Método de concentración por flotación de Sheather

“Glucosa” y de Willis “Cloruro de Sodio”

OBJETIVOS

 Adquirir habilidad para realizar otras técnicas de concentración por flotación y el manejo de
muestras biológico-infeccioso.
 Comparar las ventajas y desventajas de las técnicas de concentración.

Método de concentración de Willis (cloruro de sodio)

La técnica es cualitativa de concentración; se conoce como flotación de Willis. Es muy antigua se

utiliza desde 1921, es ideal para el trabajo de campo pues la solución saturada de NaCl (sal común
de mesa (28 g para 100mL se debe obtener una densidad de 1.19) se puede preparar en cualquier
recipiente. La muestra se homogeneíza en una pequeña cantidad de salmuera, enseguida se hace la
suspensión de tal manera que llegue hasta el borde del frasco, se deja reposar de 15 a 30 minutos y
se recolecta el material flotante con un cubreobjetos en donde se buscaran las formas parasitarias.

Es el método indicado para cualquier forma parasitaria, excepto para trofozoitos. La lectura se
debe tomar pasado el tiempo señalado para evitar deformación de las fases de parásitos. La materia
fecal se puede utilizar con soluciones conservadoras o sin ellas.

Método de concentración Sheather (glucosa)

Técnica basada en la flotación simple en solución saturada de sacarosa (azúcar de mesa), la cual se
realiza de manera semejante a la de Willis. Algunos parasitólogos recomiendan una densidad de la
solución de sacarosa de 1.12 (Sin una medida exacta, pero más densa que la de NaCl) Esta técnica
también puede deformar las formas parasitarias por lo que la lectura se debe hacer 15 a 20 minutos
después de hacer el homogeneizado. También es posible utilizar muestras con diversos
conservadores.

MATERIAL
 Asa de nicromo  Vasos de precipitados de 250 ml o
 Pipeta de plástico frascos.
 Gradilla.  Coladera de plástico de malla fina.
 Tubos de ensaye de 13 X 100  Portaobjetos y cubreobjetos.
 Tapón de hule  Bata.
 Varilla de vidrio (15 a 20 cm  Guantes.
longitud)  Lentes de seguridad.
 Franela, Jabón y cloro.

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EQUIPO
 Microscopio óptico.
 Centrifuga.

REACTIVOS
 Solución de Sheather (sucrosa 500 gr. agua destilada 320 mL y fenol 6.5 g) (densidad
1.18).
 Solución saturada de NaCl (densidad 1.20)
 Solución de lugol.

OTROS
 Heces frescas parasitadas.

PROCEDIMIENTO PARA MÉTODO DE WILLIS

1. Depositar aproximadamente 1 gr. de la muestra en un vaso de precipitados o frasco de

vidrio.
2. Agregar 10 ml de Sol. de Willis
3. Agitar hasta una mezcla homogénea.
4. Filtrar
5. Colocar el filtrado en un tubo de ensaye hasta llenarlo completamente y se forme el
menisco (puede auxiliarse de la pipeta de plástico).
6. Colocar un cubreobjetos sobre el tubo de tal manera que haga contacto con el menisco
del líquido.
7. Dejar reposar el tubo con el cubreobjetos encima durante 10 minutos
8. Colocar una gota de lugol en un portaobjetos.
9. Retirar el cubreobjetos transcurrido el tiempo y ponerlo sobre la gota de lugol.
10. Observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X
11. Anotar lo encontrado.

RESULTADO MÉTODO DE WILLIS, OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS

OBJETIVO________ OBJETIVO________

PROCEDIMIENTO PARA MÉTODO DE SHEATHER

1. Depositar aproximadamente 1 gr. de la muestra en un vaso de precipitados o frasco

de vidrio.
 2. Agregar 10 ml de agua destilada
3. Agitar hasta una mezcla homogénea.
4. Filtrar
5. Colocar el filtrado en un tubo de ensaye
6. Centrifugar a 1500 rpm. durante 5 minutos.
7. Decantar
8. Agregar al sedimento solución de Sheather y tapar el tubo
9. Agitar hasta una mezcla homogénea
10. Centrifugar (sin tapón) a 1500 rpm. durante 5 minutos

NO decantar

1. Colocar una gota de lugol en un portaobjetos.

2. Tomar con el asa de nicromo de la película formada en la parte superior del líquido.
3. Enjuagar el asa en la gota de lugol (sin extenderla)
4. Observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X

RESULTADO MÉTODO DE SHEATHER, OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS (No

contestar)

OBJETIVO________ OBJETIVO________

ACTIVIDADES extra – Laboratorio (Contestar):

1. Realizar un diagrama de flujo que muestre la metodología de los Métodos de Willis y

Sheather
Willis
 Sheather

2. Explicar bremevente las ventajas y deventajas de los métodos de concentración por

sedimentación y flotación.
Sedimentación:
Ventajas
Es más fácil de realizar, está sujeto a menos errores técnicos, no requiere
observación microscópica inmediata y es aplicable a la concentración de la
mayoría de los parásitos intestinales.
Desventajas
La observación microscópica puede dificultarse por la presencia de la
concentración de restos no parasitarios.

Flotación:
Ventajas
 Es económico.
 Fácil de realizar.
 Mas separación de los parásitos
 No requiere de mucho tiempo para su realización
 Producen una preparación más limpia de deyección que el
procedimiento de sedimentación, facilitando mucho su observación
microscópica.
 Hace una buena concentración de quistes, huevos y larvas, es la técnica
preferida por la generalidad de los laboratorios.
Desventajas
 Pueden colapsar los huevos o quistes
 Aquellos parásitos con mayor peso específico que la solución empleada
no flotarán (que es lo que a veces sucede con huevos infértiles de
Ascaris lumbricoides o huevos operculados) y que el tiempo en que
debe hacerse la observación microscópica es menor debido a que la
película superficial puede destruirse y los parásitos caer al fondo del
tubo.

Bibliografía de referencia

 Ramirez, A. (2006). MANUAL DE PRÁCTICAS DE PARASITOLOGIA I.

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 Magaró, H. (2008). TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO PARASITOLÓGICO. FACULTAD
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