UNIVERSIDAD DE LOS ANDES

FACULTAD DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO DE QUIMICA
LABORATORIO DE QUMICA ORGNICA I -A

EXTRACCION DE LA CAFEINA DEL TE

INTRODUCCION
La cafena ha sido consumida durante siglos a pesar de los intentos repetidos de
prohibir su uso por motivos morales, econmicos, mdicos o polticos. El
descubrimiento del caf tuvo lugar en el siglo IX en Arabia. Se cultiv por primera vez
en Etiopa, de la misma forma que el t en China y el cacao en Amrica del Sur. En el
siglo XV se desarroll la tcnica de tostar y moler los granos de caf y el consumo de
los productos con cafena se expandi rpidamente por todo el mundo.
La cafena es una sustancia que se encuentra en ciertas plantas naturales y puede
producirse sintticamente en laboratorio. Se localiza en cantidades variables en las
semillas, las hojas y los frutos de algunas plantas, donde acta como un pesticida
natural que paraliza y mata ciertos insectos que se alimentan de las plantas. Se
encuentra en el caf, t, chocolate, yoco, cacao y, en bebidas de cola y energticas.
Tambin se encuentran en bebidas que contienen guaran y a menudo como
ingrediente en los suplementos de prdida de peso y energizantes, las bebidas
deportivas, preparaciones herbales y analgsicos.
El caf, t y los refrescos son las fuentes de cafena consumidas con mayor
frecuencia. Las dosis presentes en los suplementos, las bebidas y las medicinas de
venta sin receta no varan mucho. Los expertos recomiendan generalmente limitar la
ingesta en torno a 300 mg al da.
La cafena es un polvo inodoro, incoloro y amargo. Friedrich Ferdinand Runge la aisl
del caf en 1819 y del t en 1827, pero su estructura qumica no se describi hasta
1875 por E. Fischer. La cafena (1,3,7-trimetilxantina) y los otros alcaloides
metilxantnicos,

como

la

teobromina

(3,7-dimetilxantina)

la

teofilina

(1,3-

dimetilxantina), son derivados del grupo de las xantinas, que a su vez se derivan de
las purinas. Tambin es conocida por el nombre tena, guaranna o matena. Es
tambin un derivado de purina y por lo tanto est relacionado con las bases tipo
purinas de los cidos nucleicos y con el cido rico. Sus estructuras qumicas se
muestran a continuacin:

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*
Numeracin de una Xantina

La cafena es la sustancia psicoactiva ms ampliamente utilizada en el mundo, y su

consumo para favorecer la alerta y aliviar el cansancio no produce dao en la mayora
de las personas. Aunque ms dbil que otros estimulantes, la cafena comparte ciertos
sntomas de la intoxicacin, tolerancia y abstinencia causados por esas sustancias en
algunos individuos.
La cafena es un estimulante del sistema nervioso central relativamente dbil. Tiene
efecto diurtico y estimulante del miocardio. Relaja los msculos lisos, favorece la
vasodilatacin, contrae las arterias cerebrales, aumenta la secrecin cida del
estmago y potencia la contraccin del msculo esqueltico. Las dosis orales de 200
mg pueden elevar el humor, causar insomnio, aumentar la irritabilidad, inducir
ansiedad y disminuir el cansancio.

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La ingesta crnica o intensa, de 500 mg o ms al da, causa intoxicacin que se

manifiesta con nerviosismo, insomnio, hiperacidez gstrica, contracciones musculares,
confusin, taquicardia o arritmia cardaca y agitacin psicomotriz. La ingesta de una
dosis letal es extremadamente rara, pero puede ocurrir con frmacos que contienen
cafena o con la infesta oral de 10 g.
Se ha descrito dependencia fsica y psicolgica con el consumo crnico de ms de
500 mg/da. Sin embargo, la dependencia puede ocurrir en algunos individuos con
dosis menores. Los sntomas de abstinencia comunicados con mayor frecuencia
incluyen cefalea, irritabilidad, somnolencia y cansancio, que aparecen entre 12-24
horas despus de suspender la ingesta.
PRESENCIA Y CONTENIDO DE CAFEINA EN ALGUNAS PREPARACIONES
COMUNES
Se consigue en las plantas conocidas como caf y t. Tambin esta presente en la
nuez de cola, en las hojas de mate, en las semillas de guaran y en pequeas
cantidades en los granos de cacao. El contenido de cafena en los granos de caf es
de aproximadamente 1-2 % en peso y en las hojas de t aproximadamente 2-4 %.
Sin embargo, debido a las diferencias en los mtodos de elaboracin, una taza de caf
de tamao promedio contiene aproximadamente el doble de cafena que el de una
taza de t.
El contenido de cafena en la bebidas de cola oscila entre 40 50 mg por cada envase
de 12 onzas. Muchos analgsicos comerciales tambin contienen cafena para
contrarrestar el efecto adormecedor producido por los ingredientes activos de tales
preparaciones.

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USOS Y EFECTOS TOXICOS DE LA CAFEINA

Recientemente ha existido preocupacin debido a que, estructuralmente hablando, la
cafena se asemeja a las bases tipo purina, adenina y guanina, que representan dos
de las cinco bases principales que el organismo usa para formar los cidos nucleicos
DNA y RNA. Se teme que la sustitucin de cafena por adenina o guanina en
cualquiera de estas sustancias de importancia gentica podra conducir a defectos
cromosmicos. El consumo excesivo de t puede causar deficiencia de vitamina B1
(tiamina). Se sugiere que los taninos del t pueden formar un complejo con la tiamina,
inutilizndola para su funcin metablica.
La cafena tambin puede reducir los niveles de la enzima transquetolaza, la cual
depende de la presencia de tiamina para su actividad. Los niveles bajos de esta
enzima podran producir los mismos sntomas que los bajos niveles de tiamina. La
cafena presenta una cintica de eliminacin de tipo Michaelis-Menten, resultando en
una farmacocintica no lineal a dosis altas por saturacin enzimtica. El isoenzima del
citrocromo P-450 (CYP) heptico subfamilia 1A, gen 2 (CYP1A2) metaboliza por
desmetilacin la mayora de la cafena (95%), transformndola en paraxantina (85%),
teobromina (10%) y teofilina (5%). Posteriormente se metaboliza tambin por la
CYP1A2 en monoxantinas que sern sustrato de la xantinaoxidasa. La Nacetiltransferasa-2 metaboliza la paraxantina a AFMU. Intervienen en forma minoritaria
otras enzimas como la CYP2E1 y CYP3A3. Se han descrito hasta 25 metabolitos. Slo
entre 1-2% de la dosis ingerida de cafena se excreta sin cambios en orina. El
mecanismo de la metabolizacin se muestra a continuacin.

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PROCESO DE AISLAMIENTO DE LA CAFEINA

En este experimento se asla la cafena de las hojas del t. El principal problema con
el aislamiento es que la cafena no se encuentra sola en las hojas de t, sino que se
encuentra acompaado de otras sustancias naturales, de las cuales debe ser
separada. El principal componente de estas hojas de t es la celulosa la cual
constituye el principal material estructural de todas las plantas. La celulosa es un
polmero de la glucosa.
Por otra parte, la cafena es soluble en agua y es uno de los componentes principales
que se extraen en la solucin que denominamos t. Conjuntamente con la cafena se
extraen algunos otros compuestos, entre ellos los llamados taninos. Los taninos
tambin se disuelven en agua caliente usada para tratar las hojas de t. El trmino
tanino no se refiere a un solo compuesto homogneo o a sustancias que poseen
estructura qumica similar. Se refiere a una clase de compuestos que tienen ciertas
propiedades en comn. Los taninos son compuestos fenlicos que tienen pesos
moleculares entre 500 y 3000 g/mol y se usan ampliamente para tratar cueros, en la
manufactura de tintas, papel y seda, para clarificar vino y cerveza y en los procesos
fotogrficos.
Este tipo de compuestos tienen la propiedad de precipitar alcaloides y protenas que
se encuentran disueltas en soluciones acuosas. Se dividen en dos clases:
hidrlizables, y condensados o no hidrlizables. Los taninos del primer tipo son steres
de un sacrido usualmente glucosa, con una o mas unidades de cido
trihidroxibencencarboxlico (cido glico). Representan estructuras en las cuales
algunos de los grupos hidroxilo de la glucosa han sido esterificados por grupos
especficos. Producen glucosa y cido glico cuando se hidrolizan. Los taninos no
hidrlizables que se encuentran en el t son polmeros de condensacin de la
catequina, derivados de los flavonoides. Estos compuestos no presentan uniformidad
en su estructura. Las molculas de catequina se encuentran usualmente enlazadas en
las posiciones 4 y 8.
Taninos hidrolizables
El ms estudiado es pentagaloil glucosa (PGG), al que se le reconoce cierta actividad
anti cancergena, antidiabtica y antioxidante en modelos experimentales in vitro. La
actividad anti cancergena in vivo de la PGG se ha probado para cncer de prstata y
pulmn. En ambos padecimientos, el suministro de PGG en dosis de 4 a 25 mg/kg de

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rata inhibe factores de crecimiento tumoral y vascular. No solo impide el crecimiento

de tumores, sino tambin disminuye su tamao, impidiendo procesos de angiognesis
(crecimiento vascular muy comn en metstasis, y la supresin de la expresin de
oncoprotenas. Otros estudios exhiben a estos taninos con actividad antitumoral contra
sarcomas. El efecto anti diabtico fue probado con una variedad -PGG en adipocitos,
donde se observ que el tanino tena un efecto muy similar al de la insulina, puesto
que se una a los receptores especficos de insulina de la membrana celular,
favoreciendo el transporte de la glucosa al interior de la clula, aun en ausencia de
esta hormona. Este resultado fue comprobado in vivo en ratones diabticos y obesos,
donde la administracin de la misma PGG, provoc mayor resistencia a la glucosa y
bajos niveles en sangre.
En cuanto a su actividad como antioxidante, en una concentracin de 100 g/mL, la
PGG fue capaz de neutralizar in vitro especies altamente reactivas, como el
superxido y radical hidroxilo, as como disminuir la peroxidacin de lpidos de
membranas celulares. Cabe mencionar que a concentraciones mayores, de 200-400
g/mL, no se observa el mismo efecto. En este contexto, se observa una importante
accin biolgica del tanino hidrolizable PGG que puede representar una actividad alta
a muy bajas concentraciones. Es importante considerar, adems, que los efectos
fueron observados in vitro, por lo que, aunque estos estudios proporcionan una buena
idea de su mecanismo de accin, muchas veces no reflejan del todo su actividad
biolgica. Aun as, es importante llevar a cabo este tipo de estudios bsicos que
sugieran el mecanismo de accin y permitan tener bases para plantear posteriores
estudios que consideren intervenciones mdicas controladas con estas sustancias
purificadas, o bien, con alimentos ricos en ellas.

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Taninos condensados.
Los taninos condensados han sido ms estudiados respecto a su actividad
antioxidante, adems de que se ha reportado que poseen beneficios a la salud por su
actividad

antibacterial

bacteriosttico,

anticarcinognica,

inhibidora

de

la

peroxidacin lipdica, y de la agregacin plaquetaria relacionada a la formacin de

trombos en sistema circulatorio. In vivo se ha observado el efecto bacteriosttico del
jugo de arndano, atribuido a los taninos condensados presentes. El jugo de arndano
no solo mantiene saludable el tracto urinario por la acidificacin del medio, sino
adems las proantocianidinas presentes en el jugo exhiben actividad antibacterial,
impidiendo la adhesin de E. coli a superficies celulares del tracto urinario. El estudio
de la actividad antioxidante de taninos condensados in vitro e in vivo demuestra que
son secuestradores efectivos de radicales libres, que inhiben la oxidacin de tejidos
mejor que la vitamina C, vitamina E y -caroteno. In vitro, se ha demostrado que los
taninos condensados tienen una preferencia por neutralizar el radical libre hidroxilo
(OH). As mismo, se demostr que tienen la capacidad de actuar como inhibidores no
competitivos de la enzima xantina oxidasa, una de las mayores generadoras de
radicales libres en el metabolismo celular
.
Por ltimo, la actividad antioxidante de taninos condensados tiene la capacidad de
evitar la oxidacin de lipoprotenas de baja densidad (LDL) y por ello inhibe la
formacin de trombosis en personas con padecimientos cardiacos como la

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aterosclerosis. Otros estudios sugieren que la administracin de extracto de semilla de

uva tiene efecto hipocolesterolemiante en modelos animales, especficamente
disminuye las concentraciones de LDL en plasma y aumenta las lipoprotenas de alta
densidad (HDL) conocidas como colesterol bueno
.
No cabe duda de la actividad antioxidante que taninos condensados exhiben in vivo e
in vitro, de tal manera que se podra considerar recomendable incluir un buen aporte
de estos taninos en la dieta para gozar de los beneficios a la salud que van
relacionados con su capacidad antioxidante.
Algunos de estos beneficios pueden ser la inhibicin de la oxidacin lipdica, as como
su efecto anti carcinognico, que va muy ligado a prevenir daos al ADN causados por
radicales libres, y el posterior desarrollo de clulas mutantes o cancergenas. Sin
embargo, se debe mencionar que las intervenciones que observaron estos resultados
tan provechosos sobre la salud han sido en modelos animales y no en intervenciones
clnicas con seres humanos. Por otra parte, las dosis suministradas son ms altas que
las que se pueden obtener directamente de fuentes vegetales presentes en la dieta de
un individuo promedio.

Cuando los taninos son extrados en agua caliente, los del tipo hidrolizable son
parcialmente hidrolizados lo cual significa que se puede encontrar cido glico libre en
la solucin acuosa del t. Los taninos debido a sus grupos fenlicos y el cido glico
debido a sus grupos carboxilo son compuestos que presentan un grado de acidez
apreciable.

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Si a esta solucin se le agrega una base tal como carbonato de sodio o hidrxido de
sodio, se forman sales inicas de calcio o de sodio de estos compuestos cidos,
fcilmente solubles en agua caliente. La cafena puede extraerse entonces en un
solvente orgnico insoluble en agua tal como el diclorometano, ya que tanto las sales
inicas de calcio del cido glico como los taninos no son solubles en este solvente
orgnico y permanecen disueltos en la fase acuosa, liberando la cafena.
La extraccin de las hojas de t directamente con solventes no polares
(diclorometano) para remover la cafena produce pobres resultados puesto que esta se
encuentra en la planta como un complejo parcialmente inico que no es muy soluble
en solventes apolares.
El color marrn de la solucin de t se debe a los pigmentos de flavonoides y clorofilas
y tambin a sus respectivos productos de oxidacin. An cuando las clorofilas son
solubles en diclorometano, la gran parte de las otras sustancias componentes de las
hojas de t no lo son. De esta manera, la extraccin con diclorometano de la solucin
bsica de t remueve la cafena prcticamente pura.
El diclorometano es fcilmente removido por evaporacin, calentando la solucin que
contiene el extracto en un bao de vapor dentro de una campana extractora de gases,
o por destilacin ya que su punto de ebullicin es suficientemente bajo. La aplicacin
de alguna de estas tcnicas deja como residuo la cafena cruda. La cafena se purifica
entonces por recristalizacin o por sublimacin.
El diclorometano es un solvente que tiene una toxicidad significativa y se sospecha
que es un compuesto cancergeno en humanos. No intente respirar los vapores de
este solvente. Los procedimientos que involucran el uso de diclorometano deben
realizarse en el interior de la campana extractora de gases.
Cuando se usa un solvente de bajo punto de ebullicin tal como el ter etlico (35 C) o
diclorometano (41C), la presin en el interior del embudo cerrado se incrementa como
resultado de la evaporacin del solvente a la temperatura ambiente. Por esta razn es
esencial permitir la salida de estos gases para liberar la presin interna del embudo.

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INSTRUCCIONES ESPECIALES
Para llevar a cabo este experimento el estudiante deber leer las tcnicas
relacionadas con la filtracin por succin, filtracin por gravedad, extraccin con
solventes (uso de embudo de separacin), uso de agentes desecantes y sublimacin.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Caliente a ebullicin 100 mL de agua en un vaso de precipitado de 250 mL, coloque 3
bolsitas de t negro de aproximadamente 2 g cada una de tal manera que estas
queden sumergidas en el fondo del recipiente, pero al mismo tiempo colgadas hacia
fuera. Permita que las bolsas permanezcan en contacto con el agua caliente por un
minuto. Retire las bolsas de t y colquelas entre dos vidrios de reloj.
Presiones las bolsas de t hasta que el exceso de solucin sea exprimido y devuelto al
envase original. Descarte las bolsas de t. Enfre la solucin de t hasta temperatura
ambiente usando bao de agua hielo.
Trasvase el lquido a un embudo de separacin y extrigalo tres veces con porciones
sucesivas de 20 mL de diclorometano. Agite la mezcla rpidamente en forma vigorosa
por aproximadamente un minuto. Las capas se separaran despus de reposar por
algunos minutos, aun cuando se podra formar alguna emulsin en la interfase de las
capas orgnica y acuosa.
Si esto sucede, intente romper la emulsin haciendo girar el embudo suavemente,
sujeto por el vstago en la parte inferior por el cuello o quebrando la emulsin agitando
la interfase con una varilla de vidrio. Espere entre dos y cuatro minutos. Si estos
procedimientos no funcionan agregue 10 mL de solucin acuosa saturada de cloruro
de sodio, agite y separe las fases.
Separe la capa orgnica directamente desde el embudo de separacin recibindola en
una fiola limpia. Trasvase la capa de diclorometano a un embudo de separacin y
lvela dos veces con 20 mL de solucin fra de hidrxido de sodio 6M y una vez con
20 mL de agua destilada. Separe la fase orgnica y squela con una capa de sulfato
de sodio anhdrido.

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La fase orgnica es separada por filtracin por gravedad. La capa de diclorometano se

evapora por calentamiento en un bao de Mara o usando un rotaevaporador. La
cafena cruda se puede recristalizar en la menor cantidad de acetona o agua caliente.
SUBLIMACION DE LA CAFEINA
Finalmente la cafena puede ser purificada por sublimacin. Arme un aparato de
sublimacin consistente en un tubo de ensayo con salida lateral y dedo fro. Coloque
parte de la cafena al fondo del tubo de ensayo y conctele el dedo fro ajustando el
sistema por medio de un tapn de goma que se fija al tubo de ensayo.
Coloque mangueras de goma al dedo frio y haga pasar agua por el interior del mismo.
Fije el sistema verticalmente con una pinza a un soporte universal y conctelo a un
sistema de vaco. Abra la llave de agua del sistema de vaco y presione el dedo fro
dentro del tubo de ensayo hasta que se obtenga un buen vaco interior. Cuando se
estime que existe un buen vaco en el sistema, caliente la cafena suave y
cuidadosamente con una llama pequea para sublimar la cafena. Sostenga el
mechero en su mano y aplique calor moviendo la llama por los alrededores del fondo
del tubo. Si la mezcla empieza a fundir, retire la llama por unos segundos antes de
comenzar nuevamente el calentamiento. Los cristales de cafena sublimado se
adhieren al dedo frio. Cuando la sublimacin se haya completado, retire el mechero y
permita que el aparato alcance la temperatura ambiente. Cuando el aparato este frio,
rompa el vaco y con sumo cuidado sostenga el dedo frio hacia abajo aplicando una
ligera presin. Cuidadosamente separe el dedo frio del resto del sistema de
sublimacin.
Si esta operacin no se efecta con el cuidado debido, los cristales sublimados
podran deslizarse desde las paredes externas del dedo frio donde se encuentran
adheridos y caer en el fondo del tubo de ensayo, donde se encuentra el residuo.
Cierre la llave que le suministra agua al dedo frio y desconecte la manguera de goma.
Remueva la cafena adherida al dedo frio, raspando sus paredes con una esptula
pequea recogiendo los cristales sobre un papel filtro. Determine el punto de fisin de
la cafena purificada por este mtodo y compare el valor obtenido as como el color de
los cristales obtenidos para ambos procesos de purificacin. Los cristales de la cafena
tienen forma en agujas (de 0.25 g aproximadamente) y tienen un punto de fusin de
235C.

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Nota 1: Tenga la precaucin de realizar las extracciones con diclorometano en un

lugar perfectamente ventilado y lejos de cualquier flama o fuente de calentamiento
pues es muy voltil.
Nota 2: No olvidar las tcnicas de manejo de embudo de decantacin y de cmo se
prepara el papel filtro. Determine el punto de fisin de la cafena purificada por este
mtodo y compare el valor obtenido as como el color de los cristales obtenidos para
ambos procesos de purificacin. Guarde los cristales obtenidos en un recipiente
dispuesto para tal fin.
CUESTIONARIO.
1. Investigue la estructura de la cafena e identifique en ella los grupos funcionales que
la forman.
2. Qu efecto del carbonato de sodio permite que la separacin de la cafena sea
eficiente?
3. Por qu se agrega la solucin de H2SO4 a la mezcla de carbonato y t caliente?
4. Cul es la fase orgnica en el proceso de extraccin de la cafena, la inferior o la
superior? Indiqu porqu.
5. Hay algn hidrgeno cido en la cafena? En caso afirmativo indique cules.