USO Y CALIBRACIÓN DE MICROPIPETAS

INTRODUCCION

Las micropipetas son uno de los instrumentos mas utilizados en las diversas técnicas de los
laboratorios ya sean de biología molecular o microbiología, para la absorción y medición de
pequeños volúmenes de líquidos. Presentan diferentes puntas desechables estériles para la
medición de volúmenes. Para facilidad en la manipulación, existe una codificación por
color de la punta para cada rango de volumen:

Existen micropipetas manuales de todo tipo, en las cuales el volumen se fija girando un
tambor en la parte superior, el cual se encuentra conectado a un sistema analógico que
precisa el volumen que se quiera captar. Otras micropipetas son automáticas, un sistema
más moderno empleando un mecanismo digital, lo que las hace más sensibles en su
medición. A su vez se pueden distinguir micropipetas simples, las cuales solamente toman
una sola punta, y las multicanales, que permiten la incorporación de múltiples puntas (por
lo general de 8 o 12), absorbiendo el mismo volumen en todas ellas, y que son ideales para
múltiples muestras en procedimientos en paralelo.

Antes de usar una micropipeta es fundamental tener en cuenta las siguientes normas de uso:

- Hay que revisar que la micropipeta sea la del volumen indicado, observando la
ventana de volumen que esta en el mango de la micropipeta.
- Es fundamental no sobrepasar el límite de volumen por ejemplo para las
denominadas P20 no se debe pasar de 20 microlitros, y tampoco no se debe
disminuir a menos de 0,5 microlitros, de ser asi fácilmente se descalibra e incluso
puede dañarse.
- Hay que tener en cuenta que tipo de puntas desechable utiliza la micropipeta
ayudandose del código de color, de esta manera se evita que la micropipeta se
contamine y en su defecto se dañe.
- La temperatura de los líquidos debe estar entre 15 y 40 º C.
- No utilizar la micropipeta con líquidos que afecten el polipropileno.
- No utilizar líquidos que estén emitiendo vapores.
Procedimiento de uso micropipeta manual:

- Colocar el pulgar sobre el émbolo de pipeteado. Oprimir el émbolo. Cuando el

émbolo se presiona sentirá un punto de resistencia. Éste es el primer “alto” o "tope".
Si continúa presionando encontrará un punto donde el émbolo ya no se mueve hacia
abajo, este corresponde al segundo “alto” o "tope".
- Una vez fijado el volumen y ya con la punta desechable colocada, se presiona el
embolo hasta primer tope.
- Seguido y sin soltar el embolo, se hace la inmersión de la punta en el líquido. Nunca
permita que el liquido llegue hasta la superficie de la micropipeta.
- Posteriormente se suelta lentamente el embolo, lo que hace que el espacio del
embolo sea ocupado por el liquido. No suelte el émbolo abruptamente, al permitirlo
causará que el líquido pueda salpicar dentro de la punta produciendo volúmenes
inexactos y generando contaminación de la pipeta. Una vez el émbolo se haya
desplazado hasta arriba mantenga la micropipeta en el líquido durante un segundo
esto evita que se aspire aire en la parte final.
- En el recipiente donde se verterá el volumen tomado se aplica presión hasta el
segundo tope con el fin de que se transfiera todo el volumen del liquido. Haga este
procedimiento a una velocidad moderada, hacerlo muy rápido hará que queden
gotas de muestra en la punta.
- Finalmente, de descarta la punta desechable con el botón eyector en un contenedor
de desechos.
OBJETIVO
Adquirir destrezas en la manipulación de las micropipetas. Determinar la exactitud
precisión y calibración.

MATERIALES
- Micropipetas de 0,5-10ul, 20-200ul, 100-1000ul
- Puntas desechables para cada rango de volumenes
- Recipientes para descarte de puntas
- Balanza analítica
- Cajas de petri
- Agua destilada
- Glicerol

PROCEDIMIENTO
Vamos a revisar el porcentaje de exactitud (E%) y el coeficiente de variación (CV%) para
cada micropipeta. Usaremos al menos dos volúmenes diferentes para cada micropipeta.
Para la micropipeta P10 revisar 1ul y 10ul. Para P20 revisar 3ul y 20ul, P200 revisar los
volúmenes de 60 y 200 μL. Para P1000 revisar los volúmenes de 300 μL y 1000 μL.

1. Seleccionar la micropipeta del volumen indicado

2. Colocar la tapa de la caja de petri en la balanza y tarar a cero
3. Colocar la punta adecuada para la micropipeta: tomar sin tocar con la mano
4. Pesar y registrar en miligramos.
5. Repetir medición cinco veces y recordando ajustar a cero en cada repetición

Cálculo de la exactitud (E%) y del coeficiente de variación (CV%)

Los valores de las pesadas del control gravimétrico son sólo la masa del volumen
dosificado. Para obtener el volumen real se debe efectuar un cálculo corrector. El cálculo
corrector se realiza por multiplicación del valor medio de los valores de las pesadas (x) con
el factor Z (mL/g que es lo mismo que μl/mg). El factor Z (1/densidad) permite convertir
una masa en un volumen, tomando en cuenta la densidad del líquido, temperatura y
presión atmosférica. Por ejemplo, para el agua destilada a 21,5 ° C y 1013 mbar (hPa), Z es
igual a 1,0032 μl/mg. A continuación se presenta una tabla de valores Z a diferentes
temperaturas:
*Para tunja la presión atmosférica corresponde a ~101.3kPa

Valor nominal
Vnominal = Volumen controlado/Z

Volumen medio (V)

Exactitud (E%)

Desviación estándar (S)

Coeficiente de variación
Límites de tolerancia
Si los valores calculados de exactitud (E [%]) y coeficiente de variación (CV [%]) son
menores que los valores de tolerancia o iguales a éstos, entonces el aparato está en
orden.

Límites de tolerancia
Volumen (μL) E% nominal CV% nominal
5-10 1 0.8
20-50 0.7 0.4
100-1000 0.5 0.2

P10 P20 P200 P1000

Vol1 Vol2 Vol1 Vol2 Vol1 Vol2 Vol1 Vol2
1
2
3
4
5
Ẋ
Ṽ
E
S
CV

PREGUNTAS

- Defina y explique exactitud

- Defina y explique precisión
- Defina y explique reproducibilidad
- Defina y explique repetitividad

REFERENCIAS

Protocolo basado en:

Jorge José Comas Angarita. https://ensayosytrabajos.com/protocolo-para-el-uso-de-
micropipetas/
Jorge contreras. https://jorge-contreras.webs.com/guia-El%20uso%20de%20micropipeta-
BM.pdf