Universidad Autnoma Metropolitana Unidad Xochimilco Trimestre 13-I Procesos Fundamentales de la Clula Grupo: 14 BBA

LA REACCIN DE DOS CONEJOS A LA CONTINUA ESTIMULACIN POR LA INOCULACIN DE LA BACTERIA LEPTOSPIRA ICTEROHAEMORRAGIAE

Equipo: 4 Huerta Muoz Acxel Nava Prez Jorge Eduardo Sevilla Flores Toms Benito Vctor Velasco Vzquez Pedro Sergio

Asesora: Dolores Guadalupe Gavaldon

Fecha de entrega: 15 de abril de 2013

NDICE 1. Introduccin 2 4

2. planteamiento del problema

3. marco terico 5 Antecedentes 5 Leptospirosis 6 La leptospirosis icterohaemorragiae palo alto 7 Taxonoma y clasificacin 9 Biologa 11 Epidemiologa 11 Patognesis 13 Mecanismos de inmunidad 14 Conceptos generales 15 Respuesta primaria y Respuesta secundaria 18 Inmunidad y leptospiras 19 Manejo y cuidado de animales de laboratorio conejos 21 4. Hiptesis 23 5. Metodologa 23 6. Resultados 25 7. Anlisis de resultados 25 8. Conclusiones 26 9. Bibliografa 28

INTRODUCCION
El presente estudio tiene como finalidad la determinacin o identificacin de la bacteria leptospira. Es producida por diferentes serogrupos de Leptospira. Se caracteriza por la presencia de anemia, ictericia, trastornos digestivos, fiebre alta, insuficiencia renal crnica, miosis, iritis y otros, que pueden ocasionar hasta la muerte del animal. Se han referido adems la deshidratacin y los temblores musculares. La leptospirosis es la zoonosis ms difundida en el mundo y es particularmente prevalente en los pases subdesarrollados (Vinetz.2003). Hasta hace poco se crea que los humanos slo enfermaban de leptospirosis aguda, enfermedad de presentacin brusca, espordica, accidental y habitualmente grave, donde los pacientes, cuando no fallecen, se recuperan pero desde mediados de la dcada de los 80, ha venido tomando fuerza la presencia de la leptospirosis crnica en animales y simultneamente se ha iniciado el conocimiento de esta fase de la enfermedad en el hombre (Faine, 1982). En la actualidad se conocen 23 serogrupos con ms de 220 serotipos. Varios son los serogrupos de la especie Leptospira interrogans que causan esta entidad, a estos pertenecen un gran nmero de tipos serolgicos denominados serovares que no son ms que las unidades taxonmicas principales sobre la base de las propiedades aglutingenas de la leptospira. (Harman. 1996). La cual se caracteriza por la presencia de anemia, ictericia, trastornos digestivos, fiebre alta, insuficiencia renal crnica, miosis, iritis y otros, que pueden ocasionar hasta la muerte del animal. Se han referido adems la deshidratacin y los temblores musculares. Existen vacunas contra los serogrupos de Leptospira de ms alta incidencia, combinadas con vacunas virales tales como parvovirus, moquillo canino, hepatitis canina, y rabia. La leptospirosis ha sido sealada como un problema econmico-social, hacindose imprescindible extender la lucha sistemtica contra sta zoonosis. Las medidas de control deben dirigirse hacia las campaas de eliminacin de los animales de vida libre que pueden ser posibles portadores y diseminadores de la enfermedad y la vacunacin de los animales susceptibles. La situacin de la leptospirosis icterohaemorragiae en Mxico es poco conocida, la infeccin debida a la serovariedad icterohaemorragiae es frecuente y se asocia a la presencia de roedores al ser estos portadoras y transmisoras En las zonas marginadas existe una gran cantidad de perros y roedores que son una fuente potencial de diseminacin de la Leptospira entre estas especies y tambin al humano (Rev. Salud Anim. Vol. 30 No. 1 (2008): 1-11) Variados estudios serolgicos realizados en distintas regiones de Mxico develaron la incidencia de casos de Leptospira Interrogans donde podemos encontrar el aislamientamiento Icterohaemorragiae Palo Alto entre los ms importantes en bovinos.

Revista Cubana de Medicina Tropical versin On-line ISSN 1561-3054] Rev Cubana Med Trop v.54 n.1 Ciudad de la Habana ene.-abr. 2002 Universidad Autnoma Metropolitana, Mxico Prof. Luis Pedro Moles Cervantes et al. Estudio serolgico de leptospirosis bovina en Mxico

PREGUNTA DE INVESTIGACIN
Qu relacin tiene la inoculacin repetida de antgenos de Leptospira interrogans serovariedad icterohaemorragiae Palo alto en conejos y la aparicin de respuesta inmune humoral?

OBJETIVO DE INVESTIGACION
Determinar las diferentes respuestas inmunitarias de los conejos a los repetidos estmulos de la inoculacin con L. interrogans serovariedad icterohaemorragiae Palo alto y ver la reaccin antgeno. Profundizar y observar la reaccin antigeno-anticuerpo y micro aglutinacin de espiroquetas. Proporcionar experiencias sobre la influencia de estas dos cepas suministradas a los conejos.

DELIMITACIN DEL PROBLEMA.

El mbito de la enfermedad abarca amplias regiones, sin embargo, por tratarse de una investigacin, el proyecto fue desarrollado en su totalidad en las instalaciones de la UAM-X, en Mxico.

MARCO TEORICO
1. Antecedentes

as Leptospira han estado en el planeta por miles de aos, encontrndose descripciones probables en Mesopotamia y Egipto, aunque su rol como causantes de enfermedades ha sido identificado en investigaciones relativamente recientes. La publicacin del internista alemn Adolf Weil en 1886 es acreditada como la primera descripcin detallada de la infeccin y la forma ictrica de la enfermedad, lleva su nombre. La infeccin en realidad ha sido conocida y reportada mucho antes, con relatos en la literatura asociando fiebres e ictericia en granjeros, inundaciones y ganado, desde la China e India hasta Europa. Hipcrates postul sobre ello, as como Galeno y en las campaas Napolenicas y en viajeros hacia las Amricas. La Leptospirosis es una patema conocida desde 1886, ao en que el mdico Alemn Adolf Weil describi una enfermedad a la que denomin Ictericia Hemorrgica en Heidelberg entre trabajadores agrcolas alemanes (Weil, 1886; van der Hoeden, 1958). No obstante, un sndrome idntico aparentemente fue descubierto varios aos antes en trabajadores de alcantarillados. La sabidura tarda o posterior consigna que la descripcin de Leptospirosis ictrica podra haber existido al principio del siglo XIX, algunos aos antes de la descripcin de Weil (Faine, 1994). Los primeros casos de Leptospirosis en humanos sin conocer el agente, los describieron, Weiss en 1881 y Weil en 1886. Los cientficos Japoneses Inada e Ido fueron los primeros en describir el agente causante de la enfermedad al comienzo del 1915, aislado por vez primera por estos mismos investigadores pero en 1916, siendo nombrado spiroqueta icterohaemorrhagiae, y luego renombrado Leptospira en 1917. Tambin en 1917, Noguchi aisl en ratas pero en Nueva York, EE.UU. (Noguchi, 1917). En 1917, se describe la infeccin en ratas gris (Rattus noruegicus) por el mismo agente y se postul su posible papel como transmisora de esta enfermedad al hombre. La confirmacin de aparicin de la Leptospirosis en toda la frontera occidental europea fue obtenida rpidamente despus de la publicacin de los trabajos de Inada (Costa y Troisier, 1916; Dawson y Hume, 1916; Stokes et al., 1917; Wilmaers y Renaux, 1917). Las primeras informaciones sobre la enfermedad de leptospira en los animales procedan de la leptospirosis humana, datan del 1852 en que Hofer describi una enfermedad de los perros antes desconocida que llam Tyfus Seu Febris Nervosa Canum. Keff en 1898 cambi el nombre de esta enfermedad por la enfermedad de los perros de Stuttgard (Stuttgarte Handesenchue). Sin embargo, su etiologa de esta enfermedad fue aclarada en 1922 por el Checoslovaco Lukes, el cual demostr que el agente era una espiroqueta. Pero en la realidad, la primera descripcin de las Leptospiras como agentes productores de enfermedad en los animales se realiz en 1933, cuando Klarenbeck y Schuffner demostraron que la L. canicola era el agente

etiolgico de la enfermedad Stuttgart en los perros (van der Hoeden, 1958). Michin y Azinov en 1935 fueron los primeros en notificar la afectacin de leptospirosis en los bovinos en la antigua URSS, denominndola como "hemoglubinuria infecciosa aguda", y del agente aislado L. icterohaemorrhagiae bovina. Estudios posteriores apuntaron a L. grippotyphosa como responsable de aquella enfermedad. Freund et al., (1941) y Jungherr, (1944) notificaron en esta misma especie tanto en Israel como en los Estados Unidos de Amrica respectivamente, quedando este ltimo como la primera notificacin en el continente Americano. Mientras el primer reporte en Gran Bretaa fue al cargo de (Field y Wellers, 1950). Smith y Perry, (1952) divulgaron los primeros casos en Canad. Los primeros diagnsticos hallados en el continente Africano datan casi al mediado del siglo XX por Donatien y Gayot, (1950) en Argelia; Cordier (1952) en Tnez y Farina y Sobrero (1960) en Somalia etc. La primera descripcin de Leptospirosis en equinos fue en la antigua Unin Sovitica por Lubaschenko y Nowikowa 1947 y desde entonces en Australia, Willington y Ferris, 1953; Yugoslavia, Zakarija, 1953; Hungra, Kasza y Kemenes, 1955; en los EE.UU. Roberts, Cork y Robinson, 1955 y Francia, Rossi y Kolochine Erber, 1955 (Hutyra et al., 1968). Pero anteriormente, haba notificacin sobre la primera observacin de Leptospira en el rin de equino ya en 1934 (Yamamuto, 1955). El conocimiento de la Leptospirosis humana remonta sobre la existencia por los reportes en casos humanos y as lo atestiguan los trabajos realizados por Francisco Navarro y Valds ("La fiebre biliosa grave de los pases clidos no es la fiebre amarrilla, 1868") y de Emilio Martnez y Martnez, donde se precisan ya casi todas las caractersticas epidemiolgicas de la Leptospirosis (Prez, 1968). Notificaron la primera comunicacin de los casos presuntivos atribuibles a Leptospirosis ocurrido en 1910 en trabajadores que construan el alcantarillado de La Habana. Pero estos mismos autores en (1921) diagnosticaron los primeros casos de leptospiras en Mridos (ratas) capturados en mataderos de La Habana. Transcurren algunos aos sin que aparezcan investigaciones y es slo cuando Prez (1943) logr la comprobacin de la enfermedad en un 28% de caninos a travs de una encuesta serolgica. Luego la primera confirmacin en humano por el mtodo serolgico y microbiolgica fueron presentado por Mrquez, Soler y Curbelo en 1945 (Mrquez, 1945) Ramrez (1971) hace la primera notificacin de la existencia de anticuerpos especficos de valor diagnsticos de Leptospira bovina en Mxico. El reservorio natural fue descubierto en las ratas en Ecuador y Mxico entre los aos 1818 y 1819. La mayora del conocimiento de la patologa y la epidemiologa actual fue definida antes de 1940, de modo que la investigacin en el presente est enfocada a la secuencia del ADN y los procesos celulares internos que le confiere al organismo su virulencia, inmunidad y el mejoramiento en el desarrollo de medidas profilcticas.

2. Leptospirosis La leptospirosis es una enfermedad infecciosa de reconocimiento reciente cuya importancia va en aumento, como lo demuestran los grandes brotes registrados hace poco tiempo en Asia, Amrica Central y del Sur y Estados Unidos. Es producida por leptospiras patgenas y se caracteriza por un amplio espectro de manifestaciones clnicas que oscilan desde una infeccin desapercibida hasta una enfermedad fulminante y fatal. La leptospirosis leve se puede presentar como un proceso seudogripal, es decir, con cefalalgias y mialgias. La leptospirosis grave se conoce tambin como sndrome de Weil y se caracteriza por ictericia, alteraciones de la funcin renal y ditesis hemorrgica. 3. La leptospira icterohaemorragiae palo alto LEPTOSPIRA MICROORGANISMOS CAUSALES La leptospira es una de las especies del grupo de las espiroquetas. Las leptospiras son microorganismos espirales, finos y dotados de gran movilidad con extremos en forma de gancho y dos flagelos periplasmticos, con los cuales horadan los tejidos (Fig. 1.1). Apenas se tien y se detectan con el microscopio por medio de la tcnica del campo oscuro y previa tincin con una impregnacin argntica. Son celulas helicoidales flexibles, que miden de 0.1 um de dimetro y 6 a 20-24 um de largo. La morfologa de esta bacteria es estrechamente enrollada, en el final de cada clula se originan fibras axiales y un flagelo periplsmico que ayudan a la clula a moverse en el lquido en que se encuentra. Las espiroquetas son aerbicas y viven por largo tiempo en agua fresca, estircol, barro y ambientes marinos. Viven en Figura 1.1 asociacin con huespedes humanos y animales. Se reconocen dos especies de leptospira, L. interrogans y L. biflexa; la primera es patgena para el hombre y para los animales, mientras que la segunda es de vida libre y saprfita. En cada especie se pueden encontrar un gran nmero de serovariedades, las cuales fueron identificadas usando pruebas de aglutinacin con anticuerpos. la especificidad de la serovariedad est dada por el lipopolisacrido o por el antgeno. En las especies conocidas y avaladas por la International Leptospirosis Society encontramos a L. interrogans, L. noguchii, L. borgpetersenii, L. santarosai, L. kirschneri, L. weilii, L. alexanderi, Leptospira genomospecies I, L. fainei, L. meyeri, L. inadai, L wolbachii, L. biflexa, Leptospira genomospecies 3, Leptospira genomospecies 4, Leptospira

genomospecies 5, L. broomii, L. licerasiae.1 De estas especies de leptospira se mencionan serovariedades patognicas. En el caso de L interrogans existen 24 serogrupos y ms de 230 serovariedades; las principales serovariedades universales son: L. Icterohaemorhagiae, L. Cancola, L. Pomona, L. Ballum, L. Bataciae, L. Grippotyphosa, L. Pyrogenes, L. Autumnalis, L. Australis, L. Hyos, L. Minigeorgia y L Hebdomadis y 3 serovariedades aisladas en Mxico: Palo Alto (Icterohaemorrhagiae), Sinaloa ACR (portland vere) y Bratislava. Morfologa Leptospira tiene una envoltura celular similar a las bacterias Gram negativas, consistiendo en una membrana citoplasmtica y otra externa. Sin embargo, la capa de peptidoglicano est asociada con la membrana citoplasmtica en vez de la membrana externa, algo que es nico de las espiroquetas. Los dos flagelos de la Leptospira se extienden desde la membrana citoplasmtica en los extremos de la bacteria, y a travs del espacio periplsmico y son necesarias para la motilidad del microorganismo. La membrana externa contiene una variedad de lipoprotenas, protenas perifricas y de transmembrana. Como es de esperarse, la composicin proteica de la membrana externa difiere al comparar las Leptospira que crecen en medio artificial con las que estn presentes en un animal infectado. Se ha demostrado que varias protenas de la membrana exterior se adhieren a la matriz extracelular y al factor H, una protena de control del complemento. Estas protenas pueden ser de importancia en la adhesin de la Leptospira a los tejidos del husped y en la resistencia a las acciones del sistema del complemento. Las Leptospira son organismos aerobios obligatorios, mviles por el uso de filamentos axiales llamados axostilo y se dividen por fisin binaria. En virtud de su estructura en espiral alrededor de su eje axial, puede haber hasta 20 enrollamientos en funcin de su longitud total. La capacidad de invadir tejidos est tambin facilitada por la produccin de la enzima hialuronidasa, la cual altera la permeabilidad del tejido conjuntivo al hidrolizar el cido hialurnico Las leptospiras requieren medios y condiciones especiales para su proliferacin; los cultivos tardan a veces semanas en hacerse positivos.

Supervivencia Para sobrevivir requieren de un alto grado de humedad ambiental, as como un pH entre 6 y 8 y una temperatura de 300C. Sin humedad no sobreviven mucho tiempo, se desactivan con solucin caliente de sosa custica al 2%, solucin de formaldehdo al

LEVETT PAUL N, HAAKE DAVID A. Leptospira Species (Leptospirosis). ELSEVIER.

http://www2.elsevierjapan.com/Portals/0/images/pdf/Chapter%20240.pdf

2%, solucin de cal clorada al 3% de cloro activo y la emulsin caliente de Creolina al 5%. Tambin el uso de desinfectantes de Yodo como Betadine. Pueden vivir fuera del husped en el agua, el fango, los terrenos hmedos y bajos, con ciertos requisitos de temperatura, pH, sales minerales y an reproducirse por das bajo stas condiciones. El agua es absolutamente esencial para la sobrevivencia de estos microorganismos. Debido a esto los brotes ocurren segn el grado de humedad del medio. Puede observarse as un incremento de los brotes en las estaciones de mayor precipitacin pluvial.

4. Taxonoma y clasificacin De la familia Leptospiraceae, el gnero Leptospira cuenta con dos especies: Leptospira biflexa y leptospira interrogans Leptospira: pertenece a la (interrogans por su apariencia morfolgica similar a un signo familia Leptospiraceae, del de interrogacin, debido a unos ganchos en los extremos del gnero Leptospira; cuenta cuerpo), adems de 18 grupos antignicos y ms de 100 tipos con dos especies: serolgicos. Los serotipos se clasifican de acuerdo a los Leptospira Biflexa y Leptospira Interrogans. huspedes que infectan, y los ms importantes son: Los serotipos mas icterohaemorrhagiae, canicola, Pomona y autumnalis. importantes son: Leptospira biflexa incluye sepas saprobias cuyo nicho icterohaemorrhagiae, ecolgico son las aguas estancadas o termales. canicola, Pomona, y Leptospira interrogans so bacilos espirales delgados de 5 a 15 autumnalis m de longitud con un gancho en uno o ambos extremos, aerobios obligados con dos flagelos periplasmaticos. Varios son los serogrupos de la especie Leptospira interrogans que causan esta entidad, a estos pertenecen un gran nmero de tipos serolgicos denominados serovares que no son ms que las unidades taxonmicas principales sobre la base de las propiedades aglutingenas de la leptospira. Existen ms de 175 serovares patgenos, 7 de los cuales han sido aislados en animales domsticos en los EEUU. Los serogrupos muestran una ntima relacin antignica. La infeccin se debe usualmente a los serovares canicola o copenhageni, un miembro del serogrupo L. icterohaemorrhagiae, aunque la L. pomona, L. grippotyphosa y L. ballum han sido aislados en perros en los EEUU. Las infecciones con L. canicola o L. copenhageni son prevalentes en algunas poblaciones de perros. Este ltimo ha sido frecuentemente la causa de las leptospirosis de tipo ictrico y hemorrgica. En la enfermedad de tipo agudo, en la que la ictericia constituye una caracterstica destacada, el comienzo puede ser sbito con un desarrollo diferido de la ictericia o bien insidioso, con ictericia como primera anormalidad observada. Tambin caracterizan este sndrome tendencias hemorrgicas, particularmente destacadas en los pulmones y el tracto gastrointestinal. La anemia es moderada, existe leucocitosis, la tasa de sedimentacin est muy aumentada, y la orina contiene albmina, cilindros, hemates, y leucocitos.

Es frecuente la necrosis focal en el hgado, pero puede estar ausente. Las lesiones microscpicas hepticas ms importantes son la disociacin de las clulas de las trabculas parenquimatosas, las clulas disociadas se hacen independientes y redondeadas, el citoplasma se vuelve eosinfilo y groseramente granuloso y los ncleos se encogen y oscurecen. La regeneracin es a veces destacada y puesta de manifiesto por citomegalia, binucleacin y mitosis. Las clulas de Kupffer contienen hemosiderina en exceso y muchos canalculos biliares estn obstruidos. Los microorganismos pueden evidenciarse por medio de tcnicas especiales en los sinusoides y las clulas epiteliales hepticas. El comienzo de la alteracin renal se inicia por los tbulos contorneados, cuyo epitelio manifiesta cambios que van desde una degeneracin hidrpica hasta una necrosis. Esta va acompaada de un edema intersticial y una difusa pero escasa infiltracin de leucocitos, principalmente linfocitos y clulas plasmticas. En los perros que sobreviven a la septicemia aguda, tipo ictrico de la enfermedad, o que dejan de manifestar de cualquier manera una fase septicmica, el nfasis clnico y patolgico pasa del hgado a los riones. El sndrome resultante es la forma comn en la que se manifiestan las infecciones de L. canicola. Los signos son los de insuficiencia renal, variando en su gravedad y rapidez de progresin. La muerte puede sobrevenir rpidamente por fallo renal debido a una nefritis difusa aguda, pero parece tambin que las infecciones inicialmente inaparentes pueden ponerse en marcha en los riones, despus de largo tiempo, posiblemente varios aos, desembocando en el fallo renal por nefritis intersticial crnica. Las otras alteraciones encontradas en el cadver son las del sndrome urmico. Especies Leptospiras L. autumnalis de Fuente infeccin ? de Enfermedad en Distribucin el hombre Fiebre pretibial, E.U.A y Japn o fiebre del Fuerte Bragg E.U.A Europa, Israel E.U.A, Israel, Australia Universal los Europa, E.U.A, frica los Japn, Europa de Universal de Australia de Europa, E.U.A,

L. ballum L. bovis

Ratn Ganado, ratones silvestres Orina de perros

L. canicola L. grippotyphosa L. hebdomadis L. icterohaemorrhagiae* L. mitis L. pomona

Ictericia infecciosa Roedores, agua Fiebre de pantanos Ratas, ratones Fiebre de siete das Orina de ratas, Enfermedad agua Weil Cerdos Enfermedad las piaras Cerdos, ganado Enfermedad

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los porquerizos

Australia

*En opinin de algunos investigadores los otros microorganismos enumerados en este cuadro no son especies diferentes sino serotipos de L. icterohaemorrhagiae

5. Biologa
PERODO DE INCUBACIN: Vara entre 7 y 20 das, 12 das como promedio. En la dinmica de la infeccin se deben considerar factores dependientes del agente etiolgico, del hospedador y del medio ambiente en el cual se encuentra el hospedador. Entre los factores ms importantes relacionados con el agente etiolgico, se indican las condiciones propicias para la supervivencia de la leptospira fuera del hospedador: temperatura 27-30C., ambiente hmedo, pH neutro o ligeramente alcalino y presencia de materia orgnica; relacionados con el hospedador la edad del animal, el estado inmunitario y la etapa reproductiva y relacionados con el ambiente las condiciones agroecolgicas, el sistema de produccin y el manejo de los animales entre otros.

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LA LEPTOSPIROSIS EN CANINOS Afecta animales de cualquier edad con mayor incidencia en machos, los casos graves se caracterizan al principio por debilidad, anorexia, vmitos, conjuntivitis, temperatura de 39,5 a 40,5C, posteriormente depresin pronunciada y mucha sed, ictericia de intensidad variable. Hay dolor a la palpacin en la regin lumbar o en la regin anterior del abdomen. Lesiones en la mucosa oral, signos de gastroenteritis hemorrgica, nefritis crnica, pigmentos biliares en orina, temblores musculares, hipotermia y muerte entre 5 y 10 das luego de iniciados los sntomas.

6. Epidemiologa
Leptospira. son bacterias Gram-, flexibles, helicoidales, mviles, aerobios obligados, no toleran la desecacin o la exposicin directa a los rayos de sol, pH cidos o muy alcalinos, ni temperaturas extremas. La epidemiologa de la Leptospirosis dentro de un ecosistema es compleja, ya que las leptospiras de varios serogrupos pueden ser mantenidas por diferentes especies animales, incluyendo especies domsticas y silvestres que comparten el mismo habitat. Las diferentes cepas patgenas de leptospiras afectan potencialmente a un gran nmero de especies animales, que actan como hospedador de mantenimiento (husped adaptado) o accidentales (husped no adaptado), en funcin de la adaptacin o preferencia del serovar involucrado. DIFERENCIAS ENTRE HOSPEDADOR DE MANTENIMIENTO Y ACCIDENTAL ASPECTO HOSPEDADOR DE HOSPEDADOR ACCIDENTAL MANTENIMIENTO Transmisin de Frecuente intraespecie Espordica intraespecie leptospiras Signos de Benignos (agalactia) Graves: complicaciones enfermedad aguda hepticas y renales Signos de Problemas reproductivos, Aparentemente ninguno enfermedad crnica uvetis Duracin de la Prcticamente toda la vida Das a semanas leptospiruria Porcentaje de Alta, aumenta con la edad Baja, No afectada con la edad de poblacin de los animales los animales seropositiva Muestras para el Rebao Animal afectado diagnstico Bovinos Hardjo, Pomona Grippotyphosa Porcinos Bratislava Autumnalis Perro (enfermedad Cancola Icterohaemorrhagiae de Stuttgart) Caballo Bratislava Pomona Roedores Icterohaemorrhagiae Pomona Ovinos y Caprinos Ballum, Hardjo Pomona

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Hombre (enfermedad de Weil)

Icterohaemorrhagiae

variedad

El hospedador de mantenimiento favorece la perpetuacin del agente infeccioso en una poblacin sin la intervencin de ningn hospedador accidental. La transmisin de la infeccin entre hospedadores de mantenimiento se realiza independientemente de las condiciones ambientales. Sin embargo en el caso de la transmisin de un hospedador de mantenimiento a un hospedador accidental o entre hospedadores accidentales se requieren condiciones ambientales favorables para la supervivencia de Leptospira fuera del hospedador. Una o ms especies de mamferos silvestres o domsticos se comportan como hospedadores de mantenimiento o fuente de infeccin de leptospiras patgenas; pudiendo ser un animal reservorio de varios serovares y diferentes especies serlo de un mismo serovar, en determinado ecosistema. Las principales caractersticas del hospedador de mantenimiento son: Gran receptividad por el serovar que mantienen. Relativa baja patogenicidad del microorganismo en el hospedador. Presencia de infeccin renal con leptospiruria prolongada. En algunas especies mantenimiento de leptospiras en el tracto genital.

Cuando la infeccin se produce en husped adaptado a un serovar de Leptospira, el animal slo sufre manifestaciones reproductivas y se convierte en un husped de mantenimiento o reservorio eliminndola a travs de la orina. La infeccin en un husped accidental, no adaptado a un serovar de leptospira causa una manifestacin aguda o enfermedad clnica. La leptospirosis tiende a ser endmica en una zona o regin, es decir que la infeccin se mantiene por tiempo, despus de ocurrido el primer brote. Debido a ello la enfermedad no puede considerarse como un problema individual sino un problema de hato, o de un grupo de animales en un rea ganadera. A medida que la enfermedad se hace endmica la severidad clnica tiende a disminuir debido a los mecanismos de resistencia o a la disminucin de la patogenicidad del microorganismo, manifestndose en forma crnica una patologa reproductiva en los animales susceptibles.

7. Patognesis
Leptospira penetra en el hombre a travs de la piel erosionada o mucosas sanas, difunde rpidamente y despus de 48 horas se la encuentra en todos los humores y tejidos, con localizacin especial en rin, hgado, corazn y msculo esqueltico (fase leptospirmica de la enfermedad). Leptospira es resistente a la actividad bactericida del suero normal y en ausencia de anticuerpos especficos no es fagocitada ni destruida por los polimorfonucleares o macrfagos. Entre los das 5 y 7 los anticuerpos especficos formados favorecen la opsonizacin del microorganismo que deja de ser encontrado en la sangre y se eliminan por la orina durante semanas o meses (fase inmune o de leptospiruria). Muchos aspectos de la leptospirosis permanecen sin explicar.

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La leptospirosis puede ser considerada como una enfermedad generalizada, sistmica, traducida fundamentalmente por una vasculitis infecciosa. La lesin vascular, predominantemente capilar, es un factor prominente de la leptospirosis y responsable del edema y la ditesis hemorrgica. Afecta fundamentalmente a los capilares de hgado, pulmn y rin. El gran dao celular en presencia de pocos microorganismos sugiri la mediacin de factores txicos tanto de la espiroqueta como del husped. As como la pobreza de alteraciones patolgicas en determinados rganos, a pesar de los profundos disturbios funcionales, hizo pensar que muchos de los aspectos de la enfermedad fueran ocasionados por productos txicos liberados por el germen. Durante la fase septicmica la migracin de bacterias, toxinas, enzimas y/o productos antignicos liberados a travs de la lisis bacteriana conducen a una permeabilidad vascular aumentada que es la manifestacin ms precoz y constante de la enfermedad. Las lesiones celulares de los diversos rganos tienen como base patognica estos mismos factores, que actan inicialmente sobre la membrana celular, adicionada a eventual hipoxemia derivada del dao vascular. La espiroqueta Leptospira interrogans produce la enfermedad de Weil, una enfermedad zoonotica de distribucin mundial pero que afecta con ms mpetu a las zonas tropicales y subtropicales8 y transmitida por la orina de animales salvajes y domsticos, en especial ratas y perros. La infeccin, en el hombre se produce por contacto directo con la orina o los tejidos del animal infectado o por medio del agua y el suelo contaminados. Se observan ictericia, hemorragia cutnea, fiebre, escalofros y dolor muscular. Las Leptospira son muy invasivas y difunden por va sangunea y asociadas a la endotoxina fibrolisina. En el estado agudo se puede aislar la espiroqueta en la orina y en la sangre. Durante la convalecencia se encuentran anticuerpos. Con mucha frecuencia es confundida con otras enfermedades febriles que por lo general tambin abundan en las regiones en cuestin, como el dengue y otras enfermedades virales e incluso el resfriado comn. Es por ello que el diagnstico por PCR es confirmatorio debido a su especificidad, capacidad de detectar genomo-especies y rpidos resultados -aproximadamente 3 horas. La misma sintomatologa est presentes en animales, como el perro, bfalo, equinos, vacunos y otros 160 mamferos. La infeccin por Leptospira genera inmunidad, sin embargo, por razn de las variaciones en la composicin de lipopolisacridos, refleja una diversidad antignica entre un serotipo y el otro, incluyendo en la misma especie de leptospiras patognicas. Por ello, la inmunidad es especfica solo contra el organismo infectante y no contra otros serotipos.

8. Mecanismos de inmunidad
Se basan en los leucocitos (glbulos blancos) especficos, los linfocitos, que reconocen el germen invasor y elaboran una respuesta de defensa frente al mismo que solo sirve para dicho germen u otra infeccin producida por el mismo. En ello reside la induccin y la especificidad de estos mecanismos, que comnmente se conocen como respuestas inmunitarias inducidas. El conjunto de estas clulas y los rganos o estructuras del cuerpo relacionadas con ellas, bien sea en su formacin, maduracin o localizacin, constituyen el sistema inmunitario humano.

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Los rganos del sistema inmunitario se denominan tambin rganos linfoides y se pueden apreciar dos tipos de ellos: 1. Los rganos linfoides primarios son aquellos donde se originan y se produce la maduracin de los linfocitos. A ellos pertenecen: 1.La mdula sea roja, donde estn las clulas madre que originan todas las clulas sanguneas, y entre ellas los linfocitos. A menudo los estudiantes confunden esta mdula sea con la mdula espinal. Son dos rganos completamente distintos. La mdula sea se encuentra en el interior de los huesos largos y es, como hemos dicho, un tejido linfoide. La mdula espinal es parte del sistema nervioso y se encuentra en el interior de la columna vertebral. 2. El timo, glndula que se sita en la zona superior del trax, sobre el esternn, y que reduce mucho su volumen a partir del sptimo ao de edad del individuo. Est formado por dos lbulos subdivididos, a su vez, en lobulillos separados por tejido conjuntivo. En cada uno de ellos se diferencia una corteza y una mdula. Es en la corteza donde proliferan las clulas provenientes de la mdula sea, originando los timocitos, que al madurar se transforman en los linfocitos T, que emigran a la sangre a travs de las vas linfticas. 3. Los rganos linfoides secundarios son aquellos donde se concentrar los linfocitos y sufren una diferenciacin terminal. Entre ellos estn: 1.El bazo, rgano muy vascularizado situado en el lado izquierdo del abdomen. Debajo del diafragma. Est rodeado por una capa fibrosa que penetra en su interior formando una serie de compartimentos a los cuales van numerosas arteriolas. Cada una de ellas est rodeada de un tejido linfoide rico en linfocitos, de color blanco y denominado pulpa blanca. El resto est relleno de un tejido esponjoso de color rojo, denominado pulpa roja, con funcin hematopoytica, madurar eritrocitos, destruir los inservibles y mantener las plaquetas. 4. Los ganglios linfticos, situados a lo largo del sistema linftico, pero ms abundantes en las zonas inguinal, axilar, cervical y subclavicular. 5. Las estructuras linfoepiteliales, asociaciones de folculos linfticos y epitelios de revestimiento de la cavidad interna donde se encuentran, tales como las amgdalas, las placas de Peyer (situadas en el intestino delgado) y el apndice vermiforme del ciego. La inflamacin de estos rganos es indicio de una actividad propia de la reaccin inmune, asociada normalmente a una infeccin Es preciso aclarar que, en el organismo, todos los mecanismos actan conjuntamente y que la separacin aqu indicada obedece nicamente a un desarrollo didctico. Sirva como ejemplo de esta afirmacin el proceso llevado a cabo por el sistema de complemento, en el que intervienen una parte especfica, la reaccin antgenoanticuerpo, y otra inespecfica como es la fijacin del complemento o la fagocitosis.

9. Conceptos generales
El trmino "inmunis" (inmune) se introdujo en la Biologa para expresar el estado en que quedaban los vertebrados superiores que, despus de pasar por una enfermedad microbiana, adquiran la propiedad de quedar libres de volver a padecerla.

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Podemos definir la inmunidad como el estado de resistencia que presentan los organismos frente a la infeccin. La ciencia que estudia la inmunidad se denomina Inmunologa. La inmunidad puede ser congnita, es decir, hereditaria (y propia de cada especie). La inmunidad adquirida puede lograrse por va natural o de una manera artificial. Tanto una como otra pueden dividirse en inmunidad activa e inmunidad pasiva (en la activa el individuo recibe antgenos y fabrica anticuerpos especficos contra esos antgenos: es ms duradera; en la pasiva el individuo recibe los anticuerpos por el suero de un individuo ya inmunizado). TIPOS DE INMUNIDAD I. Congnita: bases genticas II. Adquirida: a) Natural: -Activa: formacin de Ac por haber padecido una enfermedad. -Pasiva: por el paso de Ac a travs de la placenta. b) Artificial: -Activa: por vacunaciones. -Pasiva: por preformados. administracin de Ac

Anatmicamente el sistema inmunitario est formado por el sistema linfoide: linfocitos circulantes y rganos linfticos. Se considera que el linfocito es la clula bsica de la inmunidad. Los linfocitos son clulas con un dimetro de 8-10 m cuyo citoplasma est prcticamente ocupado por el ncleo y que circulan por el organismo. A partir de la clula madre pluripotente situada en la mdula sea se originan las clulas progenitoras de los linfocitos y del resto de las clulas sanguneas (hemates, leucocitos y monocitos). Las clulas progenitoras de los linfocitos invaden los rganos primarios o centrales (timo y bolsa de Fabricio en aves; en mamferos no hay bolsa de Fabricio y cumplen su funcin las placas de Peyer, situadas en el intestino), donde son procesados y diferenciados. Los linfocitos que van a parar al timo se transforman en linfocitos timodependientes o linfocitos T. Los que llegan a la bolsa de Fabricio o a las placas de Peyer, en linfocitos bursodependientes o linfocitos B. Los linfocitos T y B son similares al microscopio ptico, pero el electrnico nos permite ver que los linfocitos T presentan una superficie lisa mientras que los B la presentan

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rugosa. Pero an es mayor la diferente "educacin inmunolgica" que reciben: los linfocitos T son preparados para intervenir de manera directa, atacando al agresor (antgeno) por su presencia (respuesta inmune de tipo celular), mientras que los linfocitos B actan sobre los antgenos mediante sustancias de naturaleza proteica (anticuerpos) elaboradas por ellos (respuesta inmune de tipo humoral). Tanto los linfocitos T como los B, una vez educados en los rganos linfoides primarios (timo, placas de Peyer) pasan a los rganos secundarios o perifricos (ganglios linfticos, amgdalas, bazo, etc.), y de all -aptos ya para la respuesta inmunolgica- a la sangre y a la linfa. El hombre cuenta con mecanismos de defensa: mecnicos y qumicos, humorales y celulares, segn las caractersticas que presenten. En primer lugar encontramos los dispositivos mecnicos representados por la piel y las mucosas. Actan como barreras defensivas impidiendo la entrada del parsito en tejidos profundos. Cuando se produce una herida (ruptura de estas barreras), los microorganismos situados en la superficie de la piel y mucosas pueden penetrar y multiplicarse en los tejidos de nuestro organismo. Adems, en la superficie de la piel y mucosas se encuentran ciertas sustancias de naturaleza qumica (como los cidos grasos, la lisozima y el moco) que impiden que muchos microorganismos sean capaces de establecerse en esas superficies, ya que tienen capacidad bacterioltica o de arrastre. As actan muchas secreciones: lgrimas, saliva, orina, y secreciones gstrica e intestinales. En la mucosa bronquial cooperan en la accin defensiva el epitelio ciliado o vibrtil de la mucosa con el manto de moco que la recubre. La secrecin cida del sudor, el HCl del estmago, el pH cido de la orina y de algunos conductos genitales, tienen tambin carcter protector por sus propiedades bactericidas. La lisozima presente en las lgrimas, saliva, secreciones bronquiales y digestivas produce la lisis de muchos grmenes. Por ltimo, dentro de las primeras barreras defensivas, hay que citar los coliformes presentes en el intestino, que intervienen en la sntesis de algunas vitaminas y evitan la proliferacin de microbios patgenos: si por el uso de antibiticos se destruye esa flora favorable, se originan trastornos intestinales y pueden aparecer hongos y otros microbios patgenos.

Respuesta inmunitaria

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Cuando el germen ha penetrado atravesando las primeras barreras defensivas, se encuentra con otras que luchan contra su difusin. Hablamos ya de respuesta inmunitaria, en la que intervienen principalmente -como ya hemos visto- los linfocitos. Los tipos de respuesta que ofrece el organismo son dos: respuesta celular y respuesta humoral. *Respuesta celular. Se apoya en la capacidad fagoctica de diversas clulas del organismo. En este tipo de respuesta intervienen los linfocitos T (derivados del timo) y los macrfagos. Emiten pseudpodos en contacto con partculas extraas y las engloban en su protoplasma. Los linfocitos T actan de 3 formas: 1) Transformndose en linfocitos citotxicos o asesinos, que destruyen antgenos como clulas cancerosas o clulas de tejidos trasplantados. 2) Sintetizando el factor activador de los macrfagos (por el que stos se activan y adquieren la propiedad de fagocitar antgenos como bacterias, protozoos o virus, y digerirlos). 3) Sintetizando el interfern: protena que induce la sntesis de protenas antivirales en clulas infectadas por virus (aunque esto forma parte ms bien de la respuesta humoral). Una vez sensibilizados, se distinguen tres clases de linfocitos T segn su funcin: los linfocitos citotxicos (Tc), que al tomar contacto con el antgeno para el que han sido sensibilizados, lo destruyen; los linfocitos Th, que activan la respuesta inmune; y los linfocitos Ts, que inhiben la respuesta inmune. *Respuesta humoral. Se caracteriza porque los linfocitos B, al ser estimulados por el antgeno, reaccionan formando anticuerpos. En la formacin de anticuerpos, sin embargo, intervienen 3 tipos de clulas: los linfocitos B, los linfocitos T y los macrfagos. Los macrfagos tienen la funcin de fagocitar los antgenos y procesarlos de tal manera que se conviertan en antgenos aptos para estimular la respuesta inmunolgica cuando son presentados a los linfocitos. Los anticuerpos reaccionan especficamente con los antgenos para bloquear su accin nociva para el organismo. Resumiendo: -Respuesta celular: linfocitos T y macrfagos. -Respuesta humoral: linfocitos B con la colaboracin de linfocitos T y macrfagos. Reaccin antgeno-anticuerpo

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Denominamos antgeno a toda molcula que al entrar en contacto con los linfocitos es capaz de activarlos y desencadenar una respuesta de tipo humoral o celular. Los antgenos deben ser extraos al animal en el que desencadenan la respuesta inmunitaria. Por eso poseen propiedades antignicas los virus y bacterias, las macromolculas de un animal de otra especie, e incluso las protenas propias del animal cuando se ha alterado su composicin qumica (este es el caso de la respuesta inmunolgica desencadenada por clulas cancerosas). Los anticuerpos son glicoprotenas de alto peso molecular sintetizadas por las clulas plasmticas, que las secretan al espacio extracelular. los anticuerpos pueden encontrarse en todos los lquidos orgnicos. Sin embargo es en el suero donde existe la mayor concentracin. Mediante tcnicas complejas de separacin y anlisis se han identificado en el hombre cinco clases de inmunoglobulinas (gammaglobulinas con actividad de anticuerpos), que se denominan: Ig G, Ig M, Ig A, Ig D e Ig E. Las inmunoglobulinas estn formadas por cadenas pesadas (H de heavy) y ligeras (L de light) de protenas en las que hay porciones constantes y porciones variables. La propiedad biolgica ms caracterstica de las inmunoglobulinas es su capacidad de reaccionar especficamente con los antgenos. La unin del antgeno con el anticuerpo se efecta a travs de las porciones variables de los fragmentos de Ig especializadas en la unin con el antgeno. Que la unin antgeno-anticuerpo es especfica, significa que las inmunoglobulinas sintetizadas por estmulo de un antgeno, no reaccionan con otro antgeno de composicin qumica diferente. La base de esta especificidad reside en la secuencia de aminocidos de la porcin variable.

10. Respuesta primaria y Respuesta secundaria

Cuando en un animal entra por primera vez un antgeno (o se le administra por va parenteral: intravenosa, intramuscular, subcutnea, etc.), ste es fagocitado y llevado a los ganglios linfticos, donde es reconocido por los linfocitos, y stos son estimulados. La primera inmunoglobulina sintetizada es la Ig M. Si no penetra en el animal una nueva dosis de antgeno, apenas forma otras clases de inmunoglobulina. La respuesta es poco intensa y poco duradera: alcanza su mximo a los 10-15 das de la entrada del antgeno y luego declina (respuesta primaria). Pero si el antgeno vuelve a entrar al cabo de unos das de haberlo hecho por primera vez (o se le administra una nueva dosis al animal), se observa una respuesta secundaria en la que fundamentalmente se sintetiza Ig G. Esta respuesta es ms rpida, intensa y prolongada que la anterior. La respuesta secundaria se encuentra ligada a la existencia de las llamadas clulas de memoria que "recuerdan" al antgeno que ha producido la respuesta primaria. Las clulas de memoria pueden ser tanto linfocitos T como linfocitos B. Al tener los

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linfocitos una vida muy larga (especialmente los linfocitos T), y llegar a los tejidos a travs de la sangre y la linfa, cuando las clulas de memoria reconocen el "material extrao" para el que han sido especialmente programadas y sensibilizadas, desencadenan una respuesta inmune ms rpida e intensa. En la respuesta secundaria la sntesis de anticuerpos se produce ms rpidamente y en mayor cantidad.

11. Inmunidad y las leptospiras La respuesta inmune est implicada en la patognesis de la leptospirosis, como la formacin de inmunocomplejos, liberacin de citoquinas y vasculitis autoinmune. Es as que los signos y sntomas del compromiso pulmonar, renal y heptico aparecen en la fase inmune cuando las aglutininas especficas comienzan a ser detectadas. Por otro lado los resultados de investigaciones clnicas realizadas en Brasil sugieren que la gravedad de la leptospirosis podra relacionarse con la intensidad de la respuesta inmune. Tambin la trombocitopenia se atribuye a ese mecanismo. En estudios autpsicos se observaron hemorragias difusas a nivel de los tejidos, adems de las ostensibles hemorragias externas (epistaxis, hemoptisis, hematemesis, melenas). La nefritis intersticial focal y necrosis tubular aguda, tambin focal, se han relacionado a la migracin de Leptospiras a travs del rin y al depsito de antgenos. El dao capilar pulmonar conduce a fallo respiratorio agudo y hemoptisis. Se han observado miocarditis intersticial y arteritis coronaria. En el msculo esqueltico se ven reas de necrosis hialina y hemorragias. La Leptospira induce inmunidad de tipo humoral que protege solo frente a la serovariedad infectante. Diagnstico bacteriolgico Examen directo por tcnicas microscpicas Consiste en la observacin directa de las leptospiras en el microscopio metodologas: bajo dos

Examen directo en campo oscuro, Examen directo en campo claro con coloracin Rojo Congo

Ambas son pruebas presuntivas y se utilizan previo y posteriormente a los aislamientos microbiolgicos de Leptospiras en sangre, orina, LCR y rganos. Cultivo y aislamiento El aislamiento bacteriolgico y la tipificacin de Leptospira se efectuar a partir de muestras de sangre total, lquido cefalorraqudeo y orina, conforme a las tcnicas que establezca el Instituto Nacional de Salud y tambin depender de la fase de la enfermedad.

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El diagnstico definitivo de la Leptospira se realiza mediante el aislamiento bacteriolgico utilizando los medios microbiolgicos (Korthof, Fletcher y EMJH) y finalmente la tipificacin empleando mtodos serolgicos o biomoleculares. Es una prueba confirmatoria de utilidad para vigilancia epidemiolgica. Diagnstico serolgico Las pruebas de diagnstico serolgico a emplearse en los servicios de salud del Pas, sern las establecidas por el INS, siendo las principales:

a. a.1

Pruebas de tamizaje

Prueba de ELISA Indirecto Ig M.

El mtodo de ELISA es usado como una prueba adicional o como una alternativa a la prueba de MAT. Es el mtodo ms usado para detectar la leptospirosis aguda. Los anticuerpos de tipo IgM son los que se presentan en una infeccin reciente y stas se pueden detectar especficamente por ELISA. Se han desarrollado una gran variedad de ELISAs y comparndolos con la prueba MAT mostraron una concordancia muy alta. Pero necesariamente los sueros que salieran positivos debern ser confirmados por MAT. b. b.1 Pruebas confirmatorias

Prueba de Micro Aglutinacin (MAT)

Es la prueba de diagnstico estndar de referencia internacional para la confirmacin serolgica de una infeccin reciente y pasada de leptospiras. Utiliza antgenos vivos y es de alta sensibilidad y especificidad al serovar infectante. Se emplea para detectar anticuerpos anti-leptospiras en el suero (tipo Ig M e Ig G), identificar aislamientos, clasificar cepas y sirve de base para cualquier otro mtodo serolgico. Hay necesidad de tomar muestras pareadas. Actualmente solo algunos Laboratorios la pueden realizar en el pas por el alto costo de mantenimiento de las cepas y el escaso personal especializado.

12 Manejo y cuidado de animales de laboratorio conejos

Al igual que el ser humano, el conejo es un animal que merece respeto como ser vivo, debemos entender que padece necesidades y sufre dolor y que es obligacin del personal que los utiliza y de quienes cuidan y mantienen, asegurar su bienestar y confort mientras viva.

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Animal de laboratorio Es cualquier especie animal utilizada en experimentacin con fines cientficos, es decir, mantenido bajo determinadas condiciones y utilizado como instrumento de medida. Este al ser sometido a una experimentacin, proporciona datos, los cuales son utilizados como informacin para los resultados. Como ejemplo de esos animales tenemos al ratn, la rata, el hmster, el conejo, el perro o el mono. Caractersticas generales del conejo El conejo es un mamfero roedor que en libertad se alimenta hierbas y granos, su cuerpo esta cubierto por un pelo espeso y suave, tienen un temperamento asustadizo, propensos al pnico, por eso su trato y transporte debe ser cuidadoso. Cuando se encuentran nerviosos pueden araar con los miembros posteriores, excepcionalmente, llegan a morder. Cuando se aloja a varios machos juntos en un periodo prolongado, por instinto tienden a pelearse por una jerarqua. En general son tmidos y no copulan si se los est observando.

exclusivamente de Taxonoma del conejo Clase : mamfero Orden : Lagomorpha Gnero : Leporidae Gnero : Oryctolagus Especie : cuniculus

Razas de uso ms frecuente Existen cerca de 35 razas y ms del doble de variedades. La American Rabbit Breeders Association (Asociacin Americana de Criadores de Conejos) tiene una lista estndar de 28 razas y alrededor de 80 variedades. Las razas varan en tamao, tipo de pelo o color de la capa, habiendo sido seleccionadas para la produccin de carne, pelo o con fines experimentales. Como representativas entre las razas de mayor tamao (mayores de 5 kg de peso vivo) habra que sealar al gigante de Flandes o al gigante de Checkered; entre las razas de tipo medio (2 a 5 kg de peso vivo) ms representativas, estara la raza californiana o neozelandesa, la cual ha sido desarrollada para la obtencin de carne, seleccionndolas a favor de crecimiento temprano y aumento de la eficacia en la conversin de alimentos. Entre las razas de pequeo formato (menores de 2 kg de peso vivo) cabe sealar la holandesa y la polaca, muy apreciadas como mascotas. Existen pocas cepas desarrolladas para fines de laboratorio, en la actualidad existen seis cepas endocriadas, es decir, como resultado del cruzamiento de hermanos por hermanas, durante, por lo menos, 20 generaciones. Esto se debe a que es muy costoso establecer un stock de animales endocriados, porque disminuye la productividad, aumenta la susceptibilidad a enfermedades infecciosas y aumenta la mortalidad. Las razas ms frecuentes para uso en el laboratorio son: - Raza Nueva Zelanda blanco, de cuerpo cilndrico y temperamento ligeramente nervioso; - Raza Californiano, de cuerpo cilndrico, piel blanca con manchas negras sobre el hocico, las orejas, el rabo y las cuatro patas. De temperamento muy nervioso; - Raza Chinchilla, de cuerpo corto y fino, la piel cubierta de pelos negros y blancos entremezclados, dando aspecto de color grisceo. Existen tres clases: pequea, gigante y americana.

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HIPOTESIS
La repetida estimulacin de antgenos leptospira interrogans serovariedad icterohaemorragiae palo alto en los conejos estimulara una alta aparicin de respuesta inmune humoral primaria y secundaria alcanzando mayores ttulos y mayor duracion debido a la inmunidad adaptativa que posee el conejo.

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METODOLOGA.
La metodologa seguida en nuestra investigacin es mixta, es decir que tiene un enfoque tanto cuantitativo como cualitativo. Y su forma es transversal, ya que las encuestas se aplicaron dentro de un espacio y tiempo determinados Se seleccionaron dos conejos raza Nueva Zelanda blancos producidos en el bioterio de la Universidad Autnoma de Xochimilco que fueron inoculados con una dosis cada ocho das durante cinco semanas con De cepa Palo Alto de Ictericia hemorragiae a travs de los cuales se lograron los objetivos. Material y Mtodos. Para esta investigacin se necesitaron. -2 conejos alemanes -5 dosis de 3ml. de la cepa de Palo Alto (1.5 por cada conejo) -10 jeringas de 3ml -2 jeringas de 20 ml -2 ajuagas calibre -Algodn -Alcohol -Vaselina -Agua oxigenada -1 franela -4 tubos de ensaye -1 matraz Erlenmeyer -2 llaves de tres vas con extensor -xylol -1 centrifugadora -4 jaulas -30 kg de aserrn -50 kg de comida para conejos - .06 ml de xilacina - 1 ml de ketamina Nuestra investigacin se llev a cabo en el Bioterio de la UAM- Xochimilco, ya que en este lugar de experimentacin est la condicin ms favorable para realizar este tipo de pruebas. El primer da de trabajo se realiz la inoculacin, inyectndoles una cepa de 1.5ml a cada conejo de Palo Alto, para la inoculacin de las cepas hay dos mtodos: inyectar en parte inferior de la nuca, o en la parte lateral del conejo justo debajo de la costilla, para la inoculacin se enredaron a los conejos con una franela para que el proceso fuera fcil y posteriormente no hubiera ningn problema al momento de inyectar, esto se hizo cada mircoles de cada semana y se inocularon 5 veces a cada conejo . En la segunda y cuarta semana se les realizo un sangrado arterial en la parte exterior de la oreja del conejo, extrayendo de ellos aproximadamente 3 ml de sangre; para este

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sangrado se utiliz de nuevo una franela para inmovilizar a los conejos. Cada uno de estos sangrados se llev al laboratorio de Leptospira para que fueran analizados. El 18 de marzo se realiz el desangrado definitivo de los conejos, para este procedimiento se anestesiaron a estos, por lo cual se necesit una dosis de; .05 ml de ketamina (anestsico general), y .03ml de xilacina (sedante). Despus de que los conejos quedaron sedados, se colocaron en una plancha de ciruga en una posicin de decbito frontal, amarrando cada una de sus extremidades para que no hubiera problema alguno. Ya que los conejos estaban en una posicin adecuada, se introdujo una aguja de calibre 18g 30mm conectada a una llave de tres vas las cuales al otro extremo estaban conectadas dos jeringas de 20 ml cada una, posteriormente, se introdujo la aguja directo al corazn para la extraccin de la sangre. A cada conejo se le extrajo aproximadamente de 50ml a 70ml de sangre que posteriormente fueron vaciados en un matraz.

RESULTADOS. Del estudio del suero sanguneo para encontrar anticuerpos especficos contra Leptospira en la determinacin de su seropositividad se obtuvo:

Conejo 1: Disolucin (ml) 20 40 Reaccin (%) 100 100

Conejo 2:

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60 80 100 o ms

100 75 0 Disolucin (ml) 20 40 60 o ms Reaccin (%) 75 50 0

Dela inoculacin de Leptospira en la 2da Sangra se obtuvo: Conejo 1: Disolucin (ml) 20 40 60 80 160 320 Reaccin (%) 100 100 100 100 50 0 Conejo 2 Disolucin (ml) 20 40 60 80 160 Reaccin (%) 100 100 100 100 25

ANLISIS DE RESULTADOS.

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Del estudio que realizamos inoculando y sangrando a los dos conejos, tuvimos como resultado un gran incremento en la reaccin inmune. En el primer conejo reacciono mucho ms que en el segundo conejo en el primer sangrado, pero no tuvo un gran incremento en el segundo sangrado, a diferencia del segundo conejo donde en el primer sangrado se obtuvo una respuesta y en el segundo sangrado la respuesta incremento ms del 100% Conforme a los resultados de las pruebas de aglutinacin microscpica, el conejo 1 presenta mayor seropositividad en la primera y segunda sangra, esto puede ser debido a que cada organismo tiene diferentes respuestas inmunolgicas. De acuerdo a la grfica mostrada en el apartado de resultados, la segunda reaccin es significativamente ms fuerte que la primera, y destaca que, en la muestra del primer sangrado en ambos conejos los niveles de inmunoglobulinas se incrementan tras un perodo de latencia ms largo, esto se puede ver comparando la cifra alcanzada en el segundo sangrado. Tambin se observa que la respuesta primaria (sangrado 1) de ambos conejos es de menor intensidad que la respuesta secundaria correspondiente al sangrado 2. La respuesta se intensifica en el segundo sangrado debido a que los anticuerpos de la respuesta secundaria son ms especializados y poseen mayor afinidad que los de la primera. De la observacin directa con el microscopio de campo oscuro, se examin la aglutinacin de la bacteria con los anticuerpos, por lo que de acuerdo a la Acadmica Patricia Melndez, los patgenos en la muestra correspondan a la bacteria Leptospira icterohaemorragiae, donde se consider que en la tcnica de aglutinacin microscpica la dilucin mayor a 1:100 de la segunda reaccin es positiva.

CONCLUSIONES. Se investig la primera y segunda respuesta ante la inoculacin de bacteria Leptospira interrogans serovariedad icterohaemorragiae Palo alto, con el propsito de determinar las diferentes respuestas inmunitarias de los conejos, y ver la reaccin antgenoanticuerpo y micro aglutinacin de espiroquetas. Se concluy que despus de estmulos repetidos la respuesta predecible implica la sensibilizacin y formacin de anticuerpos con un aumento progresivo conforme se repiten las inoculaciones. El anlisis de resultados indico que frente a estimulacin igual, cada individuo reacciona diferente incluso en las mismas condiciones. Es importante destacar que utilizar una prueba de aglutinacin microscpica y obtener ttulos serologicos mayores de 1:100 o mayores, resulta evidente que se padeci la enfermedad o que la infeccin est en curso. Es de suma importancia mencionar que como se mencion la leptospirosis es una enfermedad zoonotica que se encuentra ampliamente difundida en Mxico por los principales portadores, los roedores. Es probable que otros individuos y otras especies

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mamferas estn expuestas al contagio de la leptospirosis debido a que la posibilidad de la diseminacin de la bacteria a travs de la orina es factible, as como la presencia de la fauna nociva. Esta investigacin aportara datos epizootiolgicos sobre la leptospirosis ampliando el campo de investigacin sobre esta bacteria.

AGRADECIMIENTOS
A Patricia Melndez Valds por el apoyo brindado en esta investigacin. Al personal del laboratorio de leptospira. Al Bioterio UPEAL de la UAM as como su personal, en especial a Eliseo Melgarejo. A la Profa. Dolores Gavaldon Rosas y al Prof. Luis Pedro Moles Cervantes.

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CRONOGRAMA
Actividad 1. Inoculacin 2. Inoculacin 1er. Sangrado 3. Inoculacin 4. Inoculacin 2. Sangrado 5. Inoculacin Desangrado Fecha 06-feb-2013 13-feb-2013 13-feb-2013 20-feb-2013 27-feb-2013 27-feb-2013 06-mar-2013 18-mar-2013

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