CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

INTRODUCCION La cromatografía de capa fina es un procedimiento que se utiliza para separar moléculas relativamente pequeñas. En la biología celular se utiliza frecuentemente para separar azúcares simples, lípidos, aminoácidos, nucleótidos, metabolitos, y ocasionalmente para separar cadenas cortas de poli péptidos y ácidos nucleicos. Al igual que otras cromatografías, consiste de una fase estacionaria y una fase móvil y el principio es el mismo: la sustancia de interés se adherirá a la fase estacionaria o se moverá con la fase móvil, viajando una distancia que es inversamente proporcional a la afinidad por la fase estacionaria. La fase estacionaria puede ser variada. Puede ser de papel, de celulosa o de un gel de silicato (vidrio molido bien fino) unido a una superficie sólida (una placa de vidrio, aluminio, plástico papel). Esta superficie sólida puede ser rígida o flexible. El tipo de fase estacionaria que se utilice en un experimento dependerá del tipo de moléculas que se quieran separar. Incluso vienen algunas placas con indicadores fluorescentes. La fase estacionaria consiste de un solvente que puede ser agua, un solvente orgánico o una mezcla de ambos. El procedimiento es sencillo: Se colocan las muestras a un centímetro del borde en uno de los extremos de la placa, se deja secar, se coloca la placa en un envase (tanque de desarrollo) que ya contiene una pequeña cantidad del solvente, se tapa y se deja correr por un rato. El solvente subirá por capilaridad e irá arrastrando las moléculas, las cuales se moverán según la afinidad que muestren por la fase estacionaria. Si la mezcla de muestras que se está analizando presenta color, se verán los distintos colores migrando a distintas velocidades. Si son incoloras hay que someter la placa a algún tratamiento con una sustancia desarrolladora (developer) para poder determinar la presencia de sustancias sobre el silicato. El tipo de desarrollador dependerá del tipo de moléculas que se analiza

OBJETIVO GENERAL  Separar los pigmentos más abundantes presentes en hojas de espinacas utilizando la cromatografía de capa fina. Analizar la influencia del solvente en la separación cromatográfica. . OBJETIVOS ESPECIFICOS     Conocer la cromatografía como técnica de separación de mezclas de sustancias. observar las diferentes características de la placa en la cromatografía. sus características y los factores que en ella intervienen. Estudiar la incidencia del coeficiente de reparto entre la fase móvil y la fase estacionaria.

plástico (ej: acetato) ó metálicos (ej: aluminio). La cromatografía se define como la separación de una mezcla de dos o más compuestos por distribución entre dos fases. Todos los sólidos finamente pulverizados tienen el poder de adsorber en mayor o menor grado otras sustancias sobre su superficie. y. Este fenómeno de adsorción selectiva es el principio fundamental de la cromatografía. liquido-líquido y gases-liquido (fase vapor). similarmente. n-hexano ciclohexano        tetracloruro de carbono éter dietílico cloroformo acetona iso-propanol etanol metanol . Hay placas que contienen un indicador de fluorescencia. Todas las técnicas cromatográficas dependen de la distribución de los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase móvil. t-butil-éter diclorometano acetato de etilo n-pentano. Se usan láminas de: vidrio como soporte del adsorbente. denominada fase estacionaria. En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un pequeño espesor constante a lo largo de la placa. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA. unas con más facilidad que otras. Varios tipos de cromatografía son posibles. llamada también activa.        éter de petróleo tolueno dietil-éter. papel o columna).MARCO TEORICO CONCEPTO DE CROMATOGRAFÍA. por la placa y arrastrará los componentes a lo largo de ésta produciendo “manchas” de los componentes. dependiendo de la naturaleza de las dos fases involucradas: sólido-liquido (capa fina. La fase móvil puede ser un líquido o un gas y la estacionaria puede ser un sólido o un líquido. que transporta las sustancias que se separan y que progresa en relación con la otra. El eluyente ascenderá. Los tamaños de la placa para CCf convencional son: 20 x 20. ELUYENTES MÁS COMUNES PARA CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA. todas las sustancias pueden ser adsorbidas. para facilitar la identificación de las muestras. 10 x 20 y 5 x 2. una de las cuales es estacionaria y la otra una fase móvil. Si no se usa indicador y los componentes no son coloridos se requerirán técnicas de revelado. por capilaridad.

Benceno ( 10 mL) Etanol ( 10 mL) Ácido Acético ( 1 mL) Cloroformo (10 mL) Diclorometano ( 10 mL) Acetato de etilo ( 10 mL) Tolueno ( 10 mL) Heptano ( 10 mL) Acetona ( 10 mL). Traído por los estudiantes REACTIVOS: 1.Frasco de compotas. Traída por estudiantes .Pitas de 5 mL 1-Motero con su mano 1-Capilar 3.MATERIALES 2.Placa cromatográficas de silica gel de 20 x 20 en aluminio. Una hoja de espinaca.

Si se va a utilizar patrones de alguna sustancia se preparan de la misma manera. Se debe preparar la cubeta en la que se va a realizar la cromatografía. Esta cubeta es un simple recipiente de vidrio en donde se añade el eluyente que se va a utilizar. esperando a que el nivel del eluyente ascienda por la placa. El disolvente al ser volátil se evapora en poco tiempo dejando la placa seca. siempre en un nivel inferior a la línea base que se ha dibujado en la placa. Cuando el nivel se encuentra casi en el borde superior. En este momento se introduce con cuidado la placa en la cubeta y se tapa. . A continuación se dibuja una línea base con lápiz y unos puntos de referencia donde se pincharán las muestras con un capilar (zanahoria y hoja de espinaca trituradas).PROCEDIMIENTO La muestra se disuelve en muy poca cantidad de un disolvente volátil. . se extrae la placa y se dibuja una nueva línea en este nivel. Ahora se debe buscar un método para visualizar el resultado del cromatograma y ver la separación de los componentes pinchados en la placa. En el caso de que la sustancia sea coloreada no habría ningún problema ya que se verían los componentes.

La placa está formada por una capa de gel de sílice. éste estará más atraído por el soporte y los componentes serán más libres para moverse mejor. . Al realizar el cromatograma. el componente más polar se encontrará en un lugar más cercano a la línea base que hemos dibujado. los componentes saldrán más alejados de la línea base. éste casi no interacciona con el soporte polar. Por la misma razón. esto significa que al revelar la placa cromatográfica. al revelar la placa. se habrán desplazado muy poco a partir de la línea base. puentes de Hidrógeno.) y para su posterior liberación de acuerdo a la constante de afinidad de por los constituyentes de la muestra por la fase móvil. para un eluyente con mayor polaridad. y por el contrario. por lo que su velocidad será más pequeña y al terminar la cromatografía. una sustancia muy polar. La polaridad del eluyente es un factor que consigue que los componentes se muevan más rápido o más lento en una cromatografía. y por lo tanto. Es decir. y los compuestos tendrán una mayor interacción con el soporte. por lo que. el componente menos polar se moverá más rápidamente y se encontrará más alejado de la línea base. las sustancias más polares interaccionarán más con el soporte y su velocidad de desplazamiento será menor. El factor que más influye en la separación de los componentes en este tipo de cromatografía es la polaridad de estos componentes.ANALISIS La muestra aplicada en la fase estacionaria es adsorbida en la superficie del material por la acción de fuerzas electrostáticas (fuerzas de Van der Waals. efectos inductivos. etc. atraerá en mayor medida a componentes más polares. con un eluyente menos polar.

un indicador enzimático o un anticuerpo. etc. que puede ser de partición o de adsorción. El flujo de la fase móvil (liquido o gas) a través de la estacionaria se consigue: 1)por presión. temperatura. por lo que puede considerarse bidimensional. en cuyo interior se coloca la fase estacionaria y a su través se hace pasar la fase móvil. (fluido calentado a una temperatura superior a la temperatura critica. Cromatografia de afinidad: es un tipo especial de cromatografia de adsorción. que es una cromatografía de partición. Cromatografia de exclusión (o de geles): el sólido es un gel formado por polímeros no iónicos porosos que retienen a las moléculas de soluto según su tamaño. Cromatografía en columna: Se utiliza un tubo cilíndrico. QUE ES RF? Rf es el registro y se define como: Rf = distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicación / distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra (tipo de adsorbente. Las técnicas cromatográficas. vapor de saturación. utilizada especialmente en bioquímica. Cromatografia plana: La fase estacionaria esta colocada en una superficie plana que en realidad es tridimensional. se trata de la cromatografía de fluidos supercríticos (CFS). Si es un fluido supercrítico. 2)por capilaridad. pueden ser: en columna y plana. cabe distinguir: Cromatografía de partición: el soluto se reparte entra la fase móvil (liquido o gas) y la fase estacionaria. 3) por gravedad. según el dispositivo utilizado para conseguir la separación entre la fase móvil y la estacionaria. cabe distinguir entre: Cromatografía gas-liquido (CGL). así como las condiciones de la placa. que es una cromatografía de adsorción. CUALES SON LOS TIPOS DE CROMATOGRAFÍA MÁS UTILIZADOS Y DESCRIBIRLOS Cromatografía de adsorción: El sólido adsorbe al componente que inicialmente estaba en fase móvil (liquida o gaseosa) (Fuerzas de Van der Waals). aunque una de sus dimensiones es muy reducida. pero simultáneamente comprimido a una presión mayor que su presión critica).  Si es líquido/líquido.). Se divide en dos tipos generales: . 2. en la que un sólido tiene enlazado un llamado ligando de afinidad que puede ser por ejemplo.  Si es líquido/gas. Cromatografia de cambio iónico: el sólido es un cambiador de iones (fuerzas electrostáticas). eluyente. por lo que es mejor correr duplicados de la misma placa. Cromatografía gas-sólido (CGS). Tiene una reproducibilidad de ± 20%.PREGUNTAS 1.

sangre. 2. se extiende en una capa delgada sobre una placa. -Cromatografía en papel: en la que el papel absorbente actúa como soporte de la fase estacionaria (cromatografia de partición). sobre la cual se van depositando los componentes en lugares específicos. El uso de la cromatografía está ampliamente extendido en el análisis de alimentos.1. generalmente de vidrio. medicinas. Una muestra líquida fluye por una tira vertical de papel absorbente. -Cromatografía en capa fina: en la que un sólido actúa como fase estacionaria (cromatografia de partición). . productos petrolíferos y de fisión radiactiva.

2007 ANEXOS .wikipedia.google. Enciclopedia virtual.com.wikipedia.IBLIOGRAFIA E INFOBIBLIOGRAFIA www.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_en_capa_fina» Manual del ingeniero químico 7ma edición. 3era edición. Aduni. www. Perry and Green Química análisis de principios y aplicaciones.com http://es.

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