UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

CURSO: MICROBIOLOGÍA AGROINDUSTRIAL GENERAL

Docente: MSc. César Augusto Napa Almeyda

PRACTICA 2

MICROSCOPIA: CONOCIMIENTO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

I. INTRODUCCIÓN

El conocimiento de las estructuras del ser vivo está basado casi totalmente en el
estudio con el microscopio. El microscopio óptico es un instrumento que permite
la observación de objetos y detalles de estructuras tan pequeñas que no podrían
ser observadas a simple vista. Con él, nuestro grado de visibilidad se amplía en
cientos o miles de veces, gracias a un conjunto de lentes, dispuestos
convenientemente. Las principales dificultades en la observación y estudio de
estructuras biológicas son su REDUCIDO TAMAÑO Y SU TRANSPARENCIA a
la luz visible. Dado que el microscopio permite superar estas dos dificultades, su
uso y el conocimiento de los principios y técnicas en microscopía, resultan
fundamentales para el desarrollo del conocimiento e identificación de los
microorganismos estudiados en microbiología agroindustrial l.

II. OBJETIVOS

La presente práctica tiene por objetivos:

 Identificar las partes del microscopio y comprender sus características y

la visión con él.

 Manejar el microscopio correctamente.

 Realizar una observación con este instrumento.

III. PALABRAS CLAVE

Microscopio, Microscopio óptico, microorganismos.

IV. FUNDAMENTO

El microscopio (de micro-, 𝜇𝕃Κ𝜌𝜊, pequeño, y scopio, 𝜎Κ𝜊𝜋𝜖𝜔 , observar) es un

instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeños para
ser vistos a simple vista. El tipo más común y el primero que se inventó es el
microscopio óptico. Se trata de un instrumento óptico que contiene dos o más
lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona
por refracción.
TIPOS DE MICROSCOPIO A USAR EN EL DESARROLLO DE LAS
PRÁCTICAS.

En el desarrollo de las prácticas serán usados 2 tipos de microscopios:

1. El microscopio estereoscópico, el cual es binocular, con aumentos de 4 a 40

veces, permite observar muestras opacas y realizar disecciones de
estructuras en organismos pequeños, ya que en él puede manipularse la
muestra mientras se observa. Proporciona una imagen tridimensional.

2. El microscopio compuesto, que puede ser monocular o biocular, permite

obtener aumentos de 100 a 1500 veces. los objetos a observar deben ser
muy pequeños o cortados en láminas tan delgadas que la luz pueda
atravesarlos. Estos se colocan en láminas de vidrio especiales denominadas
porta-objetos y cubre-objetos. Las imágenes que se obtienen son
bidimensionales e invertidas.

PARTES DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

Las partes del microscopio óptico son las siguientes, así como también se
pueden observar en la figura 2.

1. PARTE MECANICA. Comprende los siguientes dispositivos.

1.1. Pie. Base que da soporte y estabilidad al microscopio.

1.2. Columna. Estructura que une el pie con la platina y el tubo. Sostiene
además el condensador y el diafragma.

1.3. Platina. Superficie plana para sostener el porta objetos y el cubre-

objetos que contienen a las preparaciones.

1.4. Tubo. Proporciona soporte a los lentes oculares y objetivos.

1.5. Cremallera. Asociada a dos tornillos, permite el movimiento vertical del

tubo o de la platina para obtener la distancia a la cual el objeto puede
ser observado nítidamente; es decir, el enfoque preciso para el
observador.

1.6. Tornillo macrométrico. Permite movimientos muy cortos en un ajuste

fino del enfoque para lograr una observación precisa.

1.7. Revólver. Sistema giratorio relacionado con el tubo, que porta los lentes
objetivos para diversos aumentos, pudiendo utilizarlos alternativamente.

1.8. Pinzas. Par de láminas rectangulares, situadas sobre la platina, para

mantener al porta-objetos.

2. PARTE OPTICA: Comprende los lentes oculares, los lentes objetivos y los
dispositivos de iluminación.
 2.1. Oculares. Lentes dispuestos en la parte superior del tubo cercano al ojo
del observador. Su aumento puede ser de 6X, 10X y 15X.

2.2. Objetivos. Son lentes de diferentes aumentos situados en el otro

extremo del tubo, en el revólver. EI de menor aumento es más corto
(3.2X,4X, 8X y 10X) y el de mayor aumento es más largo (40X y 44X).
Puede existir además un objetivo de inmersión de 100 a 150 aumentos,

2.3. Condensador. Lente que concentra el haz luminoso hacia la

preparación.

2.4. Diafragma. Abertura que regula la cantidad de luz que ingresa hacia la
preparación.

2.5. Espejo o luz incorporada. Proporciona la luz que llega hasta el objeto a
estudiar y el sistema óptico del microscopio. Existe un espejo piano por
un lado y cóncavo por el otro, para ser usados cuando se disponga de
abundante o escasa luz, respectivamente. La luz incorporada
corresponde a un foco de luz eléctrica adaptado en el lugar que ocupa
el espejo.

Figura 2: Partes del microscopio óptico compuesto

CARACTERISTICAS DE LA VISIÓN CON EL MICROSCOPIO

1. Grado de Aumento: Es la magnificación total que sufre la imagen del objeto

debido al efecto de los lentes oculares y objetivos. Se obtiene multiplicando el
número de veces que aumenta el lente ocular por el número de veces que
 aumenta el lente objetivo. Si el objetivo aumenta la imagen de un objeto 40
veces, ésta al pasar por la lente ocular será nuevamente aumentada.

Si el ocular aumenta 10 veces, la magnificación total en este caso será:

10x x 40x = 400x.

Este resultado permite saber cuántas veces más grande estamos viendo la
imagen de un objeto.

2. Poder de Resolución. Es la posibilidad de distinguir separados dos puntos

muy cercanos entre sí. Cuanto mayor sea el poder de resolución, menor será la
distancia entre dos puntos a la cual pueden distinguirse como tales. La distancia
límite en la cual dos puntos pueden ser todavía distinguibles se denomina Límite
de Resolución. El poder de resolución de un microscopio compuesto depende
de la longitud de onda de la fuente luminosa y de la apertura numérica (propiedad
óptica de la lente).

Existe una correspondencia entre el aumento de un objeto y su apertura

numérica, de tal modo que las lentes con mayores aumentos generalmente
tendrán mayores aperturas numéricas. El poder de resolución es quizá la
característica más importante de un buen microscopio ya que de nada sirve una
imagen muy grande del objeto, si ésta se ve borrosa y no puede distinguirse en
sus detalles.

3. Distancia de Trabajo. Es la distancia que existe entre el objeto en

observación y el lente objetivo. Esta distancia variará según el aumento de la
tente objetivo con la cual se trabaje. Es inversamente proporcional al grado de
aumento; es decir, cuanto mayor sea el aumento del lente objetivo menor será
la distancia de trabajo. Cuando se trabaje con un lente de inmersión la distancia
de trabajo será mínima. En estos casos es necesario usar aceite de inmersión
entre el lente objetivo y la preparación debido a que el índice de refracción para
este tipo de lente es la del aceite y no la del aire. Esto permite obtener una
imagen de gran tamaño y al mismo tiempo de gran nitidez.

V. MATERIALES Y EQUIPOS

- Microscopio Compuesto.
- Microscopio Estereoscópico.
- Muestras de Agua Estancada.
- Goteros.
- Láminas porta-objetos.
- Láminas cubre-objetos.
- Servilleta de algodón, sin almidonar.
VI. PROCEDIMIENTO

MANEJO DEL MICROSCOPIO

1. Limpiar el espejo, condensador y los lentes del microscopio.

a. Eliminar el polvo mediante un soplete de aire o pincel fino.
b. Frotar sin presionar, con papel de lente, usando este solo una vez.

2. Comprobar si el lente objetivo de menor aumento está a continuación del tubo; si

no es así, debe colocarse en dicha posición haciendo girar el revolver hasta alcanzar
un "tope" que lo indique.

3. Abrir completamente el diafragma y observando a través del ocular, mover el espejo

orientándolo de modo que la luz reflejada se observe en un círculo uniformemente.

Iluminado. Este constituye el “campo óptico”. Una vez obtenida la iluminación

máxima, NO SE DEBE CAMBIAR LA POSICION DEL MICROSCOPIO. Con luz
incorporado no hay espejo.

4. Ubicar y sujetar el en la platina, procurando que la preparación se halle en el centro

de la circular.

5. Mover el tornillo macrométrico para acercar el lente objetivo de menor aumento

hacia la preparación, hasta llegar a un tope.

6. Observando por el lente mover nuevamente el tornillo macrométrico en el sentido

inverso hasta que aparezca la imagen.

7. Una vez enfocada la imagen girar el tornillo hasta que sea nítida. Nunca se debe
usar el tornillo micrométrico para grandes desplazamientos, para ello está el tornillo
macrométrico.

8. Cuando los tomillos macro y micrométrico se encuentren en un solo dispositivo, el

ajuste fino se hace solo después de realizado el avance rápido de acercamiento a la
preparación.

9. Antes de pasar al siguiente aumento verificar que la imagen a observar se

encuentre en el centro del campo, hacer girar el revolver cambiando el lente objetivo
hasta llegar al "tope" y accionar solamente el tomillo micrométrico hasta obtener la
nueva imagen.

10. Para observar una muestra con el objetivo de inmersión, se coloca una gota de
aceite de cedro encima de la lámina de la preparación antes de girar el revólver. Esto
permite que la imagen se vea con nitidez para realizar la observación ya que este tipo
de lentes requiere que el índice de refracción sea similar al del vidrio.

11. Terminada la observación, girar el revólver para colocar el Objetivo de menor

aumento en la primera posición de trabajo.
 12. Retirar la preparación y dejar limpio el microscopio, secando la platina con
cuidado.

13. Si usó el objetivo de inmersión, debe limpiarse inmediatamente después de su

uso con ayuda del papel de lente. Quitar el grueso del aceite con una hoja, luego
limpiar con una segunda impregnada en xylol y finalmente con una tercera. secar el
lente. No usar cantidades excesivas de solvente pues puede disolver el cemento de
componentes de los lentes.

14. Mantener cubierto o guardado el microscopio cuando no esté en uso.

15. En sitios con excesiva humedad ambiental deberá guardarse el microscopio en

una campana de vidrio con un desecante como de calcio.

MEDICIONES AL MICROSCOPIO

Para medir objetos que se observan en el campo visual de un microscopio (Metodología

microscópica), se utiliza un micrómetro ocular. Este consiste de una placa de cristal con
una escala grabada, que se inserta en un ocular microscópico, quedando la escala
enfocada por encontrarse en el plano de la imagen real intermedia.

Es preferible contar con un ocular micrométrico con la placa permanentemente instalada

(especialmente si el microscopio es monocular), el cual reemplaza al ocular visual para
hacer mediciones. Para mayor precisión se puede utilizar un tipo de ocular micrométrico
que tiene una escala exterior adicional en un tornillo micrométrico que en cada vuelta
completa desplaza un trazo perpendicular un intervalo de la escala grabada. Desde que
los aumentos de los microscopios varían (cuando son de la misma serie y marca pueden
variar ligeramente), las escalas de micrómetros oculares no representan medidas
convencionales, sino simples unidades.

Para determinar la distancia lineal que representa cada unidad (el valor micrométrico),
se debe hacer calibraciones para cada aumento de un microscopio (o sea los productos
de los aumentos de cada combinación ocular-objetivo) utilizando un micrómetro de
platina (un micrómetro objetivo). Los micrómetros de platina son similares a una lámina
portaobjetos y tienen grabadas escalas que representan medidas exactas y
convencionales. Comúnmente se utiliza un micrómetro de platina cuya escala métrica
es de un milímetro (1000 micras), dividida en 10 unidades con 10 subdivisiones de 10
micras cada una (la unidad más pequeña representada).

Determinación de Valores Micrométricos

1. Colocar el micrómetro en el ocular del microscopio (o sustituir un ocular por el ocular

micrométrico).

2. Enfocar la escala del micrómetro de platina a través del microscopio.

3. Girar el ocular micrométrico hasta que las dos escalas estén paralelas.

4. Mover el micrómetro de platina hasta que el comienzo (extremo izquierdo) de su

escala coincida con el de la escala del micrómetro ocular.

5. Ubicar la línea del micrómetro ocular más distante del comienzo de la escala que
coincida con una línea de la escala del micrómetro de platina o calcular el largo en
micras de la distancia representada en el micrómetro de platina, que corresponde al
largo total del micrómetro ocular o de contar con un tambor micrométrico desplazar
el trazo perpendicular hasta que coincida con una línea distante del comienzo de la
escala de la platina.

Determinar las unidades que estas representan en ambas escalas.

6. Cálculo del valor micrométrico (V.M.) en micras

Medida micrómetro de platina, en micras V.M. = Unidades micrómetro ocular

7. Repetir el cálculo para cada objetivo, usando aceite para el objetivo de inmersión.

8. Preparar una etiqueta con la información adquirida, la cual se adhiere al microscopio,

ejemplo:

Objetivo V.M. (micras)

10X 16.70 45X 3.70 93X 1.65

9. Para medir objetos en el campo del microscopio, hacer coincidir un extremo o división
mayor de la escala del micrómetro ocular con un extremo del objeto a medir. Contar
el número de unidades que representa.

VII. RESULTADOS

Reportar resultados, sobre la aplicación de una muestra y describir el procedimiento

seguido de acuerdo a lo indicado y mostrado en prácticas de uso del microscopio.

VIII. CONCLUSIONES

IX. BIBLIOGRAFIA

X. PREGUNTAS DE APLICACIÓN

1. Mencione la diferencia ente un microscopio óptico compuesto y un microscopio

electrónico.

2. Mencione otros tipos de microscopios.