ARTICULO 2

Fotoprotección contra el estrés

oxidativo inducido por UVB y el
daño epidérmico en ratones
utilizando hojas de tres variedades
diferentes de Lepidium
meyenii (maca)
Cynthia Gonzales-Castañeda MSc,Valery Rivera,Ana Lucía Chirinos BSc,Dr. Pablo
Evelson,Dr. Gustavo Francisco Gonzales
Primera publicación: 22 julio 2011
 
https://doi.org/10.1111/j.1365-4632.2010.04793.x
Citas: 18
Gustavo F. Gonzales, MD
Universidad Peruana Cayetano Heredia
Av. Honorio Delgado 430
Urb. Ingeniería, Lima 31
Perú
E-mail: Gustavo.gonzales@upch.pe
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Abstracto
Fondo La exposición de la piel a la radiación ultravioleta (UV) B conduce al daño
epidérmico y a la generación de especies reactivas de oxígeno. El efecto fotoprotector
de extractos de tres variedades de hojas (roja, amarilla y negra) de maca (Lepidium
meyenii), una planta de la sierra peruana, se evaluó en piel de ratón expuesta a
radiación UVB.
Materiales y métodos Los extractos hidroalcohólicos de tres variedades de hojas de
maca se aplicaron tópicamente a la piel dorsal de ratones machos jóvenes-adultos
antes de la exposición a la radiación UVB.

Resultados Las tres variedades tenían propiedades de absorción de UVA/UVB y

presentaban actividad antioxidante, siendo mayor con la maca roja, seguida de la
maca negra y amarilla. Las tres variedades de hojas de maca impidieron el desarrollo
de células quemadas solares, hiperplasia epidérmica, infiltración leucocítica y otras
alteraciones producidas por la radiación UVB. Los ratones tratados con maca negra
mostraron los niveles más altos de superóxido dismutasa, y los ratones tratados con
maca negra y amarilla mostraron niveles más altos de catalasa en la piel, mientras que
la maca roja protegió la piel y el hígado contra aumentos significativos en la actividad
de peroxidación lipídica observada en los animales desprotegidos.

Conclusión La presencia de una actividad antioxidante significativa y la inhibición de la

peroxidación lipídica sugieren que la protección observada podría atribuirse en parte a
este mecanismo.

Introducción
La radiación ultravioleta (UV) B constituye más del 10% de la radiación UV que llega a
la superficie de la tierra y es la más activa biológicamente. 1 Puede actuar directamente
generando inflamación y proliferación en la piel humana y animal, o indirectamente
produciendo especies reactivas de oxígeno (ROS) y agotando los antioxidantes en la
piel.2, 3 Estos procesos están implicados en varios de los efectos biológicos causados
por la radiación ultravioleta (UVR), como las quemaduras solares, la
hiperpigmentación, la fotoinmunosupresión, el fotoenvejecimiento y la
fotocarcinogénesis.4, 5

El estrés oxidativo inducido por los rayos UV es contrarrestado en el cuerpo por

antioxidantes endógenos que neutralizan las ROS antes de que puedan producir
cambios oxidativos en los tejidos.5, 6 Estos antioxidantes endógenos incluyen la
superóxido dismutasa (SOD), catalasa y otras moléculas, como el glutatión. 7 Sin
embargo, varios factores, incluida la edad8 o la exposición crónica a UVR, puede
generar un desequilibrio en la actividad oxidante/antioxidante, lo que reduce la
capacidad de la piel para reparar el daño debido a ROS.9 Ha habido varios intentos de
desarrollar compuestos administrados tópicamente para proteger la piel contra la
RUV.10, 11 Recientemente, se han publicado varios estudios que demuestran un efecto
protector de los extractos de plantas medicinales en la piel expuesta a la RUV. 12-15

Lepidium meyenii, también conocida como maca, es una planta que crece
exclusivamente a más de 4000 m sobre el nivel del mar en los Andes centrales
peruanos, en una zona donde la intensidad de UVR es mayor que al nivel del
mar.16 Para sobrevivir en este ambiente hostil, la maca ha desarrollado adaptaciones
que incluyen protección contra la RUV, y se ha demostrado que los extractos acuosos
de hipocótilos de maca amarilla previenen la hiperplasia epidérmica inducida por UV
en la piel de ratas.12 Debido a que los hipocótilos crecen debajo del suelo, mientras que
las hojas están directamente expuestas a la radiación solar, entonces es posible que
las hojas también puedan desarrollar mecanismos de protección contra la RUV. La
maca existe en tres variedades de color,17 cada uno con diferentes propiedades
biológicas.18-20 Sin embargo, no se sabe si los extractos de hojas de maca de diferentes
variedades de color también protegen contra los efectos de la RUV.

El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto fotoprotector de las hojas de las tres
variedades diferentes de maca (amarilla, negra y roja) contra el estrés oxidativo
inducido por UVB y el daño epidérmico en la piel de ratones.

Materiales y métodos
Animales de experimentación
Se utilizaron ratones suizos machos de tres meses de edad para los experimentos de
UVR. Los ratones fueron obtenidos del animalario de la Universidad Peruana Cayetano
Heredia y alojados bajo un ciclo de luz:oscuridad de 12 horas en jaulas en un ambiente
controlado a 20-22 °C y 60-70% de humedad. A los ratones se les dio una dieta
comercial y agua ad libitum. El estudio incluyó seis grupos experimentales de seis
animales por grupo. Este estudio de investigación cumplió con las directrices descritas
en la Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio21 y fue aprobado por el
Comité de Revisión Institucional de la Oficina de Investigaciones Científicas de la
Universidad Peruana Cayetano Heredia.

Preparación del extracto de maca

Las hojas secas de las tres variedades diferentes de maca (amarilla, roja y negra) se
pulverizaban, se hervían dos veces durante 60 minutos en EtOH al 50%, y el volumen
final del extracto etanólico se enfriaba y luego se filtraba, se congelaba a -70 ° C y se
liofilizaba. La maca fue hervida, ya que esta planta se usa tradicionalmente después de
un proceso de ebullición.12 La recuperación fue de aproximadamente 10.56-11.68%
para los tres extractos diferentes. El extracto liofilizado se diluyó con agua destilada
para su uso en los diferentes ensayos, y se utilizó el valor de polifenoles totales (TP)
como marcador para estandarizar los ensayos.

Ensayo TP
El contenido de TP de los tres extractos se determinó mediante el método de Folin-
Ciocalteau,22 con varias modificaciones: se añadieron 0,3 ml de la muestra (extracto de
hojas de maca, 0,3 mg/ml) a un matraz con 1,5 ml del reactivo Folin-Ciocalteau (1/5
dilución). Después de un minuto, se añadieron 1,2 ml de carbonato de sodio (7,5 g/100
ml). El contenido de los tubos se mezcló y almacenó en la oscuridad durante 30
minutos. La absorbancia se midió a 760 nm utilizando un espectrofotómetro.

Se realizó una curva de calibración utilizando pirogalol (50 μg/ml) como estándar, y los
resultados se expresaron como pirogalol (g)/100 g de muestra. Todas las muestras se
analizaron por triplicado.
En todos los experimentos, el contenido de TP de los extractos de hojas de maca se
estandarizó contra una concentración de 1 mg de pirogalol / ml.

Espectro de absorción del extracto de hojas de maca

Se realizó un análisis de absorción para cada una de las tres variedades de hojas de
maca (1 mg pirogalol/ml). Las muestras se diluyeron 1:10 y se filtraron (Millex;
Millipore, Farnaceutico Responsavel, Brasil). Las absorbancias se midieron en un
espectrofotómetro (Perkin Elmer Spectrum One FT-IR Spectrometer, Norton, OH, USA)
utilizando una cubeta de cuarzo estándar con una longitud de trayectoria de 1 cm.

Tratamiento UVR
Los animales, incluidos los del grupo de control, fueron afeitados en la superficie
dorsal 48 horas antes de la exposición a la radiación UVB. El día de la exposición a
UVB, los animales fueron anestesiados con pentobarbital (30 mg/kg) en solución salina
al 0,9% antes de la irradiación. Una vez anestesiado, el tratamiento se administró
tópicamente en la superficie dorsal de la piel afeitada. Los siguientes tratamientos se
colocaron tópicamente en la superficie dorsal del animal: hojas de maca negra (BM);
hojas de maca amarilla (YM); hojas de maca roja (RM); y un protector solar comercial
SPF 60 utilizado como control positivo. Se utilizó un protector solar de amplio espectro
que protege la piel en todo el espectro UVA / UVB; El protector solar contiene
ingredientes activos, como octocrileno, octil metoxicinnamato, dióxido de titanio,
benzofenona-3 y salicilato de octilo, que proporcionan protección física y química.

El volumen utilizado fue de 200 μl por tratamiento, a una concentración de 1 mg de

pirogalol/ml. Las diluciones se hicieron en agua destilada. Los animales que fueron
expuestos a la RUV y no tratados [control irradiado (CI)], y los animales que quedaron
sin tratar y sin exposición [control no irradiado (NIC)], se utilizaron como controles. El
número total de grupos fue de seis.

Luego, los ratones se colocaron, según su grupo, en la cámara de radiación para ser
irradiados en el dorso afeitado. La cámara de radiación consistía en una jaula acoplada
a una lámpara UVB (Spectroline Longlife Filter, Modelo: ENB-260C; Spectronics
Corporation, Westbury, NY, USA). Los animales fueron colocados a una distancia de 15
cm de la fuente de radiación. La exposición a la radiación UVB fue de 60 minutos
diarios, durante cinco días consecutivos.

Los animales fueron sacrificados humanamente dos horas después de la última

radiación UVB por dislocación cervical. El hígado y la piel fueron disecados, limpiados y
pesados. Las biopsias de piel se dividieron en dos: una fijada en formalina tampón
neutro al 10% para el análisis histológico y la otra colocada en tampón fosfato (pH 7,4,
proporción 1:20) para el análisis bioquímico. Las muestras de tejido para el análisis
bioquímico se homogeneizaron una vez durante cuatro minutos y luego se
centrifugaron durante 10 minutos a 10.000 g. El sobrenadante se almacenó a -20 °C
para ensayos bioquímicos y de proteínas.

El hígado se homogeneizó en tampón fosfato-cloruro de potasio (1:9) y se centrifugó

durante 10 minutos a 800 g. El sobrenadante se almacenó a -20 °C para el ensayo de
proteínas y sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBARS). El ensayo de proteína
de Lowry23 se evaluó para determinar el contenido de proteína en los tejidos
homogeneizados.

Evaluación histopatológica
Las biopsias de piel fijadas en formalina tampón neutro al 10% se incrustaron en
parafina, se seccionaron a 5 μm y se tiñeron rutinariamente con hematoxilina y eosina
(H-E). Las evaluaciones histológicas se realizaron con microscopio óptico (Leica DM
1000; Wetzlar, Alemania) con un aumento del 40×. Las mediciones se llevaron a cabo
utilizando el software informático Leica Application Suite for Windows (Leica). Los
exámenes histopatológicos fueron realizados por un patólogo. Las muestras fueron
cegadas antes de los exámenes.

Para determinar la hiperplasia epidérmica se calculó la distancia media (30

mediciones/sección) entre el estrato granuloso y la unión dermoepidérmica. 24

El número de células quemadas por el sol (SBC) se determinó de acuerdo con el

método descrito por Reefman.25 Los SBC son queratinocitos apoptóticos
caracterizados por tener un núcleo picnótico y citoplasma eosinofílico hialino. El área
de la epidermis se midió dibujando una línea alrededor del área epidérmica y
calculando la superficie total (milímetro cuadrado). Se contó el número de núcleos
picnóticos o sus fragmentos presentes en el área. El número total de SBC se determinó
dividiendo el número de núcleos picnóticos contados por el área de superficie
epidérmica.

La presencia de queratinocitos apoptóticos también se evaluó semicuantitativamente

en la epidermis, de acuerdo con una escala de 0-3,26 donde: 0, ausente; 1, leve (1–3
daño de células solares presente); 2, moderado (cuatro o más células solares de daño
presente); y 3, grave (necrosis epidérmica extendida).

La infiltración leucocitaria se evaluó semicuantitativamente observando la presencia

de leucocitos en las diferentes secciones de la epidermis y la dermis. El sistema de
evaluación utilizó una escala de 0 a 4,26 donde: 0, ausente; 1, leve (<5 leucocitos en una
sección de 40×); 2, moderada (entre 5 y 10 leucocitos en una sección de 40×); 3, grave
(más de 10 leucocitos en una sección de 40×); y 4, inflamación extensa con
oscurecimiento de la unión dermo-epidérmica.

La atipia se caracterizó de acuerdo con las células que parecen anormales (tamaño y
forma nuclear, características de tinción o posición relativa a otras células del mismo
tipo). La evaluación se realizó utilizando una escala de 0 a 3, donde: 0, ausente; 1,
focal; 2, multifocal; y 3, difusa. En presencia de atipia (puntuación >1), la gravedad de la
atipia se evaluó mediante la siguiente escala: 1, mínimo; 2, leve; 3, moderado; y 4,
grave.

La actividad de la unión dermo-epidérmica se caracterizó por la degeneración y

desintegración de su unión. Esto se evaluó utilizando una escala de 1 a 3,26 donde: 1,
leve (vacuolización pequeña, sin desintegración de la unión dermo-epidérmica); 2,
moderada (vacuolización con desintegración mínima); y 3, grave (gran desintegración
con formación de hendidura).

Ensayo de peroxidación lipídica en animales irradiados

Para determinar la cantidad de peroxidación lipídica generada por la radiación UVB, se
utilizó un ensayo TBARS. El homogeneizado de la piel o el hígado se agregó a una
mezcla que contenía 0.1 N HCl, 10% de ácido fosfotúngstico y 0.7% de TBA. se utilizó
malondialdehído (MDA) (5, 10 y 20 μl; 131,7Μ M) como control. La mezcla se calentó en
agua hirviendo durante 60 minutos, y luego se extrajo en 5 ml de n-butanol y se
centrifugó durante 10 minutos a 10,000 g; La fluorescencia de la fase butanólica se
registró a 515 nm (excitación) y 553 nm (emisión). Los valores se expresaron como
pmol MDA/mg de proteína.

Actividad enzimática antioxidante en homogeneizados

de la piel de animales irradiados
La actividad de la catalasa se determinó espectrofotométricamente por la desaparición
del peróxido de hidrógeno (H2O2). Los resultados se expresaron como picomoles de
catalasa por mg de proteína. La actividad de SOD se determinó
espectrofotométricamente siguiendo la tasa de formación de adenocroma a 480 nm
en un medio con 50 m m glicina-NaOH, pH 10.2, y con una concentración final de 1 mM
DE epinefrina. La actividad de SOD se expresó como una unidad de SOD (USOD)/mg de
proteína.

Actividad antioxidante in vitro

Ensayo de eliminación de radicales DPPH
La actividad de eliminación de radicales de los tres extractos de hojas de maca contra
el radical DPPH se evaluó como se describió anteriormente,27 con una ligera
modificación. Brevemente, diferentes concentraciones (0.01, 0.025, 0.05, 0.075 y 0.1
mg / ml) de los extractos se mezclaron con DPPH (6.5 × 10−5 mol/l, en MeOH). Se utilizó
ácido ascórbico como control y agua destilada como vehículo. La solución se incubó a
temperatura ambiente durante 30 minutos en la oscuridad, y los cambios en la
absorbancia a 515 nm debido a la eliminación del radical DPPH se midieron con un
espectrofotómetro.

La actividad antioxidante (%) se calculó utilizando la siguiente ecuación:

donde, A vehículo es la absorbancia del vehículo mezclado con la solución DPPH,

y A muestra es la absorbancia de cada extracto o ácido ascórbico mezclado con DPPH.

Análisis estadístico
Se calcularon los valores medios y las desviaciones estándar a partir de las diferentes
replicaciones para cada tratamiento. Se utilizó una prueba de Bartlett para determinar
si los datos se distribuían normalmente. Para la distribución normal, se analizaron las
diferencias entre las medias para los diferentes experimentos y tratamientos con
ANOVA. Se utilizó la prueba de Scheffé para determinar la diferencia entre el par de
medias.

Resultados
Actividad de los extractos de maca
Las hojas de maca roja mostraron un contenido de TP significativamente mayor (13,46
± 0,14) en los extractos hidroalcohólicos (P < 0,005) que los otros dos extractos, pero
no se observó diferencia entre las hojas de BM (9,47 ± 0,39) y YM (10,44 ± 0,21) (P >
0,05).

La Figura 1 muestra el espectrograma UVA-UVB-UVC de todas las especies de maca.

Las tres variedades diferentes de extractos de hojas de maca absorbieron la porción
UV de los espectros, de 200 a 320 nm. Cuando los segmentos se evaluaron
individualmente, en la longitud de onda UVB (290-320 nm), RM tuvo la mayor
absorbancia, mientras que BM e YM tuvieron una absorbancia similar. En la longitud
de onda UVA (320-350 nm), los valores de absorbancia fueron similares a los
observados con la longitud de onda UVB para los tres extractos diferentes. A más de
360 nm, las absorbancias comenzaron a disminuir para las tres variedades. En la
longitud de onda UVC (200-290 nm), no se pudo determinar la absorbancia ya que se
observó interferencia.

Figura 1
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Espectro de absorción UV (200–320 nm) de tres variedades diferentes de hojas de
maca. BM: hojas de maca negra; H2Od, agua destilada (vehículo); RM: hojas de maca
roja; YM, hojas de maca amarilla

Análisis macroscópico
Los ratones que recibieron radiación sin tratamiento presentaron eritemas y
quemaduras en la piel. Sin embargo, aquellos que no recibieron ningún tipo de
radiación mostraron una piel normal no pigmentada. También se observó piel normal
cuando se utilizó un protector solar SPF 60. El tratamiento previo con las tres
variedades de extracto de hoja de maca (RM, YM, BM) tuvo un efecto similar a los
observados con el protector solar y un patrón de piel comparable al de los ratones no
irradiados.

Análisis histopatológico
Se observaron células de quemaduras solares (Fig. 2a) y queratinocitos atípicos
(Fig. 2b) en los animales no tratados expuestos a UVB. Los ratones que no fueron
tratados antes de la irradiación también muestran destrucción de la epidermis, como
lo demuestra la necrosis de casi todo el tejido (Fig. 2c) en comparación con una piel
normal no irradiada (Fig. 2d). Los rayos UVB también produjeron una inflamación
extensa, caracterizada por infiltración leucocitaria (Fig. 3) y vacuolización y
desintegración de la unión dermo-epidérmica (Fig. 4), que no se observó en los
controles no irradiados. Estos efectos fueron leves o ausentes en los animales
fotoprotegidos.

Figura 2
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Daño epidérmico causado por la radiación UVB. a) SBC (flecha); b) queratinocitos
atípicos (punta de flecha); c) necrosis tisular; d) NIC. Hematoxilina-eosina ×40. Barra de
escala: 15 μm

Figura 3
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Infiltración leucocítica (flechas) en animales. a) Irradiados sin tratamiento previo; b) no
irradiados. Hematoxilina-eosina ×40. Barra de escala: 15 μm

Figura 4
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Integridad dermoepidérmica en animales irradiados sin tratamiento previo (izquierda)
en comparación con los no irradiados (derecha). La flecha muestra la vacuolización
producida por la exposición a los rayos UV. Hematoxilina-eosina ×40. Barra de escala:
15 μm

La hiperplasia epidérmica observada en animales irradiados no tratados fue prevenida

por la aplicación previa de extracto YM, RM o BM (P < 0,001). Estos animales tratados
tenían un grosor epidérmico similar al NIC y los que fueron tratados previamente con
protector solar (Fig. 5). Los ratones tratados con extractos de RM y YM tuvieron el
grosor epidérmico más bajo (P < 0.001) en comparación con los tratados con extracto
de BM o protector solar (P < 0.001). No hubo diferencia significativa entre el
tratamiento YM y RM (Fig. 6).

Figura 5
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Microfotografía de ratones expuestos a radiación UVB. BM: maca negra; I, control
irradiado; IN: control no irradiado; RM: maca roja; CS: protector solar comercial; YM:
maca amarilla. Las flechas muestran la altura epidérmica evaluada. Hematoxilina-
eosina ×40. Barra de escala: 15 μm

Figura 6
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Evaluación de la altura epidérmica de ratones expuestos a radiación UVB. BM: maca
negra; I, control irradiado; IN: control no irradiado; RM: maca roja; CS: protector solar
comercial; YM: maca amarilla. Cada ratón recibió 200 μl del extracto hidroalcohólico
antes de la exposición a la RUV. Datos presentados como media ± SEM. Se realizaron
ciento cincuenta mediciones por tratamiento. unP < 0,001 vs. I; bP < 0.001 vs. YM; cP <
0,001 vs.RM; dP < 0,001 vs. BM; eP < 0.001 vs.CS

El número de SBC aumentó en ausencia de tratamiento antes de la exposición UVB.

Sin embargo, cuando los animales fueron tratados previamente con los extractos de
maca o con el protector solar, la producción de SBC fue significativamente menor (Fig.
7).

Figura 7
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Número de células quemaduras solares (SBC) por área de epidermis evaluada
(milímetro cuadrado). BM: maca negra; I, control irradiado; IN: control no irradiado;
RM: maca roja; CS: protector solar comercial; YM: maca amarilla. Los datos se
presentaron como media ± SEM. Se realizaron quince recuentos por tratamiento. unP <
0,05 vs. I; bP < 0.01 vs.

La evaluación histopatológica semicuantitativa mostró que el daño cutáneo inducido

por UVB (daño de células solares, queratinocitos atípicos, necrosis tisular, infiltración
leucocítica y desintegración de la unión dermo-epidérmica) se atenuó cuando los
ratones recibieron tratamiento previo con extractos de hojas de maca. Estos efectos
fueron similares a los observados cuando los animales fueron tratados con un
protector solar. Al comparar las tres variedades de hojas de maca, todas fueron
igualmente efectivas contra el daño solar (P > 0.05) y la unión dermo-epidérmica. Sin
embargo, YM y BM fueron más efectivos que RM para reducir la infiltración leucocítica.
YM fue el más efectivo para prevenir el desarrollo de queratinocitos atípicos (Tabla 1).

Tabla 1. Valores medios de la evaluación histopatológica de la piel de ratones (media ±

SEM)
Grupo Daño a las células Infiltración Actividad D- Queratinocitos Gravedad de la
solares leucocitaria E atípicos atipia

(MS = 3) (MS = 4) (MS = 3) (MS = 3) (MS = 4)

Yo 2,72 ± 0,2 3,83 ± 0,1 2.11 ± 0.2 2,83 ± 0,1 3,78 ± 0,1

Ym 0,8 ± 0,2* 1.2 ± 0.1*,** 0,7 ± 0,2* 0,5 ± 0,2*,** 0,4 ± 0,1*,**

.RM 0,8 ± 0,2* 1,7 ± 0,2* 0,7 ± 0,1* 1.1 ± 0.2* 0,9 ± 0,2*

Bm 0,87 ± 0,3 1,47 ± 0,2* 0,4 ± 0,2* 0,87 ± 0,3* 1,0 ± 0,3*

.CS 0,0 ± 0,0* 1.0 ± 0.0* 0,0 ± 0,0* 0,0 ± 0,0* 0,0 ± 0,0*
 Grupo Daño a las células Infiltración Actividad D- Queratinocitos Gravedad de la
solares leucocitaria E atípicos atipia

(MS = 3) (MS = 4) (MS = 3) (MS = 3) (MS = 4)

NI 0,0 ± 0,0* 1,2 ± 0,0* 0,0 ± 0,0* 0,9 ± 0,2* 0,7 ± 0,1*

 BM: maca negra; CS: protector solar comercial; D-E: dermoepidérmica; I, control
irradiado; EM: puntuación máxima; IN: control no irradiado; RM: maca roja; YM:
maca amarilla.
 *P < 0,01 vs. I; **P < 0.05 vs.RM.

Análisis de peroxidación lipídica en piel e hígado

La producción de sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico se cuantificó tanto en
hígado como en piel de los diferentes grupos. En piel, la producción de TBARS en el
grupo irradiado aumentó en comparación con el NIC (P  < 0,001). Este efecto no se
observó en aquellos animales previamente tratados con los extractos RM, BM y YM
antes de la irradiación (P > 0,05). Los extractos RM y YM dieron valores similares al
grupo no irradiado (P > 0,05) y a los ratones tratados con protector solar (Fig. 8a).

Figura 8
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a) Producción de TBARS en piel de animales irradiados con UVB. BM: maca negra; I,
control irradiado; IN: control no irradiado; RM: maca roja; CS: protector solar
comercial; YM: maca amarilla. Datos presentados como media ± SEM. unP < 0,01 vs.
I; bP < 0,05 vs. I. (b) Producción de TBARS en hígado de animales irradiados con UVB.
Datos presentados como media ± SEM. unP < 0,001 vs. I; bP < 0.05 vs. BM

Al igual que con la piel, la radiación UVB produjo un aumento significativo en los
valores de TBARS en el hígado en comparación con el NIC (P < 0,05). No se observó un
aumento de TBARS después del tratamiento con extracto de RM (P < 0,01) o protector
solar (P < 0,05). No se observaron efectos significativos con YM o RM (Fig. 8b).

Actividad enzimática antioxidante

La exposición a la radiación ultravioleta B sin tratamiento redujo los niveles de SOD y
catalasa, en comparación con aquellos animales que no fueron irradiados. El
tratamiento previo con extractos de maca mostró niveles más altos de SOD, y esto
varió según el extracto de hoja de maca utilizado, siendo mayor cuando se utilizó BM
(P < 0,01). Este valor fue similar al del protector solar comercial y el NIC. No hubo
diferencia entre las variedades amarilla y roja (Fig. 9a). Al igual que con el protector
solar comercial, el tratamiento previo con extracto de BM y YM aumentó ligeramente
los niveles de catalasa en los animales irradiados. Por otro lado, el tratamiento con RM
resultó en niveles de catalasa significativamente más bajos que para el protector solar
comercial (P < 0,01; Figura 9b).

Figura 9
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a) Niveles de superóxido dismutasa (SOD) en la piel de los animales expuestos a la
radiación UVB. BM: maca negra; I, control irradiado; IN: control no irradiado; RM: maca
roja; CS: protector solar comercial; YM: maca amarilla. Datos presentados como media
± SEM. unP < 0,01 vs. NI; bP < 0,01 vs. BM; cP < 0,05 vs. I; dP < 0,01 vs.CS. (b) Niveles de
catalasa en la piel de animales expuestos a radiación UVB. Datos presentados como
media ± SEM. unP < 0,05 vs. NI; bP < 0.01 vs.RM

Actividad antioxidante in vitro

Ensayo DPPH
El extracto de hojas de maca roja produjo una mayor actividad antioxidante in
vitro que los extractos BM o YM (P < 0.01) de una manera dependiente de la
concentración. RM tuvo el mayor porcentaje de actividad antioxidante, con casi el 90%
de actividad a una concentración de 0,075 mg/ml. En contraste, BM alcanzó el 80% de
actividad con una concentración de 0,1 mg/ml, y YM tuvo una actividad máxima de
70% a una concentración de 0,075 mg/ml y mantuvo ese porcentaje con una
concentración de 0,1 mg/ml. IC50 Los valores mostraron que YM requirió una
concentración de 0,021 mg/ml para alcanzar el 50% de la actividad antioxidante,
mientras que RM requirió 0,026 mg/ml y BM 0,034 mg/ml (datos no mostrados).

Discusión
Como mecanismo de defensa contra el efecto nocivo de la radiación solar, las plantas
han desarrollado sistemas de producción de diferentes compuestos relativamente
estables que funcionan como pantallas de luz.28 El propósito de estos compuestos es
reducir la fracción de radiación absorbida y, con ello, disminuir el daño inducido por la
RUV. Uno de los problemas de los protectores solares comerciales es que no todos
actúan protegiendo contra los dos tipos de radiación que llegan a la superficie
terrestre: UVA y UVB.29 En el presente estudio, hemos utilizado un modelo de daño
cutáneo debido a la radiación UVB para evaluar el efecto fotoprotector de los extractos
hidroalcohólicos de hojas de maca de tres variedades diferentes (rojo, amarillo y
negro).

Los tres extractos de hojas de maca presentaron la capacidad de absorber la RUV. Sin
embargo, fue difícil hacer un análisis de los espectros obtenidos en el rango UVC (200-
290 nm) ya que había interferencia. En la porción UVB (290-320 nm) de los espectros,
los extractos de hojas RM mostraron una mayor absorbancia, seguidos por las hojas
BM y YM. En la porción UVA (320-400 nm) de los espectros, los extractos de hojas RM
tuvieron la mayor capacidad de absorción en el rango de 320 a 350 nm.
La presencia de eritemas y pigmentación son dos de las respuestas agudas más
prominentes y conocidas contra la RUV.30 Debido a su gran reproducibilidad y
simplicidad, los eritemas y la pigmentación inducida por UVR constituyen un excelente
modelo de inflamación para caracterizar la fisiopatología de la piel y evaluar la eficacia
de diferentes agentes.31 En el presente estudio, aunque no hubo medición cuantitativa
de eritema o hiperpigmentación, fue clínicamente evidente, ya que observamos el
eritema y las quemaduras cutáneas en el dorso de los animales cuando fueron
expuestos a la radiación UVB sin tratamiento. La aplicación previa de los extractos de
maca evitó estos efectos.

Los queratinocitos son las células principales y más abundantes en la piel que tienen
una forma especial de muerte celular programada llamada cornificación, que es un
proceso diferente a la apoptosis clásica.32 Este proceso normal se ve alterado por la
radiación UVB, causando una aparición de SBC o queratinocitos apoptóticos. Esta
desregulación de los mecanismos de muerte celular que es un proceso normal de la
piel podría conducir a varias enfermedades como el cáncer y la necrólisis. Los SBC han
sido descritos como marcadores de daño solar, y un compuesto o sustancia capaz de
reducir el número de SBC en una piel irradiada confirma su efecto fotoprotector. 33

La evaluación microscópica cualitativa reveló que la RUV produjo SBC, infiltración

leucocítica, engrosamiento de la epidermis, atipia celular moderada a severa,
formación de hendiduras y necrosis tisular, lo que coincide con los resultados previos
descritos por otros autores en ratas, ratones y cobayas.34-39

Estos efectos nocivos de la exposición UVB fueron prevenidos o reducidos por la

administración del tema anterior de los extractos de hojas de maca. Sin embargo, la
magnitud del efecto parecía diferir entre las diferentes variedades de maca. Estas
diferencias en las respuestas biológicas a las diferentes variedades de maca han sido
previamente reportadas en modelos animales de memoria y aprendizaje. 40 y en el
sistema reproductivo.18, 41 La protección observada por RM contra SBC inducida por
UVB puede explicarse principalmente por la absorción en el rango de UVB.

Por ejemplo, YM y BM tuvieron un mayor efecto en la prevención de la infiltración

leucocítica; mientras tanto, solo YM tiene un mejor efecto previniendo la atipia celular.
Sin embargo, en este último, no hubo diferencias estadísticas entre las tres variedades
y el NIC. Los extractos de YM tenían la menor capacidad para absorber los espectros
UVB; sin embargo, nuestros resultados mostraron que tienen buenos efectos que
reducen el grosor epidérmico después de la exposición a UVB. Esto significa que,
independientemente de su capacidad para absorber la RUV, las hojas de maca tenían
propiedades que las hacen versátiles para la fotoprotección.

La peroxidación lipídica se considera el principal mecanismo del fotodaño cutáneo

inducido por UVR.42 La radiación UVB aumenta la peroxidación lipídica a lo largo de la
producción de ROS, generando peróxidos a partir de los ácidos grasos
insaturados.43 La producción de ROS en la piel después de la UVR conduce a un daño
oxidativo en el ADN y otros componentes celulares34, 35, 44 y un aumento de más de 25
veces el valor de TBARS en la piel, lo que indica una notoria
lipoperoxidación.45 Nuestros resultados mostraron que la radiación UVB aumentó los
niveles de TBARS en la piel y que los extractos de las tres variedades de hojas de maca
tuvieron una acción directa sobre la piel, favoreciendo la actividad antilipoperoxidante,
evitando la producción de TBARS. Estos niveles también son similares a los observados
en los animales que no recibieron radiación o tratamiento, lo que puede indicar que
estos extractos tienen la capacidad de proteger la piel de la peroxidación lipídica
inducida por los rayos UV.

El efecto de la RUV no se limita a la piel expuesta. Por lo tanto, los niveles de TBARS en
el hígado aumentan significativamente después de la irradiación de la piel. En el
presente estudio, aquellos grupos que fueron tratados con las hojas RM y con el
protector solar comercial previnieron el aumento de TBARS en el hígado como efecto
de la radiación UVB. Se esperaba que la aplicación tópica de los diferentes
tratamientos sólo afectara a la piel y no a otros órganos; sin embargo, esta reducción
de los niveles de TBARS encontrados en el hígado puede deberse al hecho de que la
peroxidación lipídica que se encuentra en este órgano refleja la peroxidación lipídica
que se encuentra en la piel. De esta manera, nuestros resultados son similares a los
demás.43, 46 Estos autores demostraron que la irradiación con UVB aumenta la
lipoperoxidación en la piel de la misma manera que en los eritrocitos y el hígado de los
conejillos de indias y que la administración tópica de acetato de alfa-tocoferol revierte
esos efectos.

La radiación UVB disminuyó significativamente los niveles de enzimas antioxidantes,

catalasa y SOD, al igual que se describió anteriormente. 47, 48 Entre las variedades de
hojas de maca, BM permite a los animales irradiados mantener la actividad de SOD
similar a los animales no irradiados. El efecto de las hojas de maca en la actividad de la
catalasa es mucho menor, pero aún así BM y YM son los más efectivos.

La propiedad de las hojas de maca en la reducción del daño oxidativo in vivo nos lleva
a estudiar con más detalle las propiedades antioxidantes in vitro. Los resultados con el
ensayo DPPH mostraron que los extractos hidroalcohólicos de hojas de maca tenían
una actividad antioxidante in vitro.

La protección observada en nuestros experimentos puede deberse al contenido de

fenoles en las hojas de maca, como se describió anteriormente en otros
experimentos.49 Los fenoles son producidos por todas las plantas superiores para
protegerlas de los diferentes tipos de estrés biótico y abiótico, como UVR, cambios de
temperatura, infecciones, heridas y ataques herbívoros. 50 Los fenoles en las plantas
tienen la capacidad, entre otras cosas, de reducir la hiperpigmentación inducida por la
radiación UVB a través de la reducción de la actividad tirosinasa en los
melanocitos.51 La exposición a UVR induce la formación de ROS en la piel;52 estas ROS
inducen la biosíntesis de melanina y daño al ADN, lo que puede conducir a la
proliferación y / o apoptosis de los melanocitos.51

Es prematuro concluir por qué hay diferencias entre las variedades de maca. Aunque
los fenoles pueden explicar el efecto protector en las hojas de maca contra la
radiación UVB en la piel, no explicaría las diferencias entre las variedades encontradas
en aquellos ensayos donde la administración del extracto estaba controlada por el
contenido de fenol. Es probable que otros compuestos, aún no determinados, también
puedan estar participando en la protección contra la exposición UV. Entonces, estos
compuestos desconocidos pueden ser responsables del comportamiento diferente
entre las diferentes variedades de hojas de maca.

Conclusión
El presente estudio demuestra el efecto de los extractos hidroalcohólicos de hojas RM,
BM y YM en la piel de animales expuestos a la radiación UVB. Aunque la RM es la que
mostró mayor actividad antioxidante, tanto la YM como la RM fueron las que
impidieron claramente las alteraciones histológicas de la piel debidas a la RUV. Esto
sugiere que debe haber más de un principio activo para la acción de cada una de las
variedades de maca. Nuestros resultados sugieren que los mecanismos de acción de
los extractos de maca sobre los diferentes efectos observados pueden deberse en
parte a la capacidad de absorber la radiación UV y a su actividad antioxidante,
actuando particularmente sobre la lipoperoxidación. Este hallazgo es de gran
importancia ya que la acción de la radiación UVB sobre la piel se produce directamente
a través del daño de la piel e indirectamente a través de un aumento de ROS. Nuestros
datos sugieren que la maca protegería la piel de ambos mecanismos de acción de la
radiación UVB.

Reconocimientos
Los autores desean agradecer el aporte del Dr. Alberto Boveris y del
personal de la Universidad de Buenos Aires por su contribución y asistencia
técnica.

Referencias
Citando literatura

Volumen50, Número8

Agosto 2011

Páginas 928-938

Figuras


 Referencias

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