BIOQUIMICA I

• Radicales libres
• Mecanismos de control enzimático y por antioxidantes

Especies Reactivas de Oxígeno

Introducción

ERO historia y conceptos generales.

ERO fundamentales y su formación.

 1775 Descubrimiento del oxígeno 1973 Leucocitos producen ERO
1900 Existencia del radical trifenilmetilo 1978 Reactividad del •OH
1933 Linus Pauling predijo la existencia del (O2-•) 1990 Descubrimiento del NO•
1969 Descubrimiento de la SOD

ERO Antioxidantes

Accumulativo No. artículos por año

250000 25000

200000 20000

150000 15000

100000 10000

50000 5000

0
0
1990 1993 1996 1999 2002 2005 2008 2011 2014 1990 1994 1998 2002 2006 2010 2014
 ¿Qué son los radicales libres?

Los radicales libres son especies químicas capaces de una

existencia independiente que contienen uno o más electrones no
pareados en el orbital más externo. Sus tiempos de vida medio
(t½) son muy cortos (Halliwell & Aruoma, 1989).

+ +

Radical Blanco del Reducido Oxidado

libre ataque (estable) (inestable)

Dr. Gregorio Martínez Sánchez,

 ETAPAS DE LAS REACCIONES
RADICALARIAS

Iniciación: R:R → R• + R•

Propagación R• + H:H → H• + R:H

Terminación H• + R• →R:H
H• + H• → H:H
R• + R• → R:R
 ¿Quiénes son las Especies Reactivas del
Oxígeno (ERO)?
Radicales libres: especie con
existencia independiente que posee No-radicales derivados del oxígeno
uno o más electrones no pareados. con una potente acción oxidante.

Radical t ½
ERO t½
•-
Anión radical
superóxido
O2 Enzimática= 10-9
Espontánea= 10-5 Depende de
Peróxido de
H2O
Radical
• OH 10-9 s (10-7-10-10)
hidrógeno Enzima
hidroxil
o 2

Radical
10-8 s Peroxinitrito ONOO- 0,05-1 s
L•
lipídico

Óxido
NO• 3-5 s
nítrico Ácido
hipocloroso
HClO 10-6 s
Radical
alcoxil RO• 10-6 s

Radical
ROO• 7 s
Alquil
peroxil
 ANTIOXIDANTE

CUALQUIER SUSTANCIA QUE

PRESENTE A MUY BAJAS
CONCENTRACIONES COMPARADAS
CON LA SUSTANCIA OXIDABLE,
PREVENGA O RETARDE SU
OXIDACIÓN
 ESTRÉS OXIDATIVO

Desbalance a corto o largo plazo del

equilibrio antioxidantes/pro-oxidantes
que provoca disrupción de los
sistemas de señalización y control a
consecuencia de favorecer los
procesos de pro-oxidación u
obstaculizar los mecanismos
antioxidantes.
H. Sies 1985. H.K.Bieslaski. (1997) Clinical Nutrition 16: 151-155. Jones 2006. Gregorio
2008
 Nuevo concepto de estrés oxidativo
H Sies 1985

Estrés oxidativo: desequilibrio entre la generación de agentes oxidantes

y los mecanismos oxdantes………….

Jones 2006: .. Disrupción de los mecanismos de señalización y

control que forman parte de los ciruitos redox
intercelulares…....
Envejecimiento
Cardiovasculares

Cancer

Enfermedades Dieta
Del SNC

Inflamación Activ. Fisica

 HIF-1α se produce y degrada de manera
constitutiva via VHL.
1. Prolil hidroxilasa NORMOXIA ∼6% O2 40
mmHg
2. Binding Hippel-Lindau tumor
suppressor (VHL)
VHL
HIF1α HIF1α CITOPLASMA
OH- 402 564 -OH
3. Ubiquitinilación
HIF1α
402
564
26S

4. Degradación
por proteasoma
NUCLEO
 La Prolil hidroxilasa es O2-dependiente
Prolil hidroxilase HIPOXIA

HIPOXIA
VHL
HIF1α HIF1α
402 Degradación HIF1α
564
OH- 402 564 -OH

CITOPLASMA
HIF1α NUCLEO
+ HIF1β Proliferación celular

HIF Co-activadores CBP/p300 Metabolismo

Glucosa
HIF HIF-1 es un heterodimero Angiogenesis
 Interacción entre los sistemas antioxidantes
Glutation reductasa
Daño tisular
en el G.R para regenerar
al sustrato utilizado como
NADP NADPH agente reductor para
inactivar a los radicales
HOCl MPO libres (H2O2) e (OH˚)
H2O + ½ O2 GR
Cl-
Catalasa GSH Se GSSG
Daño
a- GPx
SH H2O2

H2O
SOD
O2•-+ 2 H+ +•-
Transferrina
O2
Fe2+
Ceruloplasmina
Fe/Cu
Considerado el Ácidos grasos
OH-• poli-insaturados RO• RO2 •-
mas toxico
β caroteno
Peroxidación α α tocoferol O•
Lipídica tocoferol
Daño a proteínas OH
Radical
carbohidratos, ADN, β carotenoide
etc. Ácido dehidro
ascórbico Ascorbato Daño
tisular
Mecanismos reparadores
 ENFERMEDADES EN CUYA FISIOPATOLOGÍA
ESTÁ INVOLUCRADO EL DESBALANCE
REDOX
AGUDAS CRÓNICAS
Traum Parkinson
a Apoplejía Daño IR
Síndro Alzheimer
me Distrés Resp.
Hipertensión, Aterosclerosis
Rechaz Fibrosis cística
o agudo
(transpl Rechazo crónico (transplantes)
antes) Inflamación crónica
Inflamación Cáncer
Aguda Paracetamol Envejecimiento
(sobre dosis) Entrenamiento
sistemático
Xenobióticos
Ejercicio agudo
 PRINCIPALES FUENTES INDUCTORAS DEL
DESBALANCE REDOX

INEVITABLES EVITABLES
• •

Transporte Metabolismo de
•
electrónico • •• fármacos y
mitocondrial xenobióticos
•
Iones •
Humo del cigarro y
Metálicos de contaminantes
transición ambientales
Inflamación Radiaciones
Enzimas
generadoras Célula dañada por
ERO
Célula intacta
 Producción de O2•- por la
NADH deshidrogenasa
• El otro mecanismo de producción de O2·- en la mitocondria es la flavoproteína NADH
deshidrogenasa
• El grupo flavina de esta enzima es reducido durante el transporte electrónico al radical
flavina semiquinona que al reaccionar con el O2 produce O2·- en una reacción similar
a la de la ubisemiquinona.
FUENTES O MECANISMOS GENERADORES DE ERO

Iones de metales de transición

• •

•
•
 C5a
N-formil-Met-Leu-Phe
Complejos inmunes
LTB4

(+) NADPH
OXIDASA
(activa) O2 Fe
Ubiquinona
Cit b559 O 2·-
Ensamblaje Ubiquinona H2O2
Cit b559 ·OH
FAD FAD
NADP + O2·-
NADPH NADPH
SOD
OXIDASA H2O2 + Cl- HClO
MPO
(latente)
··
·
· · ··
··

Fagocito
·

· · Mieloperoxidasa
······· · (Gránulos citoplasmáticos)
· ··

activado
·····
·····
· Elastasa
·
Colagenasa
Gelatinasa

· ··
··
F
Lactoferrin · ·· ··
a UENTES O
Defensinas
Catepsina G MECANISMO
 FUENTES O MECANISMOS GENERADORES DE ERO
CONTAMINANTES AMBIENTALES

El agente oxidante más importante en la atmósfera

terrestre es el ozono (O3).
Otro de los contaminantes atmosféricos de gran
importancia es el dióxido de nitrógeno (NO2), el cual
absorbe la luz UV generando otros compuestos con
elevada reactividad:

NO2 NO· + O· Ciclo

fotolítico
O· + O3 del NO2
O2
NO2 + O2
O3 + NO·

Los efectos tóxicos fundamentales del NO2 y el O3 ocurren fundamentalmente en las vías
respiratorias.

El O3 genera una cascada de ERO altamente reactivas e inestables (aldehídos, ozónidos,

H2O2, hidroperóxidos lipídicos) que casi instantáneamente reaccionan con componentes de
las membranas y del citoplasma celular.
 Paracetamol (Acetaminofeno)

Dosis terapéuticas Dosis altas

Oxidasas de función
mixta Cyt P450 (2E1)

Reacciones de conjugación N-acetil-β-benzoquinona

(glucurónico, sulfato) imina (NAPQI)

Conjugación con Agotamiento severo

GSH → mercapturatos de GSH
NO TÓXICO

Unión de la NAPQI Estrés oxidativo

a
macromoléculas
celulares
DAÑO CELULAR
 MECANISMOS ANTIOXIDANTES
Mecanismos antioxidantes endógenos

a) Enzimas antioxidantes

SUPERÓXIDO DISMUTASA

Cataliza la dismutación del anión superóxido en H2O2 y O2.

SOD
O2·-+ O2·- + 2H+ H2O2 + O2

Cu/ZnSOD Todas las isoformas catalizan

Humanos MnSOD la dismutación del O2·- con
EC-SOD (Cu/Zn) similar eficiencia

Única enzima que se conoce actúa sobre un radical !!

MECANISMOS ANTIOXIDANTES
Hemo Hemo
Mecanismos antioxidantes endógenos

a) Enzimas antioxidantes
Hemo Hemo

CATALASA

Es un tetrámero que contien 4 subunidades de 60 kDa cada con un grupo hemo.

Existen muchas formas de catalasa, la mayoría presenta Fe (grupo hemo), pero algunas
poseen Mn

La mayoría de las bacterias anaerobias NO presentan catalasa

🖙Es una de las enzimas más eficientes que se conoce y de las más abundantes
🖙 Reacciona con el H2O2 para generar agua y oxígeno
🖙 Se localiza en la matriz de los peroxisomas y en la mitocondria (tejido cardiaco,
solamente), mientras que en eritrocitos se encuentra en citosol
 Para que pueda mantenerse la actividad de la GPx es
necesaria la actividad de la Glutatión reductasa (GR), una
enzima que emplea el NADPH como cofactor. La GR tiene
una distribución celular muy similar a la GPx.

ROOH GSH NADP+

Se obtiene de la
glutation peroxidasa Glucosa
para inactivar los
radicales libres
GPx GR Ruta de las
pentosas

GSSG NADPH
ROH
 Glutatión

O O
HOOC-CH(NH2)-CH2-CH2-C-NH-CH-C-NH-CH2-COOH
CH2
γ- glicina
SH
glutamil
cisteinil

Dr. Gregorio Martínez Sánchez, Ph.D.

 MECANISMOS ANTIOXIDANTES
ANTIOXIDANTES OBTENIDOS DE LA DIETA

Selenio Es un elemento esencial

1817 Jons Jakob Berzelius y G Hahn descubre y nombró este

elemento
en honor a la diosa de la luna Selene

1957 Dr. Klaus Schwarz. Establece el Se como nutriente esencial en

la nutrición animal
1973 Dr John Rotruck (Univ. Wisconsin) Demostró la incorporación
de Se a GPx
1980 Requerimientos diarios 50-200 μg (Nat. Acad Sci. EEUU)
1989 Requerimientos diarios 75-55 μg
 Sitio de unión
Transferrin del Fe
a

Receptor de la
transferrina
anclado en la
membrana
Secuestro de Fe por la transferrina
En el humano, la proteína
transferrina mantiene
secuestrado prácticamente todo
el Fe extracelular debido a su
extremadamente alta afinidad
por este ion
Sitio de unión del
Fe3+ a
la transferrina
humana
O tirosina
O
aspartato
N histidina
FeIII O FeIIITf(CO3 )
tirosina 2-
O
Kd ∼10-20
M
C O Fe3+ + Apo-Tf + CO 32-
O
MECANISMOS ANTIOXIDANTES CAROTENOIDES
ANTIOXIDANTES OBTENIDOS DE LA DIETA

β-caroteno Licopeno

OH OH

HO

Luteína Criptoxantina

Estructura química de los carotenoides más comunes obtenidos de la dieta

 MECANISMOS ANTIOXIDANTES
ANTIOXIDANTES OBTENIDOS DE LA DIETA

Vitamina E
El α-tocoferol es el que presenta mayor actividad biológica y representa aproximadamente
el 90% de todos los tocoferoles presentes en los tejidos de los mamíferos.

Lipido Se representa una capa

lipídica de la bicapa de
una membrana, Una vez
que el oxígeno reacciona
con la cadena lipídica, el
cambio de los momentos
dipolares determina que
los radicales peroxilos
puedan flotar hacia la
interface Vitamin E
 VitC and VitE como Co-Antioxidantes

Lípido

La V i t E ; l u e g o , l a s
enzimas remueven los
ácidos grasos dañados y
i ns ertan uno nuevo, Vitamina E
reparando los lípidos de la
membrana.
 Vit C y Vit E : Co-antioxidantes
La ordenación termodinámica muestra que el radical tocoferol TO•,
es másoxidante que Asc•-
Se cree que el ascorbato ayuda a reciclar el TO•, el que vuelve a
TOH

TO• + AscH- → TOH + Asc•-

Este mecanismo protege las moléculas de la oxidación cuando no hay

enzimas que puedan reciclar al TO•. Está en debate si este mecanismo
es importante en células o tejidos, aunque se piensa que protegería a las
LDL de las oxidaciones.
Vitamina E Evento
Ruptura de Iniciador Iniciación

cadena Radical libre

O2
R-OO-H R•
Hidroperóxido
Reaccción Propagación
en
cadena
R-H ROO•
Peroxyl Radical α−TO
Terminación
H
H H via
=
Antioxidante
Acído graso poli-insaturado R-OO-H α−TO•
Burton & Traber Annu.
Hidroperóxido Rev.
Nutr. 10: 357-382; 1990
 MECANISMOS ANTIOXIDANTES
ANTIOXIDANTES OBTENIDOS DE LA DIETA

Citrus, Collagen, Cold

Vitamina C
1500 a.n.e se describen estados carenciales
(fatiga, inflamación bucal, caída de los dientes = escorbuto)
1700s Se descubre que el jugo de cítricos previene en
los marinos el
escorbuto
1932 Fue cristalizada y obtenida en forma pura a partir del jugo de limón
por
los bioquímicos norteamericanos C.G. King y W.A. Waugh
• Es el más potente antioxidante de fase acuosa presente en
mamíferos
• Cumple una función muy importante en la regeneración del
α- tocoferol.
• La ingestión de vitamina C se ha asociado a una disminución
del riesgo dee cáncer
antioxidante inmunoestimulante.