Laboratorio de Biología General

PRÁCTICA
DIRIGIDA Nº 1

MICROSCOPÍA

El ojo humano con una visión en óptimas condiciones solo puede observar elementos cuyo tamaño
sean mayores a 0,1 mm Para poder visualizar y catalogar las dimensiones por debajo de dicho tamaño,
surgió la necesidad de crear instrumentos y técnicas adecuadas que permitan explorar el campo de la
Biología Celular. Por esta razón, aparecen en primer lugar las lupas y los microscopios simples, muy
útiles para el estudio de estructuras macroscópicas pero insuficientes para poder realizar un estudio
de estructuras celulares. Para cumplir con este fin, aparece el microscopio óptico común o microscopio
compuesto. El microscopio óptico compuesto no es más que un sistema óptico de lentes convergentes
que cumplen la función de aumentar la imagen de un objeto.
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Fuente: GENOMA SUR – INTRODUCCIÓN A LA CÉLULA

http://www.genomasur.com/lecturas/Guia01.htm

EL MICROSCOPIO ÓPTICO
Parte mecánico y sus componentes:
 Pie o base: se encuentra en la parte inferior del aparato, proporcionándole estabilidad.
 Columna o brazo: estructura metálica que sostiene a las demás piezas del microscopio.
 Platina: placa horizontal donde se coloca el portaobjetos con la muestra y es sujetada por un
sistema de pinzas que permiten deslizar el portaobjetos en dos sentidos perpendiculares. Además
posee una perforación central para el paso de los rayos de luz.
 Diafragma: Está asociado a la platina ubicado entre la fuente de luz y el condensador. Es una
membrana metálica que se abre o cierra, cuya función es regular la intensidad de luz que atraviesa
el objeto y eliminar los rayos periféricos que distorsionan las imágenes.
 Tornillos macro y micrométrico: son las que desplazan la platina en un sentido vertical
posibilitando el enfoque. El tornillo macrométrico es el que da un ajuste grueso, con
movimientos amplios de la platina (cm, mm). El micrométrico permite un ajuste fino, casi
imperceptible (μm) para lograr una imagen nítida de la muestra a observar.
 Revolver: sitio donde se montan los objetivos.
 Cabezal: soporta el revólver y los oculares. Pueden ser mono, binocular o trinocular. Los
cabezales trinoculares son poseen una adaptador para una cámara fotográfica.

Parte óptico y sus componentes:

 Condensador: Lente o sistema de lentes de forma cónica que posee un sistema de dos lentes
convergentes que utilizan para hacer eficiente la iluminación, de manera que la mayor parte de los
rayos luminosos de la fuente atraviesen el preparado y entren en el sistema óptico del microscopio.
 Ocular: es la lente o sistema de lentes más cercana al ojo del observador, montada en un tubo
monocular o en dos tubos binocular. Las lentes llevan impreso el número de aumentos: 6X, 10X
y 15X; El más común es el de 10X. (“X” se lee “por”).
 Objetivo: es la lente más cercana al objeto a observar. En el revólver existen cuatro o cinco
objetivos montados de distintos aumentos. Estos llevan escrito el aumento que puede alcanzarse
con ellos, usualmente son de 4X, 10X, 40X, y 100X. Los cuatro primeros se denominan lentes
secos y la última, lente húmedo o de inmersión, ya que debe sumergirse en aceite de origen
sintético cuyo índice de refracción sea próximo al del vidrio.

*Fuente de luz o lámpara. Los haces de luz pueden ser natural o artificial, cuando es natural (solar)
un espejo situado en la base del microscopio recoge la luz del medio y la refleja a través del objeto
y del sistema de lentes. La luz artificial la constituye generalmente un foco de luz halógena
ubicado en el microscopio y conectado a un circuito eléctrico de bajo voltaje (6 a 12V).
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CONCEPTOS BÁSICOS
Aumento total (AT): es la imagen obtenida de un objeto que se obtiene al multiplicar el aumento de
la lente objetivo utilizada por el aumento de la lente ocular.
AT= Aumento objetivo (4x, 10x, 40x y 100x) X el aumento del ocular (10X).
Poder de resolución (PR): es la capacidad de un instrumento óptico, en este caso el microscopio,
para visualizar los detalles de un objeto; es decir, es la capacidad de poder distinguir dos puntos muy
próximos como separados desde una distancia determinada.

ENFOQUE
 Asegúrese primero de que el microscopio esté sobre una base sólida y se encuentre conectado a
una toma de corriente eléctrica.
 Utilice siempre el objetivo de menor aumento (4X), para el primer enfoque de una muestra.
 Encienda la fuente de luz, lleve el condensador a una distancia de 1 a 2 mm de la platina
 Verifique que el diafragma esté abierto y el objetivo perpendicular a la platina.
 Coloque una de las láminas preparadas sobre la platina y asegúrela con las pinzas del sistema de
desplazamiento que tiene la platina.
 Procure que la muestra que va a ser observada se encuentre en el centro del orificio de la platina.
 Gire el tornillo macrométrico hasta obtener una distancia de 1 a 2 cm entre el objetivo y la lámina
preparada. ESTA OPERACIÓN DEBE HACERLA SIN COLOCAR SUS OJOS SOBRE EL
OCULAR.
 Ahora coloque los ojos sobre los oculares y manténgalos abiertos, ajuste el sistema de binoculares
a su distancia ocular, de modo que observe un solo y gran campo de luz.
 Siga moviendo la platina hacia arriba utilizando el tornillo macrométrico hasta que visualice la
muestra en la lámina que preparó. Este enfoque se llama ENFOQUE GRUESO.
 Empiece a girar, con los dedos pulgar e índice de ambas manos, el tornillo micrométrico hasta que
pueda observar nítidamente la muestra, esto es el ENFOQUE FINO, que se ajusta a la visión de
cada observador.
 Rote el revólver para cambiar de objetivo.
 Manipule el tornillo micrométrico y enfoque nuevamente la muestra que esté observando.
 En el caso de que use el objetivo de inmersión, una vez que haya enfocado su muestra con el
objetivo de 40X, previo al cambio con el objetivo de 100X, se agrega una gota de aceite de cedro,
se ubica el objetivo y se enfoca la muestra usando el tornillo micrométrico con mucho cuidado.

COMPETENCIAS

1. Identifica las partes del microscopio óptico.

2. Reconoce los diferentes componentes del microscopio.
3. Conoce las características del microscopio óptico.
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TIPOS DE MICROSCOPÍA (continuación)

COMPETENCIAS

1. Reconoce la importancia delos diferentes tipos de microscopio.

2. Conoce las características del microscopio de campo oscuro, contraste de fases,
fluorescencia y microscopios electrónicos, en el estudio de los sistemas biológicos.
3. Reconoce el impacto que produjo en el estudio de los sistemas biológicos el desarrollo de la
microscopia electrónica.

MARCO TEÓRICO

El uso de determinados componentes colocados en el condensador o en los objetivos se interponen

al haz luminoso emitidos por la lámpara, filtrando u obstaculizando la luz y dan lugar a los distintos
tipos de microscopía óptica como la de campo claro, campo oscuro y contraste de fases. Estos tipos
de dispositivos en un microscopio de contraste de fases manipulan físicamente los haces luminosos
seleccionando parte de las ondas de las que se compone dicho haz, lo que provoca una imagen
contrastada de la muestra sin necesidad de teñirla. En el caso de la microscopia de fluorescencia, se
utiliza una lámpara que emite un haz luminoso fuera del rango de la luz visible y se aprovecha esta
propiedad de filtrar los haces de luz para poder manejar la longitud de onda que incide y emite una
muestra determinada mediante filtros. Actualmente, el microscopio de fluorescencia más utilizado
es el de epifluorescencia, que simplemente indica que la luz filtrada no atraviesa la muestra sino que
incide sobre ella a través de la lente objetivo, y esta misma lente es la encargada de recoger la luz que
emite la muestra excitada.
Otro tipo de microscopía es la Microscopía Electrónica, cuya principal virtud radica en la potencia
amplificadora que no posee un microscopio óptico, debido a que la microscopia óptica está limitada
por la longitud de onda de la luz visible (alrededor de 4000 ángstroms). En cambio un microscopio
electrónico utiliza electrones para iluminar un objeto, siendo la longitud de onda de un electrón de
0,5 ángstroms; razón por la cual en un microscopio electrónico se puede mostrar estructuras mucho
más pequeñas. La imagen que se produce es por la dispersión de los electrones, mientras que en el
microscopio óptico la imagen que se produce es por absorción de los fotones. Es decir, la imagen que
se puede observar se debe a la diferente absorción de la luz por las distintas estructuras de la muestra,
mientras que en el microscopio electrónico la formación de la imagen está en función de la dispersión
y, por consiguiente, perdida de los electrones. Existen dos tipos básicos de microscopios electrónicos:
el microscopio electrónico de transmisión (Transmission Electron Microscope, TEM) y el
microscopio electrónico de barrido (Scanning Electron Microscope, SEM).

En el microscopio electrónico de transmisión (MET), la observación de una muestra biológica se

necesita realizar cortes histológicos ultrafinos. Los haces de electrones se dirigen hacia el muestra
que se desea aumentar y uno de estos electrones que es emitido por la lámpara rebota o es absorbido
por el objeto y otros la atraviesan formando una imagen aumentada de la muestra en estudio. Los
microscopios electrónicos de transmisión pueden aumentar un objeto hasta un millón de veces.

En un microscopio electrónico de barrido (MEB), las imágenes que se crean es una imagen ampliada
de la superficie de un objeto a observar. En este tipo de microscopio la ventaja que se tiene es que
no necesario realizar un corte del objeto en capas para poder observarlo, sino que se puede colocar
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un fragmento o la muestra completa dependiendo del tamaño con muy pocos preparativos. La MEB
explora la superficie de la muestra a evaluar y provee una imagen punto por punto, al contrario de
que ofrece la MET, que examina una gran parte de la muestra cada vez. Su funcionamiento se basa
en recorrer la muestra con un haz muy concentrado de electrones. Los microscopios electrónicos de
barrido pueden ampliar los objetos 200.000 veces.

TIPOS DE MICROSCOPIOS

MICROSCOPIO UTILIDAD

Óptico de campo claro Para observar muestras teñidas.

Para la observación de microorganismos

vivos, invisibles a la microscopia de campo
Óptico de campo oscuro
claro debido a que no se tiñen con facilidad,
porque se distorsiona su visualización.

Para facilitar la visualización de estructuras

Óptico de Contraste de fases
internas de muestras vivas no teñidas

Observar estructuras internas específicas

Óptico de Fluorescencia mediante la utilización de fluorocromos o
anticuerpos marcados.

Examinar virus o la ultraestructura interna de

Electrónico de transmisión cortes delgados de células (aumento de 10000
- 100000X)

Estudiar las características de las superficies

Electrónico de barrido
externas de organismos, células y virus.

MATERIALES
 Placas fotografías usando los diferentes tipos de microscopio óptico y electrónico.
PROCEDIMIENTOS
 Teniendo en cuenta la información presente en la explicación del docente, analice las
siguientes fotografías de muestras observadas mediante microscopía.
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Tipo de microscopia utilizada

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Tipo de microscopio utilizado
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Fuente: Angiogénesis en tumores de células germinales testiculares

http://www.conganat.org/3congreso/cvhap/comunicaciones/059/index.htm

Tipo de microscopia utilizada

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Tipo de microscopio utilizado
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Fuente: Microscopio virtual

http://www.biologia.edu.ar/microscopia/meb.htm
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Tipo de microscopia utilizada

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Tipo de microscopio utilizado
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Fuente: Microscopio virtual

http://www.biologia.edu.ar/microscopia/meb.htm

Tipo de microscopia utilizada

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Tipo de microscopio utilizado
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Fuente: Microscopio virtual

http://www.biologia.edu.ar/microscopia/meb.htm
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Tipo de microscopia utilizada

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Tipo de microscopio utilizado
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Fuente: Microscopio virtual

http://www.biologia.edu.ar/microscopia/meb.htm

Tipo de microscopia utilizada

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Tipo de microscopio utilizado
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Fuente: Microscopio virtual

http://www.biologia.edu.ar/microscopia/meb.htm
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