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BACTERIAS COLIFORMES
TOTALES
Caldo laurilsulfato-triptosa
Composiscion
Preparación
Triptosa 20 g
Disolver completamente la Lactosa 5g
sustancia, sin hacer hervir
enrasar a volumen con agua, Cloruro de sodi 5g
y distribuir a 10 ml en tubos Hidrogenofosfato de potasio 2.75 g
de cultivo que contengan
tubos durhan invertido Dihidrogeno fosfto ed potasio 2.75 g
esterilizar e autoclave Sulfato de sodio 0.1 g
durante 15 min a 121°C
Agua destilada 10 ml
MEDIOS DE CULTIVO
Caldo verde brillante- bilis 2%
Preparación
Composición
Disolver completamente
la sustancia sin hacer Peptona 10 g
hervir enrasar a
Lactosa 10 g
volumen, tomar el ph 7.2
0.2 y distribuir a 10 ml Bilis de buey 20 g
en tubos de cultivo que
contengan tubos durham Verde brillante 0.0133g
invertidos esterilizar a
121°C durante 15 min Agua destilad 100000 ml
“ TECNICA NUMERO MAS
PROBABLE NMP
”
Basado en la propiedad, que tienen los microorganismos denominados coliformes, de fermentar la
lactosa con producción de acido y gas a una temperatura entre 37° C e incubados durante un periodo
comprendido entre 24 a 48 h
Prueba presuntiva
Prueba confirmativa.
TECNICA NUMERO MAS PROBABLE NMP
Prueba presuntiva
Inocular
9 tubos con caldo lauril sulfato- triptosa de
la siguiente manera
3 tubos con 1 ml de la dilución 10-1
3 tubos con 1 ml de la dilución 10-1
3 tubos con 1 ml de la dilución 10-1
Incubar a 35 2 °C durante 48 horas
Observar la formación de gas en los tubos de
fermentación
Anotar los tubos en los que se ve presencia de gas al
cabo de 24 h incubar los negativos 24 h adicionales
La usencia de gas a las 48 h significa prueba
presuntiva negativa par coliformes
Si existe formación de gas en los tubos registra el
numero de tubos positivos de cada dilución
TECNICA NUMERO MAS PROBABLE NMP
Prueba confirmativa para
Prueba confirmativa para
Coliformes Totales.
Coliformes fecales
cada uno de los tubos con Caldo lauril
De
sulfato que han producido gas, se De cada uno de los tubos con caldo lauril
transfirió una azada en tubos de cultivo
sulfato que han producido gas se
con Caldo Verde Brillante Bilis, con tubos
transfiere un asda en tubos de caldo de
Durham invertidos.
E.Coli con tubos Durham invertidos
Los tubos sembrados se incubaron a 35 °C atemperados previamente a 44.5 °C por
2°C por 24 horas a 48 horas 30min
La presencia de gas indica una prueba Los tubos sembrados se incubaron en baño
positiva para coliformes . maria a 44.5 °C por 24 horas.
Se anota entonces el numero de tubos La presencia de gas indica una prueba
cuya reacción es positiva positiva para coliformes fecales.
Los datos obtenidos se expresaron en
número más probable (NMP) para tres
“ TECNICA DE RECUENTO
DE PLACA
”
El método consiste en colocar 1 ml de alimento homogenizado al 10% y de las diluciones
decimales a cajas Petri, en un medio selectivo. Después de una incubación de 48 h a 35 ºC 2
ºC se cuenta el numero de colonias características
Recuento de la bacteria
Escherichia coli en
(ufc/mL)
MEDIOS DE CULTIVO
Caldo E.Coli EC
Composición
Preparación
Disolver Triptona 20 g
completamente la
sustancia, sin hacer hervir Lactosa 5g
ensarar a volumen con
Mezcla de sales biliares 1.5g
agua, ajustar el pH a 6.9,
distribuir a 10 ml en tubos Hidrogenofofato dipotasico 4g
de cultivo que contenga
Dihidrogenofosfato potásico 1.5 g
tubos Durham invertidos y
esterilizar en autoclave Cloruro de sodio 5g
durante 15 min a 121 °C
Agua destilada 100000ml
MEDIOS DE CULTIVO
Agar Mac Conkey
Composición
Preparación
Proteosa peptona o polipepton 3g
Suspender los componentes y calentar
con suave agitación hasta disolver, Peptona 17 g
esterilizar en autoclave a 121 °C
durante 15 minutos. Enfriar entre 45- Lactosa 10 g
50°C y fraccioner 20 ml en placas prtri
estriles Sales biliares 1.5 g
De cada tubo que contiene Caldo E.Coli Cloruro de sodio 5g
ECcon formación de gas, se transfirió
una porción con el asa de inoculación y Rojo neutro 0.03 g
se sembró sobre la superficie del Agar
Mac Conkey en cajas petris. Este medio Cristal violeta 0.001 g
de cultivo es esencial para el
crecimiento de la bacteria Escherichia Agar 13.5 g
coli. Agua destilada 1000 ml
Recuento de la bacteria
Escherichia coli
Se incubo las cajas a 37° C por un periodo de 18
a 24 h.
Posteriormente se realizo el recuento de la
bacteria Escherichia coli.
Se procedió a identificar mediante Tinción
Gram.
Los datos obtenidos se expresaron con un solo
número entero y un decimal por diez elevado a
la potencia correspondiente.
Presencia de la bacteria
Estaphylococcus aureus
en ufc/mL
MEDIOS DE CULTIVO
Agar base sangre
Preparación
Disolver los componnts en agua, calentar agitando suavemnet
hasta llevar a ebullición durante 1 minuto. Llenar 173 de
tubos de ensayo de 16x150 mm, tapar y esterilizar a 121 °C Composición
durante 15 minutos. Entes de solidificar inclinar los tubos
para obtener un pico de flauta de 4-5 cm y n fodo de 2-3 mm Triptosa 10 g
De acuerdo al Norma Boliviana NB 32004, el método consiste
Extracro de carne 3g
en extender un volumen determinado de las diluciones
correspondientes de la leche homogeneizado, sobre la Cloruro de sodio 5g
superficie de Agar Base Sangre, en este medio de cultivo se
forman colonias negras rodeadas de zonas claras Agar 15 g
características de Staphylococcus aureus este método utiliza
la prueba de coagulasa y catalasa. Agua destilada 1000 ml
Recuento en placa
Colocar en la autoclave todos los materiales de vidrio y medios de cultivo para
esterilizar.
Se peso el medio de cultivo Agar Base Sangre en una balanza de precisión y luego
se vertió en un vaso Erlenmeyer, luego se añadió agua destilada hasta que se
disuelva.
Se preparó las diluciones para cada muestra 1 en 10; 1 en 100; 1 en 1000.
El método de siembra que se utilizo es por estría. El cual consiste en sembrar
sobre el Agar.
Se incubo a 37 ºC durante 24 h.
Observar después de 48 h la formación de colonias.
Posteriormente se realizo el recuento de colonias sospechosas de Estaphylococcus
aureus.
Se realizo la identificación mediante Tinción Gram donde se observaron al
microscopio cocos Gram positivos y en racimos
Prueba de Coagulasa y
Catalasa para la bacteria
Estaphylococcus aureus
Características de la bacteria
Estaphylococcus aureus
Gram positivo en racimo.
Aproximadamente 1um de diámetro.
Inmóviles.
No forman esporas. 40
La mayoría son anaerobios facultativos
Crece bien en Agar Sangre a 37°C.
Presenta un pigmento de color amarillo.
Catalasa positivo.
Coagulasa positivo.
Colonias medianas, cremosas y brillantes
Prueba de Coagulasa y Catalasa para la bacteria Estaphylococcus
aureus