BIOMETRA HEMTICA DIVISIN

Cuenta de eritrocitos

FRMULA ROJA

Hemoglobina Hematocrito

FRMULA BLANCA

Cuenta de leucocitos Conteo diferencial

FRMULA ROJA

CUANTIFICACIN DE LA HEMOGLOBINA
MTODO: CIANOMETAHEMOGLOBINA Fundamento:

La sangre se diluye con una solucin de ferricianuro potsico y cianuro de potasio (Reactivo de Drabkin) . La Hb se oxida a metahemoglobina por el ferricianuro potsico. El cianuro potsico a continuacin convierte la metahemoglobina a cianometahemoglobina.

PROCEDIMIENTO

1. Con la pipeta de sahli medir 0.02 mL de sangre heparinizada. 2. Limpiar la pipeta y transferir a 5 ml de reactivo de Drabkin. 3. Descargar el contenido de la pipeta enjuagando por succin varias veces.

4. Por burbujeo homogenizar la sangre en el reactivo.

5. Reposar la muestra 10 minutos .

6. Leer la absorbancia en el espectrofotmetro a 540 nm utilizando como blanco el reactivo de Drabkin. Clculos: Hb = Absorbancia X 36.8 = g de Hb/dL

Valor normal: Hombres: Mujeres: 13.5 14.5 g/dL 12.5 - 14 g/dL

HEMATOCRITO
CONCEPTO: Es la cantidad de eritrocitos centrifugados que ocupa un volumen determinado de sangre entera expresado como porcentaje CLASIFICACIN a) Microhematocrito b)Macrohematocrito

Microhematocrito

Paso 1. llenar el capilar partes Con sangre heparinizada

Paso 1. limpia el capilar y sella el extremo del capilar con el anillo coloreado con calor o plastilina.

Paso 3. Equilibrar el capilar por duplicado en la microcentrfuga con los extremos sellados hacia fuera y centrifugar 2500 rpm durante 10 min.

Microhematocrito

Plasma Escala de hematocrito

Leucocitos y plaquetas Eritrocitos

Paso 4. Obtener el resultado utilizando una regla o bien haciendo uso del lector para hematocrito.

Macrohematocrito
100

100

50 40 30 30 20 10 0

Paso 2. Centrifugar el tubo a 3000 rpm durante 30 min.

Sacar el tubo y leer a partir de 0 hacia arriba, cada lnea representa el 10 %.

Paso 1. Lenar el tubo de Wintrobe con ayuda de una pipeta pasteur de punta larga hasta la marca de 100

Interpretacin del hematocrito

Normal
(Hematocrito= 45%)

Anemia
(Hematocrito= 30%)

Policitemia
(Hematocrito= 70%)

Deshidratacin
(Hematocrito= 70%)

Valor normal: Hombres: 41-44% Mujeres: 38 - 42 %

Conteo de eritrocitos
Reactivos
Lquido de Hayem Fundamento

La tcnica se basa en diluir la sangre con lquido de HAYEM en porciones exactas. El lquido de Hayem es una solucin compuesta por sales, las cuales hacen que la solucin obtenga el grado de isotnica permitiendo que los eritrocitos se mantengan completos, mientras que los leucocitos se lisan por accin de la concentracin de la solucin al penetrar al ncleo.

Material

Pipeta de thoma para glbulos rojos Cmara de Neubauer o hemocitmetro

Contador de clulas microscopio

Procedimiento

Paso 1. Llenar la pipeta con sangre a la marca de 0.5 limpiar la punta de la pipeta y aforar con lquido de Hayem a la marca de 101.

Paso 2. Agitar la pipeta por dos minutos de forma manual o 1 minuto con un mezclador.
Paso 3. Eliminar las 4 primeras gotas.

Paso 4. Cargar la cmara de Neubauer colocando el cubrehemocitmetro de forma vertical sobre la cmara y tocar a este con la punta de la pipeta hasta llenar.

Paso 5. Dejar reposar por 2 minutos.

Paso 6. Colocar la cmara en el microscopio y localizar la cuadrcula

Clculos

Si se considera que el retculo central tiene 400 cuadritos se realizar el siguiente clculo.

N x 200 x 10 x 400 = N x 10,000 80

N= nmero de eritrocitos contados 200= factor de dilucin 10= correccin x altura de la cmara Valores de referencia: Hombres 5.0 - 6.0 x 106 mm3 Mujeres 4.5 - 5.5 x 106 mm3

Velocidad de sedimentacin globular VSG

La VSG es la cantidad de milmetros que los eritrocitos sedimentan en 1 hora

La VSG es til para monitorear enfermedades inflamatorias

Valor normal

Hombres Mujeres

0 10 mm/hr 0 15 mm/hr

Fundamento:
La membrana de los eritrocitos tienen una carga electrosttica negativa (potencial z), esta carga forma fuerza de repulsin entre ellos, sin embargo, con el tiempo acaban depositndose debido a la fuera de gravedad en el fondo del tubo.

En el proceso de sedimentacin se distinguen tres fases: 1.-Fase inicial o de agregacin, dura diez minutos. 2.-Fase de sedimentacin rpida: dura 40 minutos. 3.-Fase final de concentracin: se observa despus de la segunda hora.

Procedimiento
Paso 1. Obtener sangre con anticoagulante (EDTA)
Paso 2. Llenar con una pipeta pasteur con bulbo el tubo de Wintrobe a la marca de 0 evitando que se formen burbujas. Paso 3. Dejar reposar sobre una gradilla los tubos por un tiempo de 1 hora Paso 4. Leer la escala de arriba hacia abajo y reportar el resultado. Valores normales: Nios: 0 - 10 mm / hr

Adultos:

0 - 15 mm / hr

NDICES DE WINTROBE

(VCM) (HCM) (CMHC)

Volumen corpuscular medio Hemoglobina corpuscular media Concentracin media de Hb corpuscular

Volumen corpuscular medio (VCM)

Es el volumen medio de los eritrocitos expresado en femtolitro (fL)

Hcto VCM x10 eritrocitos

Valor Normal: 80 - 103 fL

Interpretacin: Si VCM es menor a 80 hay una microcitosis Si VCM es mayor a 100 hay una macrocitosis

Concentracin de la Hb corpuscular media CHbCM Es la concentracin media de la hemoglobina en cada eritrocito expresado en gramos por decilitro (g/dl)

CHbCM

Hb x100 Hcto

Valor Normal:

32 - 37 g/dL

Interpretacin: Si es menor a 32 hay una hipocromia Si es mayor a 37 hay una hipercromia

Hemoglobina corpuscular media (HCM)

Es el peso medio de la hemoglobina en un eritrocito expresado en picogramos (pg)

Hb HCM x10 eritrocitos

Valor Normal:

28 - 32 pg

Indices de Wintrobe y anemias relacionadas

VCM (fL)

CHbCM (g/dl)

Morfologa del eritrocito Microcitico Hipocrmico

Presente en:

Menor a 80

Menor de 32

Anemia por deficiencia de hierro, talasemia, anemia sideroblstica Anemia hemoltica, leucemia. Anemias megaloblsticas

80 - 100

32 - 36

Normoctico Normocrmico

Mayor a 100

32 - 36

Macroctico Normocrmico

Frmula Blanca

Conteo de leucocitos Conteo diferencial

Clasificacin de Leucocitos

Por presencia o ausencia de Granulocitos

Granulocitos Agranulocitos

Segn su forma del ncleo

Polimorfonucleares mononucleares

Granulocitos o Polimorfonucleares

Neutrfilos Eosinfilos Basfilos

Agranulocitos o mononuclares

Monocitos linfocitos

NEUTRFILOS 1- neutrfilo en banda 2- neutrfilos segmentados

segmentado

banda

Presentan divisiones de sus ncleos en lbulos en un nmero que va de 3 a 5. Si es mayor el nmero de divisiones nucleares se habla de Neutrfilos hipersegmentados

EOSINFILOS Obsrvese el ncleo en forma de anteojo y los grnulos gruesos del citoplasma.

Los Eosinfilos tienen actividad fagoctica, es decir que "se comen" a los agentes extraos al organismo

Es una clula fcilmente identificable por la presencia de grandes grnulos color naranja en su citoplasma. El eosinfilo maduro es redondeado, con un dimetro entre 12 a 17 m y un ncleo generalmente bilobulado

Basfilo Posee un ncleo en forma de lbulos que muchas veces cuesta verlo por los grnulos gruesos del citoplasma

Linfocitos normales. El ncleo es redondo y no tan comprimido se observa un reborde basfilo (azulado) en el borde del citoplasma celular.

Monocitos son clulas fagocticas con gran capacidad bactericida. Ante estmulos de sustancias qumicas siguen a los neutrfilos en la reaccin inflamatoria

Clula ms grande en sangre perifrica

Reactivos Lquido de Turk Fundamento

La tcnica se basa en diluir la sangre con lquido de Turk, que es una solucin hipotnica de cido actico que destruye a los eritrocitos, el azul de metileno o violeta de genciana permiten reconocer fcilmente el lquido y observar mejor a los glbulos, a los que tie ligeramente.

Procedimiento Paso 1. Llenar la pipeta con sangre a la marca de 0.5 limpiar la punta de la pipeta y aforar con lquido de Turk a la marca de 11. Paso 2. Agitar la pipeta por dos minutos de forma manual o 1 minuto con un mezclador.

Paso 3. Eliminar las 4 primeras gotas.

Paso 4. Cargar la cmara de Neubauer colocando el cubrehemocitmetro de forma vertical sobre la cmara y tocar a este con la punta de la pipeta hasta llenar.

Paso 5. Dejar reposar por 2 minutos.

Paso 6. Colocar la cmara en el microscopio y localizar la cuadrcula

Clculos
N x 20 x 10 = N x 50 4

N= nmero de leucocitos contados 20= factor de dilucin 10= correccin x altura de la cmara 4= nmero de cuadrculas contadas Valores de referencia: 5,000 a 10,000

Conteo Diferencial
El extendido de sangre perifrica es muy importante ya que su utilidad consiste en poder observar y diferenciar la morfologa celular principalmente leucocitos por lo que para la prueba se utiliza la tincin de Wright.

Fundamento
El colorante de Wright est compuesto de azul de metileno y eosina, dos colorantes que de acuerdo a sus caractersticas qumicas tien a las clulas por su afinidad. La tincin depende del pH, el azul de metileno es bsico y tie componentes cidos como el RNA, la eosina es cida y tie componentes bsicos, se utiliza un buffer de fosfatos para amortiguar el pH de la tincin.

Materiales:
Colorante de Wright Buffer de Fosfatos pH 6.4

Portaobjetos limpios y sin grasa

Puentes de tincin Sangre con anticoagulante

Procedimiento:

Paso 2. Secar al aire el frotis

Paso 3. Colocar el frotis sobre un puente de tincin y adicionar colorante de Wright Paso 4. Esperar 3 minutos y adicionar solucin buffer, soplar a la tincin para homogenizar ambos reactivos. Paso 2. Secar al aire y observar con el objetivo de 100X con aceite de imersin

FROTIS SANGUINEO
Neutrfilo segmentado

Neutrfilo banda

VALORES NORMALES
Nmero total Leucocitos de 5.000 10.000 mm3

Neutrfilos
Segmentados

50-62 %
95 %

Baciliformes Juveniles
Mielocitos Mieloblastos Basfilos Eosinfilos Monocitos Linfocitos

1-2 x mm3 (5%) 0 x mm3

0 x mm3 0 x mm3 0-1 % 0-3 % 3-7 % 25-40 %