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2752 Tecnicas de Colecta y Tincion de Parsitos

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1

UNAM

FACULTAD DE ESTUDIOS
SUPERIORES ZARAGOZA

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA II

TÉCNICAS DE COLECTA Y TINCIÓN DE
PARÁSITOS

EQUIPO: 3

Barrientos Hernández Fernando
García Flores Eduardo
Romero Medina Luz Elena

Que el alumno aprenda a colectar
material parasitario de animales de
experimentación y domésticos.
Que el alumno utilice y practique las
diferentes técnicas de tinción,
utilizadas en parasitología.
Que el alumno aprenda a conocer
las preparaciones, de diversos
parásitos colectados por él.

A

los animales
solicitados se les sacrifica
en una forma rápida y los
menos dolorosa posible,
se les toma sangre y se
realiza lo siguiente:

MÉTODO

Materia fecal: Frasco limpio de boca ancha
lejos del calor y el frío.

Muestra de orina: 1ª parte de la micción de
preferencia en tubo de ensayo e hisopo.

Muestra sanguínea: Punción o extracción en
tubo.

Los embases deben estar completamente
limpios y secos antes de usarse.

4

Radicará en el mantenimiento
del parásito en condiciones
apropiadas, en donde se
asegure la integridad de este,
para el desarrollo de un
diagnóstico apropiado.

IMPORTANCIA DE LA
COLECTA
.

Conservación:

Puede ser física: Temperatura

Puede ser química : Soluciones
químicas

7

Impregnación que se
produce al ejercer presión
con un portaobjetos sobre
el tejido que va a ser
examinado.

Se fijan y se tiñen como un
frotis sanguíneo.

IMPRONTA

a) Técnica
de gota
gruesa

I) SANGRE

9

b)Frotisoextensiónfinadesangre:

Fijación:

Los procedimientos químicos son los
más utilizados para matar y fijar
parásitos.

El objetivo de la fijación es detener los
procesos metabólicos.

Los fijadores conservan indefinidamente
la muestra.

FIJADORES

Schaudinn

PVA

MIF

PAF

AFA

For-
malina

Glicerol
gelatina

Útil para diferentes
formas
parasitarias

Estas se colorean
en verde-amarillo
o marrón

Composición ya
antes
mencionada, se
toman 2 o 3 gotas
de MIF más
heces, ya antes
tratadas y se pone
en un porta
objetos limpio.

Tinción MIF

Fijador de quistes,
protozoarios,huevos,
helmintos.

Se recomienda calentar la
formalina a 60 grados C al
usarse para huevos de
helmintos (inhibe su
desarrollo infectivo)

Formula

Formaldehído
Soloucion salina 0.85%
Proporcion de uso

3 partes de formalina por
una parte de materia fecal

Formalina

Fijador de trofozoitos
y quistes
(combinación
Shaudinn más resina)

PVA
Etanol 95%
HgCl2
Ácido acetico
glacial
Glicerina
Proporción 1:3
(muestra/fijador)

PVA (Alcohol polivinilico)

Tinción:

Las tinciones pueden realizarse en dos

formas:

Progresivas: son aquellas en las que el
material se coloca en colorante diluido,
durante el tiempo necesario para lograr la
tinción hasta la intensidad deseada.

Regresivas: son las tinciones en las que el
material o preparaciones se colocan en
colorante concentrado hasta lograr una
sobre tinción y posteriormente decolorar
hasta lograr la intensidad deseada.

TIPOS DE TINCION
SU FORMA DE ACCION

16

Para que los productos tomen el color
de un colorante, ya sea uno a uno o
mezclados adecuadamente a veces es
necesario la acción de un mordente;
generalmente se utiliza una sal
compuesta de aluminio o hierro o bien
un ácido, ya sea antes del colorante, o
adicionado a la solución de tinción.
Para procesos contrastantes es
necesario utilizar más.

Montaje:

Los especimenes ya aclarados , se montan con
bálsamo de Canadá o resina sintética. Para
piezas grandes como proglótidos de cestodos
o trematodos como F. Hepática, se requiere un
medio de montaje espeso, mientras que para
frotes debe estar diluido para posteriormente
hacer una buena observación con objetivos de
inmersión.

Identificación de parásitos de
carácter uni o pluricelular para
la realización de un diagnostico
confirmativo.

Ciclo
biológico

Enfermedades

Vectores

Parásitos
de
Importancia
Médica

Ectoparásitos

Endoparásitos

Hemoparásitos

MANIPULACIÓN DEL VECTOR

› Mantener la integridad del capturador.
› Mantener vivo e integro al vector hasta la
recolección del parásito.
› El parásito debe ser recién extraído.
› Debe ser representativo a la enfermedad
que produce.
› Representa la magnitud de la enfermedad
en el paciente y en la población.

Parásito
representati
vo

Colorante
de
contras
te

Fresco

Fijación

Pluricelulares

Aseguramiento de la
eliminación de la
patogenicidad

Unicelulares.
Extremar
precaución
Aun patógeno

Aclaración de
tejidos y
tinción

Tipos de
muestra

Cuidados de la
muestra

Técnicas

Parásitos

sangre

• Heparina
• Azida de
sodio
• Recién
extraída

•Gota gruesa
•Gota fina

•Hemoparásitos
intra/extra
eritrocitarios

ectoparásito

vivo

•Sacrificado
•Fraccionado

•garrapata

Heces fecales

•Frasco boca
ancha limpio y
seco ausencia de
orina y rotulado

Varios procesos

Parásitos
intestinales

sólidas

Cerradas( evitar
desecación) y
refrigeradas
2grados C

•Cps
•Flotación
•concentración

Huevos y/o
quistes
nemátodos

líquidas

37 grados C
recién
obtenidas

Observación
en fresco

Trofozoitos y
quistes

tejidos

frascos con
fijador
•formalina

Varios
procesos T. solium

•Orina
•exudados

Frascos
limpios,
secos, boca
ancha. Tubo

con sol’n

salina
isotónica

Observación
en fresco y/o
tinción de
exudado

Trichomonas
vaginalis

Obtención
Fijación
Conservador
Tinción
Montaje
Observación
Identificación

TINCIONES

Temporales
Lugol
Giemsa
Eosina 5%

Fijas
Hematoxilina
Férrica
Tinción indica

Supravitales

Azul de cresilo
75% solución

Fijador de quistes,
trofozoitos, huevos,
larvas
Solución de trabajo
más muestra ( no se
almacena)
Proporción 1:3
(muestra/fijador)

Solución concentrada
HgCl2
Agua destilada
Etanol
Solución de trabajo
Solución
concentrada
Acido acetico glacial

SHAUDIN

Fijador y
conservador de
casi todos los
elementos
parasitarios

1) Agua destilada
Tintura de
merthiolate,
formaldehído y
glicerol
2) Lugol
Porción 14 mL de
1) más 1mL de 2)
más 2g de
muestra

MIF (Merthiolate-yodo-
formaldehído
)

Preserva quistes y
trofozoitos, además
de huevos y larvas
de helmintos

Fórmula
Fenol
Solución salina
Etanol 95%
Formaldehído
Proporción 1:5
(muestra /fijador)

PAF (Fenol-alcohol-formaldehído)

Preservador de
trematodos y
cestodos

Fórmula
Etanol 95%
Formaldehído
Agua destilada
Ácido acético
glacial

AFA (Alcohol-formaldehído-ácido acético)

Preparaciones
permanentes
de nematodos

Formulación
Gelatina
Agua
destilada

Glicerina
Fenol

Glicerina-gelatina

Tinción de negro E de clorazol.
Hematoxilina ferrica Heidenhain
Tinción tricomica
Hematoxilina tungstica de Dobell
Hematoxilina molibdica de Dobell
Tinción de Hematoxilina y eosina
Tinción de Noble
Colorante de Mann
Tinción para Cryptosporidium ssp e isospora spp
Coloración de Giemsa
Técnica de tinción para Trichomonas vaginales
Coloración para parásitos sanguíneos
Tinción Wright
Tinción tricromica (modificada por Cerva), para amibas
de vida libre.

TINCIONES PARA PROTOZOARIOS

Hematoxilina:
colorante básico para
teñir estructuras
(núcleos celulares).
Existen distintas lacas
alumínicas

de

hematoxilina:
Hematoxilina

de
Harris: Por su
estabilidad

(se
conserva entre 6-12
meses). Es de fácil
manejo.
Coloración regresiva,
se elimina el exceso
de colorante con
alcohol.

34

Como agente oxidante se utiliza el
óxido de mercurio.
Tiñe los núcleos de color azulado.
Hematoxilina de Mayer: Es un tipo de
coloración progresiva (no requiere lavado
posterior). Se usa el yodato de sodio
como agente oxidante.
Tiñe los núcleos de azul suave.
Hematoxilina ácida de Erlich.
Hemalumbre de Delafield: Utilizada en
técnicas histoquímicas e inmunológicas.

Coloración para platelmintos.
Tinción con alumbre carmín.
Hematoxilina Dalafield.
Tinción de Reynold.
Tinción de carmín acético de Semichon.
Tinción con hemateína de Roudabush.

Tinciones para
helmintos

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