UNIVERSIDAD DEL VALLE

NOTA

ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA

PRÁCTICA # 5

TEMA: Tinción GRAM

DOCENTE: ANGELA CHACON DIAMANTINO

ESTUDIANTE: MENDOZA PEREZ PAULETTE

FECHA DE ENTREGA: 14/03/2022

1. OBJETIVOS:
I. OBJETIVO GENERAL
 Realizar de manera adecuadamente el proceso de la
tinción GRAM e identificar las bacterias GRAM positivas
y GRAM negativas
II. OBJETIVOS ESPECIFICOS
 Realizar el manejo correcto del microscopio para la
observación de las bacterias
 Diferencias las estructuras de las bacterias
2. MARCO TEORICO
La tinción de Gram es una prueba que detecta bacterias en el lugar
donde se sospecha una infección, como la garganta, los pulmones,
los genitales o las lesiones en la piel. Las tinciones de Gram también
se pueden usar para detectar bacterias en ciertos fluidos corporales,
como la sangre o la orina.
Fue desarrollada por el científico danés Hans Christian Gram en 1884;
hoy en día, sigue siendo una de las tinciones más utilizadas
universalmente debido a lo económico, sencillo y eficaz que resulta.
En microbiología clínica resulta de gran utilidad, ya que a partir de
muestras clínicas directas provenientes de sitios estériles se puede
saber de manera rápida las características de la muestra y hacer una
diferencia de los potenciales microorganismos causantes de una
infección. Los principios de la tinción de Gram están basados en las
características de la pared celular de las bacterias, la cual le confiere
propiedades determinantes a cada microorganismo.
La pared celular de las bacterias Gram negativas está constituida por
una capa fina de peptidoglicano y una membrana celular externa,
mientras que las bacterias Gram positivas poseen una pared
celular gruesa constituida por peptidoglicano.
I. Diferencia en la estructura de bacterias Gram positivas frente a
Gram negativas:
Las dos características clave que conducen a las diferentes
propiedades de visualización de las especies Gram positivas y
Gram negativas son el grosor de la capa de peptidoglicano y la
presencia o ausencia de la membrana lipídica externa. Esto se
 debe a que la estructura de la pared afecta la capacidad de la
célula para retener la tinción cristal violeta utilizada en el
procedimiento de tinción de Gram, que luego puede
visualizarse con un microscopio óptico.
Las bacterias Gram positivas tienen una capa gruesa de
peptidoglicano y no tienen una membrana lipídica externa,
mientras que las bacterias Gram negativas tienen una capa
delgada de peptidoglicano y tienen una membrana lipídica
externa.
Como las bacterias Gram positivas carecen de una membrana
lipídica externa, cuando se refieren correctamente a su
estructura en lugar de las propiedades de tinción, se
denominan monodermos. La membrana lipídica externa que
poseen las bacterias Gram negativas significa que, cuando se
hace referencia a su estructura física, se denominan didermas.
 Las infecciones Gram positivas incluyen el Staphylococcus
aureus resistente a la meticilina (SARM), las infecciones por
estreptococos y el shock tóxico
 Las infecciones Gram negativas incluyen salmonela, neumonía,
infecciones del tracto urinario y gonorrea
El profesional de la salud necesita tomar una muestra del lugar
donde se sospecha que hay una infección o de ciertos fluidos
corporales. Esto depende del tipo de infección. Los tipos más
comunes de tinción de Gram se enumeran a continuación.
Muestra de una herida: El profesional de la salud usa un hisopo especial
para tomar una muestra del lugar de la herida
Análisis de sangre: El profesional de la salud toma una muestra de sangre
de una vena de un brazo
Análisis de orina: Usted entrega una muestra de orina estéril en un
recipiente siguiendo las instrucciones de su profesional de la salud
Cultivo de garganta: El profesional de la salud inserta un hisopo especial en
la boca para obtener una muestra de la parte trasera de la garganta y las
amígdalas
 Cultivo de esputo: El esputo es la mucosidad espesa que se expulsa
de los pulmones al toser. Es diferente de un escupitajo o de la saliva.
El médico le pedirá que tosa el esputo en una taza especial, o puede
usar un hisopo especial para tomar una muestra de la nariz
3. MATERIALES:
MATERIALES
PORTAOBJETOS
MECHERO BUNSEN
COLORANTES DE GRAM
VARILLAS DE TINCIÓN
HISOPOS ESTÉRILES
BAJALENGUAS
ACEITE DE INMERSIÓN
ENCENDEDOR

4. EQUIPOS:
EQUIPOS
Equipo de colorantes
para tinción de
bacilos Gram +/-
Incluye: Safranina,
Yodo Gram, Violeta
de Genciana y Alcohol
acetona
MICROSCOPIO

5. PROCEDIMIENTO:
Preparación de un frotis bacteriano
1. Lavar bien el portasobjetos.
2. Con el hisopo esterilizado y baja lenguas, sacar nuestra muestra
(hicimos muestra faríngea)
3. Después el isotopo ya con la muestra lo colocamos en el
portaobjetos.
 4. Fijación de las bacterias al vidrio portaobjetos por calor. Pasar
tres veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos.
Dejar enfriar el portaobjetos entre los pases.
Pasos de la Tinción Gram
1. Teñir con cristal violeta (1 minuto)
2. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
3. Cubrir con Lugol o solución de yodo (1 minuto)
4. Lavar con agua el exceso de Lugol.
5. Decolorar con alcohol-acetona hasta que la preparación deje de
perder color (unos 30 segundos).
6. Lavar con abundante agua para eliminar el resto del disolvente.
7. Teñir con safranina (1 minuto)
8. Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste.
9. Secar la preparación.
10. Examinar al microscopio.
6. RESULTADOS
7. CONCLUSIONES
8. BIBLIOGRAFIA

Bibliografía
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https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-laboratorio/tincion-de-gram/

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