DAO DE LA RADIACION UV Y EL SISTEMA

DE REPARACION DEL ADN BACTERIAL

JORGE ALBERTO CARO VARGAS
UNIVERSIDAD NACIONAL DE
COLOMBIA
BOGOTA D.C.
OCTUBRE 26 DE 2010

QUE SON LOS RAYOS UV?

Se denomina radiacin ultravioleta o radiacin UV a la
radiacin electromagntica cuya longitud de onda est
comprendida aproximadamente entre los 400 nm (4x10-7
m) y los 15 nm (1,5x10-8 m). Su nombre proviene que su
rango empieza desde longitudes de onda ms cortas de lo
que los humanos identificamos como el color violeta. Esta
radiacin puede ser producida por los rayos solares y
produce varios efectos en la salud.

BACTERIAS USADAS:
Escherichia coli (E. Coli)
Serratia marcescens (S.
marcescens)

Escherichia coli (E. Coli)

La Escherichia coli (tambin conocida por la abreviacin de su

nombre, E. coli) es quizs el organismo procarionte ms estudiado

por el ser humano, se trata de una bacteria que se encuentra
generalmente en los intestinos animales, y por ende en las aguas
negras. Fue descrita por primera vez en 1885 por Theodore von
Escherich, bacterilogo alemn, quin la denomin Bacterium
coli. Posteriormente la taxonoma le adjudic el nombre de
Escherichia coli, en honor a su descubridor. sta y otras bacterias
son necesarias para el funcionamiento correcto del proceso
digestivo, adems de producir las vitaminas B y K. Es un bacilo
que reacciona negativamente a la tincin de Gram (gramnegativo),
es anaerbico facultativo, mvil por flagelos peritricos (que
rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la
glucosa y la lactosa

Escherichia coli (E. Coli)

Serratia marcescens (S. marcescens)

La Serratia marcescens es un bacilo gramnegativo de la

familia Enterobacteriaceae. Puede ser peligroso para el

hombre, ya que a veces es patgena, como causa de
infecciones nosocomiales y urinarias. Es un bacilo motil que
puede crecer a una temperatura que oscila entre 5-40 C, en
niveles de pH que varan entre 5 y 9. El ambiente en el cual
predomina es en condiciones hmedas, por esa razn es
posible encontrarla creciendo en los baos y las alcantarillas,
aunque puede ser eliminada mediante la aplicacin de leja y
otros desinfectantes (sin abusar de la dosis, porque sino la
bacteria puede volverse inmune a los efectos de los
desinfectantes)

Serratia marcescens (S. marcescens)

Que se va a hacer?
Los efectos de los rayos UV en la piel principalmente por el

sol han sido estudiados por muchos aos estas investigaciones

muestran que los rayos son absorbidos por los nucletidos del
ADN, estos pueden causar cncer en la piel como ya es
conocido, para esto las clulas han creado un mecanismo para
protegerse del efecto perjudicial de los rayos UV, por
ejemplo la pigmentacin o melanina. En el estudio de estas
dos bacterias veremos la manera de cada una de protegerse
de los rayos UV, la S. marcescens produce un pigmento rojo
llamado prodigiosin mientras que el E. Colin produce uno
blanco. El prodigiosin es parecido en estructura a la melanina
humana.

EL EXPERIMENTO
Un cultivo de cada material es preparado (E.Coli y S. marcescens), es

inicialmente y reposicionada aadiendo 100l de una muestra preparada

comercialmente en 5ml de un cultivo nutritivo en 50ml de tubos de
prueba. La dilucin debe realizarse en tubos de ensayo que contengan aire
por lo menos nueve veces superior al volumen de lquido, a fin de permitir
un suministro suficiente de oxgeno durante el crecimiento de los cultivos
bacterianos. Dos cultivos de E. Coli y dos cultivos de S. marcescens deben
estar preparados, e incubados durante la noche en un bao de agua, a dos
temperaturas diferentes. El pigmento prodigiosin no se desarrolla en
temperaturas superiores a 30 C. El crecimiento de la bacteria Serratia en
dos diferentes temperaturas se ha diseado para crear un cultivo de la
produccin de este pigmento (25 C), y un cultivo de pigmentos
deficientes (37 C).
Peptona 10.0g, cloruro de sodio 5.0g, extrado 5.0g,
hervido y destilado hasta un volumen final de 1000ml
luego esterilizado en autoclave por 60 minutos

 Los cultivos se dejan de 1 a 10 de la maana, se esterilizan las placas

del vidrio reloj donde se har el experimento. La radiacin UV se

realiza mediante una lmpara UV bactericida (por ejemplo, como la
lmpara UV Vilber Lourmat VL-6LC Vilber Lourmat), con una
longitud de onda de 245nm. Con el fin de esterilizar la zona de
radiacin y permitir que la lmpara llegue a un estado estable, le
sugerimos que la lmpara funcione por lo menos 30 minutos antes de
la irradiacin a los vidrio reloj en el laboratorio. La distancia ptima
entre la lmpara UV y el plato es de 25-30cm. La parte inferior de
cada uno del vidrio reloj debe ser dividido en seis secciones iguales
utilizando un rotulador. Cada una de estas secciones ser irradiada de
diferente cantidad de tiempo. El nmero de segundos que se marca
en el borde inferior de cada seccin: segundos 0, 3, 10, 30, 60 y 120

MONTAJE

QUE SE VIO EN EL EXPERIMENTO

La observar la S. marcescens durante unos minutos se

observa la diferencia , vemos en apariencia que la placa que

estuvo a 25C incrementa la produccin de pigmento rojo,
mientras que a 37 C muestra un crecimiento de colonias
blancas, en ambos casos aparecen en las secciones de 0, 3 y
10 segundos respectivamente pero en la seccin de 30
segundos en ambos platos se mostro un crecimiento bacterial
significativo, mientras que en las zonas de 60 y 120 segundos,
est casi esterilizada no hay crecimiento de colonias.

 Para la E. Coli en la figura 4a y 4 b se ve un

crecimiento importante en las dos primeras

secciones (0 y 3 segundos respectivamente),
la seccin de 10 segundos muestra un
crecimiento importante pero las fronteras
entre colonias se pueden observar, en 30
segundos se observa un crecimiento a 37 C
mientras que en 25C solo 3, el resto
estuvieron esterilizadas.

Crecimiento de la bacteria en diferentes condiciones (a, b S. Marcescens); (c, d

E.Coli) 25C y 37C respectivamente

ANALISIS
El pigmento rojo producido por la S. Marcescens llamado

prodigiosin es el causante de la gran resistencia a la radiacin

tal vez esto se debe a su gran parecido con la melanina, que
protege a los humanos y animales contra los rayos UV, como
se ve en la figura 4a y 4b la S. Marcescens es mas resistente
que la E. Coli a la radiacin, ya que esta ultima resisti hasta
3 segundos mientras que el otro hasta 30 segundos e inclusive
mostro crecimiento en 60 y 120 segundos, aqu se pudo
observar que la resistencia de cada una no depende de la
temperatura a la que estn expuestos.

REPARACION DEL ADN

Con estos resultados vemos la reparacin del

ADN de cada una de las bacterias y su razn de

cambio, una a 10 segundos y la otra a 30
segundos. Entre ms sea capaz el sistema de
minimizar los daos por radiacin la razn de
supervivencia ser ms alta, pero en un punto la
radiacin hace que la reparacin del ADN no sea
manejable esto afecta el crecimiento del cultivo y
genera ms clulas muertas.

QUE MAS SE PUEDE MEDIR

Se puede analizar la intensidad de la luz y su influencia en las

enzimas de las bateras y su rata de cambio en el crecimiento de las

mismas. Longitud de onda diferente
Examinar los diferentes componentes de los bloqueadores solares
y ver cmo responden a este tipo de radiacin controlada, y ver
que tan buenos pueden ser.
Se puede variar la distancia y ver su dependencia con respecto al
crecimiento de las bacterias.
Se usan diferentes tipos de bacterias para ver su comportamiento.
Calentar las muestras y mirar la dependencia con la temperatura
de cada muestra.

CONCLUSIONES
Se observo el efecto de los Rayos UV en unas cadenas de

bacterias S. Marcescens y E. Coli, viendo que la 1 es ms

resistente, a este tipo de radiacin, donde se vio crecimiento
del cultivo hasta los 30 segundos, mientras que en la 2
muestra solo alcanzo a los 10 segundos: este ejercicio puede
ser pedaggico, pero adems se pueden ver las influencias de
los rayos UV en nuestro piel y en otros organismos, se puede
analizar dependencia entre la longitud de onda, el tiempo, la
temperatura entre otros como objetos de estudio
termodinmico.