Eritropoyetina

recombinante

Eritropoyetina Introduccin
Hormona renal esencial para la viabilidad y
proliferacin de los progenitores eritrocitarios
generando reticulocitos en la medula sea.
Durante el perodo embrinario la EPO se
produce en los hepatocitos pero tras el
nacimiento se da en el rin.
Es una cadena de 165 residuos de
aminocidos y 4 glicanos de
aproximadamente 34 kDa.
Su produccin es regulada por la tensin de
oxgeno tisular.
La deficiencia de sta es la causa primaria
de anemia en enfermedad renal crnica.

Historia

Paul Carnot

USO CLNICO DE LAS ERITROPOYETINAS

RECOMBINANTES

Los agentes recombinantes anlogos a

la eritropoyetina son producidos para
el tratamiento de la anemia en
pacientes con enfermedad renal
crnica

Hay dos agentes de eritropoyetina humana

recombinante en el mercado, epoetin alfa y epoetin beta.
Ambas son estructuralmente homlogas a la hormona
endgena

FARMACOLOGA
Actan sobre el receptor de la eritropoyetina
Promueve la proliferacin y supervivencia de
clulas progenitoras eritroides en la mdula
sea, incrementando el conteo de clulas rojas
circulantes y la concentracin de hemoglobina.

FACTORES QUE AFECTAN LA EFICACIA

DE LA rHuEPO

Ingesta de hierro, vitamina B12 y cido flico.

Infecciones agudas o crnicas.
Enfermedades inflamatorias.
Toxicidad por aluminio.

Beneficios secundarios a la
correccin de la anemia por rHuEPO

Revierte o mejoran los efectos causados en el

sistema cardiovascular.
Mejora la funcin de las plaquetas.
Mejora la funcin sexual.
Mejora la funcin endocrina.

Efectos adversos de la terapia con

rHuEPO

- Se piensa que los efectos adversos reportados no

son debidos al producto recombinante per se pero si
a el incremento en el hematocrito y viscosidad de la
sangre resultantes del tratamiento.
- Los efectos adversos reportados son:
- Hipertensin (20 30% de los pacientes
tratados)
- Encefalopata
- Trombosis vascullar
- Hiperkalemia
- Sntomas como de influenza
- Irritacin de la piel (slo en eopetin alfa)

Produccin comercial de
eritropoyetina recombinante

Para la produccin de EPO recombinante, debemos

asegurarnos que el mtodo utilizado gener la correcta
secuencia de aminocidos y la cantidad correcta de
glicosilaciones, para alcanzar la eficacia deseada in vivo.

La clula hospedadora usada para la produccin de

eritropoyetina recombinante debe ser de mamfero, en
este caso se usan lneas celulares de ovarios de hmster
chino, CHO.

Clulas CHO generasn patrones

de glicanos muy bien tolerados por
los pacientes y producen altas
tasas de crecimiento.

Desarrollo de la lnea celular

A) Trensfeccin y seleccin: el desarrollo de la lnea celular comienza

con la transfeccin de un vector de expresin a la lnea celular
hospedadora. Le siguen etapas de seleccin para matar selecivamente a
las clulas que no tienen el vector de expresin. Dando una diversa lnea
de clulas sobrevivientes. Las cuales producen un Master Cell Bank

En este caso el vector contiene:

Un plsmido pBR322
mutante.
Un mini gen de
dihidrofolato reductasa de
ratn.
Origen de replicacin de
SV40.
El crecimiento de estas
clulas en un medio con
mehotrexato nos dar una
amplificacin de la
produccin de r-HuEPO.

Produccin

La habilidad del cultivo celular de producir la hormona es afectada por

ambiente nutricional y otros parmetros fsicos como temperatura, pH,
osmolaridad y concentracin de gases disueltos.

La materia prima usada para el procesos de fermentacin consiste en el

banco de clulas y los nutrientes para mantener y expandir esas clulas.
Los nutrientes suelen se amino cidos, fiuentes de carbono adicionales
(glucosa), vitaminas, elementos traza, factores de crecimiento, hormonas
y sales.

Produccin

Produccin comercial de la
eritropoyetina

Produccin comercial de la
eritropoyetina

Crecimiento celular
En el primer reactor se coloca medio de cultivo estril y
se inocula con clulas CHO para la formacin de biomasa
durante 13 das aproximadamente,
Es importante mantener el pH en 7-7,5, la temperatura en
30 C y cambiar de medio de cultivo cada 72 horas.

Fermentacin y expresin.
Cuando las clulas llegan al da 13, se depositan en
fermentadores de 10 L, y son mezcladas con medio de
cultivo adicionado con insulina y metrotrexatoque facilita
la expresin de eritropoyetina al medio. Se mantienen las
mismas condiciones del paso anterior.

Produccin comercial de la
eritropoyetina

Formulacin
En base a la cantidad de eritropoyetina se adicionan
las cantidades correspondientes de excipientes para
asegurar la formulacin con la que saldr al mercado.
La mezcla se dosifica en viales de vidrio, previamente
lavados y esterilizados.

Liofilizado
Los viales se introducen en una liofilizadora para
evaporar el agua y obtener un polvo blanco muy fino.