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DAO CELULAR INDUCIDO POR

RADICALES LIBRES.

PROTECCIN CELULAR.
Mecanismos principales del dao celular inducido por xenobiticos:

1. Aumento de la formacin de ESPECIES REACTIVAS DE OXGENO - ROS


(radicales libres, perxidos, etc.), con el consiguiente estrs oxidativo. La
evolucin de estos procesos ha necesitado de la evolucin paralela de
sistemas de proteccin.

2. UNIN COVALENTE a macromolculas (protenas, polisacridos, lpidos,


ADN) que pierden su funcin y expresan el dao celular.
MECANISMOS DE TOXICIDAD DE XENOBITICOS

XENOBITICOS

metabolitos reactivos
metabolitos estables BIOTRANSFORMACION
(txico ltimo)

GSH

uniones peroxidacin
Ca ++ lipdica
DETOXIFICACIN covalentes

Mutacin haptenos alteraciones dao celular


metablicas

ELIMINACIN CANCER RESPUESTA


INMUNE NECROSIS
ESTRS OXIDATIVO
El estrs oxidativo es un estado de la clula en el cual se encuentra
alterada la xido-reduccin intracelular, es decir el balance entre
prooxidantes y antioxidantes.

El desbalance se debe a una excesiva produccin de especies reactivas de


oxgeno (ROS) y/o por deficiencia en los mecanismos antioxidantes,
conduciendo a dao celular.
ESPECIES REACTIVAS DE OXGENO.
El oxgeno es necesario para la vida, pero en determinadas condiciones, por
reacciones de naturaleza qumica, por accin enzimtica, por efecto de las
radiaciones ionizantes, etc., pueden producirse una serie de ROS (molculas
o radicales libres), capaces de reaccionar con otros compuestos presentes en
el organismo y, consecuentemente, llegar a producir un dao celular.

Un radical libre (RL) es aquella especie qumica, cargada o no, que tiene en
su estructura al menos un electrn desapareado.

Los RL son muy peligrosos porque son muy inestables y, por tanto, tienen una
vida media muy corta (tienden a aparearse robando electrones).
FUENTES DE RADICALES LIBRES DE OXGENO

INTRACELULARES
EXTRACELULARES
Transporte de electrones mitocondrial
Humo de cigarrillos
Reacciones del complejo citocromo P450 en RE
Luz solar
(metabolismo de xenobiticos)
Oxidacin de drogas (CCl4)
Metabolismo de cidos grasos en los peroxisomas
Radiaciones ionizantes
NADPH oxidasa de membrana
Shock trmico
Sustancias cclicas de (especialmente en clulas
Sustancias cclicas de (especialmente en
inflamatorias).
clulas inflamatorias) naturaleza redox
Subproductos de R. enzimticas (xantina oxidasa)
(paraquat)
Clulas fagocticas
Las ROS ms importantes son:

a) Anin superoxido: O2 + e- O2-.


b) Perxido de hidrgeno: 2O2-. + 2H+ H2O2 + O2
c) Radicales hidroxilo: H2O2 + O2-. O2 + HO- + HO.

El H2O2 puede reaccionar con metales divalentes (libres o unidos a


protenas) y producir HO. va reaccin de Fenton.
Muchos xenobiticos, directa o
indirectamente, pueden causar estrs
oxidativo como un componente de su
toxicidad, al formar ROS parcialmente
reducidos que son a su vez oxidantes muy
reactivos y, consecuentemente, muy
peligrosos.

El citocromo c tiene una ruta de


oxidacin alternativa a la normal por
accin del paraquat (herbicida
bipiridilo hepatotxico).

Obsrvese la formacin de radicales


libres.
DESTINO MOLECULAR DEL ESTRES OXIDATIVO
Cuando las especies reactivas oxidantes superan las defensas antioxidantes se produce el
estrs oxidativo, hay dao a macromolculas.

El posible destino celular bajo condiciones de estrs, depender de varios factores: el


contenido endgeno de defensas antioxidantes, el grado de estimulacin de las mismas bajo
la condicin de estrs, la reversibilidad de las modificaciones a macromolculas producidas,
la magnitud del estrs oxidativo y sus consecuencias funcionales.

LOS COMPUESTOS CELULARES MS SENSIBLES A LOS EFECTOS DE ESTOS OXIDANTES SON:

1. Las protenas
2. Los lpidos insaturados
3. Los cidos nucleicos
4. Los carbohidratos.
DESTINOS MOLECULARES DEL DAO OXIDATIVO

Oxidacin de protenas OXIDANTE Grupos de cidos graso


(enzimas, sistemas de transporte) poli nsaturados (membranas)

Oxidacin de Ac. Nucleicos Oxidacin de GSH Dienos conjugados


(mutaciones, transformacin) carbohidratos antioxidantes Ac. grasos hidroxilados
(cido hialurnico, sistema inmune) pentano, etano.
1.- PROTENAS.

a) Pueden reaccionar directamente con el ligando metlico de muchas


metaloprotenas.

El Fe de la hemoglobina puede reaccionar con el radical superxido o el


perxido de hidrgeno para formar metahemoglobina.

La Catalasa (hemoprotena citoplasmtica), es inhibida por el O2-., que la


convierte en sus formas inactivas ferroxi y ferrilo.

El peroxido de hidrgeno, puede reducir el Cu2+ de la superxido dismutasa


CuZn a Cu1+, reaccionando despus con l generando radical hidroxilo, que
ataca un residuo adyacente de histidina del centro activo del enzima, necesario
para la actividad cataltica.
b) Debido a la reactividad de los radicales libres con las molculas
insaturadas o que contienen azufre, las protenas con proporciones
elevadas de Trp, Tyr, Phe, His, Met y Cys pueden sufrir modificaciones de
aminocidos mediadas por radicales libres.

Enzimas (gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa o superoxido dismutasa),


que dependen de estos aminocidos para presentar su actividad, se inhiben
en presencia de radicales libres.

Las reacciones de los radicales libres con estos aminocidos dan lugar a
alteraciones estructurales en las protenas provocando entrecruzamientos y
fenmenos de agregacin, que se ven favorecidos por la formacin de
puentes disulfuro intra e intermoleculares.
c) Los procesos de oxidacin, pueden a su vez alterar la homeostasis
del calcio:
Por una disminucin en la actividad de la Calcio-ATPasa en las
membranas plasmticas secundaria a la oxidacin de tioles esenciales en
la protena o por formacin de aductos covalentes.
Altera los procesos en los que est implicado el calcio, la contraccin
muscular, sistemas de transporte, etc., que daan gravemente las
clulas.

d) Los enlaces peptdicos tambin son susceptibles de ser atacados


por los radicales libres (proteolisis). Estos enlaces pueden romperse
tras la oxidacin de residuos de prolina por radicales hidroxilo o
superxido.

e) La reaccin de los radicales libres con las protenas tambin genera


subproductos que amplificaran el dao inicial. la oxidacin del Trp
hasta H2O2.
2.- LPIDOS.

Los RL hidroxilo e hidroperoxilo pueden reaccionar con los cidos grasos


poliinsaturados (PUFA) de los fosfolpidos y de otros componentes lipdicos
de las membranas para formar hidroperxidos que pueden alterar la
estructura y funcin de las membranas.

Los PUFA de las membranas celulares, son muy vulnerables a los ataques
oxidativos por los RLO o por ROS, puesto que contienen grupos metileno
separados por dobles enlaces que debilitan el enlace C-H metileno.
FASES DE LA PEROXIDACION LIPIDICA
a) Iniciacin: RH + Iniciador (OH.) R. + H2O

b) Propagacin: R. + O2 ROO.
ROO. + RH ROOH + R.
c) Ramificaciones: ROOH RO. + OH.
2ROOH ROO. + RO. + H2O
d) Terminacin: ROO. + ROO. O2 + productos no radicales (ceto)
RH = cido graso insaturado OH. = radical hidroxilo
R. = radical alilo RO. = radical alcoxilo
ROO. = radical peroxilo ROOH = hidroperxido
La citotoxicidad de estas especies qumicas, en gran 3.- CIDOS NUCLEICOS.
parte, es una consecuencia de las aberraciones
cromosmicas producidas por las modificaciones
qumicas que sufren las bases y los azcares del
DNA al reaccionar con los radicales libres,
especialmente con el radical hidroxilo, con
consecuencias similares a las de los agentes
carcingenos.

Las modificaciones qumicas de los nucletidos


provocan, en muchos casos, la ruptura de las hebras
del DNA.

Si el dao que se origina es tan grande que no


puede ser reparado, se produce una mutacin, o
bien, la clula muere.
4.- CARBOHIDRATOS.
Los carbohidratos son daados por los radicales libres en menor proporcin
que otras molculas.

Los azcares: glucosa, manitol o ciertos desoxiazcares pueden reaccionar


con el radical hidroxilo para producir sustancias reactivas.

Los polisacridos pueden sufrir el ataque de los radicales libres,


fragmentndose a unidades ms sencillas (despolimerizacin del cido
hialurnico).
PROTECCION CELULAR CONTRA LOS OXIDANTES

Las clulas de mamferos han desarrollado sistemas de proteccin para


minimizar el dao resultante de la biotransformacin de xenobiticos y
productos oxidativos normales del metabolismo celular.
DEFENSAS ENZIMTICAS
1.- Reaccin de la superoxido-dismutasa (solo en arerobios):
2O2-. + 2H+ H2O2 + O2
2.- Reaccin de la catalasa (peroxidasas):
2H2O2 O2 + 2H2O
H2O2 + DH2 D + 2H2O
3.- Reaccin de la glutation-peroxidasa. Es el principal sistema de proteccin
endgeno. Tiene 3 funciones:
a) ROOH + 2GSH GSSG + ROH + H 2O
b) H2O2 + 2GSH GSSG + 2H 2O
c) Protena-S-S-R + 2GSH Protena-SH + GSSG + HS-R

El GSSG formado se reduce por accin del NADPH mediante una reaccin catalizada
por la glutation-reductasa:
GSSG + NADPH + H+ 2GSH + NADP+
LOCALIZACIN DE LAS ENZIMAS PROTECTORAS.

LA CATALASA se encuentra predominantemente en los peroxisomas y


mitocondrias.

LA GLUTATION-PEROXIDASA en lisosomas, mitocondrias y citosol, pero no


en peroxisomas.

La superoxido dismutasa en el citosol, aunque existe una segunda forma


que tambin aparece en las mitocondrias (espacio intermembranal).

DEFENSAS NO ENZIMTICAS
Antioxidantes. Diversos compuestos naturales tienen la capacidad de reaccionar con los radicales
libres sin generar nuevos radicales: tocoferol (vitamina E) , cido ascrbico (Vit. C), selenio y -
caroteno (Vit. A).
EL GLUTATION COMO AGENTE PROTECTOR
Las clulas de mamferos han desarrollado un sistema de proteccin para minimizar el dao
resultante de la biotransformacin de xenobiticos y productos oxidativos normales del
metabolismo celular. Este sistema es dependiente de glutation.

El glutation es un tripptido (-glutamil-cisteinil-glicina) con gran facilidad para ceder electrones


debido a su grupo sulfhidrilo (-SH).

Es un importante antioxidante en fase acuosa y un cofactor esencial de enzimas antioxidantes.


Da proteccin a la mitocondria contra radicales de oxgeno endgenos.
En las clulas se encuentra a concentraciones elevadas (del orden de mM), principalmente en el
hgado (10 mM), lo que contribuye a su gran poder reductor.
La disminucin de GSH conduce a la muerte celular y ha sido descrita en muchas condiciones
degenerativas.
Las dos funciones principales son:
Como basurero nucleoflico de muchos compuestos y sus metabolitos, va mecanismos qumicos y enzimticos,
convirtiendo centros electroflicos en uniones tioeter.
Como sustrato en el metabolismo de hidroperxidos (mediado por GSH peroxidasa) a los correspondientes alcoholes.
Las principales funciones de las clulas relacionadas con el poder
reductor del GSH son las siguientes:
PROCESOS PATOLGICOS RELACIONADOS CON LAS ROS

La citotoxicidad provocada por los RL, origina una amplia patologa, de


manera que se han relacionado con RL las siguientes enfermedades y
procesos clnicos:

Envejecimiento, Alzheimer, aterosclerosis, procesos autoinmunes, cncer,


cataratas, dermatitis de contacto, gota, enfermedades inflamatorias,
malaria, esclerosis mltiple, pancreatitis, Parkinson, artritis reumatoide,
demencia senil, talasemias y colitis ulcerosa.
ESPECIES REACTIVAS DEL NITRGENO (ERNs)
Las principales ERNs son el xido ntrico (NO.) y el peroxinitrito (ONOO-.)
considerado como uno de los ms potentes oxidantes biolgicos.

Las ERNs pueden daar y matar clulas por distintos mecanismos:

inactivacin de los distintos complejos de la cadena respiratoria


dao a protenas y a lpidos.
inhibicin de sntesis proteica o de ADN.
deplecin de GSH o de ATP entre otros.

La principal fuente de NO, en clulas de mamferos, es la oxidacin


enzimtica de L-arginina por una NO sintasa dependiente de calcio.

Arginina + NADPH + 2O2 NO + citrulina + 2H2O + 1NADP+


El NO. es una molcula de seal ubicua, que funciona en la regulacin de
distintos procesos en los sistemas nervioso, cardiovascular e inmune.
Est asociado a procesos inflamatorios neurotxicos y de isquemia/reperfusin.
El NO difunde desde su clula de origen a las clulas vecinas ya que es
suficientemente apolar para cruzar las membranas plasmticas sin un
transportador.
En la clula diana activa el enzima citoslica guanilil ciclasa, que cataliza la
formacin del segundo mensajero cGMP.
En el corazn el cGMP ocasiona contracciones menos enrgicas al estimular la
bombas (o bombas) de iones que expulsan Ca2+ del citosol.
El NO es inestable y su accin es breve, segundos despus de formarse sufre
una oxidacin a nitrito o nitrato.
Los nitrovasodilatadores producen una relajacin continua del msculo
cardaco ya que tardan varias horas en degradarse, produciendo una
corriente continua de NO.

.
El NO Tambin actuara induciendo la produccin mitocondrial de
peroxinitrito.

Producira a su vez la inhibicin del complejo I de la cadena respiratoria


(NADH:Ubiquinona Oxido-reductasa), lo cual tiene un efecto crtico sobre el
suplemento de energa en varios tejidos y sobre la produccin de EROs.

El dao irreversible de la cadena de transporte mitocondrial sera el


responsable, en parte, de la muerte neuronal observada en procesos
neurodegenerativos asociados a la enfermedad de Parkinson y al Alzheimer.