TEMA N° 07

Microscopía óptica

Docente: Dr. Jorge Guillermo Morales Ramos

Curso : Biología Celular y Molecular

COMPETENCIAS
• Reconoce las partes y componentes del microscopio
• Identifica los elementos de la nomenclatura de los lentes del microscopio
• Explica el funcionamiento del microscopio y su utilidad
• Valora el uso del microscopio en la formación académica, investigación,
citología y como elemento auxiliar en el diagnóstico
 Motivación

Analicemos
• Los nuevos microscopios permiten seguir el movimiento de
células dentro del organismo, visualizar las sinapsis entre
neuronas, ver la propagación del cáncer y seguir en vivo el
desarrollo de embriones.

• El desarrollo de la microscopia 3D, la superresolución y

la Light Sheet Microscopy (un tipo de microscopía que
ilumina las muestras con una lámina de luz) empujan a la
biología hacia nuevas preguntas.
• http://www.elmi2015.eu/scientific-program/
¿Porqué conocer sobre microscopía?

Los investigadores pueden

visualizar y analizar muestras con
alta resolución y precisión, lo que
les permite hacer nuevos
descubrimientos y avances en sus
respectivos campos.
 Microscopía

 Microscopía es el conjunto de técnicas y métodos destinados a

hacer visible los objetos de estudio que por su pequeñez están
fuera del rango de resolución del ojo normal.

 Robert Hooke (1665), se le atribuye el descubrimiento de la

estructura celular de los organismos.

 Anton Van Leeuwenhoek (1683), logró observar bacterias,

hongos y protozoos.

 Microscopía óptica (microscopía de luz clásica), consiste en

hacer pasar luz visible de una fuente ( (difractada, reflejada o
refractada en el sujeto de estudio) a través de lentes ópticos
simples o múltiples, para lograr una vista ampliada de la
muestra.
 Tipos de microscopio

1. Microscopio óptico:
1.1 Simple
1.2 Compuesto
- Microscopio de luz ultravioleta: Puede alcanzarse una mejor resolución que en el M.O.C. con luz visible.
Esta técnica posee la ventaja de que muchas sustancias estudiadas tienen bandas de absorción ultravioleta, con
lo que su observación microscópica no requerirá el uso de tinción.

- Microscopio de fluorescencia: Permite observar sustancias que emiten luz propia cuando son iluminadas
con una longitud de onda determinada. La muestra está marcada con colorantes fluorescentes (Fluorocromos).

-Microscopio de contraste de fase: La luz atraviesa la muestra con distintas velocidades en distintas
secciones. Esta técnica se utiliza para estudiar aquellas preparaciones de densidad homogénica y transparentes,
como son las de bacterias, células, etc.

2. Microscopio electrónico:
Emplea un haz de electrones en lugar de un haz de fotones. Se alcanzan niveles de aumento muy superior al
resto de microscopios.
• De barrido: Los electrones inciden desde arriba sobre la preparación
• De transmisión. El haz de electrones atraviesa el material que se
 Resolución, poder de resolución y límite de
resolución
• Resolución de un microscopio es la capacidad para ver dos puntos vecinos en el campo visual como entidades diferentes

• El poder de resolución de un microscopio es la capacidad del microscopio para entregar imágenes nítidas.

• El límite de resolución de un microscopio es la distancia mínima que debe existir entre dos puntos para que se puedan distinguir como
separados.

Instrumento Resolución Magnificación

óptico

Ojo humano 0,1 mm

Microscopio
0,2 μ 2 500
óptico

Microscopio
electrónico 0,1 nm 1 000 000
 Partes del microscopio
El microscopio óptico común está conformado por tres
sistemas: El sistema de iluminación, el sistema óptico y el
sistema mecánico

https://www.youtube.com/watch?v=ITNRdwbLil0
 Sistema Mecánico

Dentro del sistema mecánico se incluyen todos los elementos estructurales que dan estabilidad al microscopio y
mantienen los elementos ópticos correctamente alineados.

- Platina
- Ajustadores de platina
- Pinzas
- Brazo
- Base
- Revólver
- Tornillo macrométrico
- Tornillo micrométrico
- Tubo óptico
 Sistema óptico

Lente objetivo
El lente objetivo es la lente situada cerca de la muestra. Los
objetivos utilizados corrientemente son de dos tipos:
-Objetivos en seco.- se utilizan sin colocar alguna sustancia entre
ellos y la preparación, únicamente el aire.
-Objetivos de inmersión.- se utilizan colocando una sustancia
entre ellos y la preparación, por lo general, se emplea el aceite de
cedro.

Lente ocular
El lente ocular es la lente a través de la cual observamos la
muestra con el ojo. Los lentes oculares van montados en la parte
superior del tubo del microscopio. sus poderes de aumento van
desde 4x hasta 20x.
 Sistema óptico

La cantidad de aumentos se calcula multiplicando el aumento del ocular por

el aumento del objetivo que se está usando para observar la muestra.

Ejemplos:
Objetivo Ocular Aumento total
4x 10x 40x
10x 10x 100x
40x 10x 400x
100x 10x 1000x
 Sistema de iluminación
Elementos que reflejan, transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la
observación.
Foco o fuente de luz: es un elemento esencial que genera
un haz de luz dirigido hacia la muestra. Dirige los rayos
luminosos hacia el condensador.

Condensador: Lente ubicada debajo de la platina, es el

elemento encargado de concentrar los rayos de luz
provenientes del foco a la muestra.

Diafragma: es una pieza que permite regular la cantidad de

luz incidente a la muestra a través de una palanca lateral
giratoria.
Montaje de una preparación microscópica

https://www.youtube.com/watch?
time_continue=1&v=84WNT1zk3tY&feature=emb_logo
 Enfoque de una muestra
1. Conectar el microscopio
2. Colocar el portaobjeto que contiene la muestra sobre la platina de forma que
quede en el orificio central de la platina
3. Enfocar la preparación con el objetivo de menor aumento
4. Subir la platina usando el tornillo macrométrico y mirando la preparación
desde fuera hasta alcanzar el tope superior
5. Mirando por los oculares bajar lentamente la platina con el tornillo
macrométrico hasta conseguir ver el objeto lo más nítido posible
6. Ajustar el enfoque con el tornillo micrométrico hasta observar nítidamente la
muestra
7. Observar la preparación a mayor aumento cambiando de objetivo con un
simple giro del revólver (sin mover en ningún caso el macrométrico).
8. Conseguir nitidez ajustando solo el micrométrico https://www.youtube.com/watch?v=3o0XfkCHHoU
9. Recorrer la muestra moviendo el carril de desplazamiento de la platina
 Consejos prácticos
 Mantener apagada la luz del microscopio siempre que no se esté utilizando, la vida media de la bombilla es corta.

 Iniciar el enfoque con el objetivo panorámico.

 Girar el revólver y enfocar con el objetivo de menor aumento.

 Enfocar con el objetivo de mediano aumento.

 El uso del objetivo de mayor aumento (100x) requiere aceite de inmersión, sin la utilización de este aceite no se
podrá enfocar bien y existe una gran probabilidad de dañar la lente al rozar con el cubreobjetos.
 Limpiar el lente del objetivo de inmersión antes de su uso.

 Una vez enfocada la muestra procurar recorrerla con los tornillos de la platina iniciando en un extremo de la
lámina y terminando en el extremo opuesto.

 Realizar la limpieza adecuada del objetivo de inmersión una vez terminado el uso del microscopio..
Video: Uso del microscopio
USO DEL MICROSCOPIO

Link : https://youtu.be/M03MSo3M82g
GRACIAS
 Conclusiones y retroalimentación

Ideas importantes del tema tratado

1.) Es una herramienta de actividadinvestigativa

2.) Determina respuesta a la estructura.