AISLAMIENTO SELECTIVO Y DIFERENCIAL DE MICROORGANISMOS

ngela lvarez Coral; diego Jimnez

Universidad De Nario - Facultad De Ciencias Exactas Y Naturales

diegofer1414@hotmail.com, angevanne02@gmail.com

INTRODUCCION
El estudio de las caractersticas que
permiten identificar los microorganismos
requiere tenerlos en cultivo puro; eso
significa aislar la bacteria que interesa,
separndola de los otros organismos que
podran coexistir en una muestra. Esta
podra ser una tarea prcticamente
imposible si se utiliza un medio Rico, por
ejemplo el agar sangre, que permite el
crecimiento de un gran nmero de
especies bacterianas. Sin embargo el
aislamiento de determinada especie se
facilita al aplicar los conocimientos de
nutricin microbiana, y emplear un medio
de cultivo que favorezca el crecimiento
del microorganismo deseado e inhiba a
los otros. Este tipo de medio se
denomina Selectivo, pues selecciona a
determinados microorganismos. (1)
Actualmente, la identificacin bacteriana
se realiza por medio de mtodos
convencionales,
basados
en
las
caractersticas fenotpicas, puesto que su
realizacin y coste los hace ms
asequibles. Los mtodos genotpicos
suelen reservarse para las bacterias que
no se pueden identificar con mtodos
convencionales.
Los
esquemas
tradicionales
de
identificacin fenotpica bacteriana se
basan en las caractersticas observables
de las bacterias, como su morfologa,
desarrollo, y propiedades bioqumicas y
metablicas. El cultivo, cuando es
factible, continua siendo el mtodo
diagnstico de eleccin; permite el

aislamiento
del
microorganismo
implicado, su identificacin, el estudio de
sensibilidad a los antimicrobianos y
facilita la aplicacin de marcadores
epidemiolgicos. En el cultivo es esencial
la correcta eleccin del medio de
crecimiento y las condiciones de
incubacin.
En
el
proceso
de
identificacin
bacteriana tradicional, la experiencia del
microbilogo es fundamental para la
eleccin de una prueba o una batera de
pruebas de forma secuencial, en funcin
de la fiabilidad de las mismas, del gnero
o de la especie bacteriana que se
pretende identificar, del origen del aislado
bacteriano, as como del coste de las
mismas. Los laboratorios deben elaborar
y realizar un proceso de identificacin
normalizado en su actividad diaria, que
utilice de forma secuencial o simultnea
un conjunto de pruebas cuyo propsito
final
sea
la
identificacin
del
microorganismo a nivel de gnero y
especie y que incluya la mayora de las
bacterias desde el punto de vista
infeccioso.
Objetivos.
- realizar las tcnicas adecuadas para la
seleccin de bacterias Gram positivas.
identificar
mediante
pruebas
bioqumicas los organismos Gram
positivos y Gram negativos.

- determinar el genero y la especie, para

bacterias Gram negativas a partir de una
cepa problema.
MATERIALES Y MTODOS
Para bacterias Gram positivas.
- prueba de la catalasa.
Se utilizo cepas de Staphylococcus
aureus y de Streptococcus sp; a una
muestra de estas colonias se le agreg
una gota de agua oxigenada y se
observaron las reacciones que dio a
lugar.
- Identificacin por tincin de Gram
Se tomo una muestra de Staphylococcus
aureus y Klebsiella y se procedi a
realizar tincin de Gram:
1. Se realizo un extendido de la
muestra sobre el portaobjetos
2. Se sec la muestra, utilizando un
mechero.
3. Se fijo la muestra con metanol,
durante 1 minuto
4. Se agreg cristal violeta y se
espero durante 1 minuto para que
se fijara.
5. Se procedi a enjuagar con
abundante agua destilada.
6. Se agreg lugol y
se dej
reposar por 1 minuto
7. Nuevamente se enjuag con
abundante agua.
8. Se agreg alcohol acetona y se
esper durante 30 segundos.
9. Se enjuag con agua
10. Se utiliz tincin de contraste
agregando fucsina y se dejo
reposar durante 1 minuto.
Se procedi a observar en el
microscopio en objetivo de 100x y
utilizando aceite de inmersin. Cabe
destacar que a partir de esta prueba se
escogi las muestras que resultaron
Gram negativos, para realizar las

pruebas bioqumicas
Gram negativas.

para

bacterias

Para bacterias Gram negativas.

Cepas bacterianas: se utilizo cepas de
Klebsiella; tambin se dispuso de medios
de
cultivo,
para
realizar
la
correspondiente siembra.
1. Agar TSI: se realiz una siembra,
tomando la muestra problema de
una colonia de bacterias, con el
asa
recta
previamente
esterilizada, se destap el tubo,
se flameo la boca de este y se
hizo una puncin central hasta el
fondo del tubo y seguidamente se
sac el asa deslizndola por la
superficie en zig-zag.
2. AGAR CITRATO DE SIMMONS:
se realiz una siembra con asa
recta, previamente esterilizada,
se destap el tubo se flameo la
boca de este y se hizo la siembra
solamente en la superficie
deslizndola suavemente en zigzag.
3. AGAR UREA: se realiz una
siembra
con
asa
recta,
previamente
esterilizada,
se
destap el tubo se flameo la boca
de este y se hizo la siembra
solamente en superficie, igual que
el anterior procedimiento.
4. AGAR SIM: se realiz una
siembra
con
asa
recta,
previamente esterilizada, con la
cual se tomo la muestra del
cultivo de bacterias, se flameo la
boca del tubo; el medio qued
inoculado cuando se introdujo el
asa en profundidad hasta el fondo
del
tubo,
retirndola
posteriormente por la misma
trayectoria
utilizada
anteriormente.

5. CALDOS MR-VP: se realiz una

siembra con asa en argolla,
previamente
esterilizada,
se
destap el tubo se flameo la boca
de este y se hizo la siembra.
Resultados y discusin.

Una vez que se realizo la tincin, se

estableci la presencia de cocos Gram
positivos
pertenecientes
a
staphylococcus y bacilos Gram negativos
pertenecientes a la muestra problema
asignado.

Para bacterias Gram positivas.

- Prueba de la catalasa: la reaccin que
dio a lugar una vez que se le aplic una
gota de agua oxigenada fue el
desprendimiento
de
burbujas,
La
catalasa es una enzima que descompone
al perxido de hidrgeno en oxgeno y
agua, esta enzima es similar a la
estructura
de
la
hemoglobina.
Excluyendo al gnero Streptococcus y
algunos otros la mayora de las bacterias
aerobias y anaerobias facultativas tienen
catalasa.

En la imagen se muestra cocos Gram

positivos teidos de color purpura.
A continuacin se muestran los
resultados para tincin con bacilos Gram
negativos, teidos de color rosa.

Algunas pruebas para la catalasa que

resultan tanto positivas como negativas
son las siguientes:
Catalasa Positivo:
(Staphylococcus)
Coagulasa
Tolerancia a la sal

Catalasa
Negativo:
( Streptococcu
s)
Bilis esculina
CAMP

Sensibilidad al SXT
- identificacin por tincin de Gram.

Los fundamentos de la tcnica se basan

en las diferencias entre las paredes
celulares de las bacterias Gram positivas
y Gram negativas
La pared celular de las bacterias Gram
positivas posee una gruesa capa de
peptidoglicano, adems de dos clases de
cidos teicoicos: Anclado en la cara
interna de la pared celular y unido a la
membrana plasmtica, se encuentra el
cido lipoteicoico, y ms en la superficie,
el cido teicoico que est anclado
solamente en el peptidoglicano (tambin
conocido como murena) Por el contrario,
la capa de peptidoglucano de las Gram
negativas es delgada, y se encuentra
unida a una segunda membrana
plasmtica exterior (de composicin
distinta a la interna) por medio de
lipoprotenas. Tiene una capa delgada de
peptidoglicano unida a una membrana
exterior por lipoprotenas. La membrana
exterior est hecha de protena,
fosfolpido y lipopolisacrido.
Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se
tien diferencialmente debido a estas
diferencias constitutivas de su pared. La
clave es el peptidoglicano, ya que es el
material que confiere su rigidez a la
pared celular bacteriana, y las Gram
positivas lo poseen en mucha mayor
proporcin que las Gram negativas.
La diferencia que se observa en la
resistencia a la decoloracin, se debe a

que la membrana externa de las Gram

negativas es soluble en solventes
orgnicos, como por ejemplo la mezcla
de alcohol/acetona. La capa de
peptidoglucano que posee es demasiado
delgada como para poder retener el
complejo de cristal violeta/yodo que se
form previamente, y por lo tanto este
complejo se escapa, perdindose la
coloracin azul-violcea. Pero por el
contrario, las Gram positivas, al poseer
una pared celular ms resistente y con
mayor proporcin de peptidoglicanos, no
son susceptibles a la accin del solvente
orgnico,
sino
que
este
acta
deshidratando los poros cerrndolos, lo
que impide que pueda escaparse el
complejo
cristal
violeta/yodo,
y
manteniendo la coloracin azul-violeta.
Para bacterias Gram negativas.
A continuacin se muestra una foto
indicando como eran los medios de
cultivo en un principio y como cambiaron
estos cuando se realizaron las siembras.

De izquierda a de recha encontramos:

caldo MR-VP, TSI, SIM, UREA y
CITRATO SIMMONS.
1. Agar TSI: El Agar-hierro-triple azcar
es un medio de cultivo. Gracias a su
composicin es uno de los medios de
cultivo
ms
empleados
para
la
diferenciacin de entero bacterias segn:
-Fermenten o no glucosa.

-Fermenten o no lactosa o sacarosa.

-Produzcan o no cido sulfhdrico.
-Produzcan o no gas.

En nuestro caso correspondientemente

las reacciones sobre agar TSI son:
- Bacteria problema ferment la glucosa,
acidific el medio haciendo virar a
amarillo el indicador en el fondo del tubo,
mientras que en la superficie present un
color rojo, esto indica que en la superficie
no se presento fermentacin.
Se utiliza los valores de K (alcalinidad) y
A (acidez) para su clasificacin,
dndonos como resultado un K/A

En los resultados obtenidos se observa

un cambio de coloracin; de color verde
cambia a un color azul rey. El indicador
de PH es el AZUL DE BROMOTIMOL el
cual en presencia de alcalinidad vira al
color azul indicando que la prueba es
POSITIVA. Cuando no hay cambio de
color ni crecimiento se dice que la prueba
es negativa.
3. AGAR UREA: Es un medio utilizado
para diferenciar microorganismos en
base a la actividad uresica. Se utiliza
para identificar bacterias que hidrolizan
urea, tales como Proteus spp., otras
enterobacterias y estafilococos.

-La bacteria produjo cido sulfhdrico

(debido a la reduccin de las sales de
hierro), se presenta un ennegrecimiento
del tubo, como se puede observar en la
mancha negra de la imagen.

2. AGAR CITRATO DE SIMMONS: este

medio Sirve para determinar si un
microorganismo puede crecer utilizando
citrato como nica fuente de carbono
debido a la sntesis de la enzima citrato
permeasa la cual permite la introduccin
del citrato al interior de la clula, una vez
dentro, el citrato es incorporado al ciclo
de los cidos tricarboxilicos o ciclo de
Krebs.

En el Medio de Cultivo, la triptena y la

glucosa, aportan los Nutrientes Para El
Desarrollo de microorganismos. El
cloruro de sodio mantiene el equilibrio
osmtico, y el rojo de fenol es el
Indicador de pH. ALGUNAS bacterias
hidrolizan la urea Por Medio de la enzima
ureasa liberando amonaco y Dixido de

Carbono. Estos Productos alcalinizan El

Medio Haciendo virar el rojo de fenol del
amarillo al rojo; para nuestros resultados
dio positivo.
En este medio, la fermentacin de la
glucosa activa la enzima ureasa,
Acelerando la velocidad del metabolismo
en Aquellos Organismos que hidrolizan
Lentamente la urea.
4. AGAR SIM: Es un medio semislido
destinado a verificar la movilidad,
produccin de indol y de sulfuro de
hidrgeno en un mismo tubo. Es til para
diferenciar miembros de la familia
Enterobacteriaceae.
Antes de realizarse la prueba del indol se
observo la movilidad, el cual no presento
ya que, no hubo desplazamiento de la
colonia en el lugar en donde se inoculo.

aunque tambin existen aquellas cepas

productoras de acido sulfhdrico que se
distinguen por la formacin de un
precipitado negro de sulfuro de hierro a
partir del tiosulfato siempre que el medio
se mantenga a un pH mayor a 7.2. Por
tanto en estos resultados se llega a la
conclusin de que es positiva para el
indol y dudosa para el H2S
5. CALDOS MR-VP: En el caldo MRVP
se determina por qu va metablica
fermenta la glucosa la bacteria.
En el medio de cultivo, la pluripeptona
aporta los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano y la glucosa es el
hidrato de carbono fermentable.
La glucosa puede ser metabolizada por
los microorganismos, a travs de
distintas vas metablicas. Segn la va
utilizada, se originarn productos finales
cidos (cido lctico, cido actico, cido
frmico), o productos finales neutros
(acetil metil carbinol).
M.R: tubo con rojo de metilo
A este tubo se le agreg 10 gotas de rojo
de metilo, y al instante se observo la
aparicin de un color rojo

Prueba de indol: El triptfano es un

aminocido constituyente de muchas
peptonas, y particularmente de la
triptena, que puede ser oxidado por
algunas bacterias para formar indol. En
el proceso interviene un conjunto de
enzimas llamadas triptofanasa. El indol
producido se combina con el aldehdo del
reactivo de Kovacs o de Erlich, para
originar un compuesto de color rojo,
como en el que se ve en la imagen. Las
cepas mviles pueden apreciarse en este
medio, por la turbidez que producen
alrededor de la puncin de siembra,

Esta coloracin se debe a que La

bacteria puede fermentar la glucosa por
la VIA ACIDA MIXTA con produccin de
metabolitos como cido lctico, frmico y
succnico, los cuales van a hacer
descender el pH inicial del medio de 6.9

a 4.2, lo cual se visualiza al agregar el

indicador de pH ROJO DE METILO, el
cual a pH cido vira a un color rojo.
V.P: Tubo con alfa naftol.
A este tubo se le agrego 5 gotas de alfa
naftol al 5%, observndose una
coloracin amarilla en la parte superior
del medio. Esto indica una prueba
negativa.

logro dilucidar de cierta manera su

genero y su especie
- es necesario ser riguroso, en la
identificacin mediante las pruebas
bioqumicas,
ya
que
una
mala
interpretacin de resultados, nos llevara
a dilucidar errneamente una especie de
bacteria.
- la tincin de Gram es de gran ayuda
para diferenciar entre bacterias Gram + y
Gram
- la diversidad de medios de cultivos nos
permiten acercar a la clasificacin de una
bacteria con una alta fiabilidad en el
resultado.

La bacteria puede fermentar la glucosa

por la VIA BUTILENGLICOLICA con
produccin de productos neutros como el
ACETIL METIL CARBINOL (ACETOINA),
el 2,3 BUTILENGLICOL y el DIACETIL.
El producto final ms frecuente es el 2,3
BUTILENGLICOL, que es fcilmente
oxidado a acetil metil carbinol y luego a
di-acetil.
Una vez obtenidos todos los resultados
se prosigui a hacer un anlisis en la
tabla anexa en las guas para identificar
el gnero y la especie a la cual
corresponda la muestra problema; esta
corresponde a Klebsiella Arizona de
todas las 9 pruebas bioqumicas
realizadas 7 correspondan a esta
especie; esto dndonos un 80% de
fiabilidad en las pruebas.
Conclusiones.
mediante
diferentes
pruebas
bioqumicas, se logro identificar bacterias
Gram negativas, de tal manera que se

- Las bacterias Gram positivas son los

principales agente para la degradacin
de materia orgnica en el suelo y
solamente unas pocas son patgenas.
Las bacterias con bajo contenido en CG
son importantes en la industria
alimenticia por su importancia en la
elaboracin de productos de gran
demanda comercial.
Cuestionario.
1. Que bacterias Gram Positivas
provocan
con
mayor
frecuencia
intoxicaciones alimentarias?
Clostridium botulinum. El botulismo es
una
intoxicacin
alimentaria
poco
frecuente pero de consecuencias graves.
Esta causada por la ingestin de toxinas
botulnica (NTBo), uno de los txicos
naturales mas potentes,
formada
previamente en el alimento.
El brote de botulismo se ha asociado al
consumo de conservas caseras, hay
alimentos causantes de botulismo como
la carne cruda, pescado con una leve
conservacin.
Tambin sean descrito el botulismo
infantil a la consumo de miel, en el cul

la multiplicacin del germen y la

produccin de toxina se produce en el
intestino. Las especies del genero
Clostridium
son
anaerbicas,
son
productoras
de
esporas
termo
resistentes.
Se encuentran ampliamente distribuas
en la naturaleza y normalmente pueden
ser halladas en la tierra, vegetacin,
agua dulce y sedimentos marinos y en
las heces de animales. Por todo ello, su
alimentacin y control se consigue por
medio de tratamientos trmicos a altas
temperaturas y mediante la formulacin
de los productos, aadiendo cidos o
reduciendo el agua disponible.
-Clostridium perfringens. Es el germen
esporulado que produce enterotoxinas en
la luz intestinal. Los brotes se han
asociado a comidas ricas en protenas
como la carne y las aves, preparadas en
grandes cantidades con antelacin.
Es ubicuitario en el medio y por tanto
pueden encontrarse en la mayor parte
delos alimentos crudos, incluidos los
vegetales y productos crnicos. A
temperaturas elevadas como 50 pueden
crecer con facilidad.
Este microbio se multiplica con facilidad
en el alimento y produce sus toxinas,
una vez consumido, durante la formacin
de esporas en el intestino, produce
diarreas y nuseas, pero no es fatal. Los
controles necesarios pasan por
un
tratamiento trmico eficaz, un enfriado
rpido, separacin de los productos
terminados y de las materias primas, y
almacenamiento frigorfico de la carne
previa al consumo.
-Bacillus cereus. Es una causa
importante
de
enfermedades
de
transmisin alimentaria en las personas.
Los brotes de intoxicacin son carnes y
vegetales estofados, cremas, sopas y
brotes vegetales crudos, especialmente

el arroz hervido o frito y la pasta.

Producen dos tipos de toxinas, una
emtica de rpida accin que provoca
vmitos y una toxina que produce
diarreas. La primera es muy termo
estable sobrevive al cocinado y la
segunda se inactiva fcilmente por el
calor. Este microorganismo es comn en
el suelo, vegetales y leche cruda.
- Staphylococcus aureus. Es un agente
bacteriano causante frecuente de brotes
de toxinfecciones alimentaras en
muchos pases. Los brotes estn
causados por la ingestin de alimentos
que
contienen
las
enterotoxinas
estafiloccicas termoestables y se
asocian a productos crnicos, productos
con huevo, pasteles, cremas, bollera
rellena,
bocadillos y en general a
productos
sometidos
a
varias
manipulaciones que despus se han
mantenido
relativamente
a
altas
temperaturas.
A diferencia de otras bacterias Grampositivas, su fuente principal es humana,
a partir de la piel, nariz, garganta,
cortes y heridas de los manipuladores;
Por lo tanto si la manipulacin y prcticas
de higiene son deficientes,
pueden
transmitirse fcilmente a los alimentos.
- Listeria monocytogenes. Es un agente
bacteriano que puede causar una
enfermedad
transmitida
por
los
alimentos, la listeriosis, enfermedad
relativamente poco notificada pero grave,
con tasas de letalidad altas en personas
inmunodeprimidos.
La listeriosis en mujeres embarazadas
tiene como
complicacin habitual la
aparicin de abortos espontneos. La
importancia de los alimentos como va
primaria de transmisin de la Listeria
monocytogenes a las persona no fue
conocida hasta la
dcada de los
ochenta. Los alimentos mas implicados

son brotes y casos espordicos de

listeriosis son le
grupo de comida
preparada, los productos lcteos, en
especial los quesos de pasta blanda, los
pates y los productos de la pesca crudos
o ahumados en frio, la carne de pollo y
los embutidos cocidos y crudos curados.
Se encuentra ampliamente distribuida en
el suelo, vegetales y heces animales,
siendo por lo tanto un contaminante
habitual en las materias primas. Capaz
de multiplicarse en ambientes refrigeraos
y hmedos.
Son necesarios controles, durante la
produccin encaminada
a evitar la
contaminaciones de los
productos
elaborados durante la manipulacin y el
envasado.
2. Que bacterias Gram positivas
presentan Endosporas y cual es la
importancia en la industria alimentaria.
-Bacterias Gram Positivas esporuladas a
este grupo pertenecen los siguientes
gneros:
Bacillus
Clostridium,
Sporosarcina, Heliobacterium
- Bacillus Crecen bien en medios
definidos utilizando una variedad de
fuentes de carbono. Pueden producir
enzimas
extracelulares
como
las
hidrolasas, que rompen polisacridos
complejos. Muchos producen antibiticos
como: la bacitricina, polimixina, tirocidina,
gramicidina y circulina. Algunas especies
de Bacillus: B. popilliae, y B.
thuringiensis producen toxinas larvicidas
de insectos; el B. popilliae causa una
enfermedad fatal en las larvas de
Sccarabeidae; el B. thuringiensis produce
enfermedades mortales para las larvas
del gusano de seda, dpteros (moscas y
mosquitos)
- Clostridium Carecen de sistema
citocrmico y de los mecanismos de
fosforilacin por transporte de electrones

y viven en zona anxicas. Son

fermentadores. Algunos pueden producir
cido butrico como producto final; otros
acetona y butanol. Pueden fijar nitrgeno
en el suelo por anaerobiosis. Otro grupo
puede fermentar la celulosa y producir
cidos y alcohol. El grupo que fermenta
aminocidos por si mismo puede
degradar: la alanina, cistena, glutamato,
glicina, histidina, cerina o treonina ,
obtenindose acetato, butirato, CO2 y
H2..
3.

Bacterias mviles
(con forma de

bacilo)

Bacterias no
mviles (con
forma de coco)

-Bacillus
-Clostridium
staphylococcu
s
corynebacteri
um
Streptococcus
-lactobacillus
- listeria
4. Cul es la prueba bsica que nos
permite diferenciar los bacilos Gram
Negativos fermentadores de lactosa de
los que no lo son?
- La prueba bsica que nos permite
diferenciar bacilos fermentadores de
lactosa de los que no es la prueba para
TSI, ya que:
Gracias a su composicin es uno de los
medios de cultivo ms empleados para la
diferenciacin de enterobacterias segn:

Fermenten o no glucosa, fermenten o no

lactosa o sacarosa, produzcan o no cido
sulfhdrico, produzcan o no gas.

Bacterias Gram
positivas

5. Consulte los gneros y especies

Gram negativos ms importantes en la
industria alimentaria y en salud pblica.
- Bacterias Entricas Gram Negativas
Salmonella
Salmonella es una bacteria patgena
para el hombre y muchos animales y
produce una en edad de origen
alimentario conocida como salmonelosis,
que se presenta en forma espordica y
en forma de brotes. Salmonella es la
causa ms comn de ETA (enfermedad
transmitida por alimentos) en diversos
pases, en Cuba es el primer agente
causal de brotes de origen alimentario.
El gnero Salmonella es uno de los ms
extensamente estudiados entre los
patgenos que pueden ser aislados de
los alimentos. El primer brote de
salmonelosis se describi en Alemania
en 1888, entre 50 personas que haban
ingerido carne cruda molida proveniente
de una vaca moribunda.
Los integrantes de este gnero son
bacilos gramnegativos no esporulados
oxidasa negativa, pertenecientes a la
familia Enterobacteriaceae. La mayora
no fermentan la lactosa y son mviles,
son aerobios o anaerobios facultativos,
contienen endotoxinas, generalmente
son termolbiles resisten la congelacin
y algunos agentes qumicos poseen una
rica composicin antignica que se
emplea como base para la identificacin
de sus miembros en serotipos, ms
recientemente
designados
como
serovares.

Shigella
Es uno de los microorganismos
patgenos que con mayor frecuencia

causa infecciones intestinales en los

nios. Son comunes los brotes en
condiciones de hacinamiento y en caso
de deficiencia de la higiene personal y se
distingue por poseer una dosis infectiva
baja con respecto a otros patgenos. Los
integrantes de este gnero poseen una
manifiesta adaptacin al hombre y
algunas
bibliografas
refieren
que
tambin a los primates superiores, por lo
que se considera el hombre su reservorio
principal; producen una enfermedad de
origen alimentario conocida como
shigelosis;
la
especie
Shigella
dysenteriae produce generalmente la
enfermedad ms grave que es la tpica
disentera bacilar.
Estas bacterias pertenecen a la familia
de las Enterobacteriaceae, son bacilos
gramnegativos, anaerobios facultativos
que fermentan la glucosa sin produccin
de gas (anaerognicos), excepto algunos
biotipos de S. flexneri. Reaccionan
negativamente a las pruebas de ureasa,
gelatinasa, Voges Proskauer, H2S,
fenilalanina
deaminasa,
lisina
descarboxilasa, citrato en medio de
Simmon, cianuro y utilizacin del
malonato. El gnero comprende cuatro
especies, todas patgenas al hombre:
Grupo A: Shigella dysenteriae.
Grupo B: Shigella flexneri.
Grupo C: Shigella boydii.
Grupo D: Shigella sonnei 5.
Escherichia coli patgenas
Escherichia coli forma parte importante
de la microbiota intestinal del hombre y
de los animales de sangre caliente, sin
embargo algunas cepas han desarrollado
capacidad para provocar enfermedad en
el hombre, como son las infecciones
gastrointestinales.
Estas
cepas
patgenas representan la principal causa
de diarrea infantil en el mundo.

La capacidad de Escherichia coli

patgena para producir enfermedad est
determinada por factores de virulencia
que le permiten infectar a sus huspedes
y sobreponerse a los mecanismos de
defensa, como la produccin de
adhesinas, enterotoxinas, citotoxinas y
otras protenas que le permiten sobrevivir
en condiciones ambientales adversas.
Actualmente se reconocen seis grupos
de Escherichia coli patgenas que dan
lugar a diversos padecimientos. Entre
estos existen diferencias clnicas y
epidemiolgicas, as como en la
estructura antignica y mecanismos de
patogenicidad de los diferentes grupos.
Cepas patgenas de Escherichia coli:
-Enteropatgena (ECEP).
-Enterotoxignica (ECET).
-Enteroinvasiva (ECEI).
-Enterohemorrgica (ECEH).
-Enteroadherente (ECEA).
-Enteroagregativa (ECEG).
Escherichia coli, "la" bacteria tipo,
habitante normal del intestino humano,
es
utilizada
como
indicador
de
contaminacin fecal de aguas y
alimentos.
6. Para la identificacin temprana de la
E. coli que pruebas se realizan (no es
necesario hacer toda la batera).
- Al momento de tener una muestra en
donde se desee identificar la presencia
de E. coli hay que definir que medios de
cultivo
son
selectivos
para
enterobacterias. Los medios selectivos
son muy utilizados cuando se trabaja con
muestras que provienen de reas que
poseen una flora abundante.
Los
medios
selectivos
incorporan
sustancias inhibidoras de la propagacin

de un grupo bacteriano que no sea de

inters pero en cambio permite el
crecimiento de otros grupos.
Para microorganismos entricos, los
medios usados de modo habitual
contienen
ciertos
colorantes
e
ingredientes que inhiben los organismos
Gram positivos y permite la propagacin
de los bacilos entricos Gram negativos.
Otra tipos de medio que es una gran
herramienta a la hora de la identificacin
de microorganismos entricos como la E.
coli son los medios diferenciales que
poseen
componentes
qumicos
e
indicadores que permiten identificar con
cierta facilidad algunos gneros o
especies bacterianas por el aspecto
caracterstico que toman sus colonias.
El medio ms utilizado para reconocer
las colonias de E. coli es el agar-eosinaazul de metileno (EAM), que contiene
peptona, lactosa y los colorantes eosina
y azul de metileno.
En dicho medio se inhibe el crecimiento
de otras bacterias, pero no el de las
coliformes (stas desarrollan colonias
tpicas). E. coli: colonias grandes,
oscuras, negro-azuladas, centro casi
negro, con brillo metlico verdoso
causado por la luz reflejada.
-Seguidamente las pruebas bioqumicas
son
la forma ms convincente del
diagnstico
de
las
enfermedades
infecciosas, mediante este proceso se
determinan el gnero y las especies
bacterianas de inters. Cada tipo
bacteriano tiene un cuadro de reacciones
especficas donde se comprueba el
resultado de las reacciones y son la base
de la identificacin de los diferentes
agentes bacterianos. En general para la
identificacin de enterobacterias se
sugiere realizar las siguientes pruebas:

Agar TSI, prueba de orto-nitrofenil-

galactopiranosidico (ONPG), prueba de
movilidad, prueba de gelatinasa, prueba
de rojo de metilo, prueba de medio
MRVP.
Prueba
de
fenilalanina
desaminasa,
produccin
de
descarboxilasas y de hidrolasas de
aminocidos,
prueba
de
ureasa,
produccin de indol, entre otros.
7. Qu enterobacterias se utilizan como
indicadores de calidad del agua, por
qu?
-El examen rutinario del agua para
detectar patgenos intestinales puede
ser difcil, sino es que hasta imposible, es
mucho mas fcil demostrar la presencia
de bacterias intestinales no patgenas
como lo son E. coli y el Sstreptococcus
faecalis. Estos organismos siempre estn
presentes
en
los
intestinos
y
normalmente
no
se
encuentran
presentes ni en el suelo ni en el agua;
por lo tanto su presencia indica
contaminacin fecal. Todas las pruebas
bacteriolgicas cualitativas del agua
estn basadas en la identificacin de
indicadores de drenaje como lo son estos
dos organismos.
Una serie de pruebas son utilizadas para
demostrar la presencia de coliformes o

indicadores de drenaje en las fuentes de

agua potable. Un coliforme es una
bacteria anaerobia facultativa, bacilo
Gram negativo, fermentador de lactosa
con produccin de gas, y que no produce
esporas. E coli y Enterobacter aerogenes
entran dentro de esta categora. La
determinacin de coliformes se basa en
tres tipos diferentes de pruebas:
presuntiva,
confirmativa
y
complementaria.
Bibliografa.

Rodriguez E. Bacteriologa General:

Principios Y Prcticas de Laboratorio,
UNAM 2004
Alarcon R. Olivas E. Manual de
practicas de microbiologa bsica y
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Manual prctico de microbiologa Carlos
Gamazo Ignacio Lpez-Goi Ramn
Daz, Elsevier Espaa, 2005
http://microbitos.files.wordpress.com/
2010/06/atlasmicrobiologia1.pdf