CONTROL DE CRECIMIENTO DE LOS MICRORGANISMOS OBJETIVO GENERAL Estudiar las diferentes formas de reduccin o eliminacin de microorganismos.

OBJETIVOS PARTICULARES Estudiar la influencia del tipo de microorganismo sobre el resultado final en un proceso de reduccin o eliminacin de microorganismos Evaluar la efectividad de los diversos mtodos de reduccin o eliminacin de microorganismos

TEMPERATURA Se estudiar el efecto del calor seco y hmedo sobre diverso microorganismos. Microorganismos Escherichia coli un cultivo de 24 horas a 37C en caldo YEG (10 ml) Suspensin de esporas de Bacillus subtilis (10 ml) Candida albicans un cultivo de 24 horas a 37C en caldo YEG (10 ml)

Materiales Caldo Base Rojo de Fenol con Glucosa Bao a 65C Bao agua en ebullicin Horno a 160C Autoclave Incubadora a 37C 16 tubos con 10 ml

Procedimiento A cinco tubos con caldo base rojo de fenol-Glucosa adicional 1 ml del cultivo de E. coli A cinco tubos con caldo base rojo de fenol-Glucosa adicional 1 ml del suspensin de B. subtilis A cinco tubos con caldo base rojo de fenol-Glucosa adicional 1 ml del cultivo de C. albicans En el Bao a 65C coloque un tubo de caldo base rojo de fenol-Glucosa inoculado con E. coli, otro inoculado con B. subtilis y otro con C. albicans durante 30 minutos. Retire los tubos y pngalos a incubar a 37C por 48 horas En el Bao con agua en ebullicin coloque un tubo de caldo base rojo de fenol-Glucosa inoculado con E. coli, otro inoculado con B. subtilis y otro con C. albicans durante 10 minutos. Retire los tubos y pngalos a incubar a 37C por 48 horas En el Horno a 160C coloque un tubo de caldo base rojo de fenol-Glucosa inoculado con E. coli, otro inoculado con B. subtilis y otro con C. albicans durante 5 minutos Retire los tubos y pngalos a incubar a 37C por 48 horas En el autoclave coloque un tubo de caldo base rojo de fenol-Glucosa inoculado con E. coli, otro inoculado con B. subtilis y otro con C. albicans durante 15 minutos a 121C. Retire los tubos y pngalos a incubar a 37C por 48 horas Examine en cuales tubos hubo crecimiento y en cules no.

RADIACION ULTRAVIOLETA Microorganismos Micrococcus luteus un cultivo de 24 horas a 37C en caldo YEG (10 ml) Suspensin de esporas de Bacillus subtilis (10 ml) Serratia marcescens un cultivo de 24 horas a 37C en caldo YEG (10 ml)

Materiales Agar YEG Lmpara U.V. Cartulina de 12*12 cms Papel Aluminio de 25*25 cms Incubadora a 30C 4 cajas 1 unidad 1 unidad 4 unidades 1 unidad

Procedimiento Inocule las cuatro (4) cajas de agar YEG con los microorganismos de acuerdo a la figura No.1 Retire la tapa de una de las cajas de agar YEG inoculado y con la cartulina cubra la mitad de una caja y expngala a la luz ultravioleta con la lmpara ubicada a 5 centmetros por 5 minutos. Luego, tape la caja, envulvala con el papel aluminio e incbela 30C por 48 horas

M.luteus B. subtilis

S. marcescens

Repita el procedimiento anterior con las otras tres cajas empleando las siguientes condiciones: una caja a 5 centmetros por 10 minutos, otra caja a 10 centmetros por 5 minutos, y la ltima caja a 10 centmetros por 10 minutos. Despus de incubar realice una comparacin de los resultados de los diversos niveles de exposicin a la luz ultravioleta.

FILTRACION Materiales Caldo Nutritivo recientemente preparado sin esterilizar Sistema para filtracin por membrana estril Membrana de filtracin estril Pinza para membranas estril Erlenmeyer de 100 ml estril Agar YEG 2 Recipientes de 50 ml 1 unidad 1 unidad 1 unidad 1 unidad 1 caja

Procedimiento Prepare el sistema de filtracin colocando la membrana en posicin. Adicione uno de los 50 ml de caldo nutritivo recin preparado en el vaso del portafiltro, y con ayuda de la bomba de vacio filtre el caldo nutritivo. De manera asptica transfiera el lquido filtrado al erlenmeyer de 100 ml estril tape e incube por 48 horas a 30C De manera asptica y con ayuda de la pinza para membranas estril, transfiera la membrana de filtracin a una caja de agar YEG e incube a 30C La otra fraccin de caldo nutritivo recin preparado incbela a30C por 40 horas Revise si hubo o no crecimiento en los recientes y sobre la membrana.

EFECTO DEL pH Microorganismos Escherichia coli un cultivo de 24 horas a 37C en caldo YEG (10 ml) Suspensin de esporas de Bacillus subtilis (10 ml) Serratia marcescens un cultivo de 24 horas a 37C en caldo YEG (10 ml) Cndida albicans un cultivo de 24 horas a 37C en caldo YEG (10 ml) Materiales Caldo Base Rojo de Fenol + Glucosa pH 3 Caldo Base Rojo de Fenol + Glucosa pH 5 Caldo Base Rojo de Fenol + Glucosa pH 7 Caldo Base Rojo de Fenol + Glucosa pH 9 Agar YEG 4 unidades de 5 ml 4 unidades de 5 ml 4 unidades de 5 ml 4 unidades de 5 ml 4 unidades

Procedimiento Inocule un tubo de caldo base rojo de fenol-glucosa de cada pH con 0,1 ml de cultivo de E. coli. Mezcle bien e incube a 7C por 24 horas Realice el mismo procedimiento para cada cultivo a estudiar Despus de la incubacin, utilice una caja de agar YEG para hacer los repiques de cada cultivo. Una caja para E. coli, B. subtilis, S. marcescens y C. albicans. Sobre el agar haga una estra de los cultivos de cada pH a los que fueron inoculados los microorganismos. Incubar 24 horas a 37C. Revisar cuales inoculaciones presentan crecimiento.

pH 3 E. coli

pH 5

pH 9

pH 7

SUSTANCIAS QUIMICAS ANTIMICROBIANAS Microorganismos Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Serratia marcescens, Salmonella enteritidis, Staphylococcus aureus, Streptococcus faecalis, Bacillus cereus, Candia albicans cultivados en caldo YEG a 37C por 24 horas. Suspensin de esporas de Bacillus subtilis var niger. Elementos Fenol 5% (p/v) Glutaraldehido 2% (p/v) Alcohol 70% (p/v) Yodo Povidona Violeta de Gram Azul de Metileno Benzalconio Cloruro Ampicilina sdica Penicilina G potsica Getamicina Ciprofloxacina Kanamicina Vancomicina Nistatina Cajas de Petri con 7 cilindros de acero Pipetas de 1 ml estriles Agar Mueller Hinton fundido 25 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 20 unidades 24 unidades 20 unidades

Procedimiento Con ayuda de una pinza estril distribuir sobre la caja los seis cilindros de acero segn la figura adjunta. Por favor imprimir la imagen a tamao real. Por cada cultivo microbiano colocamos 0,3 ml en dos recipientes de agar antibitico No. 1 fundido (50C). Verter suavemente el agar inoculado sobre la caja de petri colocada en una superficie nivelada, y dejar solidificar. Luego con la pinza estril retirar los cilindros de acero. Si en los pozuelos formados quedan restos de agar, retirarlos con ayuda de la pinza estril. En una de las cajas de petri, en cada pozuelo depositar 0,2 ml de las soluciones de Fenol, Glutaraldehido, Alcohol, Lugol, Violeta de Gram, y Azul de Metileno. En la otra caja colocamos las soluciones de Ampicilina, Penicilina, Gentamicina, Ciprofloxacina, Kanamicina y Nistatina.

Dejar en predifusin por 30 minutos y con mucho cuidado y sin que se rieguen las soluciones colocar las cajas a 37C por 24 horas. Despus de ese tiempo, pasar las cajas a la nevera para su lectura a las 48 horas.