CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

INTRODUCCION La cromatografía de capa fina es un procedimiento que se utiliza para separar moléculas relativamente pequeñas. En la biología celular se utiliza frecuentemente para separar azúcares simples, lípidos, aminoácidos, nucleótidos, metabolitos, y ocasionalmente para separar cadenas cortas de poli péptidos y ácidos nucleicos. Al igual que otras cromatografías, consiste de una fase estacionaria y una fase móvil y el principio es el mismo: la sustancia de interés se adherirá a la fase estacionaria o se moverá con la fase móvil, viajando una distancia que es inversamente proporcional a la afinidad por la fase estacionaria. La fase estacionaria puede ser variada. Puede ser de papel, de celulosa o de un gel de silicato (vidrio molido bien fino) unido a una superficie sólida (una placa de vidrio, aluminio, plástico papel). Esta superficie sólida puede ser rígida o flexible. El tipo de fase estacionaria que se utilice en un experimento dependerá del tipo de moléculas que se quieran separar. Incluso vienen algunas placas con indicadores fluorescentes. La fase estacionaria consiste de un solvente que puede ser agua, un solvente orgánico o una mezcla de ambos. El procedimiento es sencillo: Se colocan las muestras a un centímetro del borde en uno de los extremos de la placa, se deja secar, se coloca la placa en un envase (tanque de desarrollo) que ya contiene una pequeña cantidad del solvente, se tapa y se deja correr por un rato. El solvente subirá por capilaridad e irá arrastrando las moléculas, las cuales se moverán según la afinidad que muestren por la fase estacionaria. Si la mezcla de muestras que se está analizando presenta color, se verán los distintos colores migrando a distintas velocidades. Si son incoloras hay que someter la placa a algún tratamiento con una sustancia desarrolladora (developer) para poder determinar la presencia de sustancias sobre el silicato. El tipo de desarrollador dependerá del tipo de moléculas que se analiza

sus características y los factores que en ella intervienen. observar las diferentes características de la placa en la cromatografía. OBJETIVOS ESPECIFICOS     Conocer la cromatografía como técnica de separación de mezclas de sustancias.OBJETIVO GENERAL  Separar los pigmentos más abundantes presentes en hojas de espinacas utilizando la cromatografía de capa fina. Analizar la influencia del solvente en la separación cromatográfica. Estudiar la incidencia del coeficiente de reparto entre la fase móvil y la fase estacionaria. .

papel o columna). y. todas las sustancias pueden ser adsorbidas. para facilitar la identificación de las muestras. Todas las técnicas cromatográficas dependen de la distribución de los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase móvil. dependiendo de la naturaleza de las dos fases involucradas: sólido-liquido (capa fina.MARCO TEORICO CONCEPTO DE CROMATOGRAFÍA. t-butil-éter diclorometano acetato de etilo n-pentano. denominada fase estacionaria. llamada también activa. Este fenómeno de adsorción selectiva es el principio fundamental de la cromatografía. La cromatografía se define como la separación de una mezcla de dos o más compuestos por distribución entre dos fases.        éter de petróleo tolueno dietil-éter. similarmente. liquido-líquido y gases-liquido (fase vapor). ELUYENTES MÁS COMUNES PARA CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA. La fase móvil puede ser un líquido o un gas y la estacionaria puede ser un sólido o un líquido. Los tamaños de la placa para CCf convencional son: 20 x 20. 10 x 20 y 5 x 2. Todos los sólidos finamente pulverizados tienen el poder de adsorber en mayor o menor grado otras sustancias sobre su superficie. por la placa y arrastrará los componentes a lo largo de ésta produciendo “manchas” de los componentes. Se usan láminas de: vidrio como soporte del adsorbente. n-hexano ciclohexano        tetracloruro de carbono éter dietílico cloroformo acetona iso-propanol etanol metanol . una de las cuales es estacionaria y la otra una fase móvil. plástico (ej: acetato) ó metálicos (ej: aluminio). Varios tipos de cromatografía son posibles. Hay placas que contienen un indicador de fluorescencia. que transporta las sustancias que se separan y que progresa en relación con la otra. por capilaridad. unas con más facilidad que otras. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA. Si no se usa indicador y los componentes no son coloridos se requerirán técnicas de revelado. En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un pequeño espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascenderá.

Una hoja de espinaca.MATERIALES 2.Pitas de 5 mL 1-Motero con su mano 1-Capilar 3.Placa cromatográficas de silica gel de 20 x 20 en aluminio. Traído por los estudiantes REACTIVOS: 1.Frasco de compotas. Benceno ( 10 mL) Etanol ( 10 mL) Ácido Acético ( 1 mL) Cloroformo (10 mL) Diclorometano ( 10 mL) Acetato de etilo ( 10 mL) Tolueno ( 10 mL) Heptano ( 10 mL) Acetona ( 10 mL). Traída por estudiantes .

. Si se va a utilizar patrones de alguna sustancia se preparan de la misma manera. Esta cubeta es un simple recipiente de vidrio en donde se añade el eluyente que se va a utilizar. En el caso de que la sustancia sea coloreada no habría ningún problema ya que se verían los componentes. siempre en un nivel inferior a la línea base que se ha dibujado en la placa. Ahora se debe buscar un método para visualizar el resultado del cromatograma y ver la separación de los componentes pinchados en la placa. Se debe preparar la cubeta en la que se va a realizar la cromatografía. . Cuando el nivel se encuentra casi en el borde superior. se extrae la placa y se dibuja una nueva línea en este nivel.PROCEDIMIENTO La muestra se disuelve en muy poca cantidad de un disolvente volátil. A continuación se dibuja una línea base con lápiz y unos puntos de referencia donde se pincharán las muestras con un capilar (zanahoria y hoja de espinaca trituradas). El disolvente al ser volátil se evapora en poco tiempo dejando la placa seca. esperando a que el nivel del eluyente ascienda por la placa. En este momento se introduce con cuidado la placa en la cubeta y se tapa.

. Es decir. El factor que más influye en la separación de los componentes en este tipo de cromatografía es la polaridad de estos componentes. efectos inductivos. al revelar la placa. y los compuestos tendrán una mayor interacción con el soporte. La placa está formada por una capa de gel de sílice. para un eluyente con mayor polaridad. el componente menos polar se moverá más rápidamente y se encontrará más alejado de la línea base. el componente más polar se encontrará en un lugar más cercano a la línea base que hemos dibujado.ANALISIS La muestra aplicada en la fase estacionaria es adsorbida en la superficie del material por la acción de fuerzas electrostáticas (fuerzas de Van der Waals. y por lo tanto. Al realizar el cromatograma. etc. con un eluyente menos polar. éste casi no interacciona con el soporte polar. esto significa que al revelar la placa cromatográfica. puentes de Hidrógeno. La polaridad del eluyente es un factor que consigue que los componentes se muevan más rápido o más lento en una cromatografía. y por el contrario. éste estará más atraído por el soporte y los componentes serán más libres para moverse mejor. por lo que. se habrán desplazado muy poco a partir de la línea base. una sustancia muy polar. las sustancias más polares interaccionarán más con el soporte y su velocidad de desplazamiento será menor.) y para su posterior liberación de acuerdo a la constante de afinidad de por los constituyentes de la muestra por la fase móvil. por lo que su velocidad será más pequeña y al terminar la cromatografía. atraerá en mayor medida a componentes más polares. Por la misma razón. los componentes saldrán más alejados de la línea base.

Se divide en dos tipos generales: . Cromatografia de afinidad: es un tipo especial de cromatografia de adsorción. vapor de saturación. según el dispositivo utilizado para conseguir la separación entre la fase móvil y la estacionaria. por lo que es mejor correr duplicados de la misma placa. 2)por capilaridad. así como las condiciones de la placa. que puede ser de partición o de adsorción. Cromatografía gas-sólido (CGS). QUE ES RF? Rf es el registro y se define como: Rf = distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicación / distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra (tipo de adsorbente. 2. etc. utilizada especialmente en bioquímica. cabe distinguir: Cromatografía de partición: el soluto se reparte entra la fase móvil (liquido o gas) y la fase estacionaria. en la que un sólido tiene enlazado un llamado ligando de afinidad que puede ser por ejemplo. que es una cromatografía de partición.PREGUNTAS 1.  Si es líquido/líquido. El flujo de la fase móvil (liquido o gas) a través de la estacionaria se consigue: 1)por presión. 3) por gravedad. temperatura. Cromatografia de exclusión (o de geles): el sólido es un gel formado por polímeros no iónicos porosos que retienen a las moléculas de soluto según su tamaño. Si es un fluido supercrítico. Cromatografía en columna: Se utiliza un tubo cilíndrico. Las técnicas cromatográficas. aunque una de sus dimensiones es muy reducida. pueden ser: en columna y plana.  Si es líquido/gas. cabe distinguir entre: Cromatografía gas-liquido (CGL). que es una cromatografía de adsorción.). un indicador enzimático o un anticuerpo. en cuyo interior se coloca la fase estacionaria y a su través se hace pasar la fase móvil. CUALES SON LOS TIPOS DE CROMATOGRAFÍA MÁS UTILIZADOS Y DESCRIBIRLOS Cromatografía de adsorción: El sólido adsorbe al componente que inicialmente estaba en fase móvil (liquida o gaseosa) (Fuerzas de Van der Waals). por lo que puede considerarse bidimensional. eluyente. se trata de la cromatografía de fluidos supercríticos (CFS). Cromatografia de cambio iónico: el sólido es un cambiador de iones (fuerzas electrostáticas). (fluido calentado a una temperatura superior a la temperatura critica. pero simultáneamente comprimido a una presión mayor que su presión critica). Cromatografia plana: La fase estacionaria esta colocada en una superficie plana que en realidad es tridimensional. Tiene una reproducibilidad de ± 20%.

Una muestra líquida fluye por una tira vertical de papel absorbente. sangre. -Cromatografía en capa fina: en la que un sólido actúa como fase estacionaria (cromatografia de partición). generalmente de vidrio. El uso de la cromatografía está ampliamente extendido en el análisis de alimentos. se extiende en una capa delgada sobre una placa. . 2. -Cromatografía en papel: en la que el papel absorbente actúa como soporte de la fase estacionaria (cromatografia de partición).1. productos petrolíferos y de fisión radiactiva. medicinas. sobre la cual se van depositando los componentes en lugares específicos.

com http://es. www. 3era edición.wikipedia.IBLIOGRAFIA E INFOBIBLIOGRAFIA www. Enciclopedia virtual. Aduni. 2007 ANEXOS .com. Perry and Green Química análisis de principios y aplicaciones.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_en_capa_fina» Manual del ingeniero químico 7ma edición.google.

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