UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS E.A. P.

INGENIERIA AGROINDUSTRIAL ASIGNATURA: BIOQUIMICA SEMESTRE 2014-I

PRCTICA 4 EVALUACION DE LAS ENZIMAS OXIDO REDUCTASAS

I.

OBJETIVO Evaluar la accin cataltica de las oxido reductasas en diferentes muestras biolgicas INTRODUCCIN
En el organismo vivo el fenmeno de la oxidoreduccin cumple uno de los papeles ms importantes proveer energa. Las enzimas que catalizan estas reacciones se denominan oxidoreductasa; un grupo importante son las deshidrogenasas.y las reductasas. El sustrato que se oxida se considera como donador de H o electrones y aceptor pueden ser sustancias naturales (Coenzimas NAD, FAD, etc). En aquellos casos cuando el aceptor es el oxgeno se emple el termino oxidasa y si el oxgeno en el curso de la reaccin, se incluye en la composicin del sustrato , el enzima se le denomnia oxigenasa. La peroxidasa cataliza el H2O2 en calidad de aceptor y catalasa, ---el enzima que cataliza las reacciones donde el par donador-aceptor lo constituyen dos molculas de H2O2.

II.

PRUEBA DE LA LACTOPEROXIDASA La enzima lactoperoxidasa es un componente natural del suero lcteo, se encuentra en la leche en cantidades variables entre 10-40 ug/mL, dependiendo de la especie de mamferos y el estado fisiolgico de la lactacin. Las Lactoperoxidasas transfieren oxigeno desde perxido de hidrogeno (H 2O2) a otras sustancias fcilmente oxidables. Esta enzima es inactivada si la leche es calentada a 80C por unos pocos segundos, un hecho que puede ser usado para demostrar la presencia o la ausencia de peroxidasa en la leche y as comprobar si realmente una temperatura de pasteurizacin encima de 80 C ha sido alcanzada

La peroxidasa es una enzima que cataliza la oxidacin de ciertos compuestos dadores de hidrgeno, como fenoles (guayacol, pirogalol) y aminas aromticas (o-fenilendiamina) por medio de perxidos ( ). El substrato oxidable ms usado es el guayacol, que es oxidado a un complejo coloreado de tetraguayacol en presencia de peroxidasa.

La peroxidasa puede ser inactivada por el calor, siendo una de las que precisa mayor temperatura y ms tiempo para su inactivacin. Se puede regenerar enzimtica. Este fenmeno consiste en que al inactivarla por medio del calor recupera parcialmente su actividad despus de un cierto tiempo. Esto ha sido explicado, aduciendo que la fraccin proteica de la enzima sufre una desnaturalizacin slo parcial, con prdida de su estructura terciaria, si el calor se aplica un tiempo muy corto, producindose luego una reversin de la protena a su estado normal.

PRUEBA DE LA ALDEHDO-REDUCTASA. FUNDAMENTO La enzima causante es la xantino-O-aldehdo-deshidrogenasa, que cataliza la oxidacin de xantina y de diversos aldehdos a cido rico y los respectivos cidos carbnicos; se trata de una flavoprotena con molibdeno. La reaccin se basa en que la deshidrogenasa, en presencia de HCHO, descolora al azul de metileno como aceptor de H. Se emplea el azul de metileno para evidenciar la actividad de la deshidrogenasa. Este colorante se recibe los protones y electrones provenientes de El cual pasa de su forma oxidada (azul) a la forma reducida (incoloro)

PRUEBA DE LA CATALASA Fundamento . La catalasa tiene como funcin la destruccin del H2O2, producto de varias oxidaciones biolgicas, para ser convertido en H2O y O2. La deshidrogenasa lctica cataliza una reaccin redox, en la que el piruvato es reducido a lactato gracias a la oxidacin de NADH a NAD+. La reaccin es reversible. El objetivo de esta prctica es observar la reaccin de la catalasa y el efecto de algunos inhibidores como cianuro, nitrato de plomo o calentamiento a altas temperaturas, adems de observar y conocer la reaccin de la deshidrogenasa lctica.

III. PARTE EXPERIMENTAL III.1. MATERIALES Tubos de prueba. 2 pipetas de 1 mL y de 5 mL, bombilla succionadora Gradilla o Matraz aforado, REACTIVOS Azul de metileno, formaldehido, agua destilada, guayacol, solucin de perxido de hidrgeno. Hgado de pollo. Papa, leche de establo, leche pasteurizada, III.2. PROCEDIMIENTO
EXPERIMENTO 1: PRUEBA DE LA LACTOPEROXIDASA. Muestra con leche 1. Medir 3 mL de leche, luego agregar 2 mL de guayacol lquido al 1% en mezcla de agua y etanol (1+1) 2. Aadir 3 gotas de agua oxigenada y mezclar. Dejar en reposo 5 minutos 3. Interpretacin: Observar color rojizo o salmn en leche cruda o si el color es reducida indica deficiente pasteurizacin

EXPERIMENTO 2 PRUEBA DE LA PEROXIDASA Muestra. Homogenizado de papa o de rbano 1. En dos tubos de ensayo agregar 2. En el primero 1 ml de homogenizado de papa y en el segundo la muestra de rbano 3. Ambos tubos aadir 5 gotas de solucin de guayacol y una gota de perxido de hidrgeno. Observar las coloraciones caractersticas EXPERIMENTO 3: PRUEBA DE LA ALDEHDO-REDUCTASA. 1. 2. 3. 4. 5. En 2 tubos de ensayo, rotular tubo A y tubo B, ambos colocar 5 ml de leche Al tubo A aadir 1 ml de agua y al tubo B 1 ml de formaldehido A ambos tubos agregar 0.5 ml de Azul de metileno Cubrir con papel parafilm (proteger la mezcla del contacto con el oxgeno del aire) Colocar los tubos en bao de agua a 37 C. Despus de 5 a 10 min comparar el cambio de coloracin en ambas muestras. Luego de agitar fuertemente el tubo de ensayo, nuevamente observar la variacin de color Esta enzima se encuentra slo en la leche de vaca. EXPERIMENTO 4: PRUEBA DE LA CATALASA Colocar en un tubo de ensayo 0.3 g de homogenizado de hgado de pollo fresco Aada 2 mL de agua oxigenada al tubo. Tome el tiempo inicial al aadir el agua oxigenada y el tiempo cuando empiece a producirse las burbujas.

1. 2.

IV. REPORTE DE RESULTADOS V. CUESTIONARIO 1. Explique la especificidad de las enzimas 2. Defina que son aceptores y donadores en las reacciones enzimticas 3. Mencione el pI de seis protenas de alimentos 4. Realice un tabla estableciendo las propiedades bioqumicas de las enzimas En estudio: catalasa, lactoperoxidasa, aldehdo reductasa (Km. Estructura de la enzimas, peso molecular, etc) VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 1. Coultate T.P Qumica y Bioqumica de los alimentos. 3 edicin Edit Acribia Zaragoza-Espaa.2000 2. Cheftel J.C y Cheftel H. Introduccin a la bioqumica y tecnologa de los alimentos, Vol I, Editorial Acribia, edicin 1era, Espaa 2000, p.43 3. Montgomery R. Bioquimica. Casos y textos, EditorialHarcourt Brace, edicin 6ta, Madrid. 2008.

REPORTE DE RESULTADOS

PRCTICA 4 EVALUACION DE LAS ENZIMAS OXIDO REDUCTASAS EN MATERIAL BIOLOGICO

Apellidos y Nombres:

Fecha: ..

1. Los resultados antelos en la siguiente tabla Material Enzima analizada Sustrato Dador Aceptor productos Observacin de la presencia de la enzima

2.

Esquematice sus resultados

Experimento 1

Experimento 3

Experimento 2

Experimento 4