PRÁCTICA DE LABORATORIO # 4: FACTORES QUE AFECTAN LA

ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS

DOCENTE: Claudia Margarita Mendoza

GRUPO: 3

NOMBRES: STIVENS MEDINA MUÑOZ CODIGO: 120543

PEDRO LUIS MOLINA CODIGO: 0120043

1. OBJETIVOS
Explorar el efecto de la temperatura, de la variación del pH del medio y de la
presencia de cianuro, sobre la actividad de la Peroxidasa.

2. MARCO TEORICO

Las enzimas suelen reconocerse como las unidades funcionales del metabolismo
celular. Las enzimas aceleran millones de veces las reacciones esto se debe a que
disminuyen la energía de activación, este proceso ocurre en el sitio activo de la
enzima de manera que al unirse enzima con el sustrato forma el complejo enzima-
sustrato “E+S” para luego liberar el producto “S”. Esta reacción enzimática tienen
la capacidad de recuperar su estado inicial tras cada ciclo catalítico además estos
mecanismos puede ser regulados o adaptados a las circunstancias en función de las
necesidades metabólicas de cada momento. Las enzimas son proteínas globulares,
específicas en cuanto al sustrato y a la reacción que catalizan, sensibles a las
variaciones de temperatura y de pH y pueden activarse o inactivarse por agentes
diversos.
Dentro del proceso catalítico existen factores que influyen en el proceso de la
reacción, tales como: el pH, la concentración y la temperatura. Para demostrar lo
anterior se opta por realzar un experimento por medio del uso de hojas de espinaca,
pues estas contienen la enzima óxido-reductasa que cataliza la reducción del
Peróxido de Hidrógeno a expensas de un sustrato rico en electrones. Se denomina
 Peroxidasa y, a través de su grupo prostético (hemina) que contiene hierro, se
combina con cianuro, lo que traduce en inhibición. La ecuación general puede
representarse así:

H 2 O 2 + AH 2 2 H 2 O + A

3. METODOLOGÍA

EXPERIMENTO # 1: Detección de la actividad de la Peroxidasa

Materiales:
a. Mortero de porcelana
b. Hojas de espinaca
c. Vaso de precipitados
d. Dos tubos de ensayo
e. Agua destilada
f. Pipeta
g. Guayacol al 1%
h. Peróxido de Hidrógeno (2%)

Paso 1: use el vaso de precipitados para medir y añadir 10 ml de agua destilada al mortero

Paso 2: por medio de un mortero triture la espinaca para extraer el líquido (macerado).

Paso 4: vierta aproximadamente 1 ml del macerado en los dos tubos de ensayo.

Paso 5: agregue 1 ml de Guayacol al 1 % y 1 ml de Peróxido de Hidrógeno al (2%) en un

tubo de ensayo agite y observe la reacción.

EXPERIMENTO # 2: Efecto de la temperatura

Materiales:

a. 3 tubos de ensayo
b. Estufa y recipiente con agua
c. Termómetro
d. Macerado vegetal (espinaca)
e. Peróxido de Hidrógeno al 2%.
f. Guayacol al 1%

Paso 1: vierta 1 ml de macerado vegetal (espinaca) en los tres tubos de ensayo y

enumérelos.
Paso 2: en el primer tubo de ensayo realice el baño de maría a 100°c por un minuto, luego
agregue 1 mil de peróxido de hidrogeno al 2% y 1 mil de guayacol al 1% agite y observe.

Paso 3: en el segundo tubo de ensayo realice el baño serológico a 37°c por un minuto,
luego agregue 1 mil de peróxido de hidrogeno al 2% y 1 mil de guayacol al 1% agite y
observe.

Paso 4: en el tercer tubo de ensayo a temperatura ambiente agregue 1 mil de peróxido de

hidrogeno al 2% y 1 mil de guayacol al 1% agite y observe.

EXPERIMENTO # 3: Efecto de la variación del pH

Materiales:

a. Buffer con pH 4
b. Buffer con pH 7
c. Buffer con pH 10
d. Buffer con pH 12
e. Macerado (espinaca)
f. Peróxido de Hidrógeno al 2%.
g. Guayacol al 1%
h. 4 tubos de ensayo
i. Pipeta

Paso 1: se añade 1 ml de macerado de espinaca a los cuatro tubos de ensayo

Paso 2: por medio de una pipeta se añade 1 mil de cada uno de los dos sustratos Peróxido
de Hidrógeno al 2% y Guayacol al 1% a los cuatro tubos de ensayo.

Paso 3: por medio de una pipeta en el primer tubo de ensayo se adiciona 1 ml de solución
buffer o tampón con pH 4, luego se agita y observa la reacción.

Paso 4: en el segundo tubo de ensayo se adiciona 1 ml de solución tampón con pH 7, luego

se agita y observa la reacción.

Paso 5: en el tercer tubo de ensayo se adiciona 1 ml de solución tampón con pH 10, luego
se agita y observa la reacción.

Paso 6: en el cuarto tubo de ensayo se adiciona 1 ml de solución tampón con pH 12, luego
se agita y observa la reacción.

EXPERIMENTO # 4: Efecto del cianuro

Materiales:

a. Macerado (espinaca)
b. 1 tubo de ensayo
c. Guayacol al 1%
d. Peróxido de Hidrógeno al 2%.
e. Cianuro de Potasio al 0.5%

Paso 1: adicione 1 ml de macerado de espinaca a un tubo de ensayo

Paso 2: adicione al tubo de ensayo 1 ml de Cianuro de potasio al 0.5%

Paso 3: adicione 1 ml de Peróxido de hidrógeno al 2% y 1 ml de Cianuro de potasio al

0.5% al tubo de ensayo.

4. RESULTADOS

Experimento # 1

Figura 1

Nota. Detección de la actividad de la enzima peroxidasa. Autoría propia 2021

En la figura 1, al agregar 1 ml de cada uno de los dos sustratos peróxido de hidrogeno y

guayacol en menos de 5 segundos la tonalidad que en un principio era verde paso hacer de
color rojo ladrillo. Esta reacción se debe a que la enzima peroxidasa cataliza el proceso de
óxido-reducción de una gran variedad de sustratos orgánicos e inorgánicos por medio del
poder oxidativo del peróxido de hidrogeno (H2O2). El peróxido de hidrogeno es conocido
como agua oxigenada de manera que es muy inestable y se descompone rápidamente
formando agua y oxígeno a temperatura ambiente, por lo tanto, es un precursor para que los
fenoles como el guayacol ante la presencia de la enzima peroxidasa promueve rápidamente
la oxidación formando el color rojo ladrillo como producto final.

Experimento # 2

Figura 2

Nota. Efecto de la temperatura e la peroxidasa. Autoría propia 2021

Figura 2, se observó un cambio notable en la coloración de las reacciones al ser sometidas

a distintas temperatura tales como a temperatura ambiente, 37°C y 100°C. La catálisis
enzimática a temperatura ambiente reacciono rápidamente formando un color rojo ladrillo
mientras que la enzima a temperatura de 37°C reacciono un poco más lento dando lugar a
un color pardo oscuro. Sin embargo, la enzima que se sometió a 100°C por medio del baño
maría no reacciono de la misma manera a comparación de sus antecesoras pues los residuos
de macerado donde se encontraba la enzima se condesaron en el medio acuoso, esto se debe
a que la enzima es una proteína y al ser sometida a condiciones de altas temperaturas
(100°C) se desnaturalizo y por ende no ocurrió ninguna reacción catalítica.

Esta enzima peroxidasa es muy determinante en la calidad de las hortalizas y las frutas de
tipo industrial, pues estas deben ser inactivadas por medio del proceso de escaldado antes
de su congelación, secado o enlatado. Según (CASP y ABRIL, 1999) el escaldado consiste
en mantener el producto algunos minutos (1,5 a 4 min) a una temperatura próxima a 95-
100ºC. Los alimentos congelados o deshidratados sin escaldar experimentan cambios
relativamente rápidos en las propiedades de calidad como color, sabor, textura y valor
nutricional debido a la continua actividad de las enzimas (SHARMA et al., 2003).

5. CONCLUSIONES

 La enzima peroxidasa tiene la capacidad de producir oxido-reducción en

compuestos fenólicos como el guayacol por medio del peróxido de hidrogeno
 A altas temperaturas por encima o igual a 100°C la enzima peroxidasa se
desnaturaliza

6. BIBLIOGRAFÍA

Ramírez Becerra C. (2009); Estudio Experimental de la Desactivación de la Enzima

Peroxidasa Durante el Proceso de Escaldado de Papas (Solanum tuberosum) y el
Almacenamiento a 18ºC; recuperado
de: .http://cybertesis.uach.cl/tesis/uach/2009/far173e/doc/far173e.pdf

Baño cerologico

BIBLIOGRAFIA

J.A Lozano, et al. 2005. Bioquímica y Biología molecular para las ciencias de la salud. Pdf