FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

E.A.P. MEDICINA HUMANA

BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR

PRÁCTICA N° 3: MICROSCOPÍA / CÉLULA PROCARIOTA Y
EUCARIOTA

DOCENTE: MAG. ELIZABETH ULLOA BACA

2021 - 1
 PRÁCTICA Nº 3

- MICROSCOPÍA –
- CÉLULA PROCARIOTA Y EUCARIOTA -

MICROSCOPÍA
I. MARCO TEORICO

El microscopio es uno de los instrumentos más versátiles usado por la ciencia. Este
instrumento en virtud de las leyes de formación de imágenes ópticas aumentadas a
través de lentes convergentes permite amplificar la imagen de un objeto que no
puede ser identificado a simple vista. La imagen puede ser observada directamente,
fotografiada o percibida por fotocélulas u otros receptores, el enfoque revela gran
cantidad de información. Las principales características del microscopio son su
aumento y poder de resolución, permitiendo examinar detalles de la estructura de
una muestra.

La trayectoria que sigue un haz de luz a través del microscopio

es la siguiente: El haz luminoso procedente de la lámpara pasa directamente a
través del diafragma al condensador, gracias al sistema de lentes que posee el
condensador, la luz es concentrada sobre la preparación a observar. El haz de luz
penetra en el objetivo y sigue por el tubo ocular hasta llegar al ocular, donde es
captado por el ojo del observador

La imagen que se observa

a través del microscopio es
una imagen virtual,
invertida y aumentada.

Se denomina "campo del

microscopio" al círculo
visible que se observa a
través del microscopio,
también podemos definirlo
como la porción del plano
visible observado.

Si el aumento es mayor, el campo disminuye, lo cual quiere decir que el campo es

inversamente proporcional al aumento del microscopio.
 PROPIEDADES DEL MICROSCOPIO

▪ PODER DE AMPLIFICACIÓN: Capacidad de aumentar una imagen varias veces

su tamaño natural.

▪ PODER DE RESOLUCIÓN: Es la medida de la cantidad de detalle que ofrece la

imagen formada por el objetivo. La calidad de un microscopio reside en su poder
separador (Límite de Resolución), es decir en la posibilidad de distinguir a través
del instrumento dos puntos muy próximos. El ojo humano puede diferenciar 2
puntos si estos están separados más de 0.075 mm, entonces el poder de
resolución del ojo humano es de 0.075 mm. El poder de resolución del
microscopio óptico es de 0.275 micras y esto está limitado por la longitud de onda
de luz utilizada.
▪ LÍMITE DE RESOLUCIÓN: Poder del sistema óptico para mostrar 2 puntos
separados a muy pequeña distancia, se expresa en micras (μm), los valores
límites son 0.5 - 0.275 μm. El ojo humano tiene límite de resolución de 0.075 mm
(200 μm )
▪ PODER DE DEFINICIÓN: Cualidad del objetivo de formar imágenes claras y de
contorno nítido.
▪ AUMENTO FINAL O POTENCIA: Es igual al producto del aumento del ocular por
el aumento del objetivo.
▪ ABERTURA NUMERICA (A.N.) Es una constante de cada lente y mide su calidad
para concentrar luz. Es igual al índice de refracción del medio interpuesto (n)
multiplicado por el seno del semiángulo de abertura (Sen θ).

II. COMPETENCIAS:

Al finalizar la sesión de práctica, los alumnos Identifican las partes del

microscopio compuesto y conocen el uso y manejo adecuado del microscopio
óptico compuesto.

III. MATERIALES Y EQUIPOS:

- Se utilizará un software de simulación para el uso y manejo del microscopio

- Videos elaborados por los docentes
- Fotos e imágenes de microscopios

IV. PROCEDIMIENTO:

1. Reconocimiento de las partes del microscopio óptico.

Para el reconocimiento de las partes del microscopio se usarán los videos

realizados por los docentes y se proyectarán imágenes del microscopio
señalando cada una de las partes e indicando las características y funciones de
cada una de ellas, tal como se describe a continuación:
Manual de Prácticas
Biología Celular y Molecular

El microscopio óptico es un instrumento científico que permite la observación de

estructuras que el ojo humano no llega a visualizar. Comprende los siguientes
sistemas:

a. Sistema soporte
b. Sistema óptico o de aumento
c. Sistema de iluminación
d. Sistema ajuste

a) SISTEMA SOPORTE: Tiene como misión sostener a la parte óptica y

permitir los desplazamientos necesarios para el enfoque y está constituido
por lo siguiente:
• Base, pie o estativo. Además de ser un soporte firme para el microscopio,
suele tener peso suficiente para dar estabilidad al instrumento,
presentándose en diferentes formas.
• Columna. Está formada por el pilar que une la platina con la base y el brazo
que sirve para el transporte del instrumento.
• Platina. Es una placa cuadrangular que presenta una perforación central que
deja pasar los rayos procedentes de la fuente de iluminación y donde se
coloca el portaobjetos con la muestra a ser observada.
• Pinzas. Sostienen la preparación con firmeza sobre la platina.
• Vernier. Sistema de medida ubicado en la platina que se utiliza para tomar
las coordenadas de una muestra y también desplazarla de derecha a
izquierda o arriba y abajo.
• Revolver. Permite colocar en posición de trabajo alternativamente a los
objetivos con que cuenta el microscopio.
• Tubo ocular. Proporciona estabilidad a los oculares y objetivos manteniendo
la separación a la distancia correcta de trabajo.

b) SISTEMA ÓPTICO: comprende un conjunto de lentes dispuestos de tal

manera que produce el aumento de las imágenes que se observan a través
de ellos Está formado por los oculares y los objetivos
• Ocular. Denominado así porque va cerca del ojo del observador, ubicado en
la parte superior del tubo ocular consta de un sistema de lentes de aumento
y puede intercambiarse. En la parte superior lleva grabado el número de
aumentos ( 10X, 15X ).
• Objetivos. Denominados así porque van cerca del objeto por observar,
ubicados en el revolver compuestos por lentes de diferentes aumentos ( 4X.
10X, 20X, 40X, 100X ).

____________________________________________________________________________________REV MAY 2020 4

Manual de Prácticas
Biología Celular y Molecular

Significado de las inscripciones observadas en un objetivo:

Nota Importante
Hay dos clases de objetivos: objetivos secos porque entre ellos y la muestra solo se
interpone el aire y objetivo de inmersión porque entre él y la muestra se interpone una
sustancia líquida llamada aceite de inmersión además, lleva una línea negra que facilita
su identificación. En el tubo de los objetivos va grabado el número de aumentos (4X,
10X, 40X, 100X) y la apertura numérica (0.20, 0.60, 1.25).

c) SISTEMA DE ILUMINACIÓN: comprende las partes del microscopio que

reflejan, transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la
observación a través del microscopio.
• Espejo. De forma circular y presenta una cara cóncava y otra plana que
reflejan los rayos luminosos.
• Condensador. Situado debajo de la platina, tiene por objeto condensar
o concentrar los rayos luminosos provenientes del espejo.
• Diafragma. Dispositivo del condensador que permite regular la cantidad
de rayos luminosos emitidos por el espejo.
• Filtros. Se usan para observar las muestras con una longitud de onda
seleccionada (azul, verde, naranja…) Se ubican en el portafiltros.

d) SISTEMA DE AJUSTE: está compuesto por:

• Tornillo macrométrico. Se utiliza para desplazar rápida y ampliamente

el objetivo a la distancia de trabajo aproximada con respecto a la
muestra.
• Tornillo micrométrico. Sirve para realizar desplazamientos cortos en
micras y enfocar la muestra.

____________________________________________________________________________________REV MAY 2020 5

Manual de Prácticas
Biología Celular y Molecular

PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

____________________________________________________________________________________REV MAY 2020 6

Manual de Prácticas
Biología Celular y Molecular

2. Manejo y uso del microscopio

Para el manejo y uso del microscopio se usará un software de simulación donde

los alumnos realizarán el enfoque de una muestra haciendo uso del microscopio
virtual, siendo los pasos básicos para un correcto uso y manejo del microscopio
al enfocar una muestra, los siguientes:

• Quitar la funda protectora del microscopio y colocarlo sobre la mesa donde se

va a trabajar debiendo ser un sitio seguro y estable.
• Antes de usar el microscopio éste debe estar limpio y en perfectas condiciones
• Para iniciar con las observaciones en el microscopio, tener listo todos los
materiales a utilizar así como los preparados microscópicos que se van a
observar.
• Enchufar/encender el microscopio.
• Seleccionar el objetivo de menor aumento, girando el revólver, escuchará un
sonido (“click”) que le indicará que el objetivo está en posición correcta.
• Llevar el condensador hacia su posición mas alta
• Bajar la platina completamente
• Colocar el portaobjetos con la preparación sobre la platina con el cubre-
objetos hacia arriba y sujetarla con las pinzas, y con ayuda del vernier centrar
la preparación.
• Observar a través de los oculares, ajustando la distancia interpupilar
(separación entre ambos oculares)
• Subir la platina con el tornillo macrométrico hasta que esté a 0.5 cm, de la
muestra y observando por los oculares manteniendo los 2 ojos abiertos, baje
suavemente la platina con ayuda del tornillo macrométrico hasta que la
imagen se encuentre en el campo visual.
• Una vez que el objeto esté enfocado, será necesario ajustar el diafragma para
obtener la mejor iluminación.
• Finalmente, proceder a darle nitidez y focalización a la muestra con el tornillo
micrométrico.
• Si desea una magnificación mayor, basta girar el revolver pues los objetivos
son para focales y están graduados a una misma distancia focal regule
usando el tornillo micrométrico.
• Terminada la observación saque la muestra y deje el microscopio con el
objetivo de menor aumento en posición de trabajo.

____________________________________________________________________________________REV MAY 2020 7

Manual de Prácticas
Biología Celular y Molecular

3. Mantenimiento del microscopio

• El microscopio debe estar protegido del polvo, humedad y otros agentes que
pudieran dañarlo. Mientras no esté en uso debe guardarse en el gabinete, y
cubrirlo con una funda para microscopio o una bolsa plástica.
• El sistema mecánico debe limpiarse con un paño suave; en algunos casos,
éste se puede humedecer con xilol para disolver ciertas manchas de grasa,
aceite de cedro o parafina, que hayan caído sobre el mismo.
• La limpieza del sistema óptico requiere precauciones especiales, para ello
debe emplearse papel "lente" que expiden las casas distribuidoras de material
de laboratorio.
• Nunca deben tocarse las lentes del ocular, objetivo y condensador con los
dedos; las huellas digitales perjudican la visibilidad, y cuando se secan resulta
trabajoso eliminarlas.
• Para una buena limpieza de las lentes puede humedecerse el papel "lente"
con éter y luego pasarlo por la superficie cuantas veces sea necesario.
• El aceite de cedro que queda en el objetivo de inmersión debe quitarse
inmediatamente después de finalizada la observación. Para ello se puede
pasar el papel “lente” impregnado en una solución alcohol/agua.
• Para guardarlo se acostumbra colocar el objetivo de menor aumento sobre la
platina bajado hasta el tope; el condensador debe estar en su posición más
baja, para evitar que tropiece con alguno de los objetivos.
• Guárdese en lugares secos, para evitar que la humedad favorezca la
formación de hongos.

4. Preparación y observación de la letra “e” minúscula.

Para la observación de la letra “e” emplearán el microscopio virtual siguiendo los

pasos del manejo y uso del microscopio indicado en el inciso 2, además
observarán la muestra con los objetivos de pequeño, mediano y mayor aumento.

En condiciones presenciales la preparación de la muestra se realiza de la

siguiente manera:

• Corte con una tijera una letra “e” minúscula de un texto de periódico.
• Coloque en el centro de la lámina portaobjeto una gota de agua.
• Con ayuda de la pinza de metal, coloque la letra “e” sobre la gota de agua.
• Cubra con una laminilla evitando la presencia de burbujas de aire.

____________________________________________________________________________________REV MAY 2020 8

Manual de Prácticas
Biología Celular y Molecular

• Luego proceder a observar al microscopio, empleando los objetivos de

pequeño, mediano y mayor aumento.

III. RESULTADOS

• Dibuje y describa sus observaciones.

Observación:

Muestra:

Aumento Total:

Observación:

Muestra:

Aumento Total:

Observación:

Muestra:

Aumento Total:

____________________________________________________________________________________REV MAY 2020 9

Manual de Prácticas
Biología Celular y Molecular

IV. CUESTIONARIO:

a. Defina imagen real e imagen virtual y represente esquemáticamente la

formación de la imagen en el microscopio compuesto.
b. ¿Construya una tabla indicando la resolución y magnificación de cada uno de
los objetivos del microscopio que trabajaste.

V. FUENTES DE INFORMACION:

1. Cleseri L, Greenberg A, Eaton A. Estándar Methods for the Examination of

Water and Wastewater, 20th. Ed. Washington DC: American Public Health
Asociation; 1998.
2. Curtis H, Barnes S. Invitación a la biología. 6ª ed. Buenos Aires: Médica
Panamericana; 2008.
3. http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMicroscopia.htm

____________________________________________________________________________________REV MAY 2020 10

Manual de Prácticas
Biología Celular y Molecular

CÉLULA PROCARIOTA Y EUCARIOTA

I. MARCO TEORICO

El conocimiento detallado de la arquitectura celular se basa en los diferentes tipos de

observaciones al microscopio, con la finalidad de visualizar células vivas, muertas o
fijadas. La naturaleza de las imágenes depende del tipo de luz y de la forma en que
se preparó la muestra, la fijación puede ser física o química, siendo el procedimiento
de preservación de la estructura celular, facilitando posteriormente el uso de
colorantes ya sean éstos de naturaleza ácida o básica. Cada técnica está diseñada
para destacar características estructurales particulares de la célula.
El ojo normal no puede ver separados dos puntos cuando su distancia es menor a
una décima de milímetro. (0,1mm) En el microscopio óptico, el poder separador
máximo conseguido es de 0,2 décimas de micra (0,2um) y en el microscopio
electrónico, el poder separador llega hasta 10 ángstrom (10 Aº) o 0,1 décimas de
nanómetros (0,1nm)
Por lo que el poder de resolución, es la capacidad que tiene el instrumento de poder
distinguir o discernir dos puntos situados uno al lado del otro en una muestra y está
relacionado inversamente con el límite de resolución que es la mínima distancia
existente entre los dos puntos a ser observados. Es decir a mayor poder de
resolución menor límite de resolución. El límite de resolución tiene un valor diferente
para cada objetivo y se calcula de la siguiente manera:

L.R = 0.61 x λ
AN

- 0.61 = constante numérica

- λ = Longitud de onda de la luz visible, expresado el promedio como 550 nm.
- AN = Apertura numérica del objetivo que es una medida de la capacidad para
colectar rayos de luz que pasan a través de la muestra. El valor de AN está
indicado en cada objetivo.

Otra característica importante del microscopio es el número de aumentos. Para

calcular el número de aumentos de una muestra observada a través del microscopio,
basta multiplicar el aumento grabado en el lente ocular por el aumento grabado en el
lente objetivo. Por ejemplo, si estamos utilizando un ocular de 10X y un objetivo de
40X, el aumento a que estamos viendo la preparación será: 10X x 40X = 400X, lo
cual quiere decir que la imagen del objeto está ampliada 400 veces.

____________________________________________________________________________________REV MAY 2020 11

Manual de Prácticas
Biología Celular y Molecular

II. COMPETENCIA:

Al finalizar la sesión de práctica, el alumno logrará observar células procariotas y

eucariotas (células animales y vegetales) haciendo uso del microscopio virtual,
estableciendo algunas diferencias entre éstas así como algunas características. Así
mismo logrará observar el procedimiento de los preparados microscópicos para la
observación de estas células los cuales serán mostrados en los videos realizados por
los docentes de práctica.

III. MATERIAL Y EQUIPO

- Se utilizará un software de simulación para el enfoque y observación de

células procariotas y eucariotas.
- Videos elaborados por los docentes
- Imágenes de células procariotas y eucariotas tomadas de las observaciones
al microscopio, realizadas por los docentes de práctica.

IV. PROCEDIMIENTO:

1. Para la observación de las células procariotas y eucariotas emplearán el

microscopio virtual siguiendo los pasos del manejo y uso del microscopio
indicado en el inciso 2.

2. Realizarán una comparación de las observaciones realizadas y establecerán

algunas diferencias y características entre ellas.

En condiciones presenciales la preparación de las muestras se realiza de la

siguiente manera:

Célula Procariota:

a) Observación de células procariotas capsuladas de Klebsiella

1. Extensión, Desecación, NO FIJACIÓN.

2. Cristal violeta durante 1 min. o violeta de genciana 2 min..

3. Lavar con solución saturada de sulfato de cobre al 20% para aumentar la

refringencia de la cápsula.

4. Secar al aire y observar con 100x.

____________________________________________________________________________________REV MAY 2020 12

Manual de Prácticas
Biología Celular y Molecular

Células Eucariotas:

a) Observación de célula Vegetal de la catáfila de cebolla.

1. Extraer el tejido epidérmico de la catáfila de la cebolla.

2. Extender sobre la lámina portaobjetos.
3. Colorear con una gota de lugol y cubrir la preparación con una
laminilla o cubreobjetos.
4. Observar con el objetivo 5x, 10x, y 40x, y dibujar lo que observa

b) Observación de células animales de Mucosa bucal

1. Obtener una muestra de la mucosa bucal con un hisopo.

2. Hacer un extendido sobre la lámina portaobjeto.
3. Dejar secar por 10 minutos.
4. Colorear con azul de metileno por 5 minutos.
5. Enjuagar con agua corriente y secar.
6. Observar a 5X, 10X y 40X. Observar y dibujar lo que observa.

V. RESULTADOS

• Dibuje y describa sus observaciones.

Observación:

Muestra:

Estructuras:

Aumento Total:

____________________________________________________________________________________REV MAY 2020 13

Manual de Prácticas
Biología Celular y Molecular

Observación:

Muestra:

Estructuras:

Aumento Total:

Observación:

Muestra:

Estructuras:

Aumento Total:

VI. CUESTIONARIO

1. Indique cinco diferencias estructurales entre una célula animal y vegetal.

2. Esquematice mediante un mapa conceptual las diferencias entre la célula
procariotas y eucariotas.
3. Realice un esquema del cloroplasto y señale sus partes.

____________________________________________________________________________________REV MAY 2020 14

Manual de Prácticas
Biología Celular y Molecular

4. Para observar a las células procariotas se realizan coloraciones como la

coloración Gram, cuál es el fundamento de esta coloración?

VII. FUENTES DE INFORMACIÓN

1. LODISH, H. F., BERK, A., MATSUDAIRA, P., KAISER, M., KRIEGER, M.,
SCOTT, M. P., ZIPURSKY, S. L. y DARNELL, J. E.: Biología Celular y
Molecular. 7a ed. ED. Panamericana. 2016.
2. NELSON D. L., COX MICHAEL M. “Principios de Bioquímica de Lehninger”. 6a
ed. Ed. ARTMED. 2014.

____________________________________________________________________________________REV MAY 2020 15