LA ESTRUCTURA DE LA INSULINA

https://www.betacell.org/content/articleview/article_id/8/
La insulina es producida exclusivamente por las clulas beta del pncreas. Esta hormona endocrina tiene una estructura
tridimensional compacta que consiste en tres hlices cortas y tres puentes disulfuro invariables. Su conformacin
cuaternario puede adoptar una teraputicamente significativa "R" o estado de "T". Una sola molcula de insulina acta
como un ligando bivalente al receptor de insulina, por medio de dos superficies de unin. Las caractersticas estructurales
bsicas y las relaciones estructura-funcin de la insulina se presentan aqu.
La molcula de insulina se ha servido de modelo para multitud de estudios sobre la estructura fundamental y las
propiedades de las protenas. Era la primera protena de tener su secuencia de aminocidos secuenciado, en 1955 por
Fred Sanger (Sanger, 1988), lo que le vali un premio Nobel en 1958. Tambin fue la primera hormona peptdica, que
circula en cantidades diminutas, que se mide por radioinmunoensayo ( Berson y Yallow 1961), ganando Yalow un Premio de
Novela en 1977. El camino detrs de la biosntesis de la insulina en las clulas beta del pncreas, especficamente como
un precursor proinsulina, se determin por Don Steiner en 1967 (Steiner y James 1992). La estructura tridimensional de la
insulina fue resuelto en ltima instancia por Dorothy Crowfoot Hodgkin y sus colegas en 1969, utilizando mtodos
cristalogrficas de rayos X (Adams et al. 1969). Tambin fue la primera protena que se sintetiza en los microorganismos
de la tecnologa del ADN recombinante a finales del 1970. Esta apoy el diseo de anlogos de insulina con el fin de
optimizar el perfil farmacodinmico de la molcula con fines teraputicos. Como resultado, la insulina recombinante ha
reemplazado a la insulina purificada para fines teraputicos. Aqu, discutimos brevemente las caractersticas estructurales
y las relaciones estructura-funcin de la insulina.
La estructura de la insulina
Circulantes, y biolgicamente activo, la insulina es monomrica. Se compone de dos cadenas de polipptidos: la cadena A
tiene 21 aminocidos y la cadena B tiene 30 aminocidos (en seres humanos). Dos puentes disulfuro (residuos A7 a B7 y
A20 a B19) atan covalentemente las cadenas, y la cadena A contiene un puente disulfuro interno (residuos A6 a A11). En
particular, las posiciones de estos tres enlaces disulfuro son invariantes en formas de mamfero de la insulina. La
secuencia de aminocidos de ambas cadenas de polipptidos y las posiciones de puente disulfuro se muestran en panel 1.
A concentraciones micromolares, dimeriza de insulina, y en presencia de
zinc, que otros asociados en hexmeros.
La cadena A tiene una hlice amino-terminal (A1-A8) vinculado a una
hlice carboxi-terminal antiparalela (A12-A20). La cadena B tiene una
hlice central (B8-B19), flanqueado por amino- extendida y hebras carboxiterminal. Esta disposicin se denomina la conformacin "T". En la
estructura de 2-Zn, resueltos por Hodgkins y colegas (Adams et al. 1969),
los seis monmeros estn en la conformacin T (T6). Una alternativa "R"
existe conformacin donde la hlice cadena B se extiende desde el Nterminal (B1-B19, B8-B19 frente). En el hexmero 4-Zn, tres de los
monmeros estn en la forma T y tres se encuentran en la forma R (R3T3),
como resultado de una alta concentracin de cloruro de (Bentley et al.
1976). Existe una forma R6 en los cristales que contienen fenol
(Derewenda et al. 1989) y en solucin (Chang et al. 1997). Un equilibrio
alostrico controla la transicin TR (Bloom et al. 1997), que desempea un
papel importante en la formulacin de insulina teraputica donde se utiliza cloruro como un agente isotnico y fenol se
utiliza como un agente antimicrobiano.
La hormona tiene una estructura tridimensional compacto, que consta de tres hlices y tres puentes disulfuro conservados
(Panel 2). Este pliegue bsico est presente en todos los miembros de la familia de pptidos de insulina, a pesar de
secuencias divergentes. Un grupo de residuos hidrfobos que forman el ncleo de la protena pequea contribuye a la
estabilidad de la protena. Esto es an mayor por restriccin del esqueleto del polipptido por los puentes
disulfuro. Alrededor de su ncleo, el monmero tiene dos superficies no polares extensas. La primera es plana y en su
mayora aromtico, y es enterrado en la formacin de dmeros contribuyendo a una estructura de lmina beta
antiparalela. La otra superficie es ms amplia y est enterrado en la formacin hexmero. Curiosamente, la insulina utiliza
las mismas superficies para la unin a su receptor cognado que lo hace para auto-ensamblaje.

ESTRUCTURA DE LA INSULINA
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK279029/#_insulin-biosynthesis_toc-insulin-structure_
La estructura tridimensional de la insulina se ha estudiado en detalle en cristales por difraccin de rayos x y en la solucin
por Espectroscopia NMR. Dichos estudios han arrojado informacin valiosa sobre el plegamiento de la proinsulina y funcin
de la insulina. Como se mencion anteriormente, la insulina se cristaliz en forma rombodrica primero en 1926; y casi 10
aos ms tarde Scott aclarada la importancia de los iones de zinc y otros cationes divalentes en cristalizacin. En 1969 se
determin la estructura de la insulina hexamrica 2-Zn (6 T designado en la nomenclatura moderna) Dorothy C. Hodgkin y
compaeros de trabajo utilizando mtodos de rayos x; Esta estructura y ms tarde fue refinado a atmica resolucin. En la
actualidad existen varias formas de cristal de la insulina, definiendo tres familias estructural de hexamers (6 T, T 3 R f 3 y
R 6), dmeros (T 2) y los fragmentos monomricas libre de cinc. Estas familias se muestran en forma esquemtica en la
figura 5A y como modelos de cinta en la figura 5B; modelos del componente T-estado protmero y R-estado protmero se
muestran en la figura 6. La estructura de la solucin de insulina diseado monmeros y dmeros asemeja el estado T
cristalogrfico.
Figure 5 . Structural families of insulin hexamers. A. Una representacin esquemtica de los tres tipos de cinc insulina
hexamers, designado 6 T, T 3 R f 3 y R 6. B, representacin de cinta correspondiente de las estructuras cristalinas de tipo
salvaje. Los iones de zinc axial se muestran en azul grisceo. Las coordenadas fueron obtenidas de protena Databank
entradas 4INS, 1TRZ y 1ZNJ, respectivamente. Residuos B1-B8 exhiben un cambio en la estructura secundaria como se
muestra en negro. Protomers T-estado si no se muestran en rojo y R-estado protomers en azul. Para los modelos del
cilindro de la T-R-estado y protomers, vase la figura 6 abajo. Esta cifra es reimpreso por Ref con permiso de los autores.

El hexamer de insulina T 6 (MW ~ 36000 Da) se compone de seis molculas de

insulina dispuestas como tres unidades dimrica relacionadas por un triple eje de
simetra. Los dmeros (MW ~ 12000) poseen un eje de simetra pseudo doble, que es
perpendicular al eje de rotacin triple. Aunque cada protmero dentro de los dmeros
tiene estructura principal cadena similar, no son idnticas en el arreglo de ciertas
cadenas laterales, rompiendo la simetra doble. La diferencia ms obvia es que la
cadena lateral de Phe B25 se dobla hacia el ncleo hidrofbico en un protmero pero
hacia fuera en el otro. Dos tomos de Zn 2 + axiales mienten en el triple eje de
simetra de la hexamer; cada uno exhibe coordinacin octadrica por tres su B10 residuos y tres molculas de agua.
La estructura de la insulina T 6 define las superficies hidrofbicas expuestas al solvente y potencial vinculante de la
insulina. Esta caracterizacin ha sido apoyada por las estructuras de la insulina hexamer, dmero ingeniera y monmero
ingeniera solucin NMR. Muchas estructuras de rayos x adicionales de insulina, insulina derivados e insulinas de otras
especies, como el Atlntico babosas (Myxine glutinosa), una variante insulina que contiene una sustitucin (su B10 Asn)
que previene la formacin de enlace y hexamer de zinc. En la mayora de estos casos la insulina, o derivado, mantiene una
estructura terciaria en general que se corresponde con el protomers en la estructura T 6. Por esta razn el hexamer
insulina T 6 ampliamente sido empleado como la estructura de la insulina hospedante. Un tema emergente de tales
estudios es que la estructura cristalina clsica de la hormona libre (estado T) representa relaciones espaciales pertinentes
a la va plegable de proinsulina considerando que un subconjunto clave de tales relaciones son alterados o roto el
atascamiento del receptor. La relevancia del estado R cristalogrfico de atascamiento del receptor sigue siendo una fuente
de especulacin.
Figura 6. Estructuras clsicas de T y R de insulina. Modelos de cinta de
dmero TR basado en las estructuras cristalinas de cinc insulina hexamers. La
cadena B se muestra en una cadena en verde y negro. La posicin de Gly B8
se muestra como una bola roja en T-especficas del estado -turn (izquierda)
o hlice R-estado-especfico (derecha). Sustituciones de aminocidos D en
B8 estabilizan el estado T pero bloquean el receptor vinculante mientras que
sustituciones de aminocidos L desestabilizan el estado T pero pueden ser
altamente activas. La estructura de la insulina como un monmero de
ingeniera en la solucin asemeja el estado T. Esta cifra es reproducida con
permiso del autor del suplemento a Ref.
Insulina existe principalmente como monmero en bajas concentraciones (~
10-6 M) y forma dmeros en concentraciones superiores a pH neutro. En altas
concentraciones y en presencia de iones de zinc, insulina forma hexamrica
complejos. Comenzamos con una discusin sobre el monmero de insulina,
que es el estado de la molcula en el plasma circulante, y entonces discutir su autoensamblaje. Esta seccin culmina con
una descripcin de la RI y la evidencia para una novela conformacin enlazado a receptor de insulina.

ESTRUCTURA MONOMRICA
Las cadenas de A - y B de insulina (individualmente ilustrada en las figuras 7a
y b, respectivamente) exposicin extensa la estructura secundaria a pesar de
su limitada longitud (Figura 3). La cadena se compone de dos -segmentos
helicoidales (A1-A8 y A12-A19) que son casi antiparalelos. Estas hlices estn
conectadas por un giro no cannico (residuos A9-A12), trayendo a proximidad
de termini la cadena N y C. La cadena B (figura 7b) contiene central -hlice
(residuos B9-B19) flanqueado por puentes disulfuro (cystines A7-B7 y A20B19) y -gira (B7-B10 y B20-B23); residuos B1-B5 se extienden en el estado T.
Cada -vuelta contiene al menos un Gly conservado con ngulo diedro
positivo (residuos B8, B20 y B23). La B7-B10 -vuelta permite la cadena
lateral de su B5 para interactuar con la regin central de la cadena la
asociacin con cistena A7-B7. El B20-B23 -vuelta orienta el segmento cterminal de la cadena B (residuos B23-B30) en proximidad cercana y
antiparalelo a la central cadena B -hlice. Residuos B24-B28 tienen una
estructura -strand. Las cadenas laterales aromticas conservados de Phe
B24 y Tyr B26 estn en contacto con Leu B11, Val B12 y Leu B15 de la central
cadena B -hlice, definir una estructura Supersecundaria - vuelta - .
Figura 7. Las estructuras de la insulina A - y B-cadenas. La figura muestra
insulina uno-cadena (a) y la cadena B (b) segn lo determinado en el anlisis
de radiografa tridimensional del hexamer T 6 (insulina 2-Zn). Ambas cadenas
son consultado perpendicular al eje de simetra triple de la hexamer de
insulina (ver texto).
Formar parte de la - y B-cadena entierra a los tomos de azufre de cystines
A6-A11 y A20-B19, as como las cadenas laterales no polares de Ile A2, Val A3,
Leu A16, Tyr A19, Leu B6, B11 Leu y Leu B15. El borde del ncleo hidrofbico
en parte expone Val A3, Ile A13, Val B12, Val B18, Phe B24 y Tyr B26. Juntos,
estos residuos conservados contribuyen a la estabilidad de la estructura
nativa. Los ltimos residuos tambin contribuyen a la superficie de la
molcula que es parcialmente expuesta a solvente en el monmero e
implicados en la dimerizacin o hexamer Asamblea discutidos ms abajo.

La Phe conservado en posicin B25 es de especial inters. Considerando que, en el estado T enlaces del su cadena
principal amida grupo hidrgeno con el oxgeno del carbonilo de Tyr A19, la cadena lateral puede adoptar diversas
orientaciones (Figura 8). En la molcula de Phe B25 est doblado contra el ncleo hidrofbico de la misma protmero pero
en molcula II el anillo aromtico es desplazar hacia afuera. La orientacin actual de Phe B25 en solucin es
probablemente una conformacin intermedia. Molculas de I y II tambin muestran notables diferencias en la estructura
uno-cadena. Tambin se observan diferencias sutiles entre las dos molculas del dmero en el patrn de hidrgeno en el
N-terminal uno-cadena -hlice (A1-A8). Estas diferencias se acentan en la transicin de TR (abajo) y pueden presagiar el
mecanismo de ajuste inducido el atascamiento del receptor. Estos resultados ilustran el principio general de que la insulina
(como otras protenas globulares) exhibe estructura altamente organizada que no obstante puede sufrir ajustes en
Asamblea o interacciones con otras protenas o ligandos.
Figura 8. Dibujo estructural de la interfaz de monmero-monmero en el dmero insulina. El dmero se considera doble eje
cristalogrfico. Las cadenas laterales de residuos Val B12, B15 Leu, Phe B24, Phe B25 y Tyr B26 que forman el ncleo del
dimer insulina se ilustran en las figuras (no clasificados: B28 Pro). Se forman cuatro enlaces de hidrgeno de la cadena
principal de los cadena principal tomos de Phe B24 y Tyr B26 se ilustran como las lneas punteadas. En el panel (b) es una
vista ampliada de la interfaz de dmero en el panel (a).