MICROSCOPIA Y ENFOQUE

DE MUESTRAS
Mg. Johanna Sánchez Dávila
jsanchezd@usmp.pe
Biología Celular y Molecular
Índice o tabla de contenidos
• 1º El microscopio óptico
• 2º Partes del microscopio
• 3º Enfoque de una muestra
 EL MICROSCOPIO
 Su invención se le atribuye a Zacharias
Jansen en el año 1590

 El microscopio permite observar

organismos y estructuras aumentadas de
tamaño, que no son posibles de ser
observadas a simple vista.

 El microscopio es un equipo basado en

lentes. Las lentes son transparentes,
normalmente de vidrio, limitados por dos
superficies, de las que al menos una es
curva.

 El microscopio óptico compuesto tiene dos

juegos de lentes: oculares y objetivos.
 Características del microscopio óptico

• PODER DE RESOLUCION.- Es la capacidad que tiene una lente

para mostrar dos objetos muy cercanos como distintos y separados.

• LIMITE DE RESOLUCION.- Es la distancia mínima a la que deben

situarse dos puntos para su perfecta individualización, esto
depende de la longitud de onda y de la apertura numérica.
 Tipos de microscopios
1. Microscopio óptico compuesto: Magnifica y enfoca
por medio de 2 series de lentes (ocular y objetivo).
a) Campo claro: aprovecha las diferencias de
contraste entre las muestras y el medio que las
rodea.
b) Contraste de fases: Incrementa las diferencias de
contraste entre las células y el medio que las rodea
para visualizarlas sin necesidad de tinción, a
través de un anillo especial ubicado en el
objetivo.
c) De fluorescencia: Visualiza muestras con capacidad
de emitir fluorescencia al haber sido tratadas con
colorantes denominados fluorocromos que son
excitados cuando absorben luz ultravioleta. Cuando
las moléculas excitadas regresan a su estado
normal liberan el exceso de energía en forma de luz
visible de mayor longitud de onda que la radiación
excitante. Esta propiedad se denomina
fluorescencia.
 Tipos de microscopios
2) Microscopio electrónico:

 Permite aumentar imágenes de muestras hasta

niveles muy superiores a los del microscopio Microscopio electrónico

compuesto.
 Utiliza electrones en lugar de luz visible para
formar las imágenes de objetos diminutos.
 Los electrones acelerados a gran velocidad.
impactan contra la muestra, algunos
son reflejados y otros la atraviesan. Mediante
la detección estos electrones es posible
reconstruir una imagen de la muestra.
 Existen dos tipos de ME:
a) De transmisión (MET) utiliza los electrones
que atraviesan la muestra los cuales son
capturados por un detector dando lugar así
a la imagen. Permite visualizar detalles
internos.
b) De Barrido (MEB) utiliza los electrones que
son reflejados por la muestra. Permite
obtener información de la superficie de la Imágenes obtenidas
por TEM y SEM
muestra.
 PARTES DEL MICROSCOPIO

a) El sistema mecánico
b) El sistema óptico
c) El sistema de iluminación
a) Sistema mecánico
Serie de piezas en las que van instaladas las lentes, que permiten el
movimiento para el enfoque.

 Platina

 Ajustadores de platina

 Pinzas

 Brazo

 Base

 Revólver portaobjetivos

 Tornillo macrométrico

 Tornillo micrométrico

 Tubo óptico
b) Sistema de iluminación
Elementos que reflejan, transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para
efectuar la observación.
Fuente de luz
* Espejo: Presenta dos caras, plana
cuando la luz es natural y cóncava
cuando la luz es artificial.
* Foco: Dirige los rayos luminosos
hacia el condensador

Condensador:
Lente ubicada debajo de la platina,
concentra la luz.

Diafragma:
Regula la cantidad de luz que llega a
la muestra, a través de una palanca
lateral giratoria.

Condensador

Diafragma
c) Sistema óptico
Conjunto de lentes que producen el aumento de las imágenes que se observan a
través de ellas.
Ocular
• Aumenta imagen formada por el objetivo.
• Aumento de 10X ó 16X
• Monocular-Binocular
• Muestran un indicador (puntero) para facilitar la posición de algún punto
específico.
c) Sistema óptico

Objetivos

a) En seco
 Objetivo de rastreo (4X)
 Objetivo 10X y 40X
 El aire se interpone entre la lente del
objetivo y la muestra

b) Objetivo de inmersión (100x)

 Se usa con aceite de inmersión
 El aceite se interpone entre la lente del
objetivo y la muestra
 Brinda el máximo aumento
 Aumento total del microscopio

Se calcula multiplicando el aumento del ocular por el aumento del

objetivo que se está usando para observar la muestra.
Ejemplos:
Objetivo X Ocular Aumento total
5x 10x = 50x
10x 10x = 100x
40x 10x = 400x
100x 10x = 1000x
 MONTAJE DE UNA PREPARACIÓN MICROSCÓPICA

Antes de observar la muestra al CUBREOBJETOS

microscopio, esta debe de ser montada sobre
dos piezas de vidrio:

MUESTRA
 Lámina portaobjetos es el soporte sobre el
que va la muestra.

PORTAOBJETOS
 Laminilla cubreobjetos se coloca sobre la
muestra.

Una vez colocada la muestra en el

portaobjetos se debe colocar el cubreobjetos.
 ENFOQUE DE UNA MUESTRA
1. Conectar el microscopio.

2. Colocar el portaobjeto que contiene la muestra sobre la platina de forma

quede en el orificio central de la platina.

3. Enfocar la preparación con el objetivo de menor aumento.

4. Subir la platina usando el tornillo macrométrico y mirando la preparación

desde fuera hasta alcanzar el tope superior.

5. Mirando por los oculares, bajar lentamente la platina con el tornillo

macrométrico hasta conseguir ver el objeto lo más nítido posible.

6. Ajustar el enfoque con el tornillo micrométrico hasta observar nítidamente

la muestra.

7. Observar la preparación a mayores aumentos cambiando de objetivo con un

simple giro del revólver (sin mover en ningún caso el macrométrico).
Conseguir nitidez ajustando solo el micrométrico.

8. Recorrer la muestra moviendo el carro de desplazamiento de la platina.

 CONSEJOS PRÁCTICOS

 Mantener apagada la luz del microscopio siempre que no se esté

utilizando, la vida media de la bombilla es corta.

 Iniciar el enfoque con el objetivo de menor aumento.

 Anotar el aumento con el que se observa la preparación.

 El uso del objetivo de inmersión (100x) requiere aceite de inmersión, sin

la utilización de este aceite no se podrá enfocar bien y existe una gran
probabilidad de dañar la lente al rozar con el cubreobjetos.

 Realizar la limpieza adecuada del objetivo de inmersión.

 Una vez enfocada, procurar recorrer, con los tornillos de la platina, toda la
preparación, empezar en un extremo de la lámina y terminar en el
opuesto.
USO DEL MICROSCOPIO

Link : https://youtu.be/M03MSo3M82g
 Fuentes de información
1. Alberts, J. Jhonson; Lewis, J.; Raff, M.; Roberts, K. y Walter, P. Biología
Molecular de la célula. 5ªEdición. Ed. Omega; 2010.
2. Solomon, E.; Berg, L. y Martin, D. Biologia. 9ª Edición. México: Ed. McGraw-
Hill – Interamericana; 2014.
3. Madigan M.T, Martinko J.M., Stahl D and Clark D.P., Brock Biology of
microorganisms, 13th edition, UK, Pearson Benjamin Cummings, 2010.
 PARTES DEL MICROSCOPIO

OCULAR TUBO OPTICO

BRAZO
REVOLVER
PORTAOBJETIVOS
MACROMETRICO
OBJETIVO
MICROMETRICO
PINZAS

PLATINA
CONDENSADOR DIAFRAGMA

FUENTE DE LUZ
BASE
BOTON DE ENCENDIDO