PRACTICA CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGICA ALIMENTOS Modelos: Verdura Picada Para Sopas o Ensaladas (arveja, habichuela, zanahoria) Carne

Fresca, Leche Cruda, Harina, Mora

Procedimientos Verduras/Hortalizas y Frutas La muestra se prepara, aspticamente, confeccionando una suspensin madre en agua de triptona, en la que se macera en refrigeracin durante treinta minutos y luego se tritura. Las determinaciones que se harn: Recuento de Mesfilos totales (Agar de Recuento en Placa) Recuento de Coliformes (Caldo Fluorocult) Recuento de Enterobacteriaceae totales (Agar ENDO) Recuento Salmonella-Shigella. (Agar SS) Recuento de Enterococcus (Estreptococcus D de Lancefield) (Agar KF) Recuento de Staphylococcus a enterotoxignico (Agar Baird Parker) Recuento de Mohos y Levaduras (Agar YGC) Carne La muestra se prepara, aspticamente, confeccionando una suspensin madre en agua de triptona, en la que se macera en refrigeracin durante treinta minutos y luego se tritura. Las determinaciones que se harn: Recuento de Mesfilos totales (Agar de Recuento en Placa) Recuento de Coliformes (Caldo Fluorocult) Recuento de Enterobacteriaceae totales (Agar ENDO) Recuento Salmonella-Shigella. (Agar SS) Recuento de Enterococcus (Estreptococcus D de Lancefield) (Agar KF) Recuento de Staphylococcus (Agar Baird Parker) Recuento de Clostridios sulfito reductores (Agar TSN para Clsotridios) Lacteos La muestra se prepara, aspticamente, confeccionando una suspensin madre en agua de triptona, en la que se macera en refrigeracin durante treinta minutos y luego se tritura. Las determinaciones que se harn: Recuento de Mesfilos totales (Agar de Recuento en Placa) Recuento de Coliformes (Caldo Fluorocult) Recuento de Enterobacteriaceae totales (Agar VRBL) Recuento Salmonella-Shigella. (Agar SS) Recuento de Enterococcus (Agar KF) Recuento de Staphylococcus (Agar Baird Parker) Recuento de microorganismos termodricos (incubar a 63C/30 min) (Agar MRS)

HARINA La muestra se prepara, aspticamente, confeccionando una suspensin madre en agua de triptona, en la que se macera en refrigeracin durante treinta minutos y luego se tritura. Las determinaciones que se harn: Recuento de Mesfilos totales (Agar de Recuento en Placa) Recuento de Coliformes (Caldo Fluorocult) Recuento de Enterobacteriaceae totales (Agar ENDO) Recuento de Bacillus cereus (agar MYP) Recuento Salmonella-Shigella. (Agar SS) Recuento de Staphylococcus (Agar Baird Parker) Recuento de Clostridos sulfito reductores (Agar TSN para Clostridios) Recuento de Mohos y Levadurs (Agar YGC) MATERIALES Y REACTIVOS ELEMENTOS Probeta * 100 ml. Estril Tubo De ensayo 120*16. Estril Pipeta graduada * 1 mL. Estril Pipeta Aforada *1 mL. Estril Pipeta Aforada * 5 ml. Estril Pipeta Aforada * 10 ml. Estril Asa De Vidrio. Estril Vidrio de Reloj. Estril Esptula o cuchillo estril Cajas De Petri 100*15. Estril (Mesfilos) Cajas de Petri 110*15. Estril (Mohos y Levaduras) Diluente Estril. Recipiente con 150 ml. Agar Plate Count (Agar Caso) Fundido, Estril. Recipiente con 200 ml. Agar YGC (Agar PDA) Fundido, Estril. Recipiente con 100 ml Tubos De Ensayo 120*16 con 9 ml de Caldo Fluorocult y Campana De Durham Caja de Agar VRBL Caja de Agar SS Caja de Agar Baird Parker Caja de Agar KF Caja de Agar MYP Caja de Agar TSN Caja de Agar de Recuento en Placa Diluente: Triptona 1 g., NaCl 9 g., agua destilada c.s.p. 1 litro.
1

CANTIDAD 1 5 6 1 7 1 1 1 1 12 6 1 1 1 9 6 6 6 6 6 6 6

GENERAL 5 25 30 5 351 62 6 5 5 60 18 5 5 4 45 30 30 30 24 6 12 6

Clculos pipeta aforada de 5mL: 1 pipeta por cada dilucin. Son 6 diluciones y 5 grupos, dando como resultado: 1*6*5 = 30 1 pipeta por grupo para adicionar los 5 mL del agar Plate Count dando como resultado : 1*5 = 35 2 Calculo pipeta aforada 10mL 1 pipeta por cada grupo para adicionar los 10 mL del agar Plate Count donde como resultado: 1*5 =5 1 pipeta para medir los 10 mL de leche.

PROCEDIMIENTO Pesar 10 g. de la muestra (verdura picada, carne) en el vidrio de reloj estril. Para El caso la carne con ayuda del cuchillo o esptula estril picar la muestra. Para le leche medir 10 ml con una pipeta estril. Colocar la muestra en la Probeta Estril y completar a 100 ml con el diluente. Esta ser la dilucin 10-1. Tapar y agitar fuertemente y dejar en reposo para que decante. Colocar 9 ml de diluente en cada uno de los tubos de ensayo estriles y marcarlos como diluciones 10-2, 10-3, 10-4, 10-5 y 10-6. De la suspensin decantada en la probeta, con ayuda de una pipeta de 1 ml estril tomar 1 ml, colocarlo en el tubo marcado 10-2 y homogenizar. De la dilucin 10-3 con ayuda de una pipeta de 1 ml estril tomar 1.0 ml, colocarlo en el tubo marcado 10-4 y homogenizar. Repetir el procedimiento para los dems tubos Tomar 12 cajas de Petri estriles, marcar en parajes como MESOFILOS 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5 y 10-6. Tomar 6 cajas de Petri estriles y marcar en parajes como HONGOS 10-1, 10-2, 10-3. Tomar las cajas de los agares VRBL, SS, AGAR KF, BAIRD PARKER, MYP y SPS y marcarlas como 10-1, 10-2 y 10-3. Tomar los 9 tubos de caldo FLUOROCULT y marcarlos en grupos de 3 como 10-1, 10-2, 10-3. Con ayuda de una pipeta estril de 5 ml tomar 5 ml de muestra de la dilucin 10-1 (suspensin decantada en la probeta) y depositar sendas muestras de 1ml en las cajas de Petri estriles marcadas como MESOFILOS 10-1, HONGOS 10-1 y en los caldos de FLUOROCULT marcados como 10-1. Lo anterior se repite con las dems diluciones. MESOFILOS hasta 10-6, Hongos hasta 10-3 y en los caldos Fluorocult hasta 10-3. Adicione una porcin (aproximadamente 15 ml) de agar Plate Count en las cajas marcadas como msfilos. Tras cada adicin, mezcle el contenido de la caja con movimientos suaves sobre el mesn en forma de ocho. Con una pipeta estril de 1 ml tomar 1 ml de la dilucin 10-1 (Probeta) y depositar sendas muestras de 0.1 ml en las cajas marcadas como 10-1 de agar VRBL, SS, AGAR KF, BAIRD PARKER, MYP y SPS. Tras la adicin de manera inmediata homogenizar la muestra sobre la superficie con ayuda del asa de vidrio estril. Repetir el procedimiento para todas las diluciones. Las cajas de recuento de msfilos, y VRBL, SS, AGAR KF, BAIRD PARKER, MYP se incuban a 37C por 48 horas Las cajas de agar SPS se colocan en campana de anaerobiosis con catalizados y se incuban a 37C por 48 horas Las cajas de recuento de hongos se incuban a 30C por 48 horas Los Tubos con caldo FLUOROCULT incubarlos a 37C por 48 horas. Retirar las cajas de la incubadora y hacer los respectivos recuentos. Retirar de la incubadora los Tubos con caldo FLUOROCULT y determinar la clave de recuentos. Cuantos tubos de cada serie de tres tiene gas en la campana (coliformes totales). Determine cuantos tubos de cada serie de tres fluorece a la luz ultravioleta (E.

coli). Cuantos tubos de cada serie de tres dan positivo para la prueba del INDOL con el reactivo de KOVACS (E. coli). Examinar los agares selectivos y detectar la presencia presuntiva de los diferentes tipos de bacterios.

1 o 0.1 ml
9 ml de Diluente 9 ml de Diluente 9 ml de Diluente
1 o 0.1 ml 1 o 0.1 ml 1 o 0.1 ml 1 o 0.1 ml 1 o 0.1 ml

1 ml 1 1 ml 1 ml

9 ml de Diluente
9 ml de Diluente

MEDICAMENTOS Y COSMETICOS MODELOS: Medicamentos: Jarabe, Tabletas Cosmticos: Procedimientos Medicamentos La muestra se prepara, aspticamente, confeccionando una suspensin madre en agua de triptona, en la que se macera en refrigeracin durante treinta minutos y luego se tritura. Las determinaciones que se harn: Recuento de Mesfilos totales (Agar de Recuento en Placa) Presencia de Escherichia coli (Agar ENDO) Presencia de Salmonella-Shigella. (Agar SS) Presencia de Pseudomonas (Agar CETRIMIDA) Presencia de Enterococos (Agar KF) Presencia de Staphylococcus (Agar Baird Parker) Recuento de Mohos y Levaduras (Agar YGC) MATERIALES, MEDIOS Y REA CTIVOS ELEMENTOS Probeta * 100 ml. Estril Tubo De ensayo 120*16. Estril Pipeta graduada * 1 ml. Estril Pipeta Graduada * 5 ml. Estril Pipeta Graduada * 10 ml. Estril Asa De Vidrio. Estril Vidrio de Reloj. Estril Esptula o cuchillo estril Mortero de Porcelana con pistilo Cajas De Petri 100*15. Estril Diluente (Caldo Peptona de Caseina-Lecitina-Tween), Estril. Recipiente con 120 ml. Caldo Casoy estril. Recipiente con 90 ml Agar Plate Count (Agar Caso) Fundido, Estril. Recipiente con 120 ml. Agar PDA (Agar Sabureaud) Fundido, Estril. Recipiente con 80 ml Caja de Agar VRBD Caja de Agar SS Caja de Agar Cetrimida Caja de Agar Baird Parker CANTIDAD 1 1 4 2 2 1 1 1 1 12 1 1 1 1 2 2 2 2 GENERAL 6 6 24 12 12 6 3 3 3 72 6 6 6 6 12 12 12 12 Crema de manos, sombra de ojos

PROCEDIMIENTO Para las muestras slidas, pesar 10 g. de la muestra en el vidrio de reloj estril. Pasar la muestra a l mortero estril y con ayuda del pistilo pulverizar la muestra. Agregar una pequea cantidad del diluente y con ayuda del pistilo macerar la muestra. Pasar la muestra a la Probeta Estril cuidando de lavar con el diluente los residuos que queden en el mortero y completar a 100 ml con el diluente. Esta ser la dilucin 10-1. Tapar y agitar fuertemente y dejar en reposo para que decante. Para la muestra lquida medir en la probeta 10 ml y completar a 100 ml con el diluente. Colocar 10 ml de diluente en el tubo de ensayo estriles y marcarlos como diluciones 10-3. De la suspensin decantada en la probeta, con ayuda de una pipeta de 1 ml estril tomar 0.1 ml, colocarlo en el tubo marcado 10-3 y homogenizar. Tomar 6 cajas de Petri estriles y marcar en parajes como MESOFILOS 10-1, 10-2, 10-3. Tomar 4 cajas de Petri estriles y marcar en parajes como HONGOS 10-1, 10-2. Marcar el caldo CASO (90 ml) con el nombre de la muestra Tomar las dos cajas de los agares VRBL, SS, CETRIMIDA, BAIRD PARKER y SPS y marcarlas Despus de 20 minutos de contacto de la muestra con el diluente, con ayuda de una pipeta estril de 5 ml tomar 5 ml de muestra de la suspensin decantada en la probeta y depositar sendas muestras de 1ml en las cajas de Petri estriles marcadas como MESOFILOS 10-1. HONGOS 10-1. De nuevo tomar 10 ml de la dilucin bien homogenizada y colocarlos en el caldo CASO. Homogenizar muy bien y pasarlo a la incubadora a 37C por 24 horas. Con una pipeta estril de 1 ml tomar 1 ml de la misma dilucin (Probeta) y depositar sendas muestras de 0.1 ml en las cajas de Petri estriles marcadas como MESOFILOS 10 -2, HONGOS 10-2. Con ayuda de una pipeta estril de 5 ml tomar 5 ml de muestra de la dilucin marcada como 10-3 y depositar sendas muestras de 1ml en las cajas de Petri estriles marcadas como MESOFILOS 10-3. Agregar el agar Plate Count (Agar Caso) fundido aproximadamente 15 ml a las cajas marcadas como MESOFILOS y homogenizar moviendo las cajas en forma de ocho. Dejar solidificar. Luego pasar a incubadora a 37C de 24 a 48 horas. Agregar el agar PDA (Agar SABOUREAUD) fundido aproximadamente 15 ml a las cajas marcadas como HONGOS y homogenizar moviendo las cajas en forma de ocho. Dejar solidificar. Luego pasar a incubadora a 30C de 24 a 48 horas. Luego de la incubacin a 37C por 24 horas del caldo de enriquecimiento, con ayuda de una pipeta de 1 ml estril, tomar un 1 ml y depositar sendas muestras de 0.1 ml en todas y cada una de las cajas de los agares selectivos, e inmediatamente distribuir la muestra sobre la superficie de los agares de manera homognea con ayuda del asa de vidrio. Luego incubar a 37C por 24 horas. Retirar las cajas de la incubadora y hacer los respectivos recuentos para los MESOFILOS, los HONGOS. Examinar los agares selectivos y detectar la presencia presuntiva de los diferentes tipos de bacterios.

AGUAS MODELOS: Agua Potable, 500 ml Suero Fisiolgico 1 de 500 ml (Producto Esteril) MATERIALES, MEDIOS Y REACTIVOS ELEMENTOS Equipo De Filtracin Membrana De Filtracin de 0.45 mm * 47 mm de dimetro. Estriles Pinza Para Membranas. Estril Tijeras en acero inoxidable estril Desinfectante Gasa Estril Diluente (Solucin Salina Isotnica Estril). Recipiente con 600 ml Caja de agar Caso Caja de Agar PDA (Agar Saboureaud) Caja de Agar VRBD Caja de Agar SS Caja de Agar Cetrimida Caldo Caso (50 ml) Caldo Tioglicolato con rezasurina CANTIDAD 1 5 1 1 2 1 1 1 1 1 1 NA NA PRUEBA DE ESTERILIDAD 1 1 1 1 1 2 1 NA NA NA NA NA 1 1

PROCEDIMIENTO Con ayuda de la gasa estril y el desinfectante limpiar el recipiente en donde viene la muestra. Dejar actuar por 10 minutos. Conectar el Equipo de filtracin a la bomba de vaco. Retirar el vaso del sistema de filtracin. Con ayuda de la pinza colocar la membrana estril en el portafiltro y ajustar muy bien el vaso del sistema de filtracin. Destapar el recipiente con la muestra y colocar 100 ml en el vaso de filtracin. Accionar la bomba de vacio hasta que se filtre completamente la muestra y esperar 1 minuto antes de apagar la bomba de vaco. Adicionar al vaso 100 ml de diluente para lavar la membrana Accionar la bomba de vacio hasta que se filtre completamente la muestra y esperar 1 minuto antes de apagar la bomba de vaco. Con ayuda de la pinza estril retirar cuidadosamente la membrana y depositarla sobre la caja de agar Caso, cuidando de no dejar burbujas entre la membrana y el agar. Tapar la caja y llevarla a incubacin a 37C de 24 a 48 horas. De nuevo retirar el vaso del equipo de filtracin, colocar la membrana en el portafiltro y colocar el vaso y ajustar muy bien el vaso. colocar 100 ml en el vaso de filtracin.

Accionar la bomba de vacio hasta que se filtre completamente la muestra y esperar 1 minuto antes de apagar la bomba de vaco. Adicionar al vaso 100 ml de diluente para lavar la membrana Accionar la bomba de vacio hasta que se filtre completamente la muestra y esperar 1 minuto antes de apagar la bomba de vaco. Con ayuda de la pinza estril retirar cuidadosamente la membrana y depositarla sobre la caja de agar PDA, cuidando de no dejar burbujas entre la membrana y el agar. Tapar la caja y llevarla a incubacin a 30C por 48 horas. Repetir este procedimiento para los agares VRBD, SS y CETRIMIDA. Estas cajas se incuban a 37 de 24 a 48 horas. Retirar las cajas de la incubadora para los respectivos recuentos y la deteccin de bacterias patgenas en los agares selectivos.