Folleto de Algas

Escuela Superior Politcnica del Litoral, 1994

Impreso en Ecuador

CAPITULO III
Introduccin al mtodo ficolgico
Objetivos

Miscelanea de preguntas.

Despus de estudiar este captulo el estudiante deber

estar en condiciones de:

Bibliografa.

1.- Explicar las fases del crecimiento en una poblacin

algal.
2.- Explicar las distintas formas de produccin de
algas por su naturaleza, por su forma de cosecha y por la
pureza del cultivo.

Crecimiento de una Poblacin Algal

Fases del crecimiento.- En un cultivo de algas del
tipo batch (ciclo), el crecimiento se presenta con cinco
fases o etapas de desarrollo como se ve en la figura 3.1

3.- Entender el diagrama del proceso de produccin y

conocer las particularidades tcnicas que se dn en cada
etapa.
4.- Clasificar por su tamao y uso las algas ms
cultivadas en laboratorios comerciales.
5.- Describir los pasos en la tcnica de aislamiento
mediante el uso de la pipeta capilar y el rayado en agar.
6.- Explicar el mtodo de purificacin mediante
tratamiento con antibiticos.
7.- Conocer los diferentes desinfectantes no voltiles
de uso en laboratorios de algas.
8.- Saber el principio en que se basa el mecanismo de
esterilizacin.
9.- Reconocer las algas microscpicas comunes de
aguas servidas.
Sinopsis del captulo
Crecimiento de una poblacin algal.
Fases de crecimiento.
Formas de cultivo.
Procedimiento general en la produccin de microalgas.
Algas comunes que se cultivan en laboratorios.
Contenido nutricional de las microalgas.
Aislamiento y purificacin.
Mtodos de aislamiento.
Mtodos de purificacin.
Desinfeccin y esterilizacin.
Desinfectantes no voltiles.
Mecanismos de esterilizacin.
Miscelanea de algas microscpicas presentes en aguas
servidas.

Figura 3.1 Fases del desarrollo de un cultivo de microalgas

Fase de ajuste.- Es la etapa de adaptacin que sufren

las algas a las nuevas condiciones del cultivo. Esta fase es
corta y no hay incremento neto de la poblacin.
Fase exponencial.- Aqu las clulas se duplican
sucesivamente en intervalos iguales de tiempo. En esta
fase, K es constante.
K = (log2 N2 - log2 N1) / (T2 - T1)
donde K es la constante de reaccin o tasa especfica
de crecimiento (1/das), log es el logaritmo en base 2, N es
la medida de la biomasa o nmero de clulas y T es el
tiempo.
Fase de retardo o declinacin.- En esta etapa el
tiempo requerido para duplicar la poblacin aumenta,
reduciendose la tasa de crecimiento. Esto se debe a que los
nutrientes estn disminudos en el medio, hay un aumento
en la concentracin de los metabolitos y una reduccin de
la actividad fotosinttica por el incremento de la densidad

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Henry G. Alvarez Arellano

de la poblacin, que reduce la disponibilidad de luz por

unidad de clula .

en:

Fase estacionaria.- Esta fase es corta y no hay un

incremento neto de la poblacin. La tasa de crecimiento
se compensa con la de mortalidad celular, de tal modo que
= d, donde es la tasa de crecimiento y d es la tasa de
mortalidad.

Cultivos axnicos: Son cultivos libres de bacterias y

estriles, para mantener la productividad por un perodo
prolongado de tiempo. Estos cultivos son delicados y de
cuidado. Requieren todo el tiempo de material estril y
asepcia.

Fase de muerte.- Aqu la tasa de mortalidad supera a

la tasa de multiplicacin celular, es decir que d > .

Cultivos monoespecficos (clonales): Aqu la

poblacin de microalgas est parcialmente contaminada
por otros microorganismos como bacterias y protozoarios.
Son empleados en cultivos del tipo batch y extensivos.

El crecimiento sostenido de una poblacin depende de

la interaccin mutua de factores fsicos, qumicos y
biolgicos; dicho crecimiento se expresa grficamente
como el incremento en funcin del tiempo de la biomasa o
nmero de clulas dentro de un cultivo. El cambio
diferencial se representa como :
dN / dT = F ( N )
donde F (N) expresa la tasa de cambio de la poblacin
en el tiempo. Como esta funcin depende de los factores
fsicos y qumicos del medio externo, el resultado cuando
el espacio disponible y los nutrientes son limitados es una
curva sigmoidea. En condiciones constantes de crecimiento
cuando la luz y los nutrientes no cambian en el tiempo F (N)
es proporcional al nmero de organismos:
F(N)=N K=N(-d)

Formas de Cultivo
Por su naturaleza los cultivos se pueden clasificar
en:
Cultivo intensivo: Aqu los factores de crecimiento se
mantienen bajo un sistema controlado, de tal manera que
se pueda obtener una mxima respuesta en la produccin.
Cultivo extensivo: En esta clase de cultivo slo se
controla las variables ms accesibles en su manejo, tales
como las caractersticas del medio y la densidad del cultivo.
Por la forma de cosechar los cultivos se pueden
clasificar en:

Por la pureza del cultivo, ste se puede clasificar

Procedimiento General en el Cultivo de las Microalgas

Mantenimiento de cepas: En esta etapa la cepas
(stocks) de algas se mantienen en fiolas o matraces de 250
cc con 100 ml de medio de cultivo y/o en placas con agar.
El medio de cultivo se prepara segn el procedimiento
descrito para cada caso y segn la especie, sea sta de mar
o de agua dulce. Esta etapa tiene carcter de cultivo
axnico por lo que un mximo de cuidado se debe tener
para no contaminar las cepas. La intensidad de luz debe
estar entre 500 y 1000 lux y la temperatura de 15 grados
centgrados constante. La cepa se mantiene en una
incubador que brinda todas estas facilidades. Las cepas
tambin se mantienen en tubos de ensayo con tapa rosca o
de algodn de 20 cc.
Cultivo inicial: El cultivo inicial se desarrolla en
fiolas o matraces de 500 cc con 250 ml de medio. La
inoculacin de las algas se realiza cuando las fiolas
esterilizadas han alcanzado la temperatura ambiente,
transfiriendo aspticamente bajo una campana de luz UV,
un volmen de 1 a 5 ml de cepa al medio fresco. La boca
de estos recipientes se debe flamear para quemar
microorganismos que pueden ingresar al interior. Luego
de la inoculacin las fiolas son puestas en la estantera
iluminada junto a uno de los matraces viejos para observar
luego de uno a dos das el crecimiento rpido del nuevo
cultivo. Estos cultivos deben agitarse manualmente en
forma peridica y suavemente, a fin de variar la posicin
de las clulas. La intensidad de luz debe estar entre 1500
y 2000 lux .

Cultivos batch: Estos cultivos son intermitentes, se

implementan de una sola vez y son cosechados
completamente despus de que la produccin algal alcance
un nivel apropiado, medido en nmero de clulas por ml.
En el momento de la cosecha el cultivo debe estar en la fase
exponencial.

Cultivo intermedio: Esta etapa se desarrrolla en

fiolas o matraces de 1000 a 2000 cc, con medios del 60 al
65% de la capacidad total. Se transfieren los antiguos
cultivos que hacen de stock (cultivo inicial) de 4 a 7 das.
Esta inoculacin se hace bajo el mismo esquema del caso
anterior evitando que las algas sedimentadas pasen al
nuevo medio. Se transfieren aproximadamente del 80 al
90% del volumen total. Los nuevos recipientes son agitados
con aire filtrado a mximo 1m. La temperatura se puede
mantener a 18 grados centgrados, igual que para la etapa
anterior. La intensidad de luz puede ajustarse entre 2000
y 2500 lux.

Cultivos semicontinuos: Aqu se cosecha una parte

del medio segn la produccin y se renueva el volmen
cosechado por medio de un cultivo fresco.

Cultivo de 10 a 20 l. (Carboys): Los cultivos

intermedios son empleados como inculo para los
recipientes de 10 a 20 litros, (ver fig. 3.2). El agua de mar

Cultivos contnuos: La poblacin algal, las

caractersticas qumicas del medio, la temperatura y
finalmente la luz son mantenidas en un valor constante por
perodos prolongados, procurando un flujo sostenido de
requerimientos y de salida del producto.

Introduccin al Mtodo Ficolgico

antes de ser enriquecida con los nutrientes es bien filtrada

a 1m y esterilizada con UV. Dejar en reposo el agua por
una hora para reducir los perxidos generados, fertilizar e
inocular. Estos perxidos afectan los pigmentos
fotosintticos de las algas. Flamear la boca de cada
recipiente y tomar las precauciones del caso para prevenir
la contaminacin, evitando adems transferir las algas
sedimentadas de los cultivos intermedios. La intensidad
luminosa se ajusta entre 2000 y 5000 lux. La temperatura
se mantiene entre 18 y 20 grados centgrados. En cultivos
batch las poblaciones algales alcanzan densidades mayores
a los 4 millones de clulas por ml. Filtrar el aire como en
el caso anterior.
Cultivo masivo: El grado de contaminacin bacteriana
es mayor en esta etapa. La iluminacin por lo general se
coloca en la parte superior de los recipientes y la intensidad
puede estar entre 4000 y 5000 lux. Los recipientes para
estos cultivos son blancos en su parte interior o son
transparentes en su totalidad. Los inculos son obtenidos
de la etapa anterior que presentan un crecimiento rpido y
carecen de sedimento. En los cultivos masivos la aireacin
no es filtrada y generalmente se desarrolla externamente,
aprovechando la iluminacin del sol. (Fig. 3.2)

21

Algas Comunes que se Cultivan en Laboratorios

Muchas son las especies de algas que se cultivan y
usan en laboratorios de larvas, siendo la ms frecuente las
diatomeas y los flagelados. Ellas son reconocidas
mundialmente como especies adecuadas por su fase de
cultivo y elevado valor nutricional. La tabla VI muestra
algunas especies de uso comn en laboratorios de
produccin de larvas.
Tabla VI. Especies de algas utilizadas en laboratorios
Especie

Tamao (
)

Chaetoceros affinis
Chaetoceros gracilis
Chaetoceros eibenii

30
18
35

Thalassiosira
pseudonana
Skeletonema
costatum
Isochrysis galvana

10

Tetraselmis sp.

12

Chlorella sp
Nitzschia sp.

5
100

16
5

Uso

larvas
larvas, juveniles
larvas, juveniles,
adultos
juveniles, adultos
larvas, juveniles,
adultos
larvas, juveniles,
adultos
larvas, juveniles,
adultos
larvas, zooplancton
juveniles, adultos.

Contenido Nutricional de las Microalgas

Los niveles nutricionales de las algas que se cultivan
con los diferentes medios enriquecidos y consecuentemente
el poder alimenticio de una especie algal depende de las
condiciones generales de crecimiento dadas en el
laboratorio.
La nutricin de las larvas y juveniles depende del
contenido y naturaleza de los constituyentes bioqumicos
de las algas, los que representan la base para la formacin
de los nuevos tejidos, restauracin de aquellos que han sido
afectados y para el metabolismo normal de los organismos
de cra. Una combinacin de algas como dieta brinda un
mayor valor nutritivo debido a que contienen un surtido de
la mayora de los requerimientos nutricionales necesarios
para el crecimiento de las larvas, sean estas de camarn,
moluscos y peces. Ver tabla IV.

Figura 3.2 Diagrama general del proceso de produccin de

microalgas

Los componentes qumicos de las microalgas no

siempren son constantes, refirindose a aquellas que se
cultivan. Estos niveles dependern del tipo y contenido de
nutrientes usados en el medio enriquecido, de la condicin
de la cepa de alga cultivada, de las condiciones de
iluminacin y temperatura, de la fase de crecimiento en
que las algas son cultivadas y de la calidad del agua de mar
empleada en el cultivo. Anormalidades en alguno(s) de
estos factores alterarn significativamente la composicin
bioqumica de las microalgas cultivadas. Un cultivo algal
considerado viejo ya no aportar con mayores ventajas
nutricionales para una cra larvaria.

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Henry G. Alvarez Arellano

Aislamiento y Purificacin

Platos Petri de vidrio o plsticos de 100 x 15 mm.

La aplicacin de los siguientes mtodos para una

colecta natural de algas microscpicas produce cultivos
monoespecficos o axnicos. Aunque tales mtodos son
sencillos sin embargo, la preparacin de cultivos axnicos
requieren paciencia y perserverancia.

Fiolas para 125 ml.

Los medios enriquecidos usados para fines de

aislamiento y purificacin pueden ser aquellos que se
revisan en el siguiente captulo para agua dulce y salada.
Las condiciones de iluminacin y temperatura son las
mismas descritas para el cultivo intermedio.
Entre los mtodos de aislamiento ms usados se
nombran:
1.- Pipeta capilar (simplificado).
2.- Rallado en agar.
3.- Aislamiento en agar.
4.- Rociado en plato.
Entre los mtodos de purificacin ms conocidos
tenemos:

Los mtodos de aislamiento y purificacin a describirse

son generales y aplicables a muchas especies algales, no
estan dirigidos para especies especficas. Las fuentes de
algas para aislamiento slo incluyen muestras
planctnicas y se refieren a colecciones naturales.
Metodos de aislamiento.
Es necesario el aislamiento de una unidad algal y la
colocacin de la misma en un medio de cultivo adecuado
para su multipliacin, a fin de establecer un cultivo unialgal
(monoespecfico). El trmino unidad se refiere a cualquier
clula, colonia, filamento, pieza o parte del talo y cuerpo
reproductivo. Un cultivo unialgal establecido es necesario
para preparar un cultivo axnico.
De todos los mtodos nombrados para aislamiento el
de pipeta capilar y el de rayado en agar son los ms
empleados para este fin. Las algas menores a 10
difcilmente son aisladas con pipeta capilar. Filamentos
pueden aislarse con pipeta capilar .

1.- Lavado.

Pipeta capilar (simplificado)

2.- Antibiticos.

La tapa de un plato Petri invertido se emplea como

rea para aislamiento:

3.- Potasio telurito.

Instrumentos pticos requeridos:
Estereo-microspio con iluminacin de abajo hacia
arriba.
Microscopio ptico compuesto.
Equipos:
Incubador iluminado con control de temperatura.

a) Coloque de 10 a 15 gotas de una coleccin natural

en el centro de la tapa invertida.
b) Coloque 8 gotas de un medio de cultivo adecuado
en 8 posiciones rodeando la coleccin natural. Marque
primero con nmero la posicin de cada gota por la cara
interior de la tapa.
c) Usando una pipeta Pasteur nueva estirada y estril,
transfiera las algas deseadas de la coleccin natural a la
gota nmero 1 del medio de cultivo.

Campana estril.
Cmara de Neubauer.
Implementos:
Mechero de gas.
Asa de platino con gancho de 4 mm.
Tacho para desechos de vidrio.
Recipiente para pipetas usadas.
Vidrios y plasticos:
Tubos de ensayo con tapa rosca (18 x 150 mm).
Pipetas Pasteur de 9" tapadas con algodn en la boca
ancha.
Goteros de caucho para usarlos con las pipetas Pasteur.
Envase metlico con tapa para guardar pipetas Pasteur
y esterilizar.

d) Transfiera una sola alga desde la gota nmero 1

hasta la gota nmero 2.
e) Repita este proceso de transferencia con el resto de
las gotas del medio de cultivo hasta asegurarse que una sola
unidad algal requerida est presente en una gota.
f) Transfiera esta unidad algal a tubos de ensayos que
contienen el medio de cultivo esterilizado. Como
precaucin, esta unidad algal en una gota puede ser
transferida primero a un fragmento de un cubreobjeto que
descansa en un portaobjeto, para examinarla con el
microscopio compuesto. El fragmento con la gota y la
unidad es entonces transferido al tubo de ensayo con el
medio de cultivo para su desarrollo. De esta manera se
asegura que una sola unidad algal es aislada y que
efectivamente va al medio de cultivo.
g) Coloque los tubos bajo condiciones favorables para
crecimiento. (Fig. 3.3)

Introduccin al Mtodo Ficolgico

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Rayado en agar
Este mtodo brinda mayor facilidad para aislar algas
de tamao igual o menor a 10 m de dimetro.
Tambin produce cultivos axnicos.

Figura 3.4 Aislamiento de una unidad algal: Mtodo Rallado

en Agar

Figura 3.3 Aislamiento de una unidad algal: Mtodo Pipeta

Capilar

a) Prepare platos Petri (vidrio o plstico) de 100 x 15

mm, conteniendo medio de cultivo solidificado con 1 a
1,5% de agar.
b) Coloque dos gotas de coleccin natural cerca de la
periferia en el medio solidificado.
Con el asa de platino (punta esterilizada sumergida en
alcohol y quemada), bajo criterio de asepsia, rayar en
paralelo la muestra de la coleccin en el agar.
c) Cubra el plato, inviertalo e incubar de 4 a 8 dias
bajo adecuada condicin de crecimiento.
d) Pasado este tiempo observar directamente en el
estereomicroscopio el rayado y seleccione las colonias
deseadas que estn libres de otros organismos.
e) Remueva las colonias seleccionadas usando una
pipeta Pasteur estirada estril o el asa de platino y colquelas
en una gota de medio de cultivo estril sobre un cubreobjeto.
En un microscopio compuesto observe las unidades de
algas deseadas y que sean de la misma especie.
f) Repita el procedimiento de rayado de una sola zona,
constatar y nuevamente incubar para que se formen las
colonias. Este segundo rayado reduce la contaminacin
por bacterias y asegura agrupaciones de unidades algales
de la misma especie.
g) Transfiera las unidades algales de una colonia a un
medio lquido (tubo de ensayo) o solidificado. (Fig. 3.4)
Mtodos de Purificacin
Unidades algales aisladas con pipeta capilar pueden
presentar contaminantes asociados como bacterias.

Tambin el manejo prolongado de cepas de algas pueden

contaminarse en un momento con microorganismos que
utilizan los mismos nutrientes del medio y cuando se
desarrollan pueden afectar las algas. La presencia de
microorganismos y bacterias contaminantes pueden
detectarse con el microscopio compuesto o mediante prueba
y anlisis microbiolgico conocido. Entonces es necesario
eliminar o inhibir el crecimiento de dichos microorganismos
in situ mediante procedimientos qumicos. Se asume que
todo aparato, equipo, implemento o medio de cultivo estn
esterilizados antes de ser usados.
Tratamiento con antibiticos
Puede usarse un antibitico o una combinacin de
stos para eliminar o inhibir el crecimiento de
microorganismos que se adhieren a las clulas algales. El
presente procedimiento corresponde a uno descrito por J.
R. Stein en su texto Handbook of phycological methods:
a) Preparar la solucin de antibiticos, disolviendo
primero 100 mg de penicilina G y 50 mg de sulfato de
estreptomicina juntos en 10 ml de agua destilada. Agregar
a este preparado 10 mg de cloranfenicol que ha sido
disuelto primero en 1 ml de ethanol al 95% y agitar bien.
b) Filtrar esta solucin rpidamente con filtro de
membrana (0.2 - 0.45 ).
c) Colocar 1ml de cultivo algal contaminado en cada
uno de los seis Erlenmeyer (fiolas) de 125 ml que contienen
50 ml de medio de cultivo estril.
d) Agregar uno de los siguientes volmenes de la
solucin de antibitico en cada fiola: 3, 2, 1, 0.5, 0.25,
0.125 ml. Esto provee concentraciones de penicilina de
aproximadamente 20 a 500 mg/l. y los niveles que
corresponden a los otros 2 antibiticos.
e) Las fiolas debidamente tapadas son puestos bajo
condiciones favorables de crecimiento.
f) Despus de 24 - 48 horas aspticamente transfiera
algunas unidades algales de cada fiola a tubos de ensayo
conteniendo medio de cultivo estril y libre de antibiticos.
Hacer esto por triplicado en cada intervalo de tiempo.
g) Colocar estos tubos en condiciones favorables de

24

Henry G. Alvarez Arellano

crecimiento. Chequear los tubos y hacer pruebas de

contaminacin bacteriolgica despus de 2 y 3 semanas,
ver fig. 20
En ocasiones las algas pueden contaminarse con otras
especies algales como las verde - azules y estas pueden ser
eliminadas usando antibiticos. Medios de cultivo
conteniendo 25 ppm. de estreptomicina pueden resultar
efectivos.
El uso de antibiticos requiere cuidado en la
concentracin de los agentes qumicos y en la duracin del
tiempo en que las algas son expuestas al tratamiento. (Fig.
3.5)

Desinfeccin y Esterilizacin
Los trminos desinfeccin y esterilizacin parecen
sinnimos, sin embargo hay diferencias fundamentales
entre ellos.
Desinfeccin significa la reduccin del nmero de
bacterias hasta un nivel aceptable: bacteriosttico.
Esterilizacin significa el proceso en el cual se asegura
la total inactivacin de todos los microorganismos:
bactericida.
A continuacin se exponen mecanismos para
desinfeccin y esterilizacin:
Desinfectantes no voltiles
El uso de estos compuestos est confinado a la
reduccin de la carga microbiana de los instrumentos y
superficies. Los siguientes desinfectantes son ms
comnmente usados, ellos pueden ser aplicados
directamente sobre las superficies o los implementos pueden
ser sumergidos en ellos:
a) Lisol al 3,5 % (v/v): Acta rpidamente sobre
clulas vegetativas (en capacidad de reproducirse). No es
efectivo contra las esporas. Puede quemar la piel al tener
contacto con este desinfectante.
b) Cloro (hipoclorito): Usado en solucin a una
concentracin de 400 ppm, como cloro activo. El
compuesto ms usado en nuestro medio es el HTH. Como
hipoclorito es efectivo contra las esporas entre 15 y 70
minutos de accin. La preparacin de esta solucin de
hipoclorito corroe los instrumentos metlicos.
c) Formaldehdo: En solucin al 5% es considerado
efectivo a temperatura ambiente. Requiere de 24 horas
para ser efectivo. Pequeas cantidades de materia orgnica
restringen mucho su accin. Es irritante a los ojos y a la
mucosa nasal.

Figura 3.5 Purificacin: Secuencia de un tratamiento con

Antibiticos

d) Alcohol: Como etanol al 70% ( v/v ). No es un

buen desinfectante, por lo que es ms usado por su efecto
antes que por su eficiencia.
Mecanismos de esterilizacin

Otros antibiticos pueden ser usados para purificacin

como las sulfonamidas. Para comprobar la presencia de
los contaminantes se puede recurrir a la directa observacin
en el microscopio de contraste de fase:

El calor hmedo es la forma ms usada para producir

esterilizacon. Es aplicable a todos los medios y materiales
que pueden resistir temperaturas de 100 a 120 grados
centgrados.

1. Aspticamente tome muestras del cultivo de algas.

2. Colquelas en lminas portaobjetos estriles y si es
necesario agregar medios de cultivo estriles a las muestras.
3. Cbralos con laminillas cubreobjetos estriles.
4. Observe al microscopio equipado con iluminacin
de contraste de fase.
5. Usando el mayor aumento posible: 20X/10X /40
aumento, buscar la presencia de microorganismos en la
muestra.

a) Autoclavado (olla a presin): La esterilizacin se

logra por autoclavado a 121 grados centgrados en vapor
puro y saturado a 15 lb / plg2 de presin. Asegurarse que
todo el aire del interior sea removido. El tiempo requerido
para lograr una esterilizacin correcta vara segn el
volmen a ser tratado: 100 ml requieren 10 minutos, 2
litros requieren 20 y 5 litros requieren 35 minutos
aproximadamente.
b) Bao en agua hirviendo: En un recipiente de
acero inoxidable ponga a hervir agua destilada (100 grados

Introduccin al Mtodo Ficolgico

centgrados). Coloque aqu el medio o los instrumentos a

esterilizarse, dejndo que se caliente por 10 minutos. Este
mtodo elimina clulas vegetativas, pero no las esporas.
Es un mecanismo empleado slo en emergencias.
c) Filtracin: Grandes volmenes de medio pueden
filtrarse a travs de papel filtro de mayor dimetro (125
mm.), bajo presin normal y sin vaco. Aunque el vaco
puede emplearse tambin, el efecto de la presin normal
simplifica el filtrado de grandes volmenes de lquido, ver
fig. 3.6
Volmenes de medio para cultivos iniciales e
intermedios pueden esterilizarse con unidades de filtracin
al vaco y membrana microporosa de 0.5 . Usar 5 lb. de
presin cuando se filtra con estas membranas. (Fig. 3.7)

25

Medida del crecimiento

El objetivo de contar algas no es slamente establecer
la poblacin (densidad) de clulas por mililitro que hay en
un recipiente, sino tambin determinar numricamente el
grado de divisin celular en un determinado tiempo. Los
resultados permiten estimar en cierto modo la situacin de
un cultivo y relacionarlo con la curva de crecimiento de esa
poblacin algal.
El mtodo empleado para contar algas es sencillo.
Implica el uso de un dispositivo que permita el contaje. De
todos los dispositivos conocidos el ms usado en los
laboratorios marinos comerciales de nuestro medio es el
hemocitmetro. Para fines de investigacin tambin se usa
la cmara de Sedgwick-Rafter.
Dispositivos de conteo y usos:
Dispositivo

Tamao de la clula

Hemocitmetro

2 - 30 um

Densidad

Objetivos

5 X 10 4 - 107

10X o 20X

(0.1 mm deep)
Sedgwick-Rafter

50 - 500 um

30 X 104

2.5 a 10X y 20X

Por lo general estos dispositivos son bien usados para

contar algas que se cultivan en recipientes, pero no
necesariamente son muy convenientes para contar
poblaciones naturales.Los mtodos para estimar biomasa
de algas de ambientes naturales generalmente requieren de
la sedimentacin del plancton.
Equipos y accesorios:
Microscopio estandard.
Figura 3.6 Filtros de 125 mm. de dimetro para volmenes
mayores

Hemocitmetro 0.1 mm deep (Improved Neubauer)

con cubre objeto No. 2
Pipetas Pasteur con bulbo (gotero) para llenar la
cmara.
Piceta con agua destilada para limpieza de accesorios.
Tubos de ensayo, preferentemente con tapa rosca,
para las muestras de algas.
Fijativos para inmovilizar algas mtiles con el lugol o
la formalina al 5%.
Uso del hemocitmetro:
Coloque el cubreobjeto bien limpio sobre los pilares
de soporte de la cmara.
Usando una pipeta Pasteur que contiene la muestra de
algas, en ngulo de 45 grados, deposite una gota en cada
ranura del hemocitmetro para llenar el espacio.

Figura 3.7 Unidad de filtracin al vaco para esterilizar

volmenes menores

Es conveniente esperar por tres minutos antes de

proceder al contaje en el microscopio,para dejar que las
unidades algales se asienten debidamente. Use objetivos

26

Henry G. Alvarez Arellano

asentadas justo en medio de cualquier lnea de los cuadros,

sean de las internas o de los laterales, aunque este criterio
no se aplica cuando apenas es un 25% del cuerpo de la
clula el que est topando la lnea. (Fig. 3.8)
Consideraciones:
Es necesario homogenizar el cultivo y seleccionar el
dispositivo indicado para el conteo, en el que las algas se
distribuyan adecuadamente.

Si el alga crece adherida al recipiente (bnticas por

ejmplo), la muestra puede ser tomada raspando un area y
homogenizandola luego para tomar nuevamente la muestra.
Hay cultivos que no se pueden contar y demandan otros
mecanismos que no implican el uso de las cmaras de
contaje.

A.- HEMOCITOMETRO: La gota de la suspensin

algal se coloca en cada ranura de la cmara

Cuando una clula se encuentra en franco proceso de

divisin (fisin binaria), la unidad se cuenta como dos por
que representa el material de dos clulas. Si las divisiones
se presentan en un alto nmero entonces habr que cambiar
la hora del contaje.

B.-La flecha indica la frecuencia del contaje. La

suma total de las clulas en los cuatro cuadros se
divide para 4 y este valor se multiplica por 10.000
para obtener la densidad de la poblacin (NB de
clulas/ml.)

de 20X o 40X segn cul le sea ms claro y cmodo para

proceder.

La seleccin del disposotivo a usarse depende de la

densidad del cultivo, del tamao y forma de la clula y de
la presencia de algn material celular que pueda influir en
el llenado de la cmara. Despus de seleccionado el
dispositivo, su limpieza es importante, incluyendo los
accesorios, para lograr una correcta distribucin de las
clulas en la cmara.

Mantenga un orden en la secuencia del contaje para

evitar errores de suma. No considere las clulas que estn

Es conveniente dejar que las clulas se asienten por

unos tres minutos en la cmara y luego proceder a contar.

Figura 3.8 Contaje de clulas

Carteria
Euglena
Phormidium
Tetraedron
Lepocinclis
Anabaena

Pyrobotrys

Spirogyra

Agmenellum

Oscillatoria

Arthrospira
Chlorogonium
Phacus

Nitzschia

Chlorella
Chlorococcum

Lyngbya

Chlamidomonas

Anacystis

Figura 3.9 Miscelanea de algas microscpicas presentes en aguas servidas

Stigioclonium

Introduccin al Mtodo Ficolgico

Miscelanea de preguntas
1.- Nombre las fases o etapas de desarrollo de una
poblacin algal.
2.- Indique los factores que caracterizan los cultivos
contnuos de algas.
3.- Cundo un cultivo es considerado axnico?
4.- Describa las condiciones tcnicas del cultivo
intermedio dentro del procedimiento general en la
produccin de microalgas.
5.- Mencione el tamao y uso de la especie Chaetoceros
eibenii.
6.- Nombre los mtodos de aislamiento ms conocidos.
7.- Describa los pasos que se dn en el proceso de
purificacin empleando antibiticos.
8.- Indique la concentracin de cloro (ppm) cuando es
usado como desinfectante.
9.- Describa la esterilizacin por autoclavado.
10.- Dibuje tres especies de algas presentes en aguas
servidas.
Bibliografa de consulta:
1) Handbook of Phycological Methods, Culture Methods
and Growth Measurements. Janet R. Stein. 1973.
2) Illustration of the Marine Plankton of Japan. Dr. I.
Yamaji. Third Edition, July 1984.
3) Tecnologia de Cultivo de Microalgas. Eduardo Uribe
T.. Universidad Catlica del Norte. Coquimbo, Chile
1992.
4) Acta Oceanogrfica del Pacfico. Dr. R. Jimenez.
INOCAR. Vol 2 No 2. 1983.

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