las causas mas frecuentes de las mutaciones se dan durante la replicacin del DNA, por la colocacion de bases incorrectas.

Tambin hay errores de inserciones delecciones y ruptura de enlaces en una hebra o varias

 La demostracin del origen de las mutaciones es el

grado de error que presentan las enzimas naturales, las dna polimerasas (de los mamiferos ), cuando se sintetiza DNA in vitro en ciertas condiciones . En los mamiferos las 5 principales clases de DNA polimerasas son , , , , .las polimerasas y intervienen en la replicacion del genoma delos mamiferos , mientras que las y estan vinculadas con procesos especiales de reparacion del DNA y la polimerasa se asocia con el proceso de replicacion del DNA mitocondrial

En ciertas condiciones las polimerasas y no poseen la actividad correctora (exonucleasa) , por la presencia inhibidora de una subunidad especifica . Por eso introducen un error . Las altas tasas de error in vitro indican la existencia de correctores in vivo

 La lectura de prueba que realizan las polimerasas

reduce la tasa de errores. Este mecanismo consiste en la eliminacion de los nucleotidos incorrectos inmediatamente despues de que se agreguen al DNA en crecimiento durante la replicacion La recombinacion en el DNA es un mecanismo para salvar interrupciones en la replicacion

Algunas enfermedades geneticas se deben a la expansion de de repeticiones de tres nucleotidos

Hay presencia de secuencias de DNA con tendencia

producir errores en el transcurso dela replicacion

Enfermedad de Huntington
transtorno neurologico autosomico dominante, gen

mutado expresa proteina huntingtina q se expresa en el cerebro y contiene residuos de poliglutamina Las disposiciones repetidas tienden a alargarse de una generacion a la siguiente anticipacion

Las bases se pueden lesionar por agentes alquilantes, agentes oxidantes y la luz
Agentes quimicos que causan la alteracin de las bases

luego de la replicacion del DNA Mutagenos especies de oxigeno reactivas como el radical hidroxilo Ejm guanina al reaccionar con agua produce 8oxoguanidina el cual se va a emparejar con adenina

 Desaminacion
Es cuando la adenina se modifica a hipoxantina y se

empareja con citosina Alquilacion la radiacion ultravioleta de la luz solar y la radiacion electromagnetica alta de los rayos x son mutagenos

Tipos de lesiones
Dao espontneo

A) Desaminaciones

A) B) Depurinacin

Dao producido por agentes externos

A) Dao producido por radiacin UV

B) Dao por alquilacin

Benzopireno

Guanina

Benzopireno-guanina

Sistemas de Reparacin DNA

O-6-metilguanina

REPARACIN POR ESCISIN

Son aquellos mecanismos de reparacin en los que se elimina la zona en la que se encuentra la lesin. Hay dos tipos de mecanismos de reparacin por escisin

REPARACION POR ESCISION DE BASE (BER)

Reparacion

de bases no habituales (Uracilo, hipoxantina, xantina),Bases alquiladas, Dimeros de pirimidinas en algunos otros organismos. DNA glucosilasas, cortan enlace N-glucosilo; dejando sitios AP o absicos. Uracilo DNA glucosilasa. Bacterias presentan 1 solo tipo. En el hombre 4 tipos: UNG (ms abundante), hSMUG1, TDG y MBD4.

Pasos del BER

Uracilo DNA glucosilasa, rompe el uracilo producto

de la desaminacion de C. AP endonucleasa, corta cadena que contiene sitio AP. El DNA es reemplazado por DNA polimerasa I El espacio vaco es sellado por DNA ligasa

REPARACION POR ESCISION DE NUCLEOTIDO (NER)

Lesiones del DNA que producen importantes cambios

estructurales, como dmeros de Pirimidina. Este mecanismo de reparacion es la principal via de muchos tipos de lesiones de ADN. Como los dmeros de Timina, fotoproducto 6-4, benzopireno-guanina (por efecto al humo del cigarrillo).

Pasos del NER

Excinucleasa. Enzima multimerica que hidroliza 2

enlaces fosfodiester. En Bacterias escinde de 12- 13 nucleotidos. En humanos de 27-29 nucleotidos. ABC excinucleasa. 3 subunidades (UvrA, UvrB y UvrC). DNA polimerasa I. DNA ligasa

NER en Bacterias

Los pacientes de xeroderma pigmentosa (XP). son extremadamente sensibles a la luz solar (sufren quemaduras abundantes en su piel, desarrollan melanomas, Tienen mutaciones en genes implicados en vas de NER Hay 7 genes implicados: XP (A G). En dmeros de timina, la XP A reconoce dicha lesin, entonces se introduce una helicasa TFII y se va abriendo el DNA en la zona adyacente a la lesin. XP G y XP F van cortando y eliminando la zona de la lesin. Se libera el oligo (23-24 nts) y RFC coloca la pinza PCNA para que la DNA polimerasa rellene el hueco y la ligasa selle el nick (en esencia es lo mismo que ocurre en E. coli).

Sistemas eucariticos responsables del mecanismo de reparacin por escisin de nucletidos (NER)

REPARACION DE APAREAMIENTOS INCORRECTOS (MMR)

Los errores que comete la DNA polimerasa dan lugar a

desapareamientos de bases, as si a una G por error se le enfrenta una A, aunque son bases normales, no lo es su apareamiento, (mismatch: bases desapareadas). En condiciones normales la actividad exonucleasa asociada a la polimerasa evita los desapareamientos, pero si no lo hace hay que eliminarlo antes de que la banda se replique, ya que si no, la mutacin quedara fijada

 En E. coli existe un grupo de genes llamados Mut,

implicados en la eliminacin de estos desapareamientos (si hay mutantes en estos genes Mut se produce una tasa de mutacin ms elevada de lo normal). El sistema de E. coli usa un reparisoma formado por las siguientes protenas:

Modelo para las primeras etapas de reparacin de apareamientos incorrectos

Discriminacion de hecbra por

metilacion de A , por la Metilasa Dam. En secuencias 5 GATC. Mut S y Mut L forman complejo en el apareamiento incorrecto. La cadena es pasada a travs de este complejo hasta encontrar a la MutH. La Mut H quien corta la hebra no metilada, en la secuencia G (del GATC en el lado 5)

Finalizacin de la reparacin de apareamientos incorrectos

REPARACION PROPENSA AL ERROR

Reparacin por sntesis de translesin trans lesion synthesis (TLS) Qu ocurre si la DNA pol de replicacin encuentra una lesin, dmero de T o un sitio AP, que no ha sido reparada?

Acta un mecanismo de seguridad que permite que la maquinaria de replicacin se salte by pass estos sitios de lesin

Este sistema es muy propenso a cometer errores, pero evita que un cromosoma se replique de manera incompleta

Polimerasas de translesin: DNA polimerasas

E. Coli

Sintetizan DNA a travs del sitio de la lesin

Son dependientes de molde

Incorporan nucletidos de una manera independiente de apareamiento de bases, por eso cometen errores con frecuencia

Causas de rotura de doble hebra

Radiaciones ionizantes (rayos g, rayos X) Especies de oxgeno reactivas Quimioterpicos (bleomicina)

Sndrome de Bloom Enanismo

Fotosensiblidad cutnea
Predisposicin a mltiples neoplasisas:

carcionomas, leucemias y linfomas. Mltiples alteraciones cromosmicas Se debe a una mutacin del gen BS (c. 15q26.1)

Ataxia Telangiectasia
Se debe a una mutacin en el gen ATM (C. 11Q22.3). Telanglectasias.

Predisposicin al cncer.
Acompaado de la diabetes mellitus. Incurable y presistente.

Anemia de Fanconi Pequea estatura, defectos en

huesos (hiper- hipo pigmentacin de la piel),hipersensibilidad al oxgeno. Leucemias, tumores cutneos. Alteracin del sistema nervioso central.

Xerodermarecesiva. pigmentoso (XP) Enfermedad gentica

Defecto

el proceso de reparacin por escisin de nucletidos(NER). Los pacientes no puede remover segmentos de DNA daados por la radiacin ultravioleta. Ocasiona la aparicin de un gran nmero de manchas pigmentadas de color oscuro. Riesgo elevado de desarrollar cnceres de piel letales y desfigurantes.

en

Xeroderma pigmentosoel(XP) Descrito, por primera vez, en 1863 por dermatlogo

hngaro Moritz K. Kaposi. Algunos aos ms tarde pas a denominarlo xeroderma pigmentosum, al describir 6 nuevos casos en donde destac la pigmentacin asociada a la atrofia. En 1932, De Sanctis y Cacchione, observaron la existencia de anomalas neurolgicas asociadas al cuadro de XP En 1968, Cleaver estableci el origen molecular del XP, al comprobar la existencia de una anomala en los procesos de reparacin del ADN en cultivos de fibroblastos de pacientes con XP irradiados con luz ultravioleta.

Pruebas diagnsticas ms habituales para la deteccin de XP

Hipersensibilidad celular a la radiacin ultravioleta.- Exposicin de

un cultivo de clulas a una dosis de radiacin ultravioleta. Esta tcnica se ha llevado a cabo utilizando fibroblastos de la piel. Sntesis no planificada de ADN (unscheduled DNA synthesis, UDS).- mide la accin combinada de endonucleasa, exonucleasa y polimerasa del sistema de reparacin de nucletidos por escisin. Las clulas son irradiadas con radiacin ultravioleta y posteriormente incubadas en un medio que contiene timidina marcada radiactivamente. Reactivacin celular en el husped.- se utiliza un plsmido no replicativo que contenga un gen cuya correcta expresin sea fcil de detectar . El plsmido, irradiado y daado con radiacin ultravioleta, se transfecta en la clula humana cuya capacidad de reparacin se pretende determinar.

Sndrome de Cockayne(CS)
Con patrn de herencia autosmico

recesivo. fue nombrado por Edward Cockayne, mdico britnico quien en 1933 lo describi por primera vez. Personas afectadas tienen una sensibilidad a la luz solar, baja estatura, alteraciones del desarrollo y envejecimiento prematuro. Su causa son las mutaciones en los genes ERCC6 ERCC8.

Tipos de Sndrome de Cockayne

El tipo I.- Es el clsico, el feto tiene un crecimiento normal

que se ve saboteado por anormalidades en los primeros dos aos de vida, tales como el deterioro de la visin, el odo y el sistema nervioso central y perifrico. Esta degeneracin progresiva conduce hacia la muerte, sea en la primer o segunda dcada de vida.
El tipo II.- Tambin llamado connatal, tiene una esperanza

de vida hasta los siete aos.

El tipo III.- Es menos frecuente todava, de aparicin tarda

y ms suave que los anteriores.

 Transtorno autosmico recesivo.

Caracterizado por una deficiencia de azufre,

Tricotiodistrofia (TTD)

cabellos quebradizos, etc. La mayoria de los pacientes con ticrotiodistrofia tiene un defecto en XPD (ERCC2). Algunos presentan mutaciones en XPB(ERCC3) y TTDA(TBF5), genes que son componentes del factor de transcripcin TFIH que regula tanto la reparacin del DNA como su transcripcin. La tricotiodistrofia fotosensitiva puede ser causada por la mutacin de por lo menos 2 genes separados: PROTENA ERCC2 y ERCC3. La tricotiodistrofia no-fotosensitiva es causada por la mutacin en el gen TTDN1.