro, que cuantifica las muestras, por radiacin emitida
por la lmpara halogenada; que emite radiacin de rango visible.
La cuantificacin la realiza en miligramos/L, como requisito para llevar acabo la
cuantificacin la muestra debe ser contener un pigmento; de ser transparente
se le puede adherir un colorante (lugol) si se desea analizar la muestra
transparente sin modificar el color se necesita un fotmetro que absorbe UV
(espectrmetro).

A. CARACTERISTICAS

Tiene una lmpara de luz halogenada.

Monocromador.
Detector fotdico de silicio.
Lecturas desde 340 nm hasta 820 nm.
Mide concentracin, absorbancia y trasmitancia.
Realiza 253 mtodos diferentes, de los cuales 234 mtodos para
medir concentraciones de sustancias especficas, 12 mtodos para
medir absorbancia y 12 mtodos para medir trasmitancia a
diferentes longitudes de onda.
Rango de temperatura de lectura ptima es de 10 a 50 C
18

B. FUNCIONES

1. Impresin del resultado

2. Indicacin del resultado
3. Resultado al ordenador
4. Numero de orden
5. Lista de mtodos
6. Lista de parmetros
7. Lista de funciones
8. Adelantar pginas
9. Tiempo de lectura
10. Fecha
11. Hora
12. Idioma
13. Medicin automtica
14. Medicin automtica conectar
15. Conexin ordenador Bandrate 9600 ISO
16. Conexin ordenador Bito datos 8SI
17. Conexin ordenador Bito stop 1SI
18. Conexin ordenador parit SBDDSI
19. Conexin ordenador retardo 0.040 ms.
20. Test ordenador.
21. Test teclado.
22. Test lectura.
23. Test impresin.
24. Test rotor de filtro.
25. Test filtros.
26. Test fotmetro 1
27. Test fotmetro 2 umbral 1
28. Test aparato.

IV.

EQUIPOS, MATERIALES Y RACTIVOS

A. EQUIPOS

19

 Fotocolormetro de
Merck sq 118

B. MATERIALES
Cinco tubos de ensayo y
gradilla

Pipeta

20

 Pisceta

Papel toalla desechable

C. REACTIVOS

21

Gaseosa de supermercado (S)

Gaseosa de dudosa procedencia (B)

Vino tinto de supermercado (S)

V.

Vino tinto de dudosa procedencia (B)

PROCEDIMIENTO
1. MEDICION DE PARMETROS
Con ayuda de la profesora, quien previamente nos explic el uso
del fotocolormetro de Merck SQ 118 y el funcionamiento de todas
sus teclas. Anotamos en cuadros cinco mtodos diferentes con
sus diez respectivos parmetros. El resultado se muestra en
lneas ms adelante.
2. CONCENTRACION DE LAS MUESTRAS ANALIZADAS.
Con ayuda de pipeta y de la propipeta medimos en los tubos de
ensayo un volumen de 10 mililitros con las diferentes muestras
que tenemos. Percatndonos de que los tubos de ensayo se
encuentren limpios por fuera para que no impidan un correcto
resultado.

22

Llevamos
muestras

estas

al

fotocolormetro de Merck SQ 118 y aplicando los diferentes

mtodos encontramos la cantidad de metales pesados, en
miligramos, que existen por cada litro de muestras.

VI.

RESULTADO
1. Resultados de los parmetros utilizando diferentes mtodos

Arsnico
1.Nombre del mtodo
2. Numero de articulo
3. Margen de medicin
4. Unidad
5. tiempo de redaccin
6. Cubeta
7. Longitud de onda
8. Calibracin y factor
9. Evaluacin
10. Factor

Ar[164]
Tc Arsnico Ar
0,05-0,6
mg/l
15+60 min
20mm rectangular
495nm
SI
lineal
0,96

Mercurio
1.Nombre del mtodo
2. Numero de articulo
3. Margen de medicin

Mg[162]
Tc Mercurio Hg
0,025-1,0
23

4. Unidad
5. tiempo de redaccin
6. Cubeta
7. Longitud de onda
8. Calibracin con factor
9. Evaluacin
10. Factor

mg/l
5+0min
50mm
565nm
SI
lineal
0,563

Plomo
1.Nombre del mtodo
2. Numero de articulo
3. Margen de medicin
4. Unidad
5. tiempo de redaccin
6. Cubeta
7. Longitud de onda
8. Calibracin con factor
9. Evaluacin
10. Factor

Pb[114]
Tc Plomo Pb
14833
0,10-5,0
mg/l
0+0min
16mm redonda
525nm
SI
lineal
4,55

Cromo
1.Nombre del mtodo
2. Numero de articulo
3. Margen de medicin
4. Unidad
5. tiempo de redaccin
6. Cubeta
7. Longitud de onda
8. Calibracin con factor
9. Evaluacin
10. Factor

Cr[025]
Cromo Cr
14758
0,10-3,0
mg/l
5+0min
10mm rectangular
550nm
SI
lineal
1,299

Cadmio
1.Nombre del mtodo
2. Numero de articulo
3. Margen de medicin
4. Unidad
5. tiempo de redaccin
6. Cubeta
7. Longitud de onda
8. Calibracin con factor
9. Evaluacin
10. Factor

Cd[115]
Tc Cadmio Cd
14834
0,025-1,00
mg/l
5+0min
16mm redonda
525nm
SI
lineal
0,54

24

2. resultados de las concentraciones de metales pesados de las

muestras analizadas, en miligramos por mililitro.
Amonio 6

<0,25

<0,08

<0,5

<0,1

<0,02
5
<0,05

<0,1

<0,02
5
<0,25

<0,5

<0,1

<0,02
5
<0,05

<0,1

0 0

0 0

0 0,001

0 <0,5

0 <10

0 0,05

0 <0,02
5
0 0,014

0 0

S B

Pilsen
(lata)

Cianuro
110
Arsnico
164
Plomo
114
D.Q.O

<0,1

0 0,12

Guaran
(plstico)

Ura 125

<0,1

<0,1

0 0,002

<0,1

Mercurio
162
Cadmio
115
Aluminio
2
Cromo
26
Nquel
109

Inka
kola(
vidrio
S B

Guaran
(lata)

0 0,0
1
0 0,0
6
0 0,0
16
0 0,1
2
0 <1
0
0 0

0 0,0
11
0 0,0
05
0 -

0 0,0
1
0 0,0
3

25

Inka
kola(plstico)

B1
B2

Brahm
a

S
Vino tinto

Kola
inglesa

0,47

0,15

0
-

<0,025 -

0,01

0,01

0,336

<0,05

<0,1

<0,1

<0,6

<0,10

<5

<0,
6
0
0

0,005 <0,0
25
0,009 0,00
4
0,01

16

0,06

<10

<0,0
25
0,04
7
0,02

>150

<0,5

16

5,2

16

1,7

<10

>1
50
0

>1
50
0

0,0
1
0,0
03
<0,
6
0,1
2
>1
50
0,2

<0,5

<0,025 <0,025

0,4

0,317

<0,5

<0,025 <0,025

>1

<0,2

<0,10

<0,10

<0,1

>6

1,49

>6

>6

0,0
3
>6

0,0
16
0,0
13
-

>6

0,007 <0,0
25
0,009 <0,0
25
-

<0,1

0,01

<0,1

<0,0
25
<0,0
25
<0,2

<0,1

0,36

Con los resultados obtenidos se puedo comparar que existe una gran
diferencia entre los productos obtenidos en los supermercados con los
de dudosa procedencia en cuanto a metales pesados.
Siendo el DQO y el plomo los metales que ms abundan en lo productos
de dudosa procedencia.

VII.

CONCLUSIONES
Se estableci un conocimiento sobre el FOTOCOLORMETRO
MERK SQ 118, y sus diferentes 28 funciones con sus respectivos
parmetros.
Se realiz una cierta cantidad de lecturas con el fotocolormetro
en la cual llevado a una tabla; se observ la presencia de ciertas
sustancias que no garantizan la inocuidad de ciertos productos,
como en el caso de algunas gaseosas, vinos y cervezas que
tenan un gran concentrado de metales pesados que producen
diversos tipos de daos a nuestro organismo.

26

VIII.

RECOMENDACIONES
Luego de realizar la lectura de la muestra escogida se enjuaga la
cubeta con agua destilada y realizar la siguiente lectura.
En la ubicacin del espectrofotmetro, evitar lugares que estn
sometido a irradiaciones intensas de luz o calor.
Usar cubetas perfectamente limpias (sin residuos de muestras
diferentes a la que se va medir, enjuagarlas antes con agua
destilada y escurrir).
No tocar las cubetas con la mano por las paredes a travs de las
cuales pasa el rayo de luz Las celdillas, para evitar que la grasa
de las manos altere la lectura.

IX.

CUESTIONARIO

1. Defina:

ONDAS LONGITUDINALES
Es aquel fenmeno fsico-mecnico donde la direccin de
vibracin y la propagacin de una perturbacin (en un medio)
coinciden (paralelos).

CELDAS UV
Est diseado para alojar una serie de accesorios opcionales
(como por ejemplo: Esfera de Integracin, Microceldas, Sipper,
etc). Las celdas que se utilizan en el espectrofotmetro por lo
general estn hechas de Vidrio o Cuarzo, pero si la aplicacin
requiere rango Visible, y el solvente es agua, pueden utilizarse
celdas de Plstico descartable. Las dimensiones de estas celdas
varan segn la aplicacin, pero las ms comunes son las de 1
cm de paso ptico.

BANCO PTIMO

27

Es la parte del instrumento que recibe la intensidad de radiacin

monocromtica de la muestra, y la transforma a un valor de seal
elctrica. Esta seal elctrica es medida y comparada con
respecto a un valor de referencia (Blanco de control), para
presentar un valor numrico que nosotros podamos entender

TUBOS FOTO EMISORES

El tipo de Detector ms usado es el Tubo Fotomultiplicador. Este
detector utiliza el fenmeno de la Foto Emisin para generar un
pequeo flujo de corriente, el cual es amplificado y medido en
forma proporcional a la cantidad de radiacin incidente sobre el
detector. Cada fotn que cae sobre el detector incide sobre una
placa que desprende 3 o 5 electrones, los cuales chocan a su vez
sobre otras placas, generando un efecto de cascada.
Un Detector Tubo Fotomultiplicador presenta las siguientes
ventajas:

Alta Sensibilidad en todo el Rango.

Repetibilidad de la seal.
Baja Fluctuacin de la seal de Absorbancia.
Deriva mnima
Bajo Nivel de Ruido.

2. Explique los mtodos fotocolormetros ms importantes

y cules son sus aplicaciones.
Los mtodos fotocolormetros sirven para cuantificar sustancias disueltas
en lquidos o slidos mientras sean transparentes a la luz
visible, ultravioleta o infrarroja, y est basado en la medida de intensidad de
luz monocromtica, transmitida a travs de soluciones coloreadas, sean
que se trate de sustancias naturalmente coloreadas o que se han hecho de
tal calidad mediante reacciones qumicas adecuadas (midiendo y
comparando sus colores), estos son 253. La ciencia o arte de su uso se
denomina fotocolorimetra y est regida por leyes fsicas muy estudiadas.
Para ello se introduce en el aparato un testigo o patrn con una
concentracin de sustancia conocida y la muestra a determinar. Se mide la
cantidad de color de cada uno y segn su relacin, se determina la
concentracin de la muestra (concentracin es la cantidad de sustancia
disuelta en un volumen determinado de solvente).
El aparato consta de un sistema lumnico para iluminar las muestras y se
mide con un sistema electrnico la cantidad de luz que pasa. Esa luz debe
ser lo ms monocromtica posible, por lo que se usan diversos medios
para
hacerlo: filtros
pticos, redes
de
difraccin y
28

ltimamente leds especficos. Los lquidos se colocan en cubetas

especiales y los slidos, como el vidrio, deben estar cortados a la medida
del receptculo que se llama portacubas, que es por donde pasa la luz,
teniendo como premisa que el espesor en milmetros de la muestra y el
testigo deben ser rigurosamente iguales. Es el equivalente al
espectrofotmetro pero este vara las longitudes de onda (los diversos
colores) en forma continua y el fotocolormetro lo hace variando por pasos
concretos. Una premisa muy importante para ambos instrumentos es que el
color de la luz que pasa por las muestras debe ser del color
complementario al color de la muestra cuando se hacen anlisis de
concentracin. En rigor, casi todo anlisis de sangre, tierra, metalrgicos o
lquidos se hace con un aparato como los descriptos que pueden ser
manuales o automticos.

3. Cules son las especificaciones del software para el

fotocolormetro Merck SQ-118?
Utilizacin del sensor colormetro con el recolector de datos y el
software MultiLab
Ejecute el software MultiLab.
Conecte el sensor colormetro a una de las entradas para sensores
del recolector de datos (comenzando desde E/S-1). El sensor es
reconocido automticamente por el software MultiLab.
Presione Configuracin en la barra de herramientas principal, y
programe la velocidad de muestreo del recolector de datos y el
nmero de muestras. Presione Ejecutar en la barra de herramientas
principal para iniciar las mediciones.

4. Explique el mtodo espectrofotomtrico comn y el

mtodo de alta absorbancia
A. Mtodo espectrofotomtrico comn

29

Se basa en la relacin entre la absorcin de la radiacin visible o

ultravioleta cercana de una solucin y la concentracin de las especies
coloreadas en la solucin. Tiene que ser convertido a un complejo
coloreado antes del anlisis.
La instrumentacin bsica es todava relativamente simple y de bajo
costo en comparacin con los instrumentos que se requieren para las
otras tcnicas de anlisis de metales. El mtodo puede automatizarse
fcilmente para el anlisis rutinario y da resultados con una buena
sensibilidad y precisin. Las desventajas de esta tcnica son que a
menudo se requiere un control estricto del pH y un estado de oxidacin
especfico y tambin puede haber problemas con la interferencia de
otros metales. Sin embargo, puede predecirse que se utilizar por
muchos aos especialmente en laboratorios pequeos o en condiciones
de terreno.

B. Mtodo espectrofotomtrico de alta absorbancia

Este mtodo se emplea cuando las disoluciones de la muestra tienen
una gran concentracin, lo que origina alta absorbancia o pequea
transmisin.se emplea cuando la transmisin est comprendida entre 0
y 10%.
En los mtodos de alta absorbancia no se usa el disolvente puro para
establecer el 100% de transmisin .Se reemplaza por una disolucin
estndar que es solo algo ms diluida que la desconocida.

5. Que se recomienda para realizar un uso correcto de los

equipos fotomtricos?

Colocar el equipo en un lugar seguro y fuera de riesgos a cadas,

golpes o algn dao fsico, vibraciones, calor intenso, alta
humedad o exposicin directa a luz.

Mantener el equipo libre de polvo y suciedad, no tocar la fuente

de luz (emisor) ni el transductor (receptor).

Permitir que el equipo se caliente por 10 minutos antes de hacer

algn procedimiento.

Verificar el 0 y el 100% T cada vez que se haga alguna lectura o

cuando vare la longitud de onda.
30

X.

Asegurarse de que las cubetas o tubos de ensayo estn libres de

manchas, ralladuras y huellas digitales.

BIBLIOGRAFIA

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Redaly.Orga.Obtenido de Acta Bioquimica Clnica Latinoamericana.
39(4). http://www.redaly.org/articulo.oa?id=53539414

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Cercano. LIMA
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S.A.DIivisin anaitica. lima.

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32