Instituto Tecnológico Superior de Zacapoaxtla

Efecto potencial antimicrobiano del mucus secretado por la ranita

verde (Ecnomiohyla miotympanum) en cepas de Escherichia coli y
Staphylococcus aureus de la Sierra Nororiental del Estado de Puebla, Méx.

Tesis que para obtener el título de:

Licenciada en Biología
Presenta:
Yulissa Galaviz Marín
Director de tesis:
Dr. Guillermo Alfonso Woolrich Piña
Codirector Q. F. B. Martín Palafox Rodríguez
 Introducción

Los antibióticos son sustancias químicas que ejercen una acción específica ante alguna infección o
enfermedad.

Al año mundialmente mueren mas de 2 millones de personas por infecciones que han tenido alguna
resistencia bacteriana.

El mal uso de antibióticos hace que las bacterias cada dia se vuelvan más resistentes.

Las bacterias como Escherichia coli y Staphylococcus aureus tienen la destreza de evadir el efecto
antimicrobiano de antibióticos comunes.

Staphylococcus aureus es una bacteria potencialmente patógena la cuál es altamente resistente a

anticépticos.

Escherichia coli es una bacteria que coloniza comúnmente el intestino del hombre aunque algunas cepas
son patógenas con una mayor resistencia antibacteriana.
 INTRODUCCIÓN
MUEREN 2
MILLONES
ANTIBIÓTICOS
DE
PERSONAS

Staphylococcus
DEFUNCIONES Escherichia coli
aureus
Se buscan alternativas de antimicrobianos que sean mas eficaces en el tratamiento de
enfermedades causadas por bacterias patógenas.

Los péptidos antimicrobianos son moléculas efectoras del sistema inmune innato y se encuentran
en casi todos los organismos o familias.

Las sustancias cutáneas de los anfibios son una rica fuente de péptidos antimicrobianos.

Se han encontrado nuevos péptidos en el mucus de la piel de anfibios los cuales tienen un efecto
antibiotico.

Los péptidos antimicrobianos de anfibios se han clasificado en familias (dermaseptina, filoseptina,

brevinina, esculentina y temporina.
 Alternativas de
PÉPTIDOS Sustancias cútaneas
antimicrobianos

Clasificación de
familias (dermaseptina,
MOCUS filoseptina, brevinina,
esculentina y
temporina.
Antecedentes

El descubrimiento de microorganismos patógenos inició en 1859 con

Louis Pasteur
En 1928 Alexander Fleming dio a conocer el primer antibiótico el cual
llamó Penicilina
 1928
Alexander
Fleming
Justificación

La resistencia antimicrobiana de las bacterias se ha convertido en un problema

muy importante para la sociedad ya que las enfermedades son mas frecuentes
día con día.

Las enfermedades diarreicas causadas por Escherichia coli son de las

principales causas de morbilidad y mortalidad a nivel mundial.

Staphylococcus aureus provoca desde infecciones de la piel hasta enfermedades

que ponen en juego la vida humana.

El mucus secretado por Ecnomiohyla miotympanum es una excelente alternativa

para un efecto antimicrobiano.
 Resistencia Enfermedades
antimicrobiana Diarreicas
JUSTIFICACIÓ
N
Staphylococcu Ecnomiohyla
s aureus miotympanum
Objetivos

Objetivo General

Evaluar el efecto potencial del mucus secretado por la ranita verde

(Ecnomiohyla miotympanum) en cepas de Escherichia coli y
Staphylococcus aureus de la Sierra Nororiental del estado de
Puebla, México.

Objetivos Específicos
Evaluar el efecto antimicrobiano del mucus en cuatro diferentes
diluciones de PBS (10 %, 25 %, 50 % y 75 %)

Comparar el tamaño del halo de inhibición bacteriana en 16, 24 y

48 horas.
OBJETIVO GENERAL
Evaluar el efecto potencial
del mucus secretado por la
ranita verde (Ecnomiohyla
miotympanum) en cepas de
Escherichia coli y
Staphylococcus aureus de
la Sierra Nororiental del
estado de Puebla, México.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Evaluar el efecto
antimicrobiano del mucus en
cuatro diferentes diluciones de
PBS (10 %, 25 %, 50 % y 75
%)
Comparar el tamaño del halo
de inhibición bacteriana en 16,
24 y 48 horas.
Hipótesis

Debido a que en los anfibios se encuentra una alta gama de péptidos antimicrobianos
capaces de inhibir patógenos, se espera comprobar un efecto potencial antimicrobiano
positivo del mucus secretado por Ecnomiohyla miotympaum en cepas de Escherichia
coli y Staphylococcus aureus en diferentes concentraciones aplicadas.
HIPÓTESIS

Debido a que en los anfibios se encuentra una alta gama de

péptidos antimicrobianos capaces de inhibir patógenos, se espera
comprobar un efecto potencial antimicrobiano positivo del mucus
secretado por Ecnomiohyla miotympaum en cepas de Escherichia
coli y Staphylococcus aureus en diferentes concentraciones
aplicadas.
Descripción de Ecnomiohyla miotympanum

Es una rana endémica de México.

La unión internacional para la conservación de la naturaleza cataloga a E.

miotympanum como casi amenazada por lo que se clasifica vulnerable.

Reino Animalia
Phylum o división Chordata
Clase Amphibia
Orden Anura
Familia Hylidae
Género Ecnomiohyla
Especie Ecnomiohyla miotympanum
Nombre científico Ecnomiohyla miotympanum (Cope, 1863)

El nombre común de E. miotympanum es ranita verde tambien llamada “calate.”

Su coloración general es verde claro dorsalmente y crema inmaculado

ventralmente, aunque también pueden observarse especímenes café claro con o
sin reticulaciones café obscuro y verde olivo en el dorso.

Es una rana moderadamente pequeña en machos 38.4 mm y en hembras 51 mm.

Es de habitos nocturnos que vive en los bosques de encino, en las cañadas
aledañas a zonas de cultivo y cerca de los arroyos que surcan las cañadas
rocosas.
 Es una rana endémica de México.
Reino
Nombre Animalia La unión internacional para la conservación
científico Phylum o de la naturaleza cataloga a E. miotympanum
Ecnomiohyla
miotympanu división como casi amenazada por lo que se
m (Cope, Chordata clasifica vulnerable.
1863)

Ecnomiohyla Su coloración general es verde claro

Especie miotympanum Clase
dorsalmente y crema inmaculado
Ecnomiohyla
Amphibia ventralmente, aunque también pueden
miotympanum
Ranita verde observarse especímenes café claro con o
“calate.” sin reticulaciones café obscuro y verde olivo
en el dorso.
Género Orden
Es una rana moderadamente pequeña en
Ecnomiohyla
Anura
machos 38.4 mm y en hembras 51 mm.
Familia Es de habitos nocturnos que vive en los
Hylidae
bosques de encino, en las cañadas
aledañas a zonas de cultivo y cerca de los
arroyos que surcan las cañadas rocosas.
Descripción de Escherichia coli.

Esta especie pertenece a la familia Enterobacteriaceae, es uno de los organismos

mas estudiados y de mayor importancia.

El genero Escherichia es llamado asi en honor al pediatra Theodor Escherich.

Se han encontrado mas de 700 serotipos.

Esta bacteria permanece inofensiva en el tracto digestivo desde el nacimiento del

ser humano.

Causa infecciones aun sin que todas las cepas sean patógenas.

El nivel de distribución de esta bacteria es mundial y está amenazando por la

resistencia frecuente a los antimicrobianos.

Para la identificación y diagnóstico de esta especie en un paciente con diarrea del

viajero se necesita un aislamiento de heces para la mayoría de categorías en E. coli
para que posteriormente sean enviadas a un laboratorio.
 Familia
Enterobacter
iaceae
Identificación
y Diagnóstico Género
Aislamiento de Escherichia
heces

Escherichia
Distribución coli. 700
Mundial Serotipos

Causa Permanencia
Infecciones Inofensiva
Descripción de Staphylococcus aureus

El género Staphylococcus fue nombrado por Ogston que viene del griego sthaphyle
que significa racimo de uvas con el fin de describir a los cocos responsables de
inflamación y supuración.

S. aureus forma parte de la familia Microccocaceae, genero Staphylococcus, el cual

contiene más de 30 especies diferentes.

La mayoría de los niños y adultos son colonizados en forma intermitente por S.

aureus.

La identificación y aislamiento de S. aureus se lleva a cabo por medio de muestras

clínicas, por ejemplo, en sangre, tejido, aspirados de abscesos y líquidos estériles.

Albergan en forma en la nasofaringe, en ocasiones puede ser en la piel, poco común

en la vagina y en forma excepcional en el recto o el área perineal.
 Nombrado por Ogston que viene del griego sthaphyle que significa racimo de
uvas con el fin de describir a los cocos responsables de inflamación y

Staphylococcus aureus
supuración.

S. aureus forma parte de la familia Microccocaceae, genero Staphylococcus, el

cual contiene más de 30 especies diferentes.

La mayoría de los niños y adultos son colonizados en forma intermitente por S.

aureus

La identificación y aislamiento de S. aureus se lleva a cabo por medio de

muestras clínicas, por ejemplo, en sangre, tejido, aspirados de abscesos y
líquidos estériles.

Albergan en forma en la nasofaringe, en ocasiones puede ser en la piel, poco común

en la vagina y en forma excepcional en el recto o el área perineal.
Método de campo

Para la colecta de E. miotympanum se llevó a cabo la técnica oportunista.

Se realizó un muestreo de campo en dos diferentes estaciones del año (primavera e
invierno) con un total de 14 muestreos.
Trabajo de laboratorio

Se aisló S. aureus en agar Sal y Manitol incubando por 24 horas y E. coli fue aislada
en agar EMB también por un lapso de 24 horas.
Se hizo una identificación de las dos bacterias por medio de la técnica tinción de
Gram y pruebas bioquímicas.

Se extrajo el mucus suficiente secretado por la ranita verde.

Se realizó una solución de PBS al 10%.
Se prepararon cuatro concentraciones diferentes de mucus con PBS.

Con la técnica Quorum sensing se vertieron sensidiscos en cada concentración y

fueron colocados en cajas con cada bacteria correspondiente previamente
sembradas con un estriado de ángulo recto para ambos casos.
ra la colecta de E. miotympanum
se llevó a cabo la técnica
oportunista.
Se realizó un muestreo de campo
en dos diferentes estaciones del
año (primavera e invierno) con un
total de 14 muestreos.
Trabajo de laboratorio
Se extrajo el mucus suficiente
secretado por la ranita verde.
Se hizo una identificación de las
dos bacterias por medio de la
técnica tinción de Gram y
pruebas bioquímicas.
Se aisló S. aureus en agar Sal y
Manitol incubando por 24 horas y
E. coli fue aislada en agar EMB
también por un lapso de 24
horas.
Se realizó una solución de PBS al
10%.
Se prepararon cuatro
concentraciones diferentes de
mucus con PBS.
Con la técnica Quorum sensing
se vertieron sensidiscos en cada
concentración y fueron colocados
en cajas con cada bacteria
correspondiente previamente
sembradas con un estriado de
ángulo recto para ambos casos.
Análisis Kruskal-Wallis en diferentes concentraciones de Escherichia coli.
Análisis Kruskal-Wallis en diferentes concentraciones de Staphylococcus aureus.
Prueba de Wald en E. coli y S. aureus contra las horas.
Discusión

Se encontró un péptido El presente trabajo tiene similitud ya que también se

antimicrobiano llamado esculentina utilizaron diferentes concentraciones y diferentes
el cual inhibe la bacteria horarios comprobando que en E. miotympanum si
Corynebacterium jeikeium se existe un efecto potencial antimicrobiano ante E.
realizaron diferentes coli y S. aureus.
concentraciones de en un lapso de
tiempo a corto plazo que iba de 40
minutos a 24 horas teniendo como
resultado que esculentina tiene un
efecto potencialmente inhibitorio
ante Corynebacterium jeikeium.
 DISCUSIÓN
Se encontró un péptido antimicrobiano
llamado esculentina el cual inhibe la
bacteria Corynebacterium jeikeium se
realizaron diferentes concentraciones
de en un lapso de tiempo a corto plazo
que iba de 40 minutos a 24 horas
teniendo como resultado que El presente trabajo tiene similitud ya que también se
esculentina tiene un efecto utilizaron diferentes concentraciones y diferentes
potencialmente inhibitorio ante horarios comprobando que en E. miotympanum si
Corynebacterium jeikeium. existe un efecto potencial antimicrobiano ante E.
coli y S. aureus.
Conclusión

La concentración del 10% tuvo el menor efecto inhibitorio para ambas cepas.

La concentración del 75% fue la más efectiva para inhibir las dos bacterias, es la

concentración que tiene más mucus de rana que PBS.

De los monitoreos realizados en los tres lapsos de tiempo, los halos de inhibición

se formaron eficazmente a las 72 horas.

Se concluye que a mayor tiempo transcurrido (72 horas) y a mayor concentración

(75%) es mayor antimicrobiano del mucus producido por la ranita verde.


La concentración del 10% tuvo
el menor efecto inhibitorio para
ambas cepas.
CONCLUSIÓ
N
De los monitoreos realizados
en los tres lapsos de tiempo,
los halos de inhibición se
formaron eficazmente a las 72
horas.
La concentración del 75% fue
la más efectiva para inhibir las
dos bacterias, es la
concentración que tiene más
mucus de rana que PBS.
Se concluye que a mayor
tiempo transcurrido (72 horas)
y a mayor concentración (75%)
es mayor antimicrobiano del
mucus producido por la ranita
verde.
Perspectivas

se tiene la expectativa de estudiar más a fondo las proteínas

y su cuantificación así como la identificación de péptidos que
se encuentran en el mucus de la rana Ecnomiohyla
miotympanum.

experimentar con diferentes especies del género anura,

especialmente en ranas de la zona de la sierra nororiental del
estado de Puebla.
 PERSPECTIVAS

Experimentar con
diferentes especies del
género anura,
especialmente en ranas
de la zona de la sierra
nororiental del estado de
Se tiene la expectativa Puebla.
de estudiar más a fondo
las proteínas y su
cuantificación así como
la identificación de
péptidos que se
encuentran en el mucus
de la rana Ecnomiohyla
miotympanum.