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Cultivo y Tinción
Cultivo y Tinción
Informe de laboratorio N3 y 4
Laboratorio de Microbiologa.
Tcnico Universitario en Anlisis Qumico y Fsico
Integrantes: Eliseo Antigual
Mara Jos Muoz
Docente: Miguel Castro
Ayudante: Maximiliano Figueroa
Fecha: Abril 30 de 2015
Introduccin.
Objetivos:
General:
Especficos:
Metodologa
a) Medios de cultivo: De dos cepas, Escherichia coli y Basillus Subtillis,
se realiz dos siembras en medios distintos; con ayuda de un asa loop
se procedi a tomar una muestra de cada una y sembrar en una
placa, previamente dividida en dos secciones, una de agar LB y otra
de agar Mac Conkey.
Para una muestra de la Prctica anterior, Control de ambiente, se
eligi dos colonias al azar, y se procedi a sembrar en dos medios
distintos agar LB y agar Mac Conkey. Se dej incubar a 35 C por 48
horas.
b) Tcnicas de tincin:
Tincin con colorantes bsicos: se procedi a fijar las muestras,
depositando una gota de muestra sobre el portaobjeto y se sec con
ayuda del mechero, pasando el portaobjetos sin permitir que el vidrio
se sobrecaliente. Una vez fijada la muestra, se dejaron los
portaobjetos sobre la malla en el lavadero.
Colorante
Azul de metileno
Cristal violeta
Calbol-fucsina
Tiempo de accin
30 a 60 segundos
10 segundos
5 segundos
Resultados
Muestra
Observacione
s
Escherichia
Coli
Basillus
Subtilis
Agar LB
El medio LB permite
el crecimiento de una
amplia
gama
de
bacterias, este medio
es
utilizado
para
conocer la viabilidad
de las bacterias. Para
este caso fue posible
observar crecimiento
en ambos tipos. Para
Escherichia coli se
observ
colonias
aisladas, estas con
bordes redondeados,
tonalidad amarillenta,
y elevacin cncava.
No as para Basillus
Subtilis
donde
el
crecimiento fue de
manera
excesiva,bordes
irregulares.
Imagen
Escherichia
coli
Basillus
Subtilis
Agar Mac
Conkey
Bacterias
Control 1 y
2 en Agar
LB
Control 1 y
2 Agar Mac
Conkey
Tincin
Observacione Imagen
s
Escherichia coli.
Azul te
metileno
Cristal
violeta
CarbolFucsina
Gram
Basillus Subtilis
Azul de
Metileno
Se
pudo
observar
detalladamente
la
forma de la bacteria,
corresponden
a
bacilos, donde existe
agrupacin formando
diplobacilos o cadena
de
bacilos
(estreptobacilos).
Son coloreadas azul
fuerte, por lo tanto el
colorante penetra de
forma uniforme en la
celular. No es posible
observar
detalles
internos de la clula.
Observado
con
Objetivo de Inmersin
(100x)
Cristal
Violeta
Carbol
Fucsina
Se observ la muestra
teida
de
color
violeta, la clula se
ti completa con el
colorante, su forma es
de bacilo y fue posible
observar
duos
(diplobacilos)
y
cadenas de bacilos.
sta tcnica de tincin
permite solo crear un
contraste
con
el
medio externo.
Observado
con
Objetivo de Inmersin
(100x)
Las clulas fueron
teidas por completo
con
el
colorante,
rosadas. Fue posible
observar en detalle
forma y agrupacin de
las bacterias. Bacillus
subtilis
presenta
forma
de
bastn
(bacilo) y se agrupa
en
cadenas
(estreptobacilos)
Observado
con
Objetivo de Inmersin
(100x)
Gram
Esporas
Control 1
Azul de
metileno
Cristal
Violeta
Carbol
Fucsina
Las
clulas
se
observaron
por
completo coloreadas
azul, no se pudo
apreciar detalles de
estructuras internas.
Present
forma
redondeada (coco) y
agrupaciones
en
racimo (estafilococos).
Con este tipo de
tincin no es posible
observar
detalles
internos.
Observado
con
Objetivo de Inmersin
(100x)
La muestra se ti de
color violeta, solo es
posible
observar
forma y agrupacin de
las bacterias. Para
este tipo celular que
present
forma
redonda,
denominndose coco
y agrupacin en forma
de
racimo,
estafilococo.
Observado
con
Objetivo de Inmersin
(100x)
El tratamiento de la
muestra
con
este
colorante bsico, nos
cre un contraste con
el medio externo, se
pudo detallar la forma
de la bacteria y su
agrupacin. Present
forma redondeada y
se agrupa en forma
de
racimos.
Observado
con
Objetivo de Inmersin
(100x)
Gram
Esporas
Esta
bacteria,
desconocida,
separada de la prueba
de
control
de
ambiente,
present
endosporas. Las que
por medio de este tipo
de tincin se observan
de color verde y en
los extremos de la
clula. No es posible
observarlas en todas,
solo en una cantidad
reducida
de
la
muestra.
Observado
con
Objetivo de Inmersin
(100x)
Cpsula
Klebsiella pneumoneae
Cpsula.
Discusin
Dentro del marco de discusin se pueden enmarcar diferentes
aspectos importantes y fundamentales a considerar, en cuanto a lo que se
relaciona con los medios de cultivo utilizados. El medio LB permite
comprobar la viabilidad de las muestras, para todos los casos hubo
crecimiento, para el agar Mac Conkey los resultados obtenidos son
congruentes con su fundamento, puesto que este medio solo permite el
crecimiento de bacterias Gram negativos, tal y como se observ. Este medio
se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil desarrollo,
aerobios y anaerobios facultativos. El agar Mac Conkey permite diferenciar
bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y
alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan
en el mismo. En el caso de la bacteria en estudio se comprob que esta era
viable y adems se determin que es Gram positiva. (2)(3)
Al observar los resultados de los mtodos de tincin utilizados es importante
destacar que la clave est dada en el momento de la fijacin de la muestra,
esta debe ser cuidadosa puesto que es un riesgo calentarla demasiado y
quemarla, por otro lado tambin existe un punto crtico al momento de
retirar el exceso del colorante con el agua, este debe ser lento y cuidadoso.
(1)
La diferencia entre las bacterias Gram positivas y negativas est dada por la
presencia de una pared de peptidoglicano, la que en bacterias Gram
positivas es gruesa, permitiendo que el colorante quede atrapado entre sus
cadenas y no se produzca la decoloracin en esa etapa de la tincin; no as
las bacterias Gram negativo donde esta pared de peptidoglicano es
delgada, por lo tanto el colorante se pierde en el proceso de decoloracin.
La tincin
estructural nos otorga ms datos, con respecto a las
caractersticas de las bacterias.
Con las observaciones realizadas no es posible dar un nombre especfico
para la bacteria en estudio, pero si se obtuvo datos caractersticos de esta.
Lo que con un estudio con mayor especificidad nos permitira llegar a
determinar que bacteria es exactamente.
Conclusin
Los medios de cultivos permiten a grandes rasgos diferenciar y
observar colonias bacterianas y caracterizarlas macroscpicamente.
Mediante los medios diferenciales podemos separar o distinguir entre unos
tipos de bacterias y otros.
Ahora bien si se desea buscar caractersticas microscpicas los mtodos de
tincin son los indicados, estos permiten diferenciar formas y agrupaciones
de las bacterias, adems de las tinciones especificas o diferenciales, como
por ejemplo la tincin de Gram que es una herramienta muy til en el
laboratorio de microbiologa as como en los anlisis clnicos y diagnostico
medico siendo ineludible conocer su fundamento y procedimiento, para
poder tener una correcta interpretacin de los datos que nos otorga la
diferenciacin de Gram positiva y negativa concluyendo que debido a la
estructura de sus paredes celulares tendrn o no propiedades patolgicas
diferentes.
Referencias
(1) Vera, G. (1994) Introduccin a la Microbiologa (2da Ed.). Pginas 56 a
59. Editorial EUNED. Costa Rica.
(2) Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine L. Case. (2007).
Introduccin a la Microbiologa (9a Ed.). Pginas 168 a 187. Editorial
Panamericana. Buenos Aires, Argentina.
(3) Granados, R., Vilaverde, M.C.,(2003). Microbiologa, Tomo I
Bacteriologa. Caractersticas y clasificacin bacteriana. Virologa.
Caractersticas y tcnicas bioqumicas . (1ra Ed.). Pginas 226 a 246.
Editorial Paraninfo. Madrid, Espaa.