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Cromatografía de capa fina

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CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

INTRODUCCION La cromatografía de capa fina es un procedimiento que se utiliza para separar moléculas relativamente pequeñas. En la biología celular se utiliza frecuentemente para separar azúcares simples, lípidos, aminoácidos, nucleótidos, metabolitos, y ocasionalmente para separar cadenas cortas de poli péptidos y ácidos nucleicos. Al igual que otras cromatografías, consiste de una fase estacionaria y una fase móvil y el principio es el mismo: la sustancia de interés se adherirá a la fase estacionaria o se moverá con la fase móvil, viajando una distancia que es inversamente proporcional a la afinidad por la fase estacionaria. La fase estacionaria puede ser variada. Puede ser de papel, de celulosa o de un gel de silicato (vidrio molido bien fino) unido a una superficie sólida (una placa de vidrio, aluminio, plástico papel). Esta superficie sólida puede ser rígida o flexible. El tipo de fase estacionaria que se utilice en un experimento dependerá del tipo de moléculas que se quieran separar. Incluso vienen algunas placas con indicadores fluorescentes. La fase estacionaria consiste de un solvente que puede ser agua, un solvente orgánico o una mezcla de ambos. El procedimiento es sencillo: Se colocan las muestras a un centímetro del borde en uno de los extremos de la placa, se deja secar, se coloca la placa en un envase (tanque de desarrollo) que ya contiene una pequeña cantidad del solvente, se tapa y se deja correr por un rato. El solvente subirá por capilaridad e irá arrastrando las moléculas, las cuales se moverán según la afinidad que muestren por la fase estacionaria. Si la mezcla de muestras que se está analizando presenta color, se verán los distintos colores migrando a distintas velocidades. Si son incoloras hay que someter la placa a algún tratamiento con una sustancia desarrolladora (developer) para poder determinar la presencia de sustancias sobre el silicato. El tipo de desarrollador dependerá del tipo de moléculas que se analiza

observar las diferentes características de la placa en la cromatografía. Estudiar la incidencia del coeficiente de reparto entre la fase móvil y la fase estacionaria. Analizar la influencia del solvente en la separación cromatográfica. . sus características y los factores que en ella intervienen.OBJETIVO GENERAL  Separar los pigmentos más abundantes presentes en hojas de espinacas utilizando la cromatografía de capa fina. OBJETIVOS ESPECIFICOS     Conocer la cromatografía como técnica de separación de mezclas de sustancias.

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA.MARCO TEORICO CONCEPTO DE CROMATOGRAFÍA. que transporta las sustancias que se separan y que progresa en relación con la otra. por capilaridad. La fase móvil puede ser un líquido o un gas y la estacionaria puede ser un sólido o un líquido. dependiendo de la naturaleza de las dos fases involucradas: sólido-liquido (capa fina. similarmente. denominada fase estacionaria. Varios tipos de cromatografía son posibles. y. por la placa y arrastrará los componentes a lo largo de ésta produciendo “manchas” de los componentes. Los tamaños de la placa para CCf convencional son: 20 x 20. Todos los sólidos finamente pulverizados tienen el poder de adsorber en mayor o menor grado otras sustancias sobre su superficie. una de las cuales es estacionaria y la otra una fase móvil. Si no se usa indicador y los componentes no son coloridos se requerirán técnicas de revelado. 10 x 20 y 5 x 2. para facilitar la identificación de las muestras. liquido-líquido y gases-liquido (fase vapor). En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un pequeño espesor constante a lo largo de la placa.        éter de petróleo tolueno dietil-éter. Todas las técnicas cromatográficas dependen de la distribución de los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase móvil. papel o columna). Se usan láminas de: vidrio como soporte del adsorbente. ELUYENTES MÁS COMUNES PARA CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA. La cromatografía se define como la separación de una mezcla de dos o más compuestos por distribución entre dos fases. Hay placas que contienen un indicador de fluorescencia. t-butil-éter diclorometano acetato de etilo n-pentano. El eluyente ascenderá. Este fenómeno de adsorción selectiva es el principio fundamental de la cromatografía. llamada también activa. n-hexano ciclohexano        tetracloruro de carbono éter dietílico cloroformo acetona iso-propanol etanol metanol . todas las sustancias pueden ser adsorbidas. plástico (ej: acetato) ó metálicos (ej: aluminio). unas con más facilidad que otras.

Placa cromatográficas de silica gel de 20 x 20 en aluminio. Benceno ( 10 mL) Etanol ( 10 mL) Ácido Acético ( 1 mL) Cloroformo (10 mL) Diclorometano ( 10 mL) Acetato de etilo ( 10 mL) Tolueno ( 10 mL) Heptano ( 10 mL) Acetona ( 10 mL).Frasco de compotas. Traído por los estudiantes REACTIVOS: 1. Una hoja de espinaca.MATERIALES 2. Traída por estudiantes .Pitas de 5 mL 1-Motero con su mano 1-Capilar 3.

siempre en un nivel inferior a la línea base que se ha dibujado en la placa. Se debe preparar la cubeta en la que se va a realizar la cromatografía. Esta cubeta es un simple recipiente de vidrio en donde se añade el eluyente que se va a utilizar. se extrae la placa y se dibuja una nueva línea en este nivel. Si se va a utilizar patrones de alguna sustancia se preparan de la misma manera. esperando a que el nivel del eluyente ascienda por la placa.PROCEDIMIENTO La muestra se disuelve en muy poca cantidad de un disolvente volátil. Cuando el nivel se encuentra casi en el borde superior. Ahora se debe buscar un método para visualizar el resultado del cromatograma y ver la separación de los componentes pinchados en la placa. En este momento se introduce con cuidado la placa en la cubeta y se tapa. En el caso de que la sustancia sea coloreada no habría ningún problema ya que se verían los componentes. . . El disolvente al ser volátil se evapora en poco tiempo dejando la placa seca. A continuación se dibuja una línea base con lápiz y unos puntos de referencia donde se pincharán las muestras con un capilar (zanahoria y hoja de espinaca trituradas).

Al realizar el cromatograma. el componente más polar se encontrará en un lugar más cercano a la línea base que hemos dibujado. . las sustancias más polares interaccionarán más con el soporte y su velocidad de desplazamiento será menor. El factor que más influye en la separación de los componentes en este tipo de cromatografía es la polaridad de estos componentes. con un eluyente menos polar. La polaridad del eluyente es un factor que consigue que los componentes se muevan más rápido o más lento en una cromatografía. y los compuestos tendrán una mayor interacción con el soporte. Por la misma razón.ANALISIS La muestra aplicada en la fase estacionaria es adsorbida en la superficie del material por la acción de fuerzas electrostáticas (fuerzas de Van der Waals. se habrán desplazado muy poco a partir de la línea base. el componente menos polar se moverá más rápidamente y se encontrará más alejado de la línea base. La placa está formada por una capa de gel de sílice. Es decir. al revelar la placa. puentes de Hidrógeno. para un eluyente con mayor polaridad. esto significa que al revelar la placa cromatográfica. los componentes saldrán más alejados de la línea base. por lo que. atraerá en mayor medida a componentes más polares. y por el contrario.) y para su posterior liberación de acuerdo a la constante de afinidad de por los constituyentes de la muestra por la fase móvil. éste casi no interacciona con el soporte polar. por lo que su velocidad será más pequeña y al terminar la cromatografía. éste estará más atraído por el soporte y los componentes serán más libres para moverse mejor. una sustancia muy polar. efectos inductivos. etc. y por lo tanto.

que es una cromatografía de adsorción. (fluido calentado a una temperatura superior a la temperatura critica. temperatura. CUALES SON LOS TIPOS DE CROMATOGRAFÍA MÁS UTILIZADOS Y DESCRIBIRLOS Cromatografía de adsorción: El sólido adsorbe al componente que inicialmente estaba en fase móvil (liquida o gaseosa) (Fuerzas de Van der Waals). Cromatografia plana: La fase estacionaria esta colocada en una superficie plana que en realidad es tridimensional. Tiene una reproducibilidad de ± 20%. utilizada especialmente en bioquímica. según el dispositivo utilizado para conseguir la separación entre la fase móvil y la estacionaria. en cuyo interior se coloca la fase estacionaria y a su través se hace pasar la fase móvil. Cromatografía en columna: Se utiliza un tubo cilíndrico. un indicador enzimático o un anticuerpo. Cromatografia de afinidad: es un tipo especial de cromatografia de adsorción. 2)por capilaridad. QUE ES RF? Rf es el registro y se define como: Rf = distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicación / distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra (tipo de adsorbente.  Si es líquido/líquido. Si es un fluido supercrítico. El flujo de la fase móvil (liquido o gas) a través de la estacionaria se consigue: 1)por presión. cabe distinguir entre: Cromatografía gas-liquido (CGL). por lo que puede considerarse bidimensional. que puede ser de partición o de adsorción. se trata de la cromatografía de fluidos supercríticos (CFS). que es una cromatografía de partición. Se divide en dos tipos generales: . Las técnicas cromatográficas. así como las condiciones de la placa. pero simultáneamente comprimido a una presión mayor que su presión critica).  Si es líquido/gas. 2.PREGUNTAS 1. vapor de saturación. cabe distinguir: Cromatografía de partición: el soluto se reparte entra la fase móvil (liquido o gas) y la fase estacionaria. Cromatografia de cambio iónico: el sólido es un cambiador de iones (fuerzas electrostáticas). etc. aunque una de sus dimensiones es muy reducida.). Cromatografia de exclusión (o de geles): el sólido es un gel formado por polímeros no iónicos porosos que retienen a las moléculas de soluto según su tamaño. Cromatografía gas-sólido (CGS). en la que un sólido tiene enlazado un llamado ligando de afinidad que puede ser por ejemplo. pueden ser: en columna y plana. eluyente. por lo que es mejor correr duplicados de la misma placa. 3) por gravedad.

se extiende en una capa delgada sobre una placa. El uso de la cromatografía está ampliamente extendido en el análisis de alimentos. productos petrolíferos y de fisión radiactiva. -Cromatografía en papel: en la que el papel absorbente actúa como soporte de la fase estacionaria (cromatografia de partición). 2. .1. medicinas. sobre la cual se van depositando los componentes en lugares específicos. Una muestra líquida fluye por una tira vertical de papel absorbente. -Cromatografía en capa fina: en la que un sólido actúa como fase estacionaria (cromatografia de partición). sangre. generalmente de vidrio.

Perry and Green Química análisis de principios y aplicaciones. www.com.IBLIOGRAFIA E INFOBIBLIOGRAFIA www. Aduni. 3era edición.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_en_capa_fina» Manual del ingeniero químico 7ma edición.google.com http://es. Enciclopedia virtual.wikipedia. 2007 ANEXOS .wikipedia.

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