INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCAIS BIOLÓGICAS

Ingeniería Bioquímica

PRÁCTICA 5:
CROMATOGRAFÍA

Equipo 5:
- Badillo Castillo Kevin Jesús
- Ortega Ramírez Luis Enrique

CDMX, 27/OCTUBRE/2023
 OBJETIVO
Separar, purificar e identificar compuestos de origen orgánico, que se encuentran mezclados
GENERAL:
en una disolución, aprovechando las mínimas diferencias en sus propiedades físicas.

OBJETIVOS PARTICULARES:
• Conocer y comprender la técnica de cromatografía y los factores experimentales que la afectan.

• Aplicar y comparar los métodos cromatográficos de capa fina y columna, para separar, identificar y purificar
compuestos orgánicos.

• Observar el efecto de diferentes fases móviles con respecto a la fase estacionaria en la separación de compuestos
orgánicos.

• Determinar los valores de Rf, como un parámetro en la identificación de los compuestos separados a través de
esta técnica
 ¿QUÉ ES LA CROMATOGRAFÍA?
Permite separar, purificar e identificar los componentes que forman parte de una
mezcla de diferentes solutos.

En química orgánica es empleada ya que nos permite

separar y cuantificar los compuestos orgánicos de la
mezcla a tratar
Se obtienen mediante dos fases: ¿CÓMO?
• Móvil (fase que atraviesa la fase estacionaria). Es nuestra mezcla disuelta en un disolvente
que le ayuda a atravesar la fase estacionaria.
• Estacionaria (medio por el que atravesará la fase móvil). Puede ser un sólido, un gel o un
líquido con sólidos.
ADSORCIÓN PARTICIÓN

INTERCAMBIO IÓNICO
EXCLUSIÓN MOLECULAR AFINIDAD
 FUERZAS
DIPOLO - DIPOLO
CROMATOGRAFÍA EN
CAPA FINA (TLC)
CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

FASE FIJA (ESTACIONARIA)

SILICA GEL

FASE MOVIL (ELUYENTES)

HEXANO BENCENO ACETATO DE ETILO

 A CONSIDERAR EN LAS
CROMATOGRAFÍAS
DE COLUMNA
1. TIEMPO MUERTO (to).
2. TIEMPO DE RETENCIÓN (tr)
3. VELOCIDAD DE FLUJO DEL DISOLVENTE (F).
4. VOLUMEN DE RETENCIÓN (Vr): Vr = tr . F

5. FACTOR DE SELECTIVIDAD (α):

6. RESOLUCIÓN (Rs):
Donde Wa y Wb corresponden a los tiempos del ancho de un pico en su base
EN CAPA FINA

i. FRENTE DEL DISOLVENTE (fd).

ii. CENTRO DEL SOLUTO (fs).

iii. RELACIÓN DE FRENTES (Rf): RF = fs/fd

iv. DIFERENCIA DE (Rfs)

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA 4g

1
2
3

ALGODÓN DE 1cm DE
MONTAR EL SISTEMA DIAMETRO EMPACADO DE LA
DE CROMATOGRAFÍA COLUMNA
 5 6

AGREGAR UNA CAPA

DE Na2SO2 anhidro
VERIFICAR GOTEO
TENER PRECAUCION
DE QUE LA COLUMNA AGREGAR 10 GOTAS DE
NO SE QUEDE SIN NUESTRA MUESTRA
DISOLVENTE
NO PERMITIR QUE EL
VERIFICAR QUE NO DISOLVENTE BAJE DEL
TENGA BURBUJAS NIVEL DE LA SILICE
7 9
8

RECOLECTAR MUESTRAS EN
TUBOS DE ENSAYO

AGREGAR EL PRIMER
ELUYENTE.
HEXANO:AcEt 8:2 30ml

AcEt:Metanol 1:1 30ml

AcEt:Etanol 7:3 10ml AGREGAR ELUYENTES
AcEt:Etanol 1:1 10ml CONFORME AVANZA EL
Acetona 10ml PROCESO
Metanol 10ml
Etanol 10ml
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
CROMATOGRAFÍA EN PLACA FINA (TLC)
1 2
EN UNA CROMATOPLACA
DIBUJAR 1 LÍNEA A 1CM EN EL EQUIDISTANTES (PUNTOS DE
BORDE INFERIOR Y 0.5CM EN
LA PARTE SUPERIOR
MICROPIPETA: UN CAPILAR
CALENTADO Y SEPARADO
PARA QUE SEA MÁS FINO
3
DIBUJAR 3 PUNTOS
CON AYUDA DE UNA
APLICACIÓN) MICROPIPETA COLOCAR 2
PUNTOS DE LAS MUESTRAS
MÁS COLORIDAS Y UNA DE LA
MUESTRA ORIGINAL
 5

CON AYUDA DE UNAS PINZAS

COLOCAR LA PLACA DENTRO
DE LA CÁMARA.

AGREGAR UNA SOLUCIÓN DE

HEXANO:AcEt 8:2 A LA
CÁMARA CROMATOGRÁFICA
TENER PRECACIOÓN DE QUE
LA FASE MÓVIL NO TOQUE
LOS PUNTOS DE APLICACIÓN
6

DEJAR ELUIR HASTA QUE

LLEGUE A LA MARCA
SUPERIOR DE 0.5cm CALCULAR Rf

7
 Densidad
Reactividad Punto de fusion punto de ebullicion solubilidad Valor de Pka Toxicidad
aparente

7
Casi insoluble en todo menos en (100 g/l, H₂O,
Silica gel Con ácido fluorhídrico 1710 °C Se desnaturaliza
ácido fluorhídrico 20 °C) (pasta
200 - 800 kg/m3

húmeda)

Muy soluble en etanol, soluble en éter etílico y

anestésico
Hexano Con agentes oxidantes, cloro, flúor, perclorato de magnesio. -96 a -94 ºC 68,5 a 69,1 ºC cloroformo. Miscible con alcohol, cloroformo y 0,6606 g/mL
leve.
éter.inmiscible con el agua

Acetato a 760 mmHg 80 g/L en agua. Solubilidad en

Agentes oxidantes fuertes -83,8 °C 16-18 a 25 °C. 0,9003 g/cm3. irritacion
(77,1 °C). solventes orgánicos
de etilo

Miscible con agua, alcoholes,

Acetona Reacciones de oxidación vigorosas -94 °C 56.5 °C cloroformo, dimetilformamida, 19.2 : 0.788 g/ ml irritacion
aceites y éteres.

Es incompatible con ácidos, cloruros de ácido, anhidridos, Soluble en agua y mayoria de

Metanol agentes oxidantes, agentes reductores y metales alcalinos.
-97.8 °C 64.7 °C (760 mm de Hg)
compuestos organicos
15.5 0.9572 g/ml irritacion

miscible en agua. Miscibilidad con irritación de los ojos y

Etanol Combustión o de oxidación – 114,14 ºC 78,24 ºC
solventes orgánicos
15.9. 0.789 g/cm3
del tracto respiratorio