Universidad Nacional Autnoma de Mxico

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

Equipo 8:
Alatriste Solano Edgar, Coln Castro Julieta, Cruz Hernndez
Carlos, Merino Gonzlez Carlos Alberto

Caractersticas tintoriales de los hongos

HONGOS
Son hetertrofos (quimioorganotrofos), se
alimentan de materia orgnica.
Son eucariotas, presentan ncleo diferenciado
con membrana bien organizada.
Presentan una pared celular formada por
polisacridos, polipptidos y quitina.

Se tienen hongos pluricelulares y unicelulares

La estructura fngica (pluricelular) consta de un
complejo llamado talo o micelio, que a su vez esta
constituido por mltiples filamentos o hifas.

Los hongos (levaduras) son microscpicos,

poseen forma redonda, estos se reproducen por
gemacin

Estructura de los Hongos

Las hifas son tubos de longitud variable
formadas por una pared celular rgida, en la
que fluye protoplasma.
Las hifas no constan de clulas, sino de
compartimientos

Estructura de la clula fngica

Poseen:
Ncleo con doble membrana
Nuclolo
Mitocondrias
Retculo endoplsmico
Vacuolas
Ribosomas
Aparato de Golgi
Inclusiones cristalinas (ergosterol)

Pared celular
La pared es un exoesqueleto rgido que protege a
la clula y condiciona la nutricin absortiva ya
que no permite la endocitosis. Algunos hongos
unicelulares producen cpsulas constituidas por
polisacridos
mucilaginosos
con
apacidadinmungena y accin antifagocitaria.

Composicin de la pared celular

Esta formada por capas de polisacridos
Glucanos (polmeros -1,6, ramificados de glucosa)
Mananos(polmeros 1,6, ramificados de manosa)
Polmeros de glucosamina
Protenas
Lpidos (ergosterol)
Quitina (polmero -1,4 de N-acetilglucosamina)

Quitina

Ergosterol
H
HO

Tinciones simples

Safranina
til para el estudio de cultivos y productos biolgicos lquidos.
Los elementos fngicos se tien de color rojo intenso, y el
resto del campo toma un tono incoloro o rosa plido.

Rhizopuz sp.

Penicillium sp.

Aspergillussp.

Azul de algodn
El azul de lactofenol tiene tres funciones importantes a
la hora de observar hongos del tipo mohos obtenidos por
aislamiento o de medios inoculados.
El fenol destruye la flora acompaante.

El acido lctico conserva las estructuras fungicas al

provocar un cambio de gradiente osmtico con relacin
al interior del fngico generando una pelcula por as
llamarlo protectora,

Es til para realizar el examen directo de cultivos, ya que es

una tcnica rpida que permite visualizar perfectamente las
estructuras fngicas.
El colorante es fuertemente cido y se usa para la tincin
directa de micelio miclico, el cual toma un delicado color
azul claro.

Composicin:
Alcohol metlico
Azul de algodn
acetico
Agua destilada
250 mL
Alcohol al 96%
Xilol

Microsporiumcanis

Paracoccidioides
brasiliensis
Hongo dimrfico; Se
visualiza macroconidia en
forma de timn de barco

Rhizopus sp

Rhizopusstolonifer

Scedosporiumapiospermum

Anaranjado de Acridina
Se utiliza para la deteccin de bacterias y hongos
en muestras clnicas
Puede utilizarse un microscopio con accesorios
fluorescentes como el de ReichertZetopan. El
microscopio ordinario puede equiparse con filtros
para filtracin fluorescente (BG12, de 4mm de
espesor). Se colocan filtros amarillos de modo de
barreras filtrantes.

Fundamento:
El pigmento se intercala en el cido nucleico
(nativo y desnaturalizado). Con pH neutro, las
bacterias, los hongos y el material celular se
tien de naranja rojizo. Con pH cido, las
bacterias y los hongos se mantienen de color
naranja rojizo, pero el material de fondo se tie
de amarillo verdoso

Composicin:
Alcohol absoluto
cido actico
Anaranjado
de
acridina
Buffer de fosfatos
Cloruro de calcio

Tincin
de ascosporas de
Sowerbyellarhenana en naranja de
acridina

Mucor mucedo.

Candidaalbicans

Tincin con Eritrocina.

til para la observacin de grnulos
causados por:

Nocardia
Madurella grisea
M. mycetomatis
Tincin de Eritrocina en M.
mycetomatis

Solucin de eritrocina.
Reactivos utilizados:

Eritrocina de Grbler 0.20g

Naranja G 1g
Agua destilada 100mL
Granos de micetoma por
Nocardiasp. Grano teido con
eritocina

Tinciones diferenciales:

Son tcnicas que utilizan dos o ms

colorantes y/o principios activos.

Tincin de Gram
Tincin diferencial
Se emplea para teir:
Productos biolgicos lquidos
Exudados de lesiones
Macerados de biopsias
Todos los hongos son positivos a la coloracin de Gram,
excepto Cryptococcus neoformans.

El decolorante alcohol acetona disuelve a los lpidos de la

pared impidiendo la retencin del cristal violeta en los
organismos Gram negativos
Se forma un complejo: lugol-cristal-violeta-ribonucleato de
magnesio
Esta tcnica se basa en las diferencias en el punto
isoelctrico

Blastomycesbraziliensis

Aspergillus fumigatus

Candidaalbicans

Pityrosporum folliculitis

Histoplasmafarciminosum

Tincin Ziehl-Neelsen (cido-Alcohol-Resistentes)

Es el procedimiento utilizado para colorear aquellos
organismos que son difciles de colorear con colorantes
bsicos, porque se muestran impermeables a la coloracin
El contenido lipdico de estos organismos esta compuesto
principalmente por ceras y fosfolpidos que alcanzan hasta un
40 % de su peso seco total

La cido-alcohol-resistencia es la capacidad de ciertos

materiales biolgicos para formar complejos con algunos
colorantes y que luego de la exposicin al alcohol-cido no
ocurre decoloracin
Se cree que el cido miclico es responsable de cidoalcohol-resistencia
Util en algunos microorganismos cido resistentes como
N. Asteroides, N. Brasiliensis y otros actinomicetes.

El calentamiento ablanda ceras permitiendo la entrada del

colorante

El calentamiento es por emisin de vapores

La tcnica de Kinyoun permite la tincin sin la necesidad
de calentamiento
Adicin de nigrosina

Rhodococcusequi

Actinomycesisraelii

Tcnica de Schiff
La tincin PAS (periodicacid-Schiff) es uno de los
mtodos qumicos ms empleados en histologa.

En la tincin PAS se trata el material con cido

perydico, que oxida los 1,2-glicoles formndose grupos
aldehdo en los glucanos y mananos de las paredes celulares
de los hongos
Con el reactivo de Schiff, los aldehdos reaccionan dando
un color rojo luminoso

Los filamentos fngicos, conidias y esporas aparecen rojos

o rosas intensos

El cemento de algunos granos en los micetomas adquiere

un color amarillo naranja
El citoplasma que es verde en general adquiere un tinte
rosa

Permite la deteccin de hongos en muestras de tejido

Mucor sp.

Candidiasis

Aspergillus sp.

Coccidioides immitis

Tincin de Giemsa y Wright

Utilizada para levaduras intracelulares, que generalmente
se encuentran dentro de los macrfagos o monocitos
Forma un halo alrededor de la pared celular
Citoplasma se tie de azul celeste
Un polo se tie de azul oscuro (media luna)

Hystoplasmacapsulatum

Pneumocystisjiroveci

Tinciones especiales

Tincin negativa con tinta china

Fundamento: Este mtodo es ideal para
observar inclusiones refrctiles que no se tien
fcilmente, tales como grnulos de azufre, cido
poli-B-hidroxibutirico, esporas o capsulas, debido
a que las partculas de carbn empleadas estn
cargadas negativamente y son repelidas por la
carga negativa de la pared y delimitan una
silueta mayor que el tamao real de la bacteria

Esta tincin especial

para
visualizar
a
Cryptococcusneoformans
La tinta china se emplea
en una dilucin de 1:2
con
agua
destilada
(suspensin de coloidal de
carbn o nigrosina)
La tcnica consiste en
colocar una gota del
producto biolgico por
examinar y una gota de
tinta china separados por
3 mm

Tincin con tinta china para observar la cpsula

de C. neoformans.

La cpsula aparece como un halo claro y ntido en torno a una

levadura redonda, delimitado por las partculas de carbn en
suspensin coloidal de la tinta china, exhibiendo un ntido contraste.

Tincin de Esporas
Tincin de ascas y ascoposras de todos los hongos, y
especialmente til cuando, se trata de visualizar
levaduras en los Hemiascomycetes, ya que con las
tinciones habituales es muy difcil distinguir sus
formas sexuales.
Reactivos
Verde de malaquita se tie la espora
Safranina se tie la clula vegetativa
Las ascas y ascasporas se tien de color verde, en
tanto que las levaduras toman coloracin roja

Ascosporas de Daldiniaconcentrica

Tincin de Gomori-Grocott
(Metenamina de plata)
Fundamento: Entre las coloraciones especiales
para hongos, la plata-metenaminas de Gomori.
La reaccin tintorial esta basada en que
presencia de acido crmico, los grupos hidroxilo
de lo polisacridos de la pared celular de los
hongos son oxidados a aldehdos; estos a su vez,
reducen el complejo nitrato- plata metenamina
produciendo la coloracin caf a negra, debido de
la plata reducida en los lugares de localizacin
de los aldehdos

Imagen histolgica, tincin con Gomori-Grocott (tincin con plata)

mostrando esfrulas en diferentes estados de maduracin.

Tincin de Gomori-Grocott
Con esta tcnica los hongos se tien de color negro al igual que
una bacterias; la mucina adquiere un color gris oscuro; las
partes internas del micelio, rosa oro; el fondo aparece de color
verde claro
Reactivos
cido crmico.- Oxidacin de grupos hidroxilo de los
polisacridos de pared celular
Bisulfito de sodio.- Buffer
Metamina-nitrato de plata.- Produccin de color caf a negro
en la pared
Cloruro de oro.- Colorante de contraste en la pared
Verde brillante.- Colorante de fondo en la preparacin

Blanco de carcoflour
Fundamento: El calcoflor es un flourocromo que se une
a polisacridos con los enlaces beta 1-3 y beta 1-4 presentes
en polmeros tales como celulosa y la quitina. El colorante
fluorece cuando se expone a una fuente de luz ultravioleta
de onda corta o capaz de producir la luz azul (longitud de
onda 410-450 nm). Es un mtodo de alta sensibilidad para
definir claramente los elementos micoticos con
microscopio de fluorescencia
Reactivos
Calcoflour blanco M2R (polysciences)
Azul de Evans

Negro de clorazol E
Fundamento: Es un colorante que permite visualizar
rpidamente y ntidamente las estructuras micoticas
unindose especialmente a la quitina. Tiene la desventaja
de degradarse con la luz, por lo requiere mantenerse en
oscuridad. Adems debe prepararse mensualmente. Las
preparaciones con la muestra deben leerse al mismo da de
la realizacin, ya que el colorante se precipita con el
tiempo y al secarse.
Clorazol E
DMSO
KOH al 7%

Helvellalacunosa en L4 C (negro de clorazol)

Procedimientos

Azul algodn-lactofenol (colonias de Hongos)

Poner en un portaobjetos limpio sobre una superficie
iluminada y transparente o en su defecto sobre una hoja
blanca
Poner una gota pequea de azul de algodn lactofenol en el
centro del portaobjetos
Tomar un fragmento de la colonia mediante una asa
Montar la preparacin depositando suavemente un
cubreobjetos sobre el portaobjetos
Sellar con esmalte incoloro

Tincin con eritrosina

Fijar con alcohol metlico por 10 min
Cubrir con eritrosina por 15 min
Lavar ligeramente con agua de la llave
Hacer pasar rpidamente alcohol al 70 % y se deja secar
Pasar por alcohol absoluto durante 5 minutos y dejar secar
Poner xilol por 15 min y dejar secar
Montar en blsamo de Canad

Tincin con azul algodn actico

Fijar con alcohol metlico, cubriendo el portaobjetos y se
deja evaporar
Cubrir la preparacin con azul de algodn actico por 20
min, calentando hasta la emisin de vapores
Lavar rpidamente con agua
Pasar por alcohol al 96 % y secar
Pasar por Xilol hasta que transparente la preparacin
Montar en blsamo de Canad

Tincin de ZiehlNeelsen para Actinomyces

La preparacin se llena con fucsina fenificada a emisin de
vapores por 3 minutos
Decolorar con alcohol-cido y se lava con agua
Cubrir la preparacin con azul de metileno durante 1 min y
se deja escurrir
Se deja secar y se observa a 10X y 40X

Tincin ZiehlNeelsen modificada

La preparacin se llena con fucsina fenificada a emisin
de vapores por 5 minutos
Decolorar con alcohol-cido y se lava con agua
Cubrir la preparacin con azul de metileno durante 2 min y
se deja escurrir
Colocar una gota de nigrosina en el extremo del
portaobjetos y se extiende como si fuera un frotis sanguneo
en capa fina, se deja secar y se observa a 10X y 40X

Tincin Gram

Tincin de Wright
No es necesario fijar el frotis
Coloque el portaobjetos completamente horizontal sobre una
superficie adecuada que deje libre la mayora de sus bordes y
cbralo con el colorante
Despus de 3 min agregue solucin buffer de fosfatos o
agua destilada en la misma cantidad que la del colorante,
mezcle la solucin, aplique una corriente de aire sobre la
mezcla mediante una pipeta
Despus de 5 min enjuague con agua de la llave
Deje secar y lea al microscopio en seco dbil, seco fuerte y a
inmersin

Referencias bibliogrficas.
Guzman Arenas Roberto, Micologa mdica., Editorial
McGraw-Hill, 2. Edicin; Mxico, 2004. Capitulo 34 pag 299305
RubenLopezMartinez, Micologa Mdica Procedimiento para el
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F.J. Baker, Manual de Tcnicas de Micologa Mdica
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Lynch, M; Raphael, S. Mtodos de Laboratorio. Editorial
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MURRAY, G. Microbiologa Mdica. Edit. El Manual
Moderno. 3 edicin Mxico D.F. 1997 pag 175-182