Cromatografia Papel - Capa Fina

UNIVERSIDAD DE LOS ANDES FACULTAD DE CIENCIAS DEPARTAMENTO DE QUIMICA COORDINACIN LABORATORIOS QUMICA ORGNICA LABORATORIO DE QUMICA ORGNICA I - A
1 1
Prof: Jorge Uzctegui Nava
CROMATOGRAFIA SOBRE PAPEL

1.INTRODUCCIN. PRINCIPIOS GENERALES.
La cromatografa puede definirse como la tcnica de separacin de una mezcla de solutos en solucin, basndose en las diferentes velocidades con que se mueven cada uno de los componentes de la mezcla a travs de un medio slido poroso insoluble, inorgnico u orgnico, mas o menos finamente repartido, arrastrados por un disolvente en movimiento. Como mecanismos fundamentales han de tenerse en cuenta el reparto entre dos fases lquidas, as como la unin reversible de los distintos solutos que se desplazan sobre la superficie de un adsorbente. Si en el ltimo caso se trata principalmente de interacciones superficiales fsicas, se habla de cromatografa de adsorcin.
2.-
CROMATOGRAFA SOBRE PAPEL.
La cromatografa sobre papel es una de las tcnicas cromatogrficas ms simples ! de las ms antiguas. Como su nombre lo indica, la separacin se realiza sobre tiras u ho"as de papel de filtro especialmente elaborado para fines cromatogrficos. La cromatografa sobre papel es bastante similar a la cromatografa de capa fina # TLC$, respecto a la aplicacin de las tcnicas e%perimentales. La fase estacionaria en este tipo de cromatografa es una capa de agua absorbida entre las fibras del papel. Los principios tericos de la cromatografa sobre papel, estn estrechamente relacionados con los de la e%traccin. La cromatografa sobre papel es en realidad una tcnica de particin lquido & lquido, antes que una tcnica de particin slido & lquido, en la cual la separacin de una mezcla de sustancias est basada en el reparto o distribucin de los diferentes componentes entre la fase mvil #disolvente$ ! la fase estacionaria #agua, en este caso$, soportada sobre un slido adecuado. ' pesar de que el papel, consiste principalmente de celulosa, sta no funciona como fase estacionaria. La celulosa es un producto natural obtenido generalmente a partir del algodn. (s un polmero de glucosa, por lo que posee una gran cantidad de grupos hidro%ilo ! adems, una microestructura mu! complicada. (n el caso de la cromatografa sobre papel, la fase estacionaria tal como se mencion anteriormente, es el agua, la cual se encuentra siempre presente # )* + en peso$ entre las fibras del papel, que act an como soporte de la fase estacionaria. ,ara asegurarse que la celulosa est siempre saturada con agua es frecuente usar como solventes de desarrollo #fase mvil$, aquellos que contengan entre sus componentes el agua, es decir, un disolvente inmiscible con el agua, generalmente un disolvente orgnico saturado con agua. Qu sucede exactamente en una cromatogra !a so"re #a#e$ %
Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina
2 2
-,or qu razn#es$ un n mero determinado de componentes de una mezcla que han sido aplicados en principio en el mismo punto, se mueven a diferentes distancias a lo largo de la distancia del papel, originando manchas discretas coloreadas o no en el cromatograma final . ' medida que el solvente se mueve ! arrastra consigo las sustancias aplicadas, comienzan a operar dos con"untos de fuerzas opuestas/ las fuerzas propulsoras ! las fuerzas retardantes. Las fuerzas propulsoras act an para hacer mover las sustancias desde su punto de origen ! desplazarlas en la direccin del flu"o del solvente. Las fuerzas retardantes act an para impedir el movimiento de las sustancias arrastrndolas fuera del solvente de flu"o ! de regreso al papel. La distancia desde el origen que realmente via"a una sustancia en un tiempo determinado es la resultante de estos dos con"untos de fuerzas.
2.1.-
FUERZAS PROPULSORAS.-
' medida que se corre un cromatograma, comienzan a funcionar las dos principales fuerzas propulsoras a saber0 el flujo del solvente ! la solubilidad de cada sustancia en el solvente.
2.1.1.- FLUJO DEL SOLVENTE:

(%clu!endo otros factores, cuando un solvente flu!e sobre la aplicacin de una mezcla determinada, tiene la propiedad de arrastrar consigo todos los solutos presentes. Si una sustancia que est siendo cromatografiada es completa e instantneamente soluble en el solvente en movimiento, por e"emplo0 az car en agua, ! adems de este factor no actuarn fuerzas retardantes, esta se mover con el frente del solvente hasta el punto ms le"ano que pueda alcanzar el solvente. (n forma alternativa, si la sustancia es completamente insoluble en el solvente, por e"emplo0 az car en acetato de etilo, esta permanecer en el origen. (l flu"o de solvente, es el mismo para todas las sustancias en el cromatograma. 1bviamente entonces, si el solvente es uno en el cual se disuelven todos los componentes de la mezcla aplicada en forma completa e instantnea, estos se movern "untos con el frente del solvente ! finalizarn como empezaron0 a n mezclados. (l resultado neto es que no habr separacin, siempre ! cuando este factor actuar slo ! separado del resto de las fuerzas en "uego.
2.1.2.- SOLUBILIDAD:
La solubilidad de una sustancia en un solvente determinado, es una propiedad intrnseca de su estructura qumica. ,or lo tanto, se puede afirmar que mu! pocas sustancias presentan idnticas solubilidades en un solvente particular. La solubilidad de cualquier sustancia en el solvente de flu"o es la fuerza propulsora que tiende a desplazar la sustancia sobre la superficie del papel ! mantenerla movindose a lo largo de este con el solvente.
3 3
Si se mantienen constantes todas las dems variables, tendremos entonces que, mientras ms soluble sea una sustancia en el solvente de flu"o, ms rpidamente se mover esta a lo largo del papel. 2e esta manera, los componentes ms solubles de una mezcla aplicada sobre un papel, tendern a ale"arse de las menos solubles ! separarse de acuerdo a las diferencias de solubilidades en el solvente particular. ,or lo tanto, los solventes deben escogerse de tal manera que induzcan la ma!or diferencia de solubilidad entre los componentes de una mezcla a ser separada.
2.2.-
FUERZAS RETARDANTES.
(%isten dos fuerzas principales de este tipo a saber0 adsorcin ! particin.
2.2.1.- ADSORCIN:
La celulosa, posee propiedades adsortivas. Las sustancias aplicadas sobre el papel de cromatografa pueden ser ms o menos adsorbidas por este. La adsorcin es una propiedad reversible ! la celulosa gradualmente liberar ms sustancia hacia el solvente a medida que este flu!a sobre la aplicacin. La adsorcin es una fuerza diferencial, es decir, algunas sustancias sern ms fuertemente adsorbidas que otras, permitiendo de esta manera que la liberacin de sustancias desde el punto de aplicacin vare de una sustancia a la otra. ' medida que el cromatograma se desarrolla, las sustancias que se adsorben ms fuertemente se retienen ms, mientras que aquellas que se adsorben menos se movern una distancia ma!or que las primeras.
2.2.2.- PARTICIN:
Superficialmente la cromatografa sobre papel parece involucrar el paso de un solvente #lquido$ sobre un slido compuesto de fibras de celulosa. 2e hecho, la cromatografa sobre papel depende en una gran medida de la presencia de dos fases lquidas inmiscibles entre s. 3na, es obviamente, la fase mvil. La otra, la fase acuosa presente en el papel de cromatografa. Cuando una sustancia que es soluble en dos solventes no miscibles, se pone en contacto simultneamente con ambos, esta se repartir entre ellos. La cantidad que se encuentra en cada solvente depender de la solubilidad relativa del soluto en cada solvente. (l grado de reparto o particin en el equilibrio se conoce como el coeficiente de reparto o relacin de distribucin. (n la autntica cromatografa de particin, el nico factor que influ!e en la migracin de un compuesto a lo largo del papel es la solubilidad relativa de ste en la fase mvil ! en la fase estacionaria. ' medida que el solvente de desarrollo asciende sobre el papel, los componentes de una mezcla a separar que son solubles slo en la fase mvil #el disolvente$ emigrarn a la misma velocidad que la parte frontal de sta, mientras las que son solamente solubles en la fase estacionaria #agua$ permanecern en el punto de origen de la cromatografa.
4 4
(s mu! importante recordar que el reparto de una sustancia entre dos fases inmiscibles no se afecta por la presencia de otras sustancias disueltas, si se asume un comportamiento ideal. Las sustancias que e%hiben alta solubilidad en agua o en su defecto, aquellas que poseen la ms alta capacidad para enlazarse mediante la formacin de puentes de hidrgeno, son las que se retienen ms fuertemente ! por lo tanto se mueven ms lentamente. La cromatografa sobre papel se aplica para separar mezclas de compuestos altamente polares o para aquellos que presentan m ltiples grupos funcionales en su estructura, tales como por e"emplo0 az cares, amino&cidos !, pigmentos naturales entre otros.
2.3.-
PROCESO DE PARTICIN LIQUDO-LQUIDO.

(n su forma bsica, un sistema de particin ! las fuerzas que gobiernan su operacin son mucho ms
simples que las de un sistema de adsorcin. (st constituido por dos lquidos que son parcialmente miscibles uno en el otro. 2ebido al requisito de inmiscibilidad, uno de los lquidos tender a ser mucho ms polar que el otro. Cualquiera de los dos lquidos puede ser un solvente puro o una mezcla de comple"idad considerable. Los factores que dictan si un soluto permanece en la fase estacionaria o si se mueve con"untamente con la fase mvil, estarn supeditados a las diferencias de solubilidad del soluto en las dos fases. La e%tensin a la cual un soluto se distribu!e entre dos lquidos puede medirse en un embudo de separacin. 4ales mediciones, producen constantes conocidas como coeficientes de particin o reparto. Si un soluto ' se disuelve en dos disolventes 5 ! C, se distribu!e entre ellos de acuerdo con la siguiente le!0
concentracin de A en B = una constante a temperatura constante = coeficiente de reparto concentracin de A en C
,or ende, entonces, podemos decir en forma general que los materiales que tienen diferentes coeficientes pueden ser separados. 'quellos solutos que son ms solubles en la fase mvil se movern ms rpido que aquellos que son menos solubles ! los solutos que son ms solubles en la fase estacionaria tendern a moverse ms lentamente que aquellos que son menos solubles. Consideraremos como e"emplo tpico la separacin de una mezcla de sustancias sobre una tira de papel de filtro. Se sabe que el papel de filtro est formado por numerosas fibras de celulosa que portan un cierto porcenta"e de humedad. ,odemos considerar que las partes individuales de cada fibra, "unto con su humedad asociada, constitu!en hipotticas 6clulas7 elementales. La separacin se lleva a cabo al repartirse las sustancias entre la humedad de las clulas ! el flu"o de disolvente entre ellas. (l agua de las clulas permanece estacionaria, mientras que el disolvente circula sobre ellas. 2ebido a esto, a las clulas se las llama fase estacionaria, mientras que al disolvente se le denomina fase mvil. ,odemos ilustrar me"or estos principios haciendo referencia a un e"emplo. Consideremos que una mezcla de dos compuestos, ' ! 5 #cu!o coeficiente de reparto entre las fases estacionaria ! mvil son )08 ! 80),
5 5
respectivamente, es decir, ' es relativamente ms soluble en agua$, que se aplican en el origen de una cromatografa de papel. La figura 8 representa un diagrama del corte longitudinal del papel, que contiene la mezcla disuelta en el agua de una clula en el origen. ,or conveniencia se puede considerar que el reparto tiene lugar entre vol menes iguales de la fase en movimiento ! estacionaria. (n la figura, las molculas del compuesto ' estn representadas por crculos negros, ! las de 5, por cruces.
FIG&RA '
Cuando el disolvente penetra en la clula #esto ocurre cuando comienza la separacin$, las dos sustancias se repartirn de acuerdo con la ley de reparto, especificada anteriormente.
6 6
(l disolvente conteniendo una cierta cantidad de mezcla correr a lo largo del papel ! encontrar otra clula que contiene slo agua, mientras que el disolvente puro se pone en contacto con la primera clula #figura 8,c$ ! tendr lugar en ella un nuevo reparto #fig. 8,d$. (ste proceso se conoce como distribucin en contracorriente continua, en tanto que el disolvente avance a lo largo del papel. La figura 8e representa la distribucin de ' ! 5 en el papel despus de haber tenido lugar la separacin. (s obvio que los dos componentes !a han comenzado a separarse. (n la prctica este proceso se repite m ltiples veces, dando, eventualmente, una separacin eficaz. 9aciendo una similitud con el proceso de e%traccin lquido & lquido, podemos afirmar que en la multitud de peque:as celdas formadas por las micelas del papel, la separacin tiene lugar igualmente como si se dispusiera de e%tracciones sucesivas. La cromatografa que resultar de la anterior separacin se representa en la figura ).
' se encontrar a un tercio de la distancia entre el origen ! el frente del disolvente, mientras que 5 estar a dos tercios de esta distancia. 3no de los aspectos ms importantes de la cromatografa es que, en un sistema cromatogrfico dado, el movimiento relativo de un compuesto con respecto al frente del disolvente es una propiedad caracterstica ! reproducible. (n el caso de las cromatografas de papel ! capa fina se e%presa el movimiento de un compuesto como un valor de ;f. (ste valor, es una constante caracterstica ! constante de cualquier sustancia para un sistema cromatogrfico dado. (n la cromatografa sobre papel ! capa fina los valores de ; f se e%presan mediante la ecuacin0
Rf = distancia recorrioda por la sustancia distancia recorrida por el disolvente
7 7
,ara el caso estudiado tendremos0 R (A) * a+x , R (B) * "+x a.& distancia recorrida por la sustancia ', la cual se mide desde el punto de aplicacin al centro de la mancha. b.& distancia recorrida por la sustancia 5, la cual se mide desde el punto de aplicacin al centro de la mancha. %.& distancia recorrida por el frente del solvente.
2.2.-
PROCEDIMIENTO GENERAL
(l papel de filtro com nmente utilizado #<hatman = 8$, est formado por celulosa con un ))+ apro%imadamente de agua absorbida #unida por puente de hidrgeno/ unas dos molculas apro%imadamente por cada unidad C>98**?$. La tcnica es simple0 un volumen peque:o # 8 l$ de solucin de la mezcla a separar se aplica sobre el papel #ho"a, tira o disco$, en un lugar pr%imo a un e%tremo #o al centro si es un disco$, ! se seca. 3na vez que la aplicacin ste seca, se introduce el papel en un recipiente que contenga un solvente adecuado que ha de usarse como fase mvil. (n este punto, el nivel del solvente en el recipiente no deber cubrir el punto aplicado. (l solvente recorrer el papel por capilaridad #ascendente, descendente u horizontal$. ' medida que el solvente se desplaza, los componentes de la mezcla se separan en manchas individuales en la direccin del flu"o de acuerdo al grado de interaccin que tendr cada componente con la fase estacionaria. Cuando el solvente alcance el otro e%tremo del papel, se saca el cromatograma, se marca con lpiz el frente del solvente ! se seca. Los componentes de la mezcla que se separan pueden ser detectados mediante el uso de procedimientos qumicos #reactivos especialmente preparados$ o fsicos #luz 3.@$, dependiendo de la naturaleza de las sustancias separadas, los cuales a continuacin se delinean con un lpiz. (l cromatograma as desarrollado est en condiciones de ser analizado. Las figuras que se muestran a continuacin representan 0 a.& una tira de papel en la que se aplic la muestra. b.& el desarrollo del cromatograma. c.& el cromatograma obtenido.
8 8
2.3.-
ETAPAS PARA REALIZAR UNA CROMATOGRAFA SOBRE PAPEL
2.3.1. MUESTRAS PARA CROMATOGRAFA:

Las muestras se aplican siempre sobre el papel en forma de solucin. ,ara esto, los slidos se disuelven en una peque:a cantidad de un solvente adecuado. Las soluciones puras pueden aplicarse directamente, pero los e%tractos preparados de te"idos biolgicos requieren frecuentemente una purificacin preliminar con el ob"eto de eliminar las protenas ! sales presentes en el e%tracto, las cuales interfieren en el proceso de separacin (%isten varios mtodos para eliminar sustancias que pueden considerarse indeseables. Los lpidos pueden e%traerse con disolventes orgnicos/ las protenas pueden precipitarse con alcohol !, las sales se eliminan con resinas de intercambio inico o por mtodos electrolticos. Las cantidades de sustancias requeridas son del orden de *,8 a ?* g para la ma!ora de los compuestos.
2.3.2. APLICACIN DE LAS MUESTRAS SOBRE EL PAPEL.

'ntes de proceder a la aplicacin de las muestras, se selecciona el tama:o ! la calidad del papel a ser usado. ' continuacin se deber determinar la orientacin de la fibra del papel escogido, lo que se logra, colocando una gota de agua en un e%tremo del papel ! notando la direccin hacia donde se dirige la curvatura ms ancha de la elipse. Seguidamente se traza una lnea paralela con un lpiz de grafito por el lado que se iniciar la cromatografa, la cual resultar perpendicular al e"e de orientacin de la fibra. ' intervalos de 8,? a ) cm apro%imadamente se marca sobre la lnea un n mero de cruces peque:as correspondientes a cada una de las muestras que se han de aplicar sobre el papel !, se se:ala cada muestra para poder identificarla. Las muestras se aplican sobre el papel mediante una micropipeta, un capilar mu! fino o un hilo de platino. Las manchas de las muestras aplicadas sobre el papel deben tener un dimetro m%imo de ? mm, puesto que, manchas de dimetro ma!ores conducen a separaciones de peor resolucin. La aplicacin del capilar en un solo punto del papel conduce a la obtencin de manchas de un tama:o peque:o. Cuando la solucin a cromatografiar se encuentra mu! diluida, se deber hacer varias aplicaciones, secando la mancha despus de cada aplicacin. (sta misma operacin se realiza cada vez que estemos interesados en que e%istan varias muestras en una sola mancha. La me"or manera de secar las manchas es con un secador de pelo. Cuando se desea separar una cantidad apreciable de compuestos de una mezcla determinada #cromatografa preparativa$, las muestras debern aplicarse varias veces en forma de ra!a continua. 3na vez que las manchas sobre el papel se han secado, !a estar preparado el cromatograma para su desarrollo. Se puede definir desarrollo al proceso fsico mediante el cual un disolvente flu!e a travs del papel produciendo la separacin.
9 9
2.3.3. ELECCIN DEL SOLVENTE.

(l solvente a usar depende de las sustancias que se han de separar. La eleccin proviene de la e%periencia. Los solventes para la cromatografa de reparto sobre papel se pueden preparar por simple saturacin con agua de un solvente orgnico, tal como el n&butanol. Com nmente se adicionan peque:as cantidades de cidos, bases o agentes acomple"antes, como por e"emplo0 cido actico o frmico, piridina ! solucin de amonaco, los cuales permiten aumentar la solubilidad de algunos compuestos en la fase mvil ! disminuir la de otros. Los disolventes ternarios se utilizan mu! ampliamente algunos de estos solventes son0 n&butanol 0 etanol 0 amonaco en las proporciones A0808, agua destilada0 etanol0 solucin acuosa saturada de sulfato de amonio #8?0A0)$/ acetona 0 agua destilada0 cido clorhdrico concentrado #8B080)$
2.3. .- DESARROLLO DEL CROMATOGRAMA.

(l desarrollo se puede realizar por alguna de las siguientes tcnicas0 a-. Ascendente/ si el solvente sube por el papel, "-. 0escendente/ si el solvente desciende por el papel,
10 10
c-. 1or23onta$/ si el solvente se desplaza sobre el papel colocado en forma horizontal. La eleccin de una de stas tcnicas es cuestin de decisin personal, !a que, los resultados que se obtienen son similares. (n caso de compuestos que tienen mu! poco recorrido sobre el papel, se recomienda usar la tcnica descendente con el fin de que el solvente corra fuera del papel debido a la gravedad, con lo que es posible aumentar considerablemente la longitud del recorrido !, de sta manera conseguir me"ores separaciones.
2.3. .1.-
T!CNICA ASCENDENTE:
(n sta tcnica, el solvente se coloca en el fondo de la cubeta cromatogrfica que puede ser un recipiente especialmente dise:ado o en su defecto un vaso de precipitados, o un cilindro graduado de tama:o adecuado ! el papel se suspende mediante alg n artefacto colocado en la parte superior del recipiente escogido, tal como un gancho o un clip #ver figura$, teniendo el cuidado de que el nivel del solvente en el recipiente cromatogrfico toque la parte inferior del papel, pero que sin embargo, no est por encima del nivel de las manchas aplicadas sobre el papel. 4ambin se puede enrollar el papel en forma de cilindro "untando los e%tremos mediante hilo o grapas. (n el caso de que se trate de un cilindro de papel, ste deber ser colocado en el fondo de la cubeta cromatogrfica, teniendo precaucin de que el nivel del solvente en la cubeta no sobrepase la altura de las manchas aplicadas. La cuba cromatogrfica deber cerrarse lo ms hermticamente posible, haciendo uso de una tapa especialmente dise:ada para la cubeta cromatogrfica o con un vidrio de relo" de un dimetro superior al de la boca del vaso de precipitado usado como la cuba cromatogrfica.
4-5-6-4-
T7C8ICA 0ESCE80E8TE-
(n este tipo de tcnica el depsito del solvente se coloca en la parte superior de la cubeta ! se llena con el solvente adecuado. (n el fondo de la cubeta se coloca tambin un poco de solvente para asegurarse que la atmsfera del interior se encuentre saturada con los vapores del mismo. (l papel preparado como se indic anteriormente, se suspende en el solvente ! se tapa hermticamente la cubeta. (l papel se su"eta al fondo del depsito mediante una varilla de vidrio ! a continuacin se pasa sobre otra varilla que est a una altura ligeramente superior al nivel del lquido, para evitar que ste sifone.
2.3. .3.-
T!CNICA "ORIZONTAL.
Se usa papel cortado en forma de disco. La cubeta cromatogrfica la constitu!e dos cpsulas de #etr2- (l solvente se coloca en un recipiente ubicado en el centro de una cpsula de petri. (l disco de papel se apo!a en el recipiente que contiene el solvente !, ste se hace llegar al papel mediante una mecha de papel, un hilo o un tubo capilar. (l disolvente fluir entonces en forma radial.
10
11 11
2.3.#- SECADO DEL PAPEL.

2 Cuando el solvente ha recorrido ms de dos tercios de la longitud del papel o la longitud requerida de acuerdo a las premisas del procedimiento, se procede a sacar el papel de la cubeta cromatogrfica, se marca el frente del solvente con un lpiz. (l papel se seca colocando el cromatograma en una estufa a 8**C, o con un secador de pelo elctrico. 3na vez seco !a est el papel listo para la localizacin #revelado$ de los productos.
2.3.$.- LOCALIZACIN O REVELADO DE LAS SUSTANCIAS EN EL CROMATOGRAMA.

Cuando el papel est seco, es necesario localizar la posicin de las manchas sobre el papel. Si las sustancias son coloreadas, esto no representa ma!or dificultad pues pueden detallarse visualmente mu! fcilmente. Sin embargo, la gran ma!ora de los compuestos son incoloros ! por consiguientes invisibles a la vista humana. La visualizacin de las manchas puede realizarse por dos mtodos generales/
2.3.$.1. M%&'(') F*)+,')/ utilizan propiedades particulares de los compuestos, tales como la fluorescencia !
la radiactividad. Son de aplicabilidad limitada ! tienen la venta"a de que las sustancias no sufren transformaciones ! pueden recuperarse para estudios posteriores. (l mtodo ms generalmente usado es hacer reaccionar las sustancias a revelar con alg n agente qumico con el que formen un compuesto coloreado.
2.3.$.2.- F-.'/0),01,+2: muchos compuestos orgnicos no saturados presentan fluorescencia debido a la

propiedad de absorber las radiaciones ultravioletas ! emitir radiaciones de ma!or longitud de onda #regin visible del espectro$. (stos compuestos, aunque invisibles en el cromatograma a la luz ordinaria pueden
11
12 12
detectarse con una lmpara de luz ultravioleta. La longitud de onda emitida, ! por consiguiente, el color que presenta, es caracterstica del compuesto ! se usa como mtodo de identificacin.
2.3.$.3.- R2(+'2,&+3+(2(: 9o! da es posible traba"ar con compuestos radioactivos/ la localizacin de las
manchas de compuestos radioactivos puede hacerse mediante un contador especial. Las manchas localizadas se delinean con un lpiz de grafito, para disponer de una localizacin permanente sobre el papel.
2.3.$. .-
M%&'(') Q.*4+,'): los compuestos incoloros sobre papel pueden visualizarse hacindolos
reaccionar con alg n reactivo especfico para formar compuestos coloreados. (l reactivo se denomina revelador. (ste puede ser gaseoso #9)S para revelar iones metlicos$, liquido o slido #se emplean en forma de soluciones diluidas$.
Las soluciones del revelador se pueden rociar sobre el papel (tcnica del rociado$ o se puede sumergir el cromatograma en un ba:o de la solucin reveladora (tcnica de baado$. (n algunos casos es necesario usar varios reveladores, para lo cual se deber secar el papel antes de la aplicacin de cada revelador.
2.3.$.#.-
T%,1+,2 (0- /',+2('. (sta tcnica consiste en rociar uniformemente el revelador sobre la
superficie del cromatograma por medio de un rociador que puede ser una botella de rociado especial para cromatografa #ver figura$, a la cual se le puede adaptar una pera o una bomba, mediante la cual se insufla aire a presin que obliga al revelador salir de la botella ! ba:ar toda la superficie del papel. (ste procedimiento debe efectuarse en un campana e%tractora de gases debido a la to%icidad de los reactivos qumicos empleados para preparar las soluciones de los reveladores.
12
13 13
2.3.$.$.- T%,1+,2 (0 5262('. (l material que se requiere para la aplicacin de esta tcnica, es una bande"a
poco profunda, fabricada de material inerte, en donde se coloca la solucin reveladora ! se sumerge el cromatograma, teniendo cuidado de que ste no toque las paredes laterales de la bande"a, tal como se indica en la figura.
(s esencial que el compuesto coloreado formado al revelar sea insoluble en el disolvente elegido, de lo contrario, las manchas aparecern difusas o desaparecern completamente. (l agente ms empleado para detectar aminocidos es la ninhidrina. (sta se aplica sobre el papel en forma de solucin de *,8+ a *,)?+ en acetona o n&butanol. La reaccin con los aminocidos puede representarse en forma sencilla como0 am2no9c2dos : n2n;2dr2na ..................> #roducto co$oreado #incoloro$ #incoloro$ ca$or #violeta$ Las reacciones involucradas en la produccin del color son0
13
14 14
O OH OH O Ninhidrina O Base - (CO2) O O N H2 O + O O O N - H2O
O O O
R NH2CHCOOH - (H2O)
R NCHC OH
O O
CHR
H2O O
N H2 +
C O
O N - (H2O) O AZUL
3nos pocos aminocidos producen un color diferente, por e"emplo la prolina genera un color amarillo plido con ninhidrina. (l papel se introduce en la solucin de acetona, se saca ! se lleva a una estufa donde se evapora el solvente a 8**CC durante ? a 8* minutos, tiempo suficiente para que aparezca el color. La tcnica de ba:ado no puede emplearse si alguno de los compuestos del cromatograma, o el producto coloreado del revelado, son solubles en el disolvente del revelador. (n estos casos se emplea la tcnica del rociado.
2.3.7.- IDENTIFICACIN DE LOS COMPUESTOS.

,ara cada sustancia, su recorrido relativo respecto al recorrido del solvente en un sistema cromatogrfico dado, es constante ! caracterstico de la sustancia. (sta constante se denomina ; f. 'ctualmente, estn tabulados los valores de ;f de casi todos los compuestos conocidos que pueden separarse por cromatografa sobre papel.
14
15 15
(n consecuencia, si se conoce la naturaleza del compuesto, el valor de su ; f ! el sistema cromatogrfico usado, es posible identificar por comparacin con los valores de ; f tabulados para la clase de compuestos con los estamos traba"ando, cada una de las sustancias integrantes de una mezcla determinada. Deneralmente la identificacin se realiza aplicando en el papel muestras de soluciones de compuestos conocidos #patrones$. Se desarrolla ! revela el cromatograma !, se determinan los valores de ; f para cada una de las muestras separadas. (stos valores se comparan con los obtenidos para las muestras patrones, con el ob"etivo de identificar cada componente particular de una mezcla determinada. Si los ; f son iguales, podemos concluir que la sustancia particular en la mezcla es la misma que la correspondiente al patrn, ! son diferentes entonces, las sustancias patrn ! la sustancia particular de la mezcla tambin sern diferentes.
2.3.8.- CROMATOGRAFIA SOBRE PAPEL BIDIMENSIONAL.

(n algunos casos como por e"emplo en el hidrolizado de protenas, no se consigue una buena separacin de las manchas por cromatografa sobre papel en una sola direccin para lograr la separacin de los componentes de una mezcla de sustancias. (n estos casos, se realiza otra cromatografa sobre el mismo cromatograma anterior pero sin revelar, usando sta vez otro solvente ! desarrollando el cromatograma en otra direccin perpendicular a la primera. Se obtiene un cromatograma en el cual las manchas estn me"or separadas. 3na cromatografa desarrollada de esta manera, en dos direcciones perpendiculares entre s, se le conoce con el nombre de CROMATOGRAFIA BI0IME8SIO8AL(n este caso, se emplea una ho"a cuadrada de papel de dimensiones adecuadas al requerimiento e%perimental. La muestra deber ser colocada cerca de una esquina del papel ! se somete al proceso de cromatografa ascendente o descendente. Seguidamente, se saca el papel de la cubeta cromatogrfica, se seca, se gira E* ! se desarrolla el cromatograma con un solvente distinto al utilizado en primera instancia. 2espus que el segundo desarrollo ha finalizado, se retira el papel de la cubeta, se seca ! se revela. (l con"unto de figuras muestra una separacin bidimensional.
15
16 16
CROMATOGRAF<A 0E CAPA FI8A

1.FUNDAMENTO TERICO:
La cromatografa de capa fina es una tcnica de adsorcin slido & lquido. (l fenmeno responsable de la separacin es la adsorcin, la cual implica la distribucin de un soluto entre dos fases inmiscibles de acuerdo a la ma!or o menor adsorcin del soluto en la superficie de una fase slida. La fase estacionaria es slida ! la fase mvil es lquida #disolvente$. La adsorcin es un fenmeno de superficie, que se manifiesta por un aumento de concentracin en la interfase que rodea el medio estacionario. =o se debe confundir la adsorcin con la absorcin, que consiste en la penetracin de una sustancia en el seno de otra. ,or e"emplo, al escribir, el papel adsorbe tinta, mientras que una espon"a absorbe agua. La teora de la cromatografa de capa fina a n no ha podido aclararse en todos sus detalles ! es complicada por varias razones. 1.1.La velocidad de flu"o del solvente no es constante, sino que varia a medida que el frente del solvente avanza a lo largo de la capa de adsorbente. La velocidad depende de las caractersticas fsicas del solvente empleado. (l solvente se mueve constantemente hacia reas de adsorbente seco, lo cual tiende a involucrar calores de ! consecuentemente distorsiona el equilibrio. 1.2. Las manchas que se separan pueden sufrir una difusin lateral ! probablemente no estarn uniformemente depositadas sobre el adsorbente. ,robablemente, la conclusin ms importante, de toda la teora desarrollada para la cromatografa de capa fina, es que el ma!or grado de resolucin en una capa fina ocurre en el rea alrededor de los valores de ;f entre *,A ! *,F.
2.&
COMPARACIN CON LA CROMATOGRAFA SOBRE PAPEL:
La cromatografa sobre papel es una tcnica mu! valiosa. 9aciendo uso de ella se pueden separar en forma fcil ! rpida, sustancias qumicas relacionadas estrechamente en estructura, bien sean iones inorgnicos, as como tambin, compuestos orgnicos polifuncionales o mu! polares, tales como0 amino&cidos, azucares o pigmentos de plantas. -entonces porqu usar otros mtodos, los cuales, aparentemente, a primera vista, hacen e%actamente la misma cosa . La respuesta a esta interrogante es bastante sencilla. (%isten un gran n mero de familias de compuestos, principalmente en el campo de los lpidos, donde la cromatografa de papel no ha producido los resultados deseados. ,or lo tanto, se necesita una tcnica alternativa que sea capaz de separar, por e"emplo, los cidos grasos de estructura mu! parecida, de una manera tan simple ! fcil como la cromatografa de papel separa los amino&cidos estrechamente relacionados en su estructura qumica. La cromatografa de capa fina (TLC/ T;2n La=er Cromatogra#;=, en 2d2oma 2ng$es), es la tcnica que cubre estas e%pectativas.
16
17 17
,odemos comparar la cromatografa sobre papel con la cromatografa de capa fina #4LC$ respecto a las similitudes de los principios tericos ! las tcnicas e%perimentales empleadas. (n cuanto al fundamento terico, la cromatografa sobre papel es una tcnica de particin lquido & lquido, mientras que la de capa fina es una tcnica de adsorcin slido & lquido. Las venta"as de la 4LC son 0 ma!or velocidad, me"or resolucin, #en general las manchas separadas se presentan ms compactas$, ma!or sensibilidad, #se pueden separar ! recuperar con ma!or facilidad cantidades e%tremadamente peque:as de compuestos, en el orden de los microgramos$ ! ms amplia posibilidad en la seleccin de reactivos de deteccin, #se puede esparcir sobre las placas de slica ! al mina, reactivos reveladores altamente corrosivos como el cido sulf rico, sin afectar la capa de adsorbente$. La cromatografa de capa fina tiene otras venta"as comparada con la de papel. Gientras que la cromatografa sobre papel se desarrolla sobre una pelcula de peque:o espesor de celulosa soportada sobre el papel mismo, la de capa fina puede desarrollarse sobre capas finas de una gran variedad de materiales inorgnicos pulverizados, tales como0 silica gel #%ido de silicio0 Si1 ).9)1$, celita, al mina #%ido de aluminio0 'l )1A$, tierra de diatomeas #Hieselguhr$ ! sobre sustancias orgnicas como0 alcohol polivinlico, celulosa ! celulosas modificadas qumicamente. (s posible entonces, escoger el material particular ms adecuado para resolver la separacin del grupo de compuestos en estudio. (l tiempo requerido para lograr una separacin satisfactoria es considerablemente ms corto en 4LC/ ! por ltimo, la capa de adsorbente puede ser fcilmente retirada con una esptula fina para recuperar por elucin el contenido de una mancha o banda presente en un espacio determinado de la placa. 'dicionalmente, la 4LC puede usarse para separar sustancias hidrofbicas tales como0 lpidos e hidrocarburos que son difciles de mane"ar sobre el papel cromatogrfico. Las desventa"as de la 4LC comparadas con la cromatografa sobre papel son0 ma!or dificultad para preservar resultados en 4LC, los valores de ; f no son fcilmente reproducibles en 4LC !, los platos para la 4LC son ms costosos que las ho"as de papel.
3.-
PRINCIPIOS GENERALES DE LA CROMATOGRAFA EN CAPA FINA.
La cromatografa de capa fina se lleva a cabo sobre una capa delgada uniforme de un adsorbente adecuado e%tendida sobre una lmina de vidrio o de alg n otro material ! activada por calentamiento en un horno #8** a )?*CC$. Las muestras de mezclas a separar se disuelven en un solvente adecuado #apro%imadamente al 8+$ ! se aplican, mediante el uso micropipetas, a lo largo de un borde de la placa, alrededor de 8 cm del final. 2espus de evaporado el solvente, las placas se colocan verticalmente en un recipiente de vidrio cerrado, denominadas cmaras de desarrollo, que contiene una capa de solvente adecuado en el fondo. 'ntes, se ha debido procurar que la atmsfera de la cmara de desarrollo est saturada con vapor del elu!ente. (l elu!ente, avanza sobrepasando la mancha de origen. 'l cabo de unos pocos minutos los componentes de la mezcla son separados por el solvente que ir ascendiendo a travs de la capa fina del adsorbente, transportando las manchas a localizaciones diferentes sobre el adsorbente, por una combinacin de adsorcin ! distribuciones variables del sistema del solvente. 3n e"emplo de separacin empleando la cromatografa de capa fina se indica en la serie de figuras que se muestra a continuacin.
17
18 18
frente del solvente
componente B frente del solvente
menospolar!
componenteB componente A componenteA orgen mezcla frente del solvente
mspolar!
orgen
orgen
Incremento del tiempo de desarrollo
Las placas se e%traen, procedindose a marcar rpidamente el frente del solvente antes que el disolvente se evapore, se secan ! se revela con diversos agentes que permiten visualizar los componentes de la mezcla. La presencia de las sustancias separadas, se comprueban entonces por alg n mtodo de visualizacin. las sustancias coloreadas se pueden observar inmediatamente, algunas fluorescen o absorben luz 3.@., ! otras se hacen visibles rocindolas con reactivos especficos. Como medida de la velocidad de desplazamiento de cualquier sustancia en un elu!ente determinada, se usa, como en la cromatografa de papel, el valor del ; f, es decir, la relacin de la distancia que una sustancia se ha movido con la distancia que ha via"ado el frente del solvente de desarrollo. Los valores de ; f, pueden a!udar en la identificacin de sustancias, cuando las mediciones se realizan ba"o las mismas condiciones, esto significa que se deben desarrollar cromatogramas comparativos al mismo tiempo.
18
19 19
R f del componente A = dA dS R f del componente B = dB dS E l valor de R f esuna fraccin decimal, generalmente reportadohas ta dos cifras decimales
La cromatografa de capa fina se usa para determinar el n mero de componentes en una mezcla, para detectar un compuesto particular en una mezcla de reaccin, ! como un ensa!o preliminar, para determinar las condiciones ptimas para realizar una cromatografa de columna. (l uso de la cromatografa de capa fina est limitado a la aplicacin de sustancias relativamente poco voltiles, !a que las peque:as cantidades de las mismas se encuentran e%puestas en una superficie abierta.
3.1.-
PROCESOS DE ADSORCIN:
2os factores estn involucrados en la cromatografa de adsorcin0 las fuerzas de atraccin entre los solutos ! adsorbentes ! las fuerzas que tienden a apartar los solutos de los adsorbentes, de tal manera que puedan desplazarse con la fase mvil ! puedan ser separados. ' estos dos factores se les denomina respectivamente adsorcin ! desorcin. 2e esta manera, la separacin de componentes de una mezcla por cromatografa de adsorcin depende del equilibrio adsorcin & desorcin entre los compuestos adsorbidos en la superficie de la fase slida estacionaria ! la fase lquida mvil. La fuerza con la que se adsorbe un componente aislado depende de la polaridad de la molcula, de la actividad del adsorbente, ! de la polaridad de la fase lquida mvil. ,or lo tanto, la separacin de los componentes de una mezcla depende de los valores relativos del equilibrio de adsorcin & desorcin para cada uno de ellos. ,or
19
20 20
lo general, cuanto ms polar es un compuesto, ms fuertemente ser adsorbido en la superficie de la fase slida. (l proceso de adsorcin es un fenmeno de superficie (n el sentido cromatogrfico el trmino adsorcin se limita a las interacciones que implican enlaces por puente de hidrgeno, fuerzas de @an der <alls o fuerzas de atraccin electrostticas #cuando las interacciones son inicas el proceso se denomina intercambio inico$, entre el o los solutos a separar ! los centros activos del adsorbente. Los centros activos del adsorbente provienen principalmente de los defectos #grietas, filos, etc.$ de la red cristalina del adsorbente donde las fuerzas electrostticas estn pro!ectadas parcialmente hacia el e%terior. La adsorcin es debida "ustamente a la interaccin de estas fuerzas con las interiores del soluto, provocando de esta manera que las molculas del soluto se distribu!an en capas sucesivas diferenciadas. Las primeras capas de molculas se adsorben A a ? veces ms fuertes que las capas siguientes. (l calor de adsorcin para la primera capa adsorbida sobre un slido est en el rango de )?&A? IcalJmol, disminu!e rpidamente al rango de ?&8* IcalJmol para capas sucesivas. Cuanto ma!or sea la separacin de cargas del soluto #ma!or momento dipolar$, ma!or ser la adsorcin. 2esde el punto de vista prctico la cromatografa de adsorcin se aplica en la separacin de sustancias de media o ba"a polaridad. (n resumen, podemos decir que las fuerzas que causan la adsorcin de los solutos neutros son0 3.2.1. 'tracciones del tipo dipolo&dipolo entre adsorbentes polares ! solutos polares.
3.2.2.
(nlaces por puentes de hidrgeno entre los grupos hidr%ilo dentro de la estructura qumica del adsorbente que se usa, especialmente de la silica, ! los tomos de o%geno ! nitrgeno en la estructura qumica de los solutos.
3.2.3. Las fuerzas de polarizabilidad entre adsorbentes polares ! solutos tales como materiales aromticos que pueden ser polarizados. (n todo caso, en cualquier fenmeno de adsorcin influ!en tres variables independientes. estas son el adsorbente, el disolvente ! las sustancias a cromatografiar. Las separaciones sobre adsorbentes dependen de la e%istencia del equilibrio entre las molculas adsorbidas en la fase estacionaria ! las que estn libres en el disolvente #equilibrio adsorcin & desorcin$. Si las molculas de un componente particular tienen una elevada afinidad por el adsorbente pasarn mu! lentamente, mientras que otro componente con menos afinidad lo har ms rpido.
3.3.-
INFLUENCIA DEL DISOLVENTE.
(l tipo de disolvente a usar es determinante para lograr una buena separacin. La regla general es elegir la polaridad del disolvente anloga a la de la muestra a emplear ! en la ma!ora de los casos adsorbentes poderosos #activos$ para sustancias no polares ! adsorbentes con menos actividad para sustancias ms polares.
20
21 21
La razn de la primera regla es obvia. Si, por e"emplo, elegimos un disolvente polar para una mezcla de compuestos no polares, las molculas del disolvente sern adsorbidas preferentemente, por lo que la mezcla pasar rpidamente a travs del sistema sin conseguir la separacin. Contrariamente, si empleamos un disolvente apolar para una mezcla polar, sta permanecera en el origen sin lograrse tampoco la separacin. Ex2sten dos uer3as $as cua$es causan >ue $os so$utos se mue?an con e$ so$?ente en un cromatograma . La #r2mera, es la tendencia para disolverse ! moverse con el solvente, un fenmeno denominado frecuentemente e$uc2@n(n este caso, los solventes ideales, debern disolver los solutos ! debern ser lo suficientemente buenos como solventes, como para competir con el poder de adsorcin del adsorbente. (ste tipo de situacin probablemente prevalece cuando se usan solventes aprticos para desarrollar los cromatogramas como por e"emplo0 hidrocarburos, teres ! compuestos con funcin carbonlica. La segunda fuerza que tiende a mover los solutos en un sistema cromatogrfico es un fenmeno de des#$a3am2ento. Las molculas del solvente tienden a competir con el soluto por los sitios de adsorcin en el adsorbente ! por tanto tienden a mover las molculas del soluto a lo largo del sistema. (ste fenmeno se denomina des#$a3am2ento- (n cierto sentido, la elucin es una fuerza de traccin ! el desplazamiento es una fuerza de empu"e. (l fenmeno de elucin prevalece con solventes aprticos ! el de desplazamiento con solventes prticos como los alcoholes.
,ara facilitar la eleccin del disolvente, se les ha clasificado en una serie llamada elutrpica, es decir en orden de poder elu!ente creciente. (l poder elu!ente aumenta con la polaridad del disolvente. La serie elutrpica de 4rappe modificada es0 DISOLVENTE Kter de petrleo Ciclohe%ano 4etracloruro de carbono 5enceno 4olueno 4ricloroetileno Kter dietlico Cloroformo 'cetato de etilo Cloruro de etileno ,iridina 'cetona n & propanol (tanol Getanol 'cetonitrilo 'gua CONSTANTE DIELECTRICA 9 : ),* ),8 ),) ),A ),F A,F F,A ?,* >,F 8*,* 8),* )8,* )),* )>,* AF,* AB,* L8,*
21
22 22
(s importante correlacionar el poder elu!ente de un disolvente con su constante dielctrica !a que la cromatografa de adsorcin est basada en atracciones electrostticas, las cuales estn gobernadas por la le! de Coulomb.
F =
q1 x q 2 x r2
(sta ecuacin establece que la fuerza M, entre dos cargas depende de la magnitud de las cargas ! es inversamente proporcional a la constante dielctrica del medio ! al cuadrado de la distancia entre las cargas. Si asumimos que los otros factores permanecen constantes, la fuerza de atraccin vara inversamente con la constante dielctrica del medio. (s fcil demostrar #cmo .$ que el ; f es inversamente proporcional a las fuerzas de atraccin entre el adsorbente ! el material adsorbido, esto es0 F =
1 Rf
mientras menor es la
interaccin soluto & adsorbente, ma!or es su ;f/ si es grande, M es peque:a, ! el ;f es grande.
Cuando no es posible obtener una buena separacin con disolventes puros se usan mezclas de disolventes, hasta conseguir aquella combinacin que permita obtener la separacin deseada. ,ara que los resultados de la cromatografa en capa fina sean reproducibles se usan disolventes de alto grado de pureza, !a que las constantes dielctricas dependen grandemente de la pureza.
3. .-
INFLUENCIA DE LA ESTRUCTURA QUMICA DE LAS SUSTANCIAS A SEPARAR.
La polaridad de las molculas es un factor mu! importante en las separaciones cromatogrficas por adsorcin. (n general, cuanto ms polar es una sustancia, ms fuertemente es adsorbida. Las sustancias adsorbidas fuertemente necesitan disolventes ms polares para ser eluidos. Si las sustancias a separar poseen en la adsorcin con un disolvente no acuoso poca afinidad por los adsorbentes hidrfilos usuales, entonces se traba"ar con un absorbente activo ! elu!entes poco polares. ,or el contrario, se emplearn adsorbentes poco activos ! elu!entes polares cuando la afinidad de adsorcin de las combinaciones es grande. ,or esto es mu! importante conocer qu caractersticas de la estructura qumica de las sustancias influ!en en la fuerza de unin por adsorcin. Los principios en los que esto se rige se indican a continuacin0
3. .1.- Los hidrocarburos saturados son poco o nada adsorbidos. la introduccin de enlaces dobles aumenta
la afinidad de adsorcin, tanto ms, cuanto ma!or es su n mero ! ms todava si estn con"ugados. Con la introduccin de enlaces dobles, especialmente enlaces dobles con"ugados, aumenta la facultad de polarizacin de las molculas ! con esto la fuerza de la unin adsortiva a la superficie de los adsorbentes hidrfilos.
3. .2.& Si se introducen grupos funcionales en un hidrocarburo, aumenta generalmente la afinidad de

adsorcin, pudindose observar la siguiente serie de adsorcin descendente0 &C119, &C1=9 ), &19, Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina 22
23 23
&=9C1C9A, &=9), &1C1C9A, &C1C9A, &=#C9A$), &=1), &1C9A, &9, &Cl. Las combinaciones carbonlicas se adsorben ms dbilmente que las hidro%licas ! amnicas. Los grupos C & metilo estn sin una influencia especial.
3. .3.- Si en una molcula estn presentes varios grupos funcionales de distinta naturaleza, sus influencias
separadas en la adsorcin son apro%imadamente aditivas. Los efectos estricos son importantes ! pueden variar grandemente el grado de adsorcin. 2e aqu resulta que para la separacin de sustancias poco polares #vrtice del tringulo punteado se:alando hacia aba"o a la izquierda en la direccin de mezcla a separar no polar$, ha! que emplear un adsorbente con actividad alta #vrtice del tringulo punteado se:alando hacia arriba a la izquierda en la direccin de la fase estacionaria con actividad N$ ! un elu!ente con poco poder de elucin #vrtice del tringulo punteado se:alando hacia la derecha$.
3.#.-
NATURALEZA DEL ADSORBENTE.
La adsorcin de sustancias en la superficie del slido que act a como adsorbente es ma!or cuanto ma!or es la polaridad del absorbente. La presencia de agua disminu!e la actividad del adsorbente. La actividad del adsorbente #poder de adsorcin$, depende del tipo de material ! del modo cmo se prepar. Guchos de los slidos empleados como adsorbentes en cromatografa de capa fina son %idos metlicos, %idos hidratados ! sales. Las sustancias adsorbidas, llamadas tambin adsorbatos, son combinaciones polares o polarizables. (n general, estn ligadas a la superficie del adsorbente por medio de fuerzas electrostticas, las cuales tambin son responsables de la cohesin de la red cristalina. 'qu, las tensiones reticulares act an en parte hacia afuera. Los centros activos de adsorcin en el adsorbente son, por lo tanto, aristas, secciones de rotura, ngulos ! lugares defectuosos de la superficie, en los que los iones estn mas o menos al descubierto. Con esto se hace comprensible el paralelismo entre la actividad de adsorcin ! la escala de dureza, que representa una medida de la magnitud de las fuerzas reticulares. ,or las tensiones elctricas superficiales se inducen momentos dipolares en las combinaciones no polares, o se intensifican los momentos dipolares !a e%istentes en combinaciones polares. 's pues, la unin del adsorbato a la superficie del medio de adsorcin est producida por fuerzas ion & dipolo o dipolo&dipolo respectivamente. (n caso e%tremo la polarizacin puede conducir a la ionizacin de las molculas adsorbidas. Los puentes de hidrgeno participan a menudo de la unin entre el adsorbente ! la sustancia adsorbida. Las molculas, que forman puentes de hidrgeno internos, se adsorben ms dbilmente en silicagel, %ido de aluminio hidratado, que los compuestos ismeros que no poseen estas propiedades. 'dems, los puentes de hidrgeno influ!en en la movilidad entre la sustancia ! el elu!ente. La serie de poder adsortivo de los adsorbentes ms usados que se presenta en la tabla fue establecida por 9. 9. Strian. ,ara facilitar la eleccin del sistema, se ha preparado una lista de adsorbentes ! disolventes ordenados de menor a ma!or polaridad
23
24 24
#actividad ! poder elu!ente respectivamente$. (sta se ha elaborado a base de conocimientos prcticos ! se representa a continuacin. Adsorbentes por orden de menor a mayor poder adsortivo 'z car, almidn Nnulina =itrato magnsico 4alco Sosa Carbonato potasio Carbonato clcico Mosfato clcico Carbonato magnsico Gagnesia Ocido silicio activado Silicato de magnesio activados P%ido de aluminio activada Carbn animal activado ! magnesia activada Disolventes por orden de menor a mayor poder eluyente 9e%ano, teres de petrleo 9eptano Ciclohe%ano 4etracloruro de carbono 5enceno 4olueno Cloroformo (ter dietlico 'cetato de etilo ,iridina 'cetona ,ropanol (tanol Getanol 'gua Gezcla de cidos, bases con agua, alcoholes o piridina 'unque esta relacin es mu! condiciones. @irtualmente puede emplearse cualquier lquido como disolvente en la cromatografa de adsorcin, pudiendo combinarse mezclas de dos, tres e incluso cuatro lquidos de polaridad diferente. 2e esta manera, el n mero de disolventes disponibles es mucho ma!or que el de adsorbentes. Los adsorbentes ms usados en 4LC, en orden de importancia son la silicagel, ! la al mina. (n determinados casos tambin se emplean otros adsorbentes especiales como Hieselguhr, celulosa, carbn activado ! el polvo de poliamida #niln$. (n la prctica slo se emplean con frecuencia solamente dos adsorbentes, la slica gel ! la al mina, desarrollando la separacin empleando el disolvente apropiado o cambiando la polaridad del adsorbente por adicin de agua. ,ara conseguir la forma ms activa del adsorbente, se calienta fuertemente, eliminando todo el agua ! cualquier impureza orgnica. Los grados de menos actividad se consiguen por adicin de cantidades conocidas de agua. ' este proceso se le denomina desactivado.
til, ha! que tener cuidado, especialmente con los disolventes, !a que con
frecuencia se encuentra inversin de los resultados, entre dos disolventes determinados, en las mismas
24
25 25
'lgunos adsorbentes contienen un aglomerante el cual aumenta la adhesin del adsorbente a la placa de vidrio. Los aglomerantes ms comunes son el sulfato de calcio #!eso$ ! el almidn. Sin embargo, los productos modernos tienen me"ores propiedades adhesivas, siendo, en muchos casos, superfluo e incluso indeseable el empleo de aglomerantes.
3.#.1.- SILICAGEL: 9CIDO SILICICO:.

(s el adsorbente ms e%tensamente usado en 4LC ! probablemente el me"or material para realizar las pruebas iniciales de separacin, !a que posee una capacidad de adsorcin mu! elevada. Si los compuestos a separar son neutros ! contienen uno o dos grupos funcionales, pueden ser resueltos sobre capas de silicagel activada usando para el desarrollo de la cromatografa solventes orgnicos puros o mezclas de solventes. Si los compuestos a ser separados son bases orgnicas, el solvente de desarrollo deber contener una peque:a cantidad de hidr%ido de amonio o de dietilamina. 2el mismo modo, se deber a:adir una peque:a cantidad de cido actico a los solventes usados para el desarrollo del cromatograma cuando se desea separar mezclas de compuestos cidos. La silicagel puede usarse con todos los solventes, a n cuando e%hibe capacidad de enlazamiento por puentes de hidrgeno con algunos solutos ! solventes cuando est presente el agua. (sta capacidad de enlazamiento con"untamente con el factor de inchamiento ! por tanto la disminucin de la velocidad de flu"o, en presencia de agua, metanol ! etanol, causa algunas limitaciones a su uso general. Los compuestos mu! polares, tales como0 alcoholes, aminas o cidos carbo%licos, se adsorben fuertemente a la superficie de la silica, formando puentes de hidrgeno con los residuos de cido silicco de la forma Si&&1&&9. ,or lo tanto, se requiere de un solvente mu! polar para hacer que este tipo de compuestos se mueva a lo largo de la superficie de la silicagel. Los compuestos apolares no sern mu! atrados por la silicagel ! se movern rpidamente a n en la presencia de solventes apolares. La silicagel puede adquirirse en formas mu! diversas. Las ms comunes son la silicagel D ! la silicagel 9. La forma D, #la D significa D!psum o !eso de ,ars, es decir sulfato de calcio. Cuando este aglomerante se e%pone al contacto con el agua o la humedad, se convierte en una masa rgida de CaS1F.)9)1, el cual se enlaza al adsorbente ! a la placa de vidrio$, contiene un 8A+ de aglomerante0 (l tama:o medio de sus granos es de ? a )? micras. la silicagel 9 no contiene aglomerantes. Ngual que la forma D, posee un tama:o medio de granulacin de ? a )? micras. Las capas de silicagel 9 poseen una buena estabilidad. Los tiempos de recorrido, en comparacin con los de la silicagel D son algo superiores. 4ambin pueden obtenerse silicagel 9 ! silicagel D, con indicadores de fluorescencia #silicagel DM)?F ! silicagel 9M)?F$. La materia fluorescente inorgnica #un silicato de zinc activado con manganeso$, hace innecesario en muchos casos, tener que colorear las sustancias. Se observa el cromatograma en la luz de una lmpara 3@ de onda corta. Las sustancias que absorben la luz 3@ aparecen como manchas de absorcin oscuras sobre un fondo fluorescente.
25
26 26
3.#.2.- AL;MINA:
9asta ahora el %ido de aluminio #al mina$, se ha utilizado con menor frecuencia en la cromatografa de capa fina que la silica gel. Las m ltiples posibilidades de aplicacin de la al mina inclu!en por e"emplo la separacin de terpenos, alcaloides, esteroides, combinaciones alicclicas, alifticas ! aromticas. La al mina tiene reaccin alcalina, por lo tanto se usa frecuentemente para la separacin de compuestos con caractersticas bsicas en preferencia a la silica gel. 2ebido a su naturaleza bsica, no se requiere a:adir cantidad alguna de base al solvente de desarrollo. La cromatografa de capa fina sobre al mina tambin se usa como una herramienta complementaria para la cromatografa de columna, tcnica en la cual la al mina se emplea ms e%tensamente que la silica gel. La al mina presenta sitios de adsorcin de estructura qumica variada del tipo0 'l Q, 'l & 19, 'l & 1&, 'l & 19Q ! dependiendo de su preparacin iones sodio o hidronio. La al mina puede obtenerse en tres formas0 cida, bsica ! neutra. La al mina cida es una al mina lavada con cido, la cual produce una suspensin en el agua con un p9 de apro%imadamente F. (sta al mina es adecuada para la separacin de compuestos con propiedades cidas tales como aminocidos ! cidos carbo%licos. La al mina neutra #p9 apro%imadamente B$ se puede usar para la separacin de cetoesteroides, glicsidos, cetales. lactonas, algunos steres ! para la deshidratacin de solventes. La al mina
26
27 27
bsica #p9 apro%imadamente 8*$ es adecuada para la separacin de compuestos con caractersticas bsicas como las aminas. (ste tipo de al mina, posee el ms amplio espectro de aplicacin. Los compuestos altamente polares se adsorben fuertemente sobre este material, mientras que los compuestos no&polares #e%cepcin hecha con los hidrocarburos insaturados$ se enlazan dbilmente. La acetona, no debe usarse como solvente de elucin con al mina bsica de alto grado de actividad, !a que puede condensar por una reaccin de condensacin aldlica. (%isten varios tipos de al mina dependiendo de su grado de actividad, la cual se mide en la escala de 5rocHman, de acuerdo al contenido de agua. Los grados de actividad son los siguientes0 grado de act2?2dad N NN NNN N@ @ #eso de agua (A en #eso ) 1 A > 8* 8? ,ara la al mina, el grado de ma!or actividad se define como actividad N de 5rocHman. (l contenido de agua posee un significado decisivo, !a que las molculas de agua fcilmente adsorbibles bloquean los puntos activos de la superficie. La cromatografa de los cidos ! bases se desarrolla en forma diferente. 2e los adsorbentes que ms se emplean en cromatografa de capa fina, la silica gel es relativamente cida ! la al mina es relativamente bsica. Si se intentara cromatografiar solutos con propiedades cidas sobre al mina, estos se unirn fuertemente al adsorbente mediante fuerzas inicas. 2ebido a este hecho, se movern con mucha dificultad a lo largo de la capa de adsorbente, por lo tanto, su separacin ser mu! difcil.
Ngual situacin ocurrir con solutos bsicos sobre silica gel. (s as como, las bases debern ser cromatografiadas sobre al mina, donde podrn ser adsorbidas en casi la misma e%tensin que los alcoholes. Los cidos ! fenoles, debern ser separados sobre silica gel, donde podrn ser adsorbidos en una e%tensin un poco ma!or que los alcoholes.
3.#.3.- <IESELGU"R = CELULOSA:
27
28 28
(l kieselgur adsorbe ms dbilmente que la silica gel ! la al mina. ,or eso es especialmente apropiado para separaciones de combinaciones polares #en particular para cromatografa de reparto$. (stos dos adsorbentes se usan como soportes para pelculas lquidas en la cromatografa de particin. (ste tipo de cromatografa se usa siempre para la separacin de molculas mu! polares como los amino& cidos, los carbohidratos ! algunos otros compuestos hidroflicos naturales ! frecuentemente para la separacin de ismeros estrechamente relacionados. Se debe tener cuidado de asegurar que las capas contengan un lquido como fase estacionaria, generalmente agua. (sto es especialmente el caso, cuando las capas se preparan por el mtodo de inmersin. (l sistema de solventes usado con estos adsorbentes contiene generalmente varios constitu!entes, uno de los cuales es la fase estacionaria lquida, por e"emplo, agua.
3.$.
CONCENTRACIN DE LA MUESTRA A APLICAR.
La cantidad de muestra en la cromatografa de adsorcin es mu! importante, puesto que el poder adsorbente de la superficie disminu!e marcadamente con el incremento de la cantidad de muestras, !a que se ocupan primero los centros ms activos. (l resultado es la aparicin de 7colas7 en direccin al origen. Los me"ores resultados se consiguen al aumentar tanto como se pueda la relacin adsorbenteJmuestra. Lo normal es que sea de 8*** a 8, para obtener resultados satisfactorios. (n todo caso, las cantidades que se pueden cromatografiar sin formacin de cola, son distintas. 2ependen del nivel de adsorcin total, es decir de la clase de adsorbente ! de su capacidad, que en general va paralela con la actividad de adsorcin. ,ara un espesor de capa de )?* , las cantidades de sustancias que se pueden cromatografiar en cada capa de silicagel ascienden a unos miligramos, sobre las capas de %ido de aluminio menos activadas, la dcima
parte, mientras que sobre capas de Iieselgur inactivas, se pueden cromatografiar solamente )? hasta ?* g de mezclas de sustancias.
3.7.-
ETAPAS PARA REALIZAR UNA CROMATOGRAFA DE CAPA FINA
3.7.1.- PREPARACIN DE LA PAPILLA DE ADSORBENTE.

Sobre las placas se esparce en forma homognea una papilla de adsorbente dispersado en un solvente adecuado. Si el adsorbente no contiene aglomerante, las papillas de adsorbente pueden conservarse en frascos cerrados, casi indefinidamente. =ormalmente, las papillas se hacen con agua que, si es necesario, puede contener cidos, bases, tampones o reactivos acomple"antes. (l ma!or problema en esta tcnica es conseguir una consistencia correcta. Si la papilla es demasiado diluida correr rpidamente, dando lugar a capas e%cesivamente finas. ,or el contrario, si es mu! espesa se e%tiende mu! difcilmente, siendo fcil obtener lneas o grumos a lo largo de las placas. La papilla con agua debe usarse inmediatamente despus de su preparacin, de lo contrario comenzar a formar
28
29 29
grumos. (sta no debe emplearse si la misma ha estado sin uso despus de un periodo de tiempo. Las placas preparadas con una papilla acuosa deben secarse en una estufa antes de su uso. ' n cuando, se pueden usar un gran n mero de solventes, para preparar la papilla, el cloruro de metileno ! el cloroformo son probablemente los ms convenientes. ,oseen dos venta"as, ambos tienen ba"os puntos de ebullicin ! la habilidad para evitar que el adsorbente forme grumos. Los ba"os puntos de ebullicin significa que no es necesario secar las placas revestidas de adsorbente en una estufa. 'dems, las placas preparadas con estos solventes son estables por varios das. 4ienen la desventa"a, que la capa de adsorbente formada sobre el vidrio es frgil ! por tanto se debe tratar cuidadosamente. ,or esta razn, algunas personas prefieren a:adir una peque:a cantidad de metanol para hacer posible que el aglomerante se fi"e ms firmemente. (l metanol solvata el sulfato de calcio tanto como el agua. La papilla se prepara convenientemente en un recipiente de tama:o mediano con tapa hermtica. Se requieren de A ml de diclorometano por cada gramo de silica gel. ,ara obtener una papilla sin grumos, se deber a:adir la silica gel al solvente, mientras la mezcla esta siendo agitada. ':adir solvente al adsorbente usualmente causa la formacin de grumos en la mezcla. Cuando la adicin del solvente es completa, se coloca la tapa del recipiente ! se cierra hermticamente, se agita vigorosa ! para asegurar un mezclado completo.
3.7.2- PREPARACIN DE LAS PLACAS.

Las placas para la cromatografa de capa fina se pueden adquirir comercialmente revestidas de capas mu! uniformes de silica gel o al mina sobre lminas de plstico. (stas placas pueden obtenerse con o sin un colorante fluorescente impregnando la superficie del adsorbente. Sin embargo, generalmente se usan placas de vidrio, de tama:o variable seg n las necesidades de la aplicacin particular. Las dimensiones ms comunes
son0 B,? % ),? cm #portaob"eto$, )* % ? cm, )* % 8* cm, )* % )* cm #para cromatografa bidimensional$, 8** % )* cm #para cromatografa preparativa$. Las placas deben lavarse con "abn ! agua, lavadas nuevamente con agua ! luego con metanol acuoso al ?*+. Seguidamente, se permite que las placas se sequen completamente sobre toallas de papel. La manipulacin de las placas debe hacerse por los e%tremos, debido a que las huellas digitales sobre la superficie de las placas hacen dificultoso que el absorbente pueda adherirse al vidrio. ,ara la preparacin de placas de capa fina sobre lminas de vidrio en el laboratorio se usan frecuentemente dos mtodos0 #i$ #ii$ por revestimiento por inmersin.
3.7.2.1.-
REVESTIMIENTO.
29
30 30
(n este mtodo, placas de vidrio del mismo espesor se disponen en hilera sobre un soporte especial, e%tendiendo la papilla de adsorbente con un e%tendedor de capa fina. Si las placas de vidrio poseen distinto espesor se usa un aparato con un dispositivo que permite colocar las placas de tal manera que todas ellas tengan la superficie superior en un mismo plano, para asegurar que cada placa recibe el mismo espesor de adsorbente., al deslizar el e%tendedor con el adsorbente tal como se indica en las figuras0
(l nivelador automtico de placas tiene una manivela frontal, la cual, con un giro, hace que suban las placas ! queden niveladas por la parte superior, ofreciendo una superficie total en un mismo plano, aunque el grosor de las placas sea diferente. Las placas se aplican por medio del e%tendedor, el cual cuenta con una serie de calibraciones para conseguir capas de *,)? / *,?* / *,B? / ! 8 mm de espesor. 9abiendo preparado las placas, el paso siguiente es el secado, lo que se consigue calentndolas en una estufa a una temperatura de 8** & 8)? CC durante un par de horas. 2e esta forma se activan, lo que las hace adecuadas para la cromatografa de adsorcin.
3.7.2.2.-
INMERSIN.
(ste es el mtodo ms ampliamente usado para preparar placas revestidas de adsorbente, tipo portaob"etos, con fines didcticos en el laboratorio.
30
31 31
Consiste en sumergir un par de portaob"etos de vidrio de similares dimensiones adheridos uno contra el otro ! su"etados por un e%tremo con los dedos ndice ! pulgar, dentro del recipiente que contiene la papilla a una velocidad constante hasta que apro%imadamente *,)? cm desde el borde superior de las placas permanezca sin revestimiento de adsorbente. ' continuacin, se e%traen las placas, lentamente a una velocidad constante0 La operacin puede visualizarse en la figura 0
La operacin total del procedimiento oscila entre A ! ? segundos. Se requiere de cierta prctica para a"ustar el tiempo correcto. 2espus de e%tradas. se permite escurrir la suspensin sobrante en el otro e%tremo de la placa, apo!ando el borde inferior de las placas en la parte superior del envase que contiene la papilla. Las placas se separan, limpiando con un dedo el e%ceso de absorbente que ha!a quedado en los bordes ! en la superficie no cubierta de las placas, para finalmente colocarlas sobre una toalla de papel para completar el proceso de secado.
3.7.3.- APLICACIN DE LAS MUESTRAS SOBRE LAS PLACAS.

Los mtodos son prcticamente los mismos que para la cromatografa de papel, teniendo en cuenta que la ma!or delicadeza de las capas finas e%ige ma!or cuidado al aplicar la muestra. Las muestras se aplican con un capilar sobre la lnea base, de"ando evaporar el disolvente.#ver figura$. Los capilares que se usan son una e%tensin mu! fina del tipo empleado en la determinacin de puntos de fusin.#ver figura$ La evaporacin del disolvente en la capa fina es tan rpida que no es necesario el empleo de un secador de pelo u otro aparato similar. (l dimetro de las manchas en el origen debe ser lo ms peque:o posible. Las soluciones no mu! concentradas se pueden aplicar varias veces de"ando evaporar el disolvente entre cada aplicacin. (l volumen de la muestra suele ser de 8 microlitro. =o se debe olvidar marcar la placa de forma
31
32 32
adecuada, antes de comenzar la cromatografa. Lo ms sencillo es enumerar los puntos de origen de izquierda a derecha, anotando las sustancias que se aplican en el cuaderno de laboratorio.
3.7. .-ELECCIN DEL DISOLVENTE.

,ara obtener resultados reproducibles, en la cromatografa se deben usar solamente disolventes mu! puros. (n general, se procura emplear disolventes #elu!entes$ sencillos, de uno o dos componentes. (n caso de disolventes de varios componentes, ha! que evitar que los ms voltiles se evaporen si se emplean recipientes que no cierran hermticamente. Cuando se trata de mezclas de sustancias desconocidas, lo me"or es emplear en primer lugar como disolvente benceno o cloroformo #con contenido de alcohol$. Si las sustancias se quedan durante la cromatografa cerca del origen, entonces o bien se elige un medio disolvente de ma!or polaridad o se agrega al disolvente empleado otro miscible con l de ma!or polaridad. Si las sustancias se desplazan demasiado aprisa #cerca del frente$,se emplea entonces un disolvente, con menor polaridad. (n todo caso, la eleccin del disolvente depender de la naturaleza de los compuestos que se van a separar ! del material adsorbente sobre el cual se desarrollar la separacin. 3na regla general para la eleccin del disolvente es establecer la comparacin de polaridad del mismo con respecto a las polaridades de las sustancias a separar. 's, para sustancias solubles en agua se elegirn capas de celulosa o silicagel, emplendose un disolvente polar. ,ara sustancias menos polares se elegirn capas de al mina o silicagel activadas, emplendose un disolvente no acuoso apropiado. 3na tcnica sencilla para la eleccin del disolvente a emplear en una determinada separacin consiste en colocar una serie de manchas de la muestra a intervalos en un placa. Los disolventes se prueban aplicndolos en los centros de las manchas mediante un capilar mu! fino, lo que permite desarrollar las manchas radialmente #ver figura$.
32
33 33
(n el caso representado el disolvente ) resulta ser el ms apropiado, debido a que resulta en la separacin del ma!or n mero de componentes de la mezcla en estudio.
3.7.#.- DESARROLLO DE LAS PLACAS.

(l desarrollo se lleva a cabo por el mtodo ascendente en cubetas especiales para cromatografa o en recipientes adecuados tales como frascos peque:os con tapa de rosca, vasos de precipitados cubiertos con vidrio de relo", etc, del tipo que se muestran en las figuras ane%as.
(n el interior de la cmara de desarrollo debe colocarse un papel de filtro, empapado de disolvente, que cubra las paredes interiores de la misma, para conseguir que la atmsfera est saturada de vapor del disolvente.
33
34 34
(l fondo de la cubeta se cubre de disolvente hasta una altura de *,? a 8 cm !, despus de un periodo de tiempo apropiado, en el que se consigue el equilibrio, se introduce la placa. 2urante el desarrollo no puede moverse la cubeta. ,or lo general, cuando se desarrolla una placa se de"a que ascienda el disolvente unos 8* cm por encima del origen ! se saca la placa. (l frente del disolvente se marca cuidadosamente con un lpiz puntiagudo ! se de"a evaporar el mismo, operacin que dura unos pocos minutos. Si es necesario se calienta la placa, estando lista para el revelado.
3.7.$.- REVELADO DE LAS PLACAS.

Los procedimientos empleados para revelar las placas son anlogos a los que se usan en la cromatografa sobre papel. Sin embargo, e%isten algunas diferencias interesantes. (n principio, el mtodo de ba:ado no es recomendable, !a que las placas se estropean fcilmente con este mtodo.
34
35 35
3na de las venta"as de la cromatografa en capa fina sobre la de papel es la posibilidad de revelado con agentes corrosivos tal como los cidos concentrados ! compuestos fuertemente o%idantes, a alta temperatura, debido a la naturaleza inorgnica de la capa. 1tro reactivo mu! empleado son los vapores de !odo. (n un recipiente con tapa hermtica que contiene en el fondo unos pocos cristalitos de !odo, se introduce el cromatograma ! se de"a unos minutos. (l !odo tiende a concentrarse en los sitios donde estn los compuestos, por lo que aparece una mancha marrn oscuro, sobre un fondo amarillo plido. (n tanto que el !odo no reaccione con los compuestos revelados, el mtodo es e%traordinariamente bueno como revelador no destructivo. 1tros mtodos que no afectan a los productos en el revelado son la fluorescencia ! la radiactividad0 Guchas placas llevan impregnadas sustancias fluorescentes como aditivos para el revelado de los compuestos, localizndose los mismos por la aparicin de manchas no fluorescentes. 'dems, muchas veces los compuestos a separar absorben en el ultravioleta, siendo este el mtodo ms sencillo para localizarlos. Cuando se emplea una lmpara 3@, cualquier material orgnico que contenga un cromforo, aparecer sobre la placa como una mancha oscura sobre un fondo luminoso. 4eniendo en cuenta que el material orgnico se deposita sobre la superficie del adsorbente, si se tiene un cromforo, actuar como una sombra o cortina que evitar que la radiacin 3@ alcance la superficie del adsorbente. La posicin de la mancha debe delinearse como se mencion antes. Si se desea emplear el revelado 3@, se coloca la placa seca ba"o una lmpara 3@, preferiblemente en un recinto oscurecido. (%isten diversas lmparas de luz 3@, pero las dos ms comunes son una que puede manipularse con la mano ! colocarse directamente sobre la placa ! otra con un recinto cerrado por todos los lados, provista de un trapo oscuro en la parte frontal ! una mirilla en la parte superior. Si se emplea una lmpara de mano, se mantiene sobre la placa a una altura de 8* cm apro%imadamente, tal como se muestra en la figura. Grese slo la placa, evite siempre mirar directamente a la lmpara.
35
36 36
3.7.7.- CONSERVACIN DEL CROMATOGRAMA.

La conservacin de los cromatogramas en capa fina es difcil ! generalmente indeseable, puesto que las placas se utilizan muchas veces. Nnteresa, por tanto, encontrar un medio para conservar los cromatogramas obtenidos. (l espesor del vidrio ! la naturaleza tan delicada de la capa son obstculo para guardar los cromatogramas. La posicin de las manchas despus del revelado puede fotografiarse o dibu"arse. 3n mtodo que puede usarse convenientemente, consiste en adherir con sumo cuidado sobre la superficie del adsorbente, una cinta plstica transparente de una anchura un poco ma!or que el de la placa !, tratar que el cromatograma se pegue en la cinta de manera que conservarlo por largo tiempo.
3.>.-
APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFA DE CAPA FINA EN QUMICA ORGNICA.
La tcnica de cromatografa en capa fina tiene muchos usos importantes en qumica orgnica. ,uede usarse en las siguientes aplicaciones.
3.>.1.- (stablecer si dos compuestos determinados son idnticos. 3.>.2.- 2eterminar el n mero de componentes en una mezcla. 3.>.3.- 2eterminar el solvente apropiado para una separacin en columna cromatogrfica. 3.>. .- Gonitorear la separacin de una columna cromatogrfica.
36
37 37
3.>.#.- Comprobar la efectividad de separaciones realizadas en columna, o mediante tcnicas de e%traccin o

cristalizacin.
3.>.$.- ;egistrar el progreso de una reaccin.

(n todas estas aplicaciones, la cromatografa de capa fina tiene la venta"a sobre otras tcnicas, que en esta, se usan peque:as cantidades de material para realizar los anlisis. Con muchos de los mtodos de visualizacin, se pueden detectar cantidades tan peque:as como 8* &B gramos. ,or otra parte, pueden utilizarse cantidades relativamente grandes como 8 miligramo. (l uso de la cromatografa de capa fina, puede servir para establecer la identidad qumica de dos compuestos que se sospechan son idnticos. Simplemente se aplican ambos compuestos en una misma placa ! se desarrolla en un solvente adecuado. Si ambos compuestos recorren la misma distancia, es decir tienen el mismo valor de ;f, estos sern probablemente idnticos. Si en cambio, la posicin de ambas manchas no es la misma, se puede asegurar en forma definitiva ! conclu!ente que los dos compuestos no son idnticos. (s importante, aplicar ambos compuestos en la misma placa. (sta precaucin es especialmente importante cuando se usan placas preparadas por inmersin, puesto que estos varan de uno a otro. 2os placas preparadas de esta forma no tendrn e%actamente el mismo espesor de adsorbente. La cromatografa en capa fina, tambin encuentra aplicacin para establecer si un compuesto es una sustancia pura o en su defecto se trata de una mezcla. 3na sustancia pura produce una sola mancha sin importar el
solvente que se use para desarrollar la placa. ,or otra parte, el n mero de componentes de una mezcla puede establecerse probando varios solventes para desarrollar la mezcla. Sin embargo, los resultados deben tomarse con cuidado, !a que a menudo resulta difcil, conseguir un solvente adecuado que pueda separar una mezcla de compuestos con propiedades mu! similares tales como los ismeros. La falta de separacin no es prueba absoluta de que un aplicacin particular de una muestra sea una sustancia pura. ,odemos emplear la cromatografa de capa fina para determinar el me"or solvente que podr ser usado en la resolucin de una mezcla que ha de ser separada utilizando la tcnica de cromatografa en columna. (l proceso consiste en preparar varias placas, impregnadas con el mismo adsorbente que ser usado en la separacin por cromatografa en columna, aplicar la solucin de la mezcla en cada una de las placas ! analizar los resultados que se obtienen al desarrollar la cromatografa de capa fina en solventes de diferente polaridad. (l solvente que proporciona una me"or resolucin en capa fina, mu! probablemente funcionar me"or en columna. (stos e%perimentos en peque:a escala tienen la virtud de ser rpidos, usar peque:as cantidades de material ! ahorrar tiempo. (n forma similar, la tcnica de 4LC, puede usarse para monitorear el progreso de una separacin por cromatografa de columna. 3na situacin hipottica se analiza en los diagramas de la figura que se muestra a continuacin.
37
38 38
(l anlisis preliminar por cromatografa de capa fina revela que un solvente determinado, separa la mezcla en cuatro componentes #'&2$. ,or lo tanto, se usa este solvente para eluir la columna. (ste proceso conduce a la obtencin de 88 fracciones de 8? ml cada una.
(l estudio detallado de las distintas fracciones por 4LC muestra que las fracciones 8, ), ! A, contienen el componente ', las fracciones F, ?, >, ! B, el componente 5, las fracciones L ! E, el componente C ! las fracciones 8* ! 88, el componente 2. Se observa que las fracciones A, F, B ! E. se obtienen con una peque:a contaminacin de otro componente. La fraccin A est contaminada con algo de 5. la F con ', la B con C ! la E con 2. 1tro e"emplo de la aplicacin de la tcnica de 4LC, se encuentra en el anlisis de una mezcla producto de una reaccin. (l anlisis del producto de reaccin por 4LC, produ"o dos manchas, ' ! 5. 2espus de la cristalizacin del producto, se procedi a analizar los cristales obtenidos por 4LC, encontrndose que los cristales eran puros e idnticos al componente ', mientras que las aguas madre contenan una mezcla de ' !
38
39 39
5. (stos resultados conducen a pensar que el proceso de purificacin resulta satisfactorio para el componente '. Minalmente, es posible usar la tcnica de 4LC para monitorear el progreso de una reaccin. ' intervalos de tiempo especficos, durante el transcurso de la reaccin, se toman muestras de la mezcla de reaccin ! se someten a anlisis por 4LC. 3n e"emplo se detalla en las figuras esquematizadas a continuacin0
(n este caso, se desea convertir el reactante ' en el producto 5. 'l comienzo de la reaccin #* hr$, se preparo una placa en la cual se aplicaron los compuestos puros ' ! 5, adems de la mezcla de reaccin. 'nlisis similares se condu"eron a *,?/ 8/ )/ ! A horas despus del inicio de la reaccin. Las placas muestran que la reaccin se completa en ) horas0 Cuando el tiempo de reaccin se prolonga por ms de ) horas, comienza a aparecer un producto colateral nuevo C. ,or lo tanto, el tiempo ptimo de reaccin es de ) horas.
BIBLIOGRAFIA '- Introducc2@n a $a Cromatogra !a, 2avid 'bbott ! ;. S. 'ndreRs, 4ercera (dicin., 'lhambra S.'.., Gadrid., 8EBA. 4- Pa#er, T;2n La=er C;romatogra#;= and E$ectro#;ores2s, A Teac;2ng Le?e$ Manua$-, Smith Nvor and Meinberg, S. D.., Shandon., London., 8E>?
39
40 40
5- Ex#er2menta$ Met;ods 2n Organ2c C;em2str=-, Goore, S. '.., and 2alr!mple, 2. L., Second (dition., <. 5. Saunders Co., ,hiladelphia., 8EB>. 6- Introduct2on to Organ2c La"orator= Tec;n2>ues- A Contem#orar= A##roac;, Second
Ed2t2on-, Pa?2a, Lam#man = Br23 ?. Curso ,rctico de Tumica 1rgnica, 4ercera (dicin, 5reRster, @anderRerf, Gc(Ren >. Qu!m2ca Org9n2ca, Fundamentos te@r2cos C #r9ct2cos #ara e$ La"orator2o, L!dia DalagovsH! Iurman., Tuinta (dicin, Ganuales (udeba, 5uenos 'ires, 8EE?. B. Qu!m2ca Org9n2ca Ex#er2menta$. ,rimera (dicin (spa:ola., 9. 2. 2urst ! D. <. DoHel, (ditorial ;evert S.'., 5arcelona, 8EL?L. A Text BooD o Pract2ca$ Organ2c C;em2str=, 4hird (dition., '. N. @ogel., <ile!., =eR UorH., 8EB). E. Ex#er2mentos de Qu!m2ca Org9n2ca- L. M. Mieser., (ditorial ;evert S.'., Gadrid., 8E>B. 8*. T;e Organ2c C;em La" Sur?2?a$ Manua$, A StudentEs Gu2de to Tec;n2>ues-, Sames <. VubricH., 4hird (dition., Sohn <ile! and Sons., =eR UorH., 8EE).
CROMATOGRAF<A SOBRE PAPEL F CAPA FI8APARTE EGPERIME8TAL

8OTA0
,ara esta prctica el estudiante debe llevar al laboratorio el siguiente material0 8 lpiz
mongol =C ), 8 ti"era/ ) escuadras grandes graduadas/ ! una regla. Garcador negro ! de colores.
'-. '-'. EGPERIME8TOS 0E CROMATOGRAF<A SOBRE PAPELCROMATOGRAF<A ASCE80E8TE, &8A TIRA 0E PAPEL, 0E TI8TA 0E MARCA0OR/
40
41 41
a)E$ #a#e$/ manipule el papel con mucho cuidado. 2etermine la orientacin de la fibra del papel #se:alado en
la ca"a que lo contiene$. Corte una tira de papel de )A % ),? cm #el lado debe ser paralelo a la direccin de orientacin de la fibra$ - 4race a 8 cm de uno de los e%tremos una ra!a paralela al borde, #3S( LO,NV 2( D;'MN41$.
") La muestra a a#$2car/ es tinta de marcador negro. Se aplicar directamente con el marcador en forma de
ra!a. Con el marcador trace una lnea de 8 cm de longitud sobre la ra!a de grafito, a igual distancia de los lados. 2e"e secar la tinta.
c) La c9mara de desarro$$o/ #cubeta cromatogrfica$0 la constitu!e un cilindro graduado de )?* ml con un

tapn monohoradado que a"uste bien.
d) E$ d2so$?ente/ es la fase orgnica de una mezcla de n&butanol, cido actico ! agua, en la proporcin F080?
#en volumen$ recin preparada.
e) Proced2m2ento/ con dos clips, suspenda la tira de papel del tapn. '"uste el tapn #con la tira de papel
suspendida$ en la boca del cilindro graduado. Suba o ba"e uno de los clips hasta que el e%tremo de la tira de papel quede lo ms cerca posible del fondo del cilindro #8 cm$. ;etire el tapn con la tira de papel. Coloque con una pipeta el disolvente en el cilindro procurando no mo"ar las paredes, ! en cantidad suficiente de manera que toque ligeramente la tira de papel #la cantidad no debe ser ms de 8? ml ! no debe tocar la muestra$. Nntroduzca la tira de papel ! a"uste bien el tapn. 'seg rese que el nivel del disolvente no est por encima del punto de, aplicacin de la muestra. La tira de papel debe quedar centrada/ evite que se pegue a las paredes del cilindro, porque de lo contrario el disolvente ascender en forma irregular. 'l cabo de ) ! W horas saque el cromatograma. Garque inmediatamente el frente del disolvente. Seque el cromatograma.
) An9$2s2s de$ cromatograma/ marque con un lpiz el borde de cada mancha que observe a simple vista.
Nlumine el cromatograma con luz ultravioleta. (n caso de que aparezcan nuevas manchas, deline stas anotando el color que presentan.
'-4-.
;epita la cromatografa anterior, usando como disolvente una mezcla de n&butanol, etanol ! amonaco
)=, en la proporcin )080) #en volumen$. 'nalice el cromatograma ! compare los resultados con los obtenidos en el cromatograma 8 #decir cual ha sido el me"or disolvente, en base a las manchas ! su separacin$.
'-5-. a-.
CROMATOGRAF<A ASCE80E8TE 0E AMI8OHCI0OS E$ #a#e$/ manipule el papel con mucho cuidado. (vite todo contacto directo de los dedos con el papel.
2etermine la orientacin de la fibra ! corte una pieza rectangular #)) % 8) cm$ de papel. La direccin de la fibra debe ser paralela al lado de 8) cm. 4race a 8 cm de cada borde del lado ms grande una ra!a paralela. #3S(
41
42 42
LO,NV 2( D;'MN41$. Sobre una de las ra!as marque trece puntos, con 8,? cm de separacin entre cada uno de ellos/ el primero ! el ltimo deben quedar a ) cm del borde0
"-.
Las muestras a a#$2car/ son soluciones de F aminocidos # A mgJml$ en etanol&agua #808$ !
e%tractos preparados de "ugo de limn, naran"a ! tomate. Con capilares finos #o micropipetas$ aplique las siguientes muestras, usando un capilar para cada solucin0
Punto 8I '0 dos gotas de solucin de lisina #LUS$. Punto 8I 40 dos gotas de solucin de cido aspartico #'S,$. Punto 8I 5/ dos gotas de solucin de metionina #G(4$. Punto 8I 60 dos gotas de solucin de leucina #L(3$. Punto 8I J/ dos gotas de cada una de las soluciones de los cuatro aminocidos . Punto 8I K/ dos gotas de e%tracto de "ugo de limn. Punto 8I L/ cuatro gotas de e%tracto de "ugo de limn. Punto 8I M: dos gotas de e%tracto de "ugo de naran"a. Punto 8I N/ cuatro gotas de e%tracto de "ugo de naran"a. Punto 8I 'O0 dos gotas de e%tracto de "ugo de tomate. Punto 8I ''0 cuatro gotas de e%tracto de "ugo de tomate. Punto 8I '40 tres gotas de solucin de cada uno de los cuatro aminocidos. Punto 8I '50 tres gotas de solucin de cido asprtico.
Las manchas aplicadas no deben tener un dimetro ma!or de ) cm. 2e"e secar cada gota antes de aplicar la siguiente. 'ntes de introducir el papel en el disolvente las manchas deben estar secas . a- La c9mara de desarro$$o/ La constitu!e un vaso de precipitados de L**&8*** ml, el cual se cubre con un trozo de papel aluminio.
"- E$ d2so$?ente/ es el n&5u19, 'c19, 9)1 #F080?$ usado en la primera cromatografa. c- Proced2m2ento/ (n el vaso de precipitados coloque 8* ml del disolvente ! tpelo hermticamente. 2oble la pieza de papel hasta obtener un cilindro. 3na los e%tremos, sin que estos se toquen, mediante tres grapas #me"or es hacerlo con agu"a e hilo blanco$. Nntroduzca el cilindro de papel en la cmara de desarrollo/ al cabo de dos horas apro%imadamente, el frente del disolvente debe alcanzar 88 cm. Saque el cromatograma e inmediatamente marque con un lpiz el frente del disolvente. Seque el cromatograma. ;ocelo con la solucin reveladora #ninhidrina al *,?+ en n&butanol$, ! llvelo a la estufa #8)* CC$ durante 8* minutos. Garque con un lpiz el borde de cada mancha.
42
43 43
d- An9$2s2s de$ cromatograma/ Calcule el ;f de cada mancha. 4abule los resultados, indicando el color ! el ;f de cada mancha, asi como el disolvente usado ! la temperatura. ,or comparacin indique cuantos aminocidos estn presentes en los e%tractos de los "ugos e identifique algunos de ellos.
'-6-.
CROMATOGRAF<A ASCE80E8TE 0E PARIAS TI8TAS 0E MARCA0ORES/
;epita la cromatografa A. 3se el mismo disolvente. Las muestras a aplicar son tintas de diferentes colores ! marcas. La aplicacin se hace directamente con el marcador. 'nalice el cromatograma. (stablezca si en tintas diferentes de una misma marca ha! colorantes iguales. (stablezca si tintas de marcas diferentes tienen los mismos colorantes.
JJ-'-.
EGPERIME8TOS 0E C ROMATOGRAF<A E8 CAPA FI8APREPARACIQ8 0E LAS PLACAS-
Lave bien con agua ! "abn 8) placas de vidrio#portaob"etos$, de manera de eliminar cualquier residuo de grasa adherida en ellas, esc rralas ! squelas completamente sobre papel adsorbente. (vite que a las placas se le pegue residuos del papel. 'dhiera dos placas ! su"etndolas por uno de sus e%tremos introd zcalas lentamente en una suspensin de >* gramos de gel de slice tipo D en 8?* ml de una mezcla de cloroformo & metanol #)08$. Saque las placas lentamente con velocidad contnua/ escurra la suspensin sobrante en el e%tremo de la placa apo!ando el borde inferior de las placas en la pared del envase que contiene la suspensin. Con un movimiento de los dedos, despegue las placas. ,ermita que el solvente se evapore ! proceda a limpiar con la punta del dedo el e%ceso de adsorbente que se ha!a permanecido en los bordes ! en la superficie no cubierta de la placa. ;epita el proceso con las otras 8* placas restantes. 'ctive 8* de las placas en una estufa a 8)*CC durante 8 hora.
8OTA/ LAS PLACAS SO8 M&F FRHGILES- MA87RELAS CO8 C&I0A0O-
J-4-.
PREPARACIQ8 0E LAS CHMARAS 0E 0ESARROLLO-
Lave bien ! seque completamente los envase que servirn como cmaras de desarrollo. Coloque en su interior una banda de papel de filtro que alcance para cubrir las )JA partes de las paredes internas de los envases. (n cada uno coloque un volumen de solvente a usar tal que alcance una altura de apro%imadamente A mm sobre el fondo del envase # ? ml$. 4ape el recipiente con un circulo de papel aluminio o con un vidrio de relo" ! de"e en reposo para permitir que el papel de filtro interno se impregne completamente con el solvente. 'gregue ms solvente hasta alcanzar el nivel inicial.
43
44 44
J-5-.
PREPARACIQ8 0E &8A CHMARA 0E REPELA0O CO8 PAPORES 0E FO0O-
3se un recipiente que posea tapa enroscable. Lvelo bien ! squelo completamente. Coloque en su interior unos cristales de !odo. 4ape el envase ! d"elo en reposo para que la atmsfera se sature con los vapores del !odo que se sublima.
J-6-.
APLICACIQ8 0E LAS M&ESTRAS-
2ebe utilizar un capilar fino para cada una de las soluciones a ser utilizadas. Llene el capilar con la solucin a cromatografiar, aplique una peque:a cantidad de la solucin, procurando que la mancha obtenida no tenga un dimetro superior de )mm. (vite romper la capa de adsorbente con la punta del capilar. la aplicacin debe hacerse a > mm apro%imadamente del e%tremo de la placa. cuando ha!a aplicado todas las muestras trace una ra!a con un lpiz de grafito de punta fina en el e%tremo opuesto de la placa a A mm apro%imadamente del borde del adsorbente. (sto se consigue raspando el absorbente con la punta del lpiz.
J-J-.
CROMATOGRAF<A 0E PARIOS A8ALG7SICOS-
Las muestras a analizar son soluciones de cuatro analgsicos en cloroformo. ,ara las primeras > e%perimentos utilice placas activadas. 'plique las muestras a intervalos de ? mm, use un capilar para cada solucin. (vite en todo momento confundirlos, de lo contrario contaminar las soluciones ! los resultados sern impredecibles.
#$aca 8I '/ #r2mer #unto/ segundo #unto/ tercer #unto/ cuarto #unto/ ) gotas de solucin de rilan ) gotas de solucin de cafenol ) gotas de solucin de coricidin ) gotas de solucin de rhinazol
2esarrolle el cromatograma usando acetato de etilo como solvente. Nnmediatamente despus de obtenido el cromatograma, localice las manchas usando una lmpara 3ltravioleta, mrquelas con un lpiz ! luego introduzca la placa en la cmara de !odo ! observe si aparecen nuevas manchas.
#$aca 8I 4'plique las mismas soluciones que us para la placa =C 8. 3se n&butanol como solvente #$aca 8I 5 'plique las mismas soluciones que us para la placa =C 8. 3se butanona como solvente
44
45 45
#$aca 8I 6'plique las mismas soluciones que us para la placa =C 8. 3se ter de petrleo como solvente #$aca 8I J'plique las mismas soluciones que us para la placa =C 8. 3se une mezcla de n&butanol, butanona ! acetato de etilo en la proporcin )0E0E como solvente #$aca 8I K'plique las siguientes muestras patrones0 #r2mer #unto/ segundo #unto: tercer #unto ) gotas de solucin de cido acetilsaliclico ) gotas de solucin de cafena ) gotas de solucin de fenacetina.
3se como solvente aquel que ha!a desarrollo el me"or cromatograma en las cinco primeras placas.
#$aca 8I L3tilice para este e%perimento una placa sin activar. 'plique las mismas soluciones que us para la placa =C 8. 3se como solvente aquel que ha!a desarrollo el me"or cromatograma en las cinco primeras placas.
An9$2s2s de $os resu$tados/ Copie el resultado de cada una de las placas en su cuaderno. (specifique los datos concernientes a saber0 adsorbente, solvente ! activacin. por comparacin de los resultados indique el orden de polaridad de los solventes usados. (n el me"or de los cromatogramas obtenido, calcule el ;f de cada mancha ! por comparacin con los ;f obtenidos para las muestras patrn, identifique el analgsico que est presente en las soluciones de rilan, rhinazol, cafenol ! coricidin. Compare los valores de ;f que se obtienen en la me"or placa activada con respecto a la placa sin activar.
45
46 46
BIBLIOGRAFIA ') Introducc2@n a $a Cromatogra !a, 2avid 'bbott ! ;. S. 'ndreRs, 4ercera (dicin., 'lhambra S.'.., Gadrid., 8EBA. 4) Pa#er, T;2n La=er C;romatogra#;= and E$ectro#;ores2s, A Teac;2ng Le?e$ Manua$-, Smith Nvor and Meinberg, S. D.., Shandon., London., 8E>? 5) Ex#er2menta$ Met;ods 2n Organ2c C;em2str=-, Goore, S. '.., and 2alr!mple, 2. L., Second (dition., <. 5. Saunders Co., ,hiladelphia., 8EB>. 6) Introduct2on to Organ2c La"orator= Tec;n2>ues- A Contem#orar= A##roac;, Second
Ed2t2on-, Pa?2a, Lam#man = Br23 J) Curso Pr9ct2co de Qu!m2ca Org9n2ca, 4ercera (dicin, 5reRster, @anderRerf, Gc(Ren >$ Qu!m2ca Org9n2ca, Fundamentos te@r2cos C #r9ct2cos #ara e$ La"orator2o, L!dia DalagovsH! Iurman., Tuinta (dicin, Ganuales (udeba, 5uenos 'ires, 8EE?. B$ Qu!m2ca Org9n2ca Ex#er2menta$. ,rimera (dicin (spa:ola., 9. 2. 2urst ! D. <. DoHel, (ditorial ;evert S.'., 5arcelona, 8EL?L$ A Text BooD o Pract2ca$ Organ2c C;em2str=, 4hird (dition., '. N. @ogel., <ile!., =eR UorH., 8EB).
E$ Ex#er2mentos de Qu!m2ca Org9n2ca- L. M. Mieser., (ditorial ;evert S.'., Gadrid., 8E>B. 8*$ T;e Organ2c C;em La" Sur?2?a$ Manua$, A StudentEs Gu2de to Tec;n2>ues-, Sames <. VubricH., 4hird (dition., Sohn <ile! and Sons., =eR UorH., 8EE).
46
47 47
88$ T;e Ident2 2cat2on o As#2r2n C Free Ba=er Products- An A$ternat2?e to t;e C$ass2ca$ TLC o Ana$ges2cs-, Sohn S. CaRle!,, Sournal of Chemical (ducation, @olume B)., =umber A., Garch 8EE?. 8)$ 4hin X La!er Chromatograph! of 'nalgesics. 'n 3pdate. Sohn <. (lder., Sournal of Chemical (ducation., @olume B)., =umber 88., =ovember 8EE?.
47

Cromatografia Papel - Capa Fina

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Cromatografia Papel - Capa Fina

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

UNIVERSIDAD DE LOS ANDES FACULTAD DE CIENCIAS DEPARTAMENTO DE QUIMICA COORDINACIN LABORATORIOS QUMICA ORGNICA LABORATORIO DE QUMICA ORGNICA I - A

Prof: Jorge Uzctegui Nava

CROMATOGRAFIA SOBRE PAPEL

CROMATOGRAFA SOBRE PAPEL.

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

2.1.1.- FLUJO DEL SOLVENTE:

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

(%isten dos fuerzas principales de este tipo a saber0 adsorcin ! particin.

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

PROCESO DE PARTICIN LIQUDO-LQUIDO.

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

ETAPAS PARA REALIZAR UNA CROMATOGRAFA SOBRE PAPEL

2.3.1. MUESTRAS PARA CROMATOGRAFA:

2.3.2. APLICACIN DE LAS MUESTRAS SOBRE EL PAPEL.

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

2.3.3. ELECCIN DEL SOLVENTE.

2.3. .- DESARROLLO DEL CROMATOGRAMA.

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

2.3.#- SECADO DEL PAPEL.

2.3.$.- LOCALIZACIN O REVELADO DE LAS SUSTANCIAS EN EL CROMATOGRAMA.

2.3.$.2.- F-.'/0),01,+2: muchos compuestos orgnicos no saturados presentan fluorescencia debido a la

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

O OH OH O Ninhidrina O Base - (CO2) O O N H2 O + O O O N - H2O

2.3.7.- IDENTIFICACIN DE LOS COMPUESTOS.

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

2.3.8.- CROMATOGRAFIA SOBRE PAPEL BIDIMENSIONAL.

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

CROMATOGRAF<A 0E CAPA FI8A

COMPARACIN CON LA CROMATOGRAFA SOBRE PAPEL:

PRINCIPIOS GENERALES DE LA CROMATOGRAFA EN CAPA FINA.

frente del solvente

componente B frente del solvente

componenteB componente A componenteA orgen mezcla frente del solvente

Incremento del tiempo de desarrollo

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

INFLUENCIA DEL DISOLVENTE.

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

interaccin soluto & adsorbente, ma!or es su ;f/ si es grande, M es peque:a, ! el ;f es grande.

INFLUENCIA DE LA ESTRUCTURA QUMICA DE LAS SUSTANCIAS A SEPARAR.

3. .2.& Si se introducen grupos funcionales en un hidrocarburo, aumenta generalmente la afinidad de

NATURALEZA DEL ADSORBENTE.

3.#.1.- SILICAGEL: 9CIDO SILICICO:.

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

3.#.3.- <IESELGU"R = CELULOSA:

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

CONCENTRACIN DE LA MUESTRA A APLICAR.

ETAPAS PARA REALIZAR UNA CROMATOGRAFA DE CAPA FINA

3.7.1.- PREPARACIN DE LA PAPILLA DE ADSORBENTE.

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

3.7.2- PREPARACIN DE LAS PLACAS.

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

3.7.3.- APLICACIN DE LAS MUESTRAS SOBRE LAS PLACAS.

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

3.7. .-ELECCIN DEL DISOLVENTE.

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

3.7.#.- DESARROLLO DE LAS PLACAS.

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina

3.7.$.- REVELADO DE LAS PLACAS.

Laboratorio de Qumica Orgnica I-A. Cromatografa sobre papel y capa fina