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APLICACIONES DEL ADN EN MEDICINA

LEGAL- ADN MITOCONDRIAL



Martha Lidia Vera

Bioqumica.
Comisario Inspector (RE)
mvalac@hotmail.com



Resumen
Este artculo analiza las aplicaciones del adn en medicina legal, repasa la
importancia del adn mitocondrial con sus principales caractersticas y aplicaciones
prcticas.
Abstract
This paper analyzes the applications of DNA in forensic medicine, reviews the
importance of mitochondrial DNA to their main characteristics and practical
applications.

Revista INDICIOS, Ao 3. Vol. 1. La Rioja
(Argentina) 2012.
Martha Lidia Vera: Aplicaciones del ADN en
medicina legal. pp. 46-54
Recibido 27/03/2012 Aprobado 28/04/2012

PALABRAS CLAVES:

ADN, ADN mitocondrial,
medicina legal.

KEY WORDS:

DNA, mitochondrial DNA,
forensic medicine,


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VERA MARTHA LIDIA: Aplicaciones del ADN en medicina legal
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El ADN o Acido Desoxirribonucleico es el componente ms importante del ser
vivo, ya que es la sustancia bioqumica encargada de transmitir y regular la vida
de las diferentes especies, es distinto en todos los individuos (excepto en los
gemelos univitelinos).
Est presente en el ncleo de todas las clulas del cuerpo (cromosomas
autosomicos) y esta formado por una sucesin de nucletidos (unidad bsica del
ADN), compuesto por un azcar (desoxirribosa), un grupo fosfrico y una base
nitrogenada, hay cuatro diferentes tipos de bases en el ADN, dos pirimidicas:
TIMINA (T) Y CITOSINA (C) y dos puricas: ADENINA (A) y GUANINA (G). Estos
nucletidos estn unidos entre si formando una cadena lineal enfrentada con su
complementaria, por lo que se utiliza la expresin PAR DE BASES, FORMANDO
UNA ESTRUCTURA de doble cadena o doble hlice enrolladas alrededor de un eje
central.
La caracterstica ms importante de esta doble hlice es la
COMPLEMENTARIDAD DE LAS BASES, ya que la unin de las bases de una cadena
a las de la otra se rige por la exclusividad de la unin: A solo se une a la T y
viceversa; la G solo se une a la C y viceversa.
Por ello, una vez que se conoce la secuencia de una de las cadenas, se puede
saber que nucletidos componen la otra cadena. Este es el principio para el
estudio de identificacin de una persona, los fragmentos hipervariables de pares
de bases o tndem STRs o Short Tandem Repeats de longitud variable que se
repiten un numero determinado de veces tanto en cromosomas autosomicos como
en los sexuales; especialmente en regiones no codificantes.











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Son susceptibles a automatizacin y estandarizacin, por lo que son muy
adecuados para el cotejo de resultados entre laboratorios y para la creacin de
Base de datos criminales.
Los STRs poseen de 2 a 7 nucleotidos y estn ampliamente distribuidos por
todo el genoma en bloques o fragmentos de tamao inferior a 400 pb.
Para que el ADN pueda aplicarse con fines forenses, ha de cumplir una serie
de requisitos, estas condiciones son:
El ADN como portador de la informacin gentica, se transmite de padres a
hijos por medio de los cromosomas en el ncleo de todas las clulas, mitad del
padre y la otra mitad de la madre.

El ADN tiene una gran estabilidad en el medio ambiente, siendo posible
aislarlo e identificarlo de clulas con das, semanas, meses e incluso aos de
antigedad, se logro identificar momias de miles de aos.

Por su presencia en todas las clulas es posible obtener indicios biolgicos en
el lugar que ocurrieron los hechos.
Las largas cadenas de ADN, compuestas por decenas de miles de pares de
bases, presentan ciertas zonas en que los pares de bases se repiten de una forma
secuencial y determinada, especificas en longitud y localizacin para cada
persona. Por ello el ADN es como una impresin digital gentica (genetic
fingerprint) para cada persona.



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Con el descubrimiento de la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), a
fines de la dcada del 80, los STRs se convirtieron en un poderoso instrumento
para la identificacin humana como el esclarecimiento de hechos criminales.

La PCR es una tcnica que permite la amplificacin IN VITRO de pequeos
segmentos de ADN por la extensin simultanea de unos cebadores o primers
sobre las hebras complementarias de la cadena de ADN ; as se obtiene un
elevado numero de copias del fragmento de inters, con gran rapidez y fiabilidad,
a partir de cantidades iniciales de ADN del orden de los ng (nanogramos)
La utilidad de la tcnica de PCR es insospechada en el campo de la
farmacologa, la medicina, la bioqumica, la virologa, bacteriologa, biomedicina,
etc.







ADN mitocondrial- su importancia

Nuestros 23 pares de cromosomas nucleares suman una secuencia con un
total de 6.000 millones de pares de bases, cada par de cromosomas homlogos le
corresponderan entre 1.500 y 2.000 genes, y la deteccin de estos por STRs
requiere cierta cantidad de muestra (ng) y condiciones como el bulbo o restos
de este en un pelo.



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Esto se vio solucionado cuando se detecta en las Mitocondrias su ADN.
Las Mitocondrias son organelos intracelulares presentes en todas las clulas
humanas (excepto los glbulos rojos maduros).
Son esenciales para la produccin y almacenamiento de energa en el
metabolismo celular, como son la cadena respiratoria y la obtencin del ATP
mediante la fosforilacion oxidativa. Estn presentes en el citoplasma de las clulas
y lo que es relevante, poseen su propio ADN.
El genoma humano mitocondrial posee ciertas caractersticas que lo hacen
especialmente til para estudios de identificacin y evolucin molecular, como por
ejemplo:
. El ADN mt es circular, cerrado y de doble cadena; lo que le confiere mayor
estabilidad (con respecto al ADN nuclear) frente a fenmenos degradativos.
. Alto numero de copias que posee cada clula. Por termino medio se estima
que hay de diez a100 mitocondrias por clula y de diez a 100 copias de ADN mt
por mitocondria, lo que supone de 100 10.000 copias de ADN mt por clula.
. La presencia de numerosos polimorfismos; de longitud y de secuencia.
. La completa caracterizacin de su genoma; el ADN mt mide 16.569 bp y fue
completamente secuenciado en 1981 por S. Anderson del laboratorio de Biologa
Molecular del Medical Research Council en Cambridge y hoy se utiliza como la
secuencia de Anderson.

.Su elevada tasa de mutacin promedio; de cinco a diez veces mayor que el
ADN nuclear.

Su tamao es pequeo, cuenta con un total de 37 genes de los que la
mayor parte se usan para la sntesis de protenas que intervienen en los procesos
bioqumicos de sntesis de energa (enzimas como citocromo oxidasa, ATPasa,
NADH deshidrogenasa, etc.).

Existen dos regiones principales en el genoma mitocondrial:





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. Una regin codificante (90%). Contiene 37 genes: 28 codificados por la
cadena pesada (H rica en purinas) y nueve por la ligera (L, rica en pirimidinas).
Una regin pequea (10%), no codificante; conocida como regin control (D
loop) de aproximadamente 1,2 Kb.
Por un lado , las mas ampliamente estudiadas y conocidas por su alto grado
de variabilidad son la REGION HIPERVARIABLE 1 (HVI), que abarca las posiciones
16.024-16.365 y la REGION HIPERVARIABLE 2 (HVII) , que va desde la posicin
73 a la 340.



Cuando ocurre el proceso de fecundacin del ovulo por el espermatozoide,
solo el ncleo de este ultimo logra penetrar el ovulo. Las Mitocondrias del
espermatozoide no ingresan, como consecuencia las mitocondrias y su ADN del
nuevo ser, provienen exclusivamente del ovulo, es decir de la madre. En otras
palabras, todos los seres humanos reciben ADN mitocondrial exclusivamente de
su madre biolgica, por lo que todas las personas que tengan el mismo linaje
materno poseen el mismo ADN Mitocondrial, el ADN Mitocondrial del padre no
pasa a la descendencia.




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El anlisis de ADN Mitocondrial se hace secuenciando especficamente una
regin de este, es mucho ms elaborado que el anlisis de ADN por STR por que
lleva ms tiempo y costo su realizacin.


Principales aplicaciones del ADN mitocondrial

La importancia del ADN mitocondrial es la escasa cantidad de muestra que se
necesita, debido a su mayor numero de copias por clula, se puede realizar en un
solo pelo cortado o sin bulbo.
Un pelo con bulbo caduco o un fragmento de pelo contendr una cantidad de
ADN Nuclear tan escasa que en principio resultara negativo.
Tambin cuando exista una gran degradacin de las muestras por las malas
condiciones de conservacin en que permanecieron hasta que fueron encontradas
en el lugar del crimen o por la antigedad que tienen, tal el caso de restos seos y
dientes antiguos o sometidos a condiciones extremas, el ADN mt se encontrara en
mejor estado.
Tambin en la Antropologa molecular para el estudio de la evolucin
humana, los flujos migratorios, determinar linajes completos, en catstrofes, etc.
El descubrimiento de la estructura del ADN por WATSON Y CRICK,
revoluciono la criminalstica forense por la incapacidad en que se vean sumidos
los laboratorios en determinados casos, en que pese a existir indicios, estos no
eran suficientes para resolver el problema planteado, se aplicaba la falta de
prueba equivale a la inocencia , hoy los indicios levantados del lugar del hecho
son elevados a la categora de prueba irrefutable con una coincidencia del
99,99999% con el ADN testigo. De esa manera la gota de sangre levantada , el
pelo que dejo el asesino, la colilla de cigarrillo del sospechoso, el chicle levantado
, el doble ADN en una violacin, identifican categricamente al sospechoso o al
recin nacido robado o al vinculo filiopaterno negado, etc.
Cito dos casos donde el ADNmt sirvi para la resolucin de ellos y donde el
CIGA (CENTRO INTEGRAL DE GENETICA APLICADA) de la ciudad de Crdoba
actu asesorando, en el primer caso en Madrid, al centro Toxicolgico y el
segundo al FBI.


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1) Homicidio de Natalia Milan, a esta joven le deban plata y fue a
cobrar cuando estaba Francisco Flamon, luego desapareci. La encontraron a
los das en un baldo adyacente semidesnuda y atada. Los mdicos forenses
levantaron de la zona de bajo vientre, varios pelos. El fracaso del ADN nuclear
conllevo a que se realice el ADN mitocondrial, algunos pelos dieron compatible
con la vctima y otros con el imputado.

2) En el caso Nora Dalmasso se encontr un pelo en regin vaginal. El
ADN mitocondrial era distinto a la vctima y por ende distinto a su hijo Facundo
Macarron. Aun no se sabe a quin pertenece.

En el primer caso se inculpa a un sospechoso y en el segundo se exime de
culpa a un inocente.


Metodologa empleada- interpretacin de las diferentes bandas.






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Caso prctico de una paternidad en geles de poliacrilamida, donde las
variantes alelicas se observan como bandas, con la coincidencia del SP (supuesto
padre) con las del H (hijo).


BIBLIOGRAFIA
Informe pericial del CIGA, Dr Ruben Simonetta y Dr Juan Carlos Jaime,
bioqumicos. Cordoba- Argentina.
Juan Carlos Jaime, Manuel Fondevila, Antonio Salas, Maria Victoria Lareu,
Angel Carracedo.
NINE AUTOSOMAL STRs genotype profiles in a sample from Cordoba













VERA, M. L. (2012) Aplicaciones del ADN en medicina legal.
Revista INDICIOS [en lnea] 25 de Mayo de 2012, Ao 3, Vol. 1.
pp.46-54. Recuperado (Fecha de acceso), de
http://www.indicios.org