UNIVERSIDAD DE SUCRE

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

DEPARTAMENTO DE FONOAUDIOLOGÍA
PRÁCTICA Nº3

MICROMETRÍA

OBJETIVOS

 Realizar cálculos o mediciones aproximadas de células y otras estructuras,

a través de estrategias microscópicas.
 Adquirir destreza manual y matemática para calcular el diámetro óptico en
varias unidades microscópicas.
 Calcular el área de algunas células y de estructuras celulares en forma de
prácticas y por concepto matemático.

INTRODUCCIÓN

Al observar células u objetos microscópicos, tenemos una imagen clara de ellos,

pero no la idea real de su tamaño, ya que solo sabemos que se encuentran
aumentados n veces, según el ocular y el objetivo utilizados. En algunos campos
de la biología es indispensable saber el número de células por campo óptico, el
tamaño de cada una de ellas, el tamaño aproximado de un determinado
microorganismo etc, datos que permiten deducir valores de importancia para una
determinada investigación.

La parte que se encarga de averiguar el tamaño aproximado de un objeto se

denomina micrometría.

Que es micrometría Es la parte de la microscopia que se encarga de averiguar el

tamaño aproximado de un objeto.

Con el microscopio es posible además de aumentar la imagen de un objeto,

efectuar mediciones, estimando el tamaño de una célula o una población de
microorganismos.
La mayoría de los microorganismos y estructuras que se observan en un
microscopio son tan pequeñas que para poder medir se deben utilizar medidas
reducidas tales como: Armstrong (A°), milimicra (mu), micra (u), milímetro (mm),
las equivalencias son:

1mm=1000u

1u=1000mu

1mu>10A°

El poder de resolución es la capacidad que tiene el microscopio de resolver o

distinguir dos objetos separados por una distancia mínima. Mientras menor sea la
distancia que puede medirse entre dos puntos en un campo microscópico mayor
es el poder de resolución del microscopio.

La capacidad de resolución depende del tipo de luz que se emplea, los

microscopios de luz (que son los que nosotros utilizamos) nos permiten la
resolución de objetos de tamaño inferior a la mitad de la longitud de onda de luz
utilizada, por lo tanto los microscopios ópticos que utilizan luz visible con
longitudes de onda 390 del violeta al rojo, con 780 nanómetros (nm), permiten
resolver objetos separados por distancias inferiores a 250mm o 0,25 micras.

El poder de resolución se mide a través de la distancia límite (do) que se calcula a

partir de la siguiente formula en donde:

d.o = λ/An en donde:

Λ= longitud de onda de luz utilizada

AN= Abertura numérica del objetivo

An= Abertura numérica del condensador

Do = lamda entre AN+an

En la práctica AN = an, por ello la formula se puede escribir así:

d.o=λ/2AN

do= λ/2 ¡ sen θ/2

Siguiendo: AN = ¡ sen θ/2

En donde 1= índice de refracción del medio que rodea la lente. Si el aire es el

medio circundante ¡ = 1; si es aceite de inmersión el medio circundante ¡ = 1.56

θ/2 = que es la mitad del ángulo de entrada del cono de luz que llega al
condensador. Cuando no se utiliza aceite de inmersión entre el portaobjeto y el
objetivo, la abertura numérica puede aumentarse desde: 0.6 cuando el aire en el
medio es circundante; y hasta el 1.3 cuando es aceite y con ello se aumenta el
poder de resolución. Con el siguiente ejemplo se ilustra esta situación.

Observación sin aceite de inmersión

Lamda = 500mm 0 555mm

NA = 0,6

Do = 500nm/2x0.6

do = 192.3nm Mayor resolución

Observa con aceite de inmersión Lamda = 500 o 555nm

Do 500 entre 2 x 1,3

do = 192.3nm Mayor resolución.

PODER DE AUMENTO O DE MAGNIFICACIÓN DEL MICROSCOPIO

Es la capacidad que tiene el microscopio de aumentar el tamaño de los objetos
que han sido resueltos, esta determinado por las lentes objetivos y oculares y es
independiente del poder de resolución.

El poder de aumento se obtiene de multiplicar el número de aumentos que

determine el ocular por aquellos que determinan separadamente cada uno de los
objetivos. En el microscopio compuesto el aumento o magnificación es expresado
en diámetros. Así por ejemplo un ocular 10X y un objetivo 10X podrían dar un
aumento total de 100 diámetros. Calcula el poder de aumento utilizando el
numero de aumentos de cada objetivo y ocular con los que estás trabajando.

MATERIALES

Microscopio compuesto
Portaobjetos*
Cubreobjetos*
Papel milimetrado*
Cuchilla*
Cebolla blanca (Allium cepa)*
Azul de metileno

*Lo traen los estudiantes

PROCEDIMIENTO

1. MEDICIÓN DEL DIÁMETRO DEL ÁREA OCULAR (CAMPO ÓPTICO) Y

RELACIÓN CON EL PODER DE AUMENTO.

Tome un pedazo de papel milimetrado de 1cm 2 y realice un montaje siguiendo las

técnicas enseñadas en el primer laboratorio. Enfoque con aumento de 3.2X, haga
coincidir el lado de uno de los cuadros con el límite del campo óptico y el otro lado
con el diámetro horizontal del campo.

Límite del campo óptico

Diámetro horizontal del campo

 Figura 1. Ilustración de montaje y observación del papel milimetrado con el objetivo de
3.2X.

Observe y cuente el número de cuadros que hay en el diámetro horizontal

del campo óptico.

Repita el paso anterior con el aumento de 10X. En este caso observará un cuadro
y un pedazo del otro (fig. 2), es decir, conocerá 1mm y un pedazo X; para conocer
el valor de este último fije mentalmente la dimensión de X, transpóngalo
imaginariamente sobre un cuadro y calcule a cuánto equivale, un dato muy
aproximado, debe confirmar con su profesor.

Figura 2. Ilustración del papel milimetrado con el objetivo de 10X.

Una vez conocidos los diámetros en milímetros convierta estos valores a micras,
teniendo en cuenta las siguientes equivalencias:

1µ (micra) = 1x10-6 cm ó 1x 10-3 mm = 0.001mm

Es posible que observe que la medición del diámetro con mayores aumentos
ofrezca una mayor posibilidad de error con relación a la observación con menor
aumento; para solucionar esto se utiliza una fórmula matemática que relaciona
diámetro y poder de aumento.

A1 d 2
= Esto indica que la relación es inversamente proporcional.
A2 d1
Donde: A1 = menor aumento (capacidad aumento objetivo)
A2 = mayor aumento (capacidad aumento objetivo)
D1= diámetro del campo con menor aumento
D2= diámetro del campo con mayor aumento

 Calcule con base en la fórmula anterior el diámetro para los objetivos de

40x y 100x, éste valor obtenido en milímetros conviértalo a micras.
 Con base en los resultados obtenidos describa como es el diámetro en 40x
con relación al de 10x, explique si es el doble, la mitad, la tercera parte, el
triple o la cuarta parte.

2. MEDICIÓN DE CÉLULAS Y ESTRUCTURAS

Realizar un montaje con epidermis de cebolla (Allium cepa), (muestra de la parte

interna), enfoque con el objetivo de 10X y seleccione una célula que tenga la
forma geométrica mejor definida, haga coincidir su largo con el diámetro horizontal
del campo óptico, y que uno de sus extremos toque el límite del campo, así:

4X 10X

Figura 3. Preparación de epidermis de cebolla y la disposición aproximada que se debe

tener sobre el diámetro horizontal del campo óptico.
Fuente: http://myhandsonscienceblog.blogspot.com.co/2014/04/pictures-of-our-onion-cell-lab.html

Si la célula es lo suficientemente larga se puede facilitar la medida.

 Para medir la longitud de varias células que se encuentran en el diámetro

del campo óptico se promedia la longitud de dichas células, evitando así
medir cada célula:
 diámetro campo óptico
Longitud celular =
Nº células contadas en el diámetro horizontal del campo

 Para estimar el ancho de las células, se procede a contar las hileras de

células hay a lo largo del diámetro vertical, y se promedia dividiendo por el
número de hileras existentes; así:

diámetro campo óptico

Ancho celular=
Nº de hileras verticales de células

 Conocidas las dimensiones de la célula se puede calcular el área

aproximada de la misma:

Área del rectángulo = b x h; donde b= base y h= altura.

Entonces área celular = Longitud x ancho estimado.

CUESTIONARIO

1. Dos microorganismos A y B tienen longitudes de 50µ y 100µ

respectivamente. ¿Cuál de los dos se verá aumentado mayor número de
veces al observarlo en un microscopio con un ocular de 6X y un objetivo de
10X.
2. Convierta 0.25mm a µ, Å y 1300Å a mµ, µ y mm.
3. El diámetro del campo visual de un microscopio es de 155 µ cuando se
observa con un ocular de 10X y un objetivo de 100X. ¿Cuál será el
diámetro del campo visual si se observa con un objetivo de 40X y el mismo
ocular?
4. Si el diámetro del campo visual de un microscopio con objetivo de 10X y
ocular de 100X es de 1600 µ. ¿Cuál será el área de ese campo visual?