Facultad de Ciencias de la Vida

Departamento de Ciencias Biológicas

BIOL254 2022

Clase 04
Enfermedad Periodontal
Caries y Enfermedad periodontal
 Microbiología de la enfermedad periodontal

Encía Sana Gingivitis

Periodontitis
 Enfermedades de la encía. Gingivitis

 Dependiente sólo de la placa

 Modificada por factores sistémicos
Inducida por la placa  Modificada por medicamentos
 Modificada por la desnutrición

 De origen bacteriano específico

Gingivitis  De origen viral (herpes)
 De origen fúngico (eritema lineal)
 De origen genético (fibromatosis)
NO inducida por la placa  Manifestaciones de enf. sistémicas
 Lesiones traumáticas
 Enfermedad periodontal
Se clasifican de acuerdo a:
 El grado de progresión de la enfermedad (crónica, agresiva)
 La distribución de la lesión (localizada, generalizada)
 Grupo etáreo (juvenil, adulta)
 En asociación con desórdenes sistémicos o del desarrollo
 Enfermedad periodontal
Sano Gingivitis ? Periodontitis
 Modificaciones a los postulados de Koch
Socransky postuló las siguientes modificaciones para determinar los
patógenos periodontales:

i) La mayoría de las bacterias blanco deben estar asociados a la periodontitis.

ii) La eliminación de las bacterias blanco resulta en la detención de la progresión
de la enfermedad.
iii) Debe ser posible determinar la respuesta del hospedero frente a las bacterias
blanco.
iv) Si es posible, la patogenicidad debería ser demostrada en un modelo animal
adecuado.
v) Debería ser determinado un único mecanismo de patogenicidad.
Conformación bacteriana subgingival
La placa supragingival contiene muchos
compuestos bioactivos (ácidos orgánicos,
compuestos asufrados, enzimas proteolíticas
PAMPs, etc.

Estos compuestos difunden hacia la

superficie del epitelio gingival aumentando
el flujo de fluido crevicular gingival y fluido
inflamatorio del tejido periodontal.

Este nuevo suministro de nutrientes

modifica el ecosistema adyacente a la encía
inflamada. Las bacterias proteolíticas de la
placa se expanden, lo que acelera el daño
tisular
Conformación bacteriana subgingival
 Conformación bacteriana subgingival
 Existen más de 500 especies capaces de colonizar la placa subgingival

Ribotipificación

 Se han descrito más de 100 especies presentes en la microflora subgingival

que no son cultivables
 Se estima que existen unas 300 especies desconocidas
 Conformación bacteriana subgingival
La Placa Subgingival de puede dividir en tres:
i) Adherida al diente:
 Predominan Streptococci orales y Actinomyces spp., pero existen mayor proporción
de anaerobios estrictos (Veillonella, Peptostreptococcus, Eubacterium y Fusobacterium).
 Asociada a la caries radicular, ya que se relaciona directamente con la placa
supragingival.
 Zona donde existe una mayor mineralización de la placa: por precipitación de
sales a pH alcalino. Presencia de grandes cantidades de bacterias con la capacidad de
cristalización intracelular (Actinomyces spp., Corynebacterium matruchotii)

Actinomyces spp.
C. matruchotii
 Conformación bacteriana subgingival
La Placa Subgingival de puede dividir en tres:
ii) Asociada al epitelio:
 No es bien conocida su composición, pero estaría constituida por especies con la
capacidad de unirse a superficies blandas.
 Esta adhesión bacteria/células se debe principalmente a la presencia de fimbrias
específicas.
 Principalmente a Gram negativos y bacilos móviles. Prevotella nigrescens / Prevotella
intermedia. Porphyromonas gingivalis, Capnocytophaga spp., Fusobacterium spp.,
Aggragatibacter actinomycetemcomitans, etc.
 Están asociados a la invasión del tejido conectivo.

Fusobacterium Capnocytophaga
 Conformación bacteriana subgingival
La Placa Subgingival de puede dividir en tres:

iii) No adherida o flotante:

 Se dispone entre la placa adherida al diente y la adherida al epitelio. No
necesitan adherirse, sólo establecen uniones débiles.
 Microflora similar a la de la placa adherida al epitelio. Compuesta
principalmente por Gram negativos y bacilos móviles. Porphyromonas,
Prevotella spp., Fusobacterium, Selenomonas, Aggregatibacter, Eikenella y
Treponema denticola (hacia el fondo donde al Eh es más negativo).
 Inducen y aceleran el proceso inflamatorio.
 Progresión de la enfermedad
i) Inicialmente la enfermedad periodontal se manejaba eliminando la placa
bacteriana.
ii) Posteriormente se determinó que microorganismos como bacterias eran
responsables de la patología.
iii) En un comienzo la estrategia para determinar el o los agentes etiológicos
consistía en comparar la composición microbiana de la placa subgingival entre sitios
sanos, gingivitis y periodontitis.
iv) En la actualidad, con el desarrollo de la biología molecular, las metodologías de
diagnóstico, tratamiento y estimación de riesgo futuro se basan en el seguimiento y
cuantificación de factores de virulencia.

 Hoy en día es posible determinar el número de ciertos patógenos periodontales,

así como las propiedades de toxinas y enzimas destructoras de tejidos.
 Progresión de la enfermedad

Enzimas proteolíticas extracelulares:

i) Pueden degradar proteínas de la matriz extracelular.
ii) Pueden degradar inhibidores de proteinasas de la matriz del hospedero.
iii) Pueden activar metaloproteinasas de la matriz del hospedero.
iv) Pueden inducir citoquinas pro-inflamatorias involucradas en la
destrucción tisular y reabsorción ósea.
v) Pueden alterar las defensas del hospedero:
a) degradando receptores celulares
b) degradando proteínas del complemento
c) degradando anticuerpos y ciertas citoquinas
 Progresión de la enfermedad

Lipopolisacárido – Lípidos de ME – Fimbrias – Flagelo - Cápsulas - etc.

 Identificación Microbiana
Técnicas genéticas. DNA-DNA Checkerboard
Muestras

Sondas de DNA

Cada sonda de DNA es específica

para una especie bacteriana
 Identificación Microbiana
Técnicas genéticas. DNA-DNA Checkerboard
 Complejos microbianos en la Placa
Subgingival
Actinomyces
spp.

V. parvula
A. odontolyticus P. gingivalis
S. mitis
S. sanguis T. forsythia
S. oralis T. denticola
C. rectus
Streptococcus spp. C. gracilis
P. intermedia
S. gordonii
P. nigrescens
S. intermedius
M. micros
S. castellatus F. nuc. nucleatum
F. nuc. polymorphum
E. corrodens F. nuc. vincentii
C. gingivalis F. periodonticum
C. sputigena C. showae E. nodatum
C. ochracea
C. consisus
A. actino. a S. noxia
A. actinomycetemcomitans b
Complejos microbianos en la Placa
Subgingival
 Según estudios epidemiológicos y en
modelos animales

1.- Aggregatibacter actinomycetemcomitans Gram negativo

Capnofílico
2.- Porphyromonas gingivalis
Bacterias Gram
3.- Tannerella forsythia (ex Bacteroides forsythus) Negativas
anaerobias
estrictas
4.- Treponema denticola

Prevotella intermedia/nigrescens, Eikenella corrodens, Campylobacter rectus,

Eubacterium nodatum, Fusobacterium nucleatum, Micromonas micros y
Streptococcus intermedius
 Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)

Cocobacilo Gram negativo,

Lipopolisacárido (LPS),
No formador de esporas,
Leucotoxina,
Inmóvil,
Cdt,
Anaerobio facultativo
Fimbrias
Microaerofílico y Capnofílico
 Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)
Factores de adherencia:

Proteína Aae
i) Adherencia a células epiteliales

Proteína EmaA
i) Adherencia a colágeno

Polisacárido PGA (NAG)

i) Autoagregación
 Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)
Factores de adherencia, invasión y evasión del sistema inmune:

Proteína ApiA
i) Adherencia a células epiteliales
ii) Invasión de células epiteliales
iii) Resistencia al suero*
 Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)
Factores de adherencia e invasión:
Fimbria flp-1 y operon tad
i) Adherencia a células epiteliales
ii) Adherencia a la película adquirida y superficies abióticas
iii) Formación de Biopelículas
iv) Invasión de células epiteliales mediante receptores específicos

Generan un alto título de anticuerpos. Además anticuerpos específicos inhiben

adhesión>>>Vacuna?!
 Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)
Factores de adherencia y co-agregación:

Operon pilABCD:
 Pili Tipo IV y competencia
 PilA unión a DNA
 Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)
Factores que modulan el sistema inmune:
Leucotoxina (LtxA)
Proteína de 116 KDa anclada a la superficie del membrana externa de la
bacteria y secretada (LFA-1: CD11a CD18)

Destrucción de linfocitos vía Destrucción de linfocitos vía

apoptosis formación de poros y necrosis

Desgranulación de neutrófilos
Liberación de MMP8

Desregulación de la respuesta inmune!!!

 Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)
Factores que modulan el sistema inmune:
Lipopolisacárido (LPS)

Serotipificación en base al
Antígeno O:

 Mediante Anticuerpos y
PCR: a – g.
 b y c más prevalentes en
Chile.
 activación de la vía
alternativa del complemento.
 Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)
Factores que modulan el sistema inmune:
Lipopolisacárido (LPS)

Lípido A:

 activación de la vía clásica

del complemento.
 Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)
Factores que modulan el sistema inmune:
Lipopolisacárido (LPS)

Citoquinas:
IL-8
IL-1
TNF (Factor de necrosis tumoral )
PGE2 (Prostaglandina E2)
 Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)
Factores que modulan el sistema inmune:

Aa estimula TH17

RANKL
 Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)
Factores que modulan el sistema inmune:
Proteasas

A. actinomycetemcomitans posee:
i) serina proteasas
ii) proteasas que degradan IgG (todas), IgA e IgM

Desregulación de la
respuesta inmune

Degradación de fibrinógeno y colágeno

 Enfermedad periodontal
Sano Gingivitis ? Periodontitis
Microbiología de la periodontitis crónica
 Treponema denticola

Espiroqueta Gram negativa, Lipopolisacárido, lípidos

Asacarolítico, Msp,
Móvil, Enzimas proteolíticas extracelulares,
Anaerobio estricto Flagelo
 Treponema denticola
Factores de adherencia e invasión:
Proteína Msp (major surface protein)
i) (53 KDa): se une a fibrinógeno, fibronectina y laminina unión de la bacteria
a células del hospedero. Promueve la destrucción de células epiteliales (mecanismo
desconocido), formación de poros?
ii) (64 KDa): se une a complejos de quimiotripsinas y a fibroblastos gingivales.

a) Poseen efecto citotóxico sobre:

Fibroblastos gingivales Células epiteliales
Linfocitos Eritrocitos

b) Aumentan la respuesta inflamatoria:

Promueven la desgranulación de PMN (colagenasas, gelatinasas) y
metaloproteinasas de la matriz (MMP-8 y MMP-9)
 Treponema denticola
Factores de adherencia e invasión:
Flagelo Permite un movimiento tipo
“atornillador”. Esto le permite moverse
en microambientes muy viscosos (FCG),
penetrar el epitelio gingival y tejido
conectivo.

El flagelo está compuesto por tres

filamentos: FlaA (38 KDa)
FlaB1 (35KDa)
FlaB2 (35 KDa)
FlaB3 (34 KDa)
 Treponema denticola
Factores que modulan el sistema inmune:

Enzimas proteolíticas extracelulares. Trepolisina o Dentilisina

i) hidroliza: fibrinógeno, transferrina, gelatina, colágeno tipo IV, IgG e IgA.

ii) degrada: bradiquinina, sustancia P y angiotensinas I y II.
iii) degrada: inhibidores de proteasas como 1-antitripsina, antitrombina III,
etc.
iv) induce: apoptosis en células epiteliales.

“La habilidad de degradar proteínas de la matriz, proteínas regulatorias de proteasas y de la

respuesta inmune contribuye a la destrucción incontrolada del tejido periodontal y
progresión de la enfermedad"
 Treponema denticola
Factores que modulan el sistema inmune:

Enzimas proteolíticas extracelulares. Cistalisina

Hidroliza proteínas y libera:

i) piruvato: utilizado como fuente de energía
ii) NH3: alcaliniza el medio.
iii) H2S: es tóxico para glóbulos rojos y otras células presente en
el epitelio (mal olor).

“La cistalisina hidroliza puentes disúlfuro, por lo tanto, inactiva inmunoglobulinas,

citoquinas, etc, desregulando la respuesta inmune. "
 Tannerella forsythia ex Bacteroides forsythus

Bacilo fusiforme Gram negativo,

Sacarolítico, Lipopolisacárido,
Anaerobio estricto, Enzimas proteolíticas extracelulares,
Requiere ácido N-acetilmurámico
 Tannerella forsythia
Factores de virulencia:

Se sabe muy poco de sus factores de virulencia porque es muy difícil de cultivar en
el laboratorio.

LPS
Parecido al de P. gingivalis (reacciones cruzadas en ensayos de ELISA)

Enzimas proteolíticas extracelulares

Enzimas tipo tripsina: Serina proteasas (70 KDa y (81 KDa)
Cisteína proteasa hemolítica PrtH (48KDa)

Otros antígenos
Proteína tipo GroEL
BspA (proteína de superficie). Título elevado de anticuerpos en
pacientes con periodontitis crónica. Se uniría a CD14 y TLR-4?! y a fibrinógeno.
 Porphyromonas gingivalis (PG)

Cápsula,
Cocobacilo Gram negativo,
Lipopolisacárido,
No móvil,
Fimbrias,
Asacarolítico
Enzimas proteolíticas extracelulares,
Anaerobio obligado
Hemaglutininas.
 Porphyromonas gingivalis (PG)
Factores de adherencia, invasión y evasión del sistema inmune:
Cápsula: Antígeno capsular K
Serotipificación:
K1, K2, K3, K4, K5, K6 y K(-)

Cápsula de PG:
i) aumenta la invasividad
ii) inhibe la adherencia de los fibroblastos del
ligamento periodontal al diente
iii) resistencia a la fagocitosis
iv) disminuye la activación de la vía alterna del
complemento
v) aumenta la hidrofobicidad de la bacteria
 Porphyromonas gingivalis (PG)
Factores de adherencia e invasión
Fimbrias
i) Son altamente antigénicas tanto en pacientes con periodontitis agresiva como con
periodontitis crónica.
ii) Altos niveles séricos de IgA e IgG (isotipo IgG3).
iii) Esta compuesta por fibrillas de una proteína de 43 KDa codificada por el gen fimA
iv) De acuerdo a su “antigenicidad” son clasificadas en serotipos: Tipo I, II, III, IV y V

Tipo I: adhesión e invasión de células epiteliales orales y fibroblastos

La invasión estimularía la expresión de receptores ICAM-1, VCAM-1, Selectinas P

y E. Reclutamiento de linfocitos aumentando la inflamación.

“La inmunización con péptidos fimbriales protege de la pérdida de hueso en un modelo

murino.”
 Porphyromonas gingivalis (PG)
Factores que modulan el sistema inmune:
Lipopolisacárido (LPS)

Es el antígeno de superficie más importante de PG. (IgG2)

Antígeno O: tetrasacáridos fosforilados

i) Rha-P (1-3) Gal-P (1-3) Glc-P (1-4) GlcNAc-P
ii) Glc-P (1-4) Rha-P (1-3) GalNAc-P (1-3) Gal-P
 Porphyromonas gingivalis (PG)
Factores que modulan el sistema inmune:
Lipopolisacárido (LPS)

Las modificaciones del LPS de PG son importantes en la respuesta del hospedero:

IL-1
IL-6 Fibroblastos gingivales
IL-8

IL-13
IL-5 Linfocitos Th2
IL-10

El LPS de P. gingivalis induce la reabsorción ósea estimulando células mieloides

(macrófagos) y no-mieloides (fibroblastos). Además bloquea la inmunidad adquirida
estimulando células de la línea linfoide (Th2)
 Porphyromonas gingivalis (PG)
Factores que modulan el sistema inmune:
Enzimas proteolíticas extracelulares
PG posee una gran cantidad de proteasas extracelulares, pero las más importantes son
las denominadas “gingipain (gingipainas)”, que poseen el 80 % del total de la actividad
proteolítica y el 100% de la actividad proteolítica tipo tripsina de esta bacteria.

Cisteína Proteasas Gingipain R (arg-gingipain)

Gingipain K (lys-gingipain)

Gingipain R Gingipain K

rgpA rgpB kgp

 Porphyromonas gingivalis (PG)
Efecto sobre los componentes del
complemento (reclutamiento de
PMN, evasión de la opsonización
Activación de Metaloproteinasas y fagocitosis) Degradación de los receptores de
de la Matriz, MMP (aumentando PMN (evasión de la actividad
actividad proteolítica del antibacteriana y fagocitosis)
hospedero)

Estimulación de la síntesis de
Degradación de citoquinas Gingipains MMP por los fibroblastos
(desregulación de la reacción gingivales (aumento local de la
inflamatoria local) actividad proteolítica)

Activación de la vía de la Degradación de péptidos

Calicreína/Quinina (generación
de fluido crevicular gingival)
antibacterianos (evasión de la
Des-regulación de la coagulación actividad antibacteriana)
y las vías fibrinolíticas (liberación
de trombina, reabsorción ósea y
tendencia al sangramiento)
 Prevotella intermedia/nigrescens

Bacilo Gram negativo,

Anaerobio estricto, Lipopolisacárido,
Algunas especies presentan Hemaglutininas,
pigmentos negros -lactamasas
 Fusobacterium nucleatum
 F. nucleatum mejora la unión de P.
Fusobacterium nucleatum: gingivalis en células del hospedero.
subsp. nucleatum
subsp. vicentii  Agrava la pérdida de hueso alveolar
subsp. polymorphum e induce una mayor respuesta
inflamatoria en comparación con la
mono infección en modelo murino.

 Efecto sinérgico en la destrucción de

tejido blando en un modelo murino.
 Hipótesis de la placa ecológica

Predominio G(+)
Inflamación FCG bajo Anaerobios
Reducción
reducida Alto Eh Facultativos
de la placa
Respuesta Cambios Cambio
Inflamatoria Ambientales Ecológico

Inflamación Predominio G(-)

Acumulación FCG alto Anaerobios
de placa aumentada
Bajo Eh Obligados

 Los microorganismos son necesarios, pero no suficientes para el desarrollo de

la Enfermedad Periodontal.
 El rol de la respuesta inflamatoria del hospedero es un determinante crítico
de la susceptibilidad y severidad de la Enfermedad Periodontal.