CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

INTRODUCCION La cromatografía de capa fina es un procedimiento que se utiliza para separar moléculas relativamente pequeñas. En la biología celular se utiliza frecuentemente para separar azúcares simples, lípidos, aminoácidos, nucleótidos, metabolitos, y ocasionalmente para separar cadenas cortas de poli péptidos y ácidos nucleicos. Al igual que otras cromatografías, consiste de una fase estacionaria y una fase móvil y el principio es el mismo: la sustancia de interés se adherirá a la fase estacionaria o se moverá con la fase móvil, viajando una distancia que es inversamente proporcional a la afinidad por la fase estacionaria. La fase estacionaria puede ser variada. Puede ser de papel, de celulosa o de un gel de silicato (vidrio molido bien fino) unido a una superficie sólida (una placa de vidrio, aluminio, plástico papel). Esta superficie sólida puede ser rígida o flexible. El tipo de fase estacionaria que se utilice en un experimento dependerá del tipo de moléculas que se quieran separar. Incluso vienen algunas placas con indicadores fluorescentes. La fase estacionaria consiste de un solvente que puede ser agua, un solvente orgánico o una mezcla de ambos. El procedimiento es sencillo: Se colocan las muestras a un centímetro del borde en uno de los extremos de la placa, se deja secar, se coloca la placa en un envase (tanque de desarrollo) que ya contiene una pequeña cantidad del solvente, se tapa y se deja correr por un rato. El solvente subirá por capilaridad e irá arrastrando las moléculas, las cuales se moverán según la afinidad que muestren por la fase estacionaria. Si la mezcla de muestras que se está analizando presenta color, se verán los distintos colores migrando a distintas velocidades. Si son incoloras hay que someter la placa a algún tratamiento con una sustancia desarrolladora (developer) para poder determinar la presencia de sustancias sobre el silicato. El tipo de desarrollador dependerá del tipo de moléculas que se analiza

OBJETIVO GENERAL  Separar los pigmentos más abundantes presentes en hojas de espinacas utilizando la cromatografía de capa fina. OBJETIVOS ESPECIFICOS     Conocer la cromatografía como técnica de separación de mezclas de sustancias. observar las diferentes características de la placa en la cromatografía. . Estudiar la incidencia del coeficiente de reparto entre la fase móvil y la fase estacionaria. sus características y los factores que en ella intervienen. Analizar la influencia del solvente en la separación cromatográfica.

para facilitar la identificación de las muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son coloridos se requerirán técnicas de revelado.MARCO TEORICO CONCEPTO DE CROMATOGRAFÍA. liquido-líquido y gases-liquido (fase vapor). t-butil-éter diclorometano acetato de etilo n-pentano. ELUYENTES MÁS COMUNES PARA CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA. La cromatografía se define como la separación de una mezcla de dos o más compuestos por distribución entre dos fases. En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un pequeño espesor constante a lo largo de la placa. denominada fase estacionaria. y. Varios tipos de cromatografía son posibles. una de las cuales es estacionaria y la otra una fase móvil. Todas las técnicas cromatográficas dependen de la distribución de los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase móvil. 10 x 20 y 5 x 2. similarmente.        éter de petróleo tolueno dietil-éter. por la placa y arrastrará los componentes a lo largo de ésta produciendo “manchas” de los componentes. por capilaridad. Todos los sólidos finamente pulverizados tienen el poder de adsorber en mayor o menor grado otras sustancias sobre su superficie. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA. Hay placas que contienen un indicador de fluorescencia. n-hexano ciclohexano        tetracloruro de carbono éter dietílico cloroformo acetona iso-propanol etanol metanol . llamada también activa. dependiendo de la naturaleza de las dos fases involucradas: sólido-liquido (capa fina. todas las sustancias pueden ser adsorbidas. Este fenómeno de adsorción selectiva es el principio fundamental de la cromatografía. Los tamaños de la placa para CCf convencional son: 20 x 20. papel o columna). que transporta las sustancias que se separan y que progresa en relación con la otra. plástico (ej: acetato) ó metálicos (ej: aluminio). El eluyente ascenderá. La fase móvil puede ser un líquido o un gas y la estacionaria puede ser un sólido o un líquido. Se usan láminas de: vidrio como soporte del adsorbente. unas con más facilidad que otras.

Placa cromatográficas de silica gel de 20 x 20 en aluminio. Benceno ( 10 mL) Etanol ( 10 mL) Ácido Acético ( 1 mL) Cloroformo (10 mL) Diclorometano ( 10 mL) Acetato de etilo ( 10 mL) Tolueno ( 10 mL) Heptano ( 10 mL) Acetona ( 10 mL).Pitas de 5 mL 1-Motero con su mano 1-Capilar 3. Traída por estudiantes .MATERIALES 2.Frasco de compotas. Traído por los estudiantes REACTIVOS: 1. Una hoja de espinaca.

Cuando el nivel se encuentra casi en el borde superior. Ahora se debe buscar un método para visualizar el resultado del cromatograma y ver la separación de los componentes pinchados en la placa. . En este momento se introduce con cuidado la placa en la cubeta y se tapa. En el caso de que la sustancia sea coloreada no habría ningún problema ya que se verían los componentes. se extrae la placa y se dibuja una nueva línea en este nivel. esperando a que el nivel del eluyente ascienda por la placa. El disolvente al ser volátil se evapora en poco tiempo dejando la placa seca. siempre en un nivel inferior a la línea base que se ha dibujado en la placa. Se debe preparar la cubeta en la que se va a realizar la cromatografía. Esta cubeta es un simple recipiente de vidrio en donde se añade el eluyente que se va a utilizar. A continuación se dibuja una línea base con lápiz y unos puntos de referencia donde se pincharán las muestras con un capilar (zanahoria y hoja de espinaca trituradas).PROCEDIMIENTO La muestra se disuelve en muy poca cantidad de un disolvente volátil. Si se va a utilizar patrones de alguna sustancia se preparan de la misma manera. .

las sustancias más polares interaccionarán más con el soporte y su velocidad de desplazamiento será menor. se habrán desplazado muy poco a partir de la línea base. y los compuestos tendrán una mayor interacción con el soporte. El factor que más influye en la separación de los componentes en este tipo de cromatografía es la polaridad de estos componentes. Es decir. al revelar la placa. por lo que. para un eluyente con mayor polaridad. éste casi no interacciona con el soporte polar. Al realizar el cromatograma. etc. atraerá en mayor medida a componentes más polares. Por la misma razón. éste estará más atraído por el soporte y los componentes serán más libres para moverse mejor.ANALISIS La muestra aplicada en la fase estacionaria es adsorbida en la superficie del material por la acción de fuerzas electrostáticas (fuerzas de Van der Waals.) y para su posterior liberación de acuerdo a la constante de afinidad de por los constituyentes de la muestra por la fase móvil. esto significa que al revelar la placa cromatográfica. efectos inductivos. una sustancia muy polar. . y por el contrario. el componente menos polar se moverá más rápidamente y se encontrará más alejado de la línea base. y por lo tanto. con un eluyente menos polar. el componente más polar se encontrará en un lugar más cercano a la línea base que hemos dibujado. por lo que su velocidad será más pequeña y al terminar la cromatografía. puentes de Hidrógeno. La placa está formada por una capa de gel de sílice. los componentes saldrán más alejados de la línea base. La polaridad del eluyente es un factor que consigue que los componentes se muevan más rápido o más lento en una cromatografía.

en la que un sólido tiene enlazado un llamado ligando de afinidad que puede ser por ejemplo. se trata de la cromatografía de fluidos supercríticos (CFS). Cromatografía gas-sólido (CGS). temperatura. Cromatografía en columna: Se utiliza un tubo cilíndrico. etc. que puede ser de partición o de adsorción. cabe distinguir: Cromatografía de partición: el soluto se reparte entra la fase móvil (liquido o gas) y la fase estacionaria. Se divide en dos tipos generales: . vapor de saturación. 2)por capilaridad. así como las condiciones de la placa. cabe distinguir entre: Cromatografía gas-liquido (CGL).  Si es líquido/líquido. que es una cromatografía de partición. eluyente.PREGUNTAS 1. Si es un fluido supercrítico. Cromatografia plana: La fase estacionaria esta colocada en una superficie plana que en realidad es tridimensional. aunque una de sus dimensiones es muy reducida. Cromatografia de afinidad: es un tipo especial de cromatografia de adsorción. Las técnicas cromatográficas. que es una cromatografía de adsorción. por lo que puede considerarse bidimensional. Cromatografia de cambio iónico: el sólido es un cambiador de iones (fuerzas electrostáticas).  Si es líquido/gas. 2. pueden ser: en columna y plana. en cuyo interior se coloca la fase estacionaria y a su través se hace pasar la fase móvil. utilizada especialmente en bioquímica. El flujo de la fase móvil (liquido o gas) a través de la estacionaria se consigue: 1)por presión. Tiene una reproducibilidad de ± 20%. (fluido calentado a una temperatura superior a la temperatura critica. por lo que es mejor correr duplicados de la misma placa. Cromatografia de exclusión (o de geles): el sólido es un gel formado por polímeros no iónicos porosos que retienen a las moléculas de soluto según su tamaño. QUE ES RF? Rf es el registro y se define como: Rf = distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicación / distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra (tipo de adsorbente. CUALES SON LOS TIPOS DE CROMATOGRAFÍA MÁS UTILIZADOS Y DESCRIBIRLOS Cromatografía de adsorción: El sólido adsorbe al componente que inicialmente estaba en fase móvil (liquida o gaseosa) (Fuerzas de Van der Waals).). un indicador enzimático o un anticuerpo. según el dispositivo utilizado para conseguir la separación entre la fase móvil y la estacionaria. 3) por gravedad. pero simultáneamente comprimido a una presión mayor que su presión critica).

. medicinas. sobre la cual se van depositando los componentes en lugares específicos. El uso de la cromatografía está ampliamente extendido en el análisis de alimentos. productos petrolíferos y de fisión radiactiva. 2. se extiende en una capa delgada sobre una placa. Una muestra líquida fluye por una tira vertical de papel absorbente. generalmente de vidrio. sangre.1. -Cromatografía en papel: en la que el papel absorbente actúa como soporte de la fase estacionaria (cromatografia de partición). -Cromatografía en capa fina: en la que un sólido actúa como fase estacionaria (cromatografia de partición).

Perry and Green Química análisis de principios y aplicaciones.IBLIOGRAFIA E INFOBIBLIOGRAFIA www. 2007 ANEXOS .org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_en_capa_fina» Manual del ingeniero químico 7ma edición.google. Aduni.wikipedia. Enciclopedia virtual. 3era edición.com. www.com http://es.wikipedia.