VALIDACIÓN de métodos

analíticos
por: QFB MARÍA ESTHER HERNÁNDEZ JIMÉNEZ
FES-ZARAGOZA
ESPECIALIDAD FARMACIA INDUSTRIAL
Abril-2022
Justificación(1):

🠶 Una etapa fundamental en el diseño de medicamentos es el

desarrollo de metodología analítica exacta y precisa que garantice la
calidad del producto.
🠶 De acuerdo con el CFR 🡺 los métodos que los métodos que se
empleen para el aseguramiento de la calidad de los productos
farmacéuticos con especificaciones establecidas cumplan los
estándares de exactitud y confiabilidad. Indican que los usuarios de
los métodos analíticos descritos en la USP/NF NO requieren validar
la exactitud y confiabilidad de estos métodos, sino solamente
verificar su adaptabilidad bajo sus condiciones de operación.
Justificación(1):

🠶 Otras fuentes han argumentado que los métodos establecidos en

medios oficiales (como la USP, AOAC y otros) deberán validarse
igualmente, ya que nuevas condiciones de operación, reactivos,
instrumentos y personal, pueden alterar sus características.
🠶 Además se tiene la experiencia de que los métodos compendiales
descritos en las Farmacopeas, no producen los mismos resultados en
productos con los mismos Principios Activos (API’s), pero con
diferente formulación, por lo que es necesaria la validación analítica
para cada producto.
 🠶 “La validación de un método analítico es el
proceso por el cual se establece, mediante
estudios de laboratorio, que las características
¿qué es la de desempeño del método cumplen con los
requisitos para las aplicaciones analíticas
validación de previstas.(2)”
métodos 🠶 USP 31 –NF 26, Capítulo General Validación
de métodos farmacopeicos.
analíticos?
 FDA draft guidance – Analytical Procedures
and Methods Validation(3):
🠶“La validación de métodos, es el proceso
por el cual se demuestra que los
procedimientos analíticos son aptos para el
uso indicado.”
¿Cuál es el objetivo de la Validación?

🠶“El objetivo de la validación de un

procedimiento analítico es demostrar
que es apto para el propósito
indicado.”
🠶 (ICH Guideline Q2A – Text on Validation of Analytical
Procedures)
ICH Q2(R1)
🠶Validation of Analytical Procedures: Text and
Methodology „
🠶Documento principal (parámetros de
validación necesarios, características que
deben ser consideradas): etapa 5, Oct 94 …
Lo que buscamos en la Validación de MA:

🠶 Linealidad
🠶 Especificidad
🠶 Límite de Detección
🠶 Límite de cuantificación
🠶 Precisión
🠶 Exactitud
 Componentes de calidad de datos analíticos:

Verificación del CC Calificación de los

(Calibración de instrumentos
materiales de analíticos
referencia)

Pruebas de aptitud Validación de los

del Sistema Métodos Analíticos
 Componentes del Proceso de Validación:
Analista Equipo Instrumental Método
Calificación del Calificación de la Calificación del
Calificación de la
diseño y desarrollo operación (OQ) desempeño (PQ)
instalación (IQ)
del método (DQ)

Etapa de
calificación Definir Diseñar Instalar Preparar Funcionar Operar

Ciclo de vida
del equipo
INSTRUMENTO MÉTODO
Necesidad de Soporte Técnico
validación

Papel y Usuario del Método

responsabilidad
 ¿Por qué es necesaria la validación analítica?

Métodos
confiables

Métodos
reproducibles

🠶 ¿Cuál es el propósito de la validación analítica?

¿CUÁNDO VALIDAR?

🠶El método analítico debe estar

NORMALIZADO antes de iniciar el
proceso de validación.
Etapas para desarrollar un Método analítico:

🠶 Búsqueda bibliográfica.
🠶 Definir las condiciones:
Práctico: tiempo,
🠶 El equipo recursos.
🠶 Los reactivos
🠶 El muestreo Idóneo: preciso, exacto.

🠶 Estandarizar el Método
🠶 Encontrar las condiciones óptimas
🠶 Validar
Validación de Métodos Analíticos(4):

Requiere:
• Instrumentos analíticos calificados y calibrados.
• Métodos documentados.
• Patrones de referencia confiables.
• Analistas calificados.
• Integridad de la muestra.
Validación de Métodos Analíticos(5):

PROTOCOLO DE VALIDACIÓN DE MÉTODO

ANALÍTICO, DEBE ESPECIFICAR:
❑ El propósito y alcance.
❑ Responsabilidades y competencias del equipo de trabajo.
❑ Método de ensayo normalizado y documentado (los pasos
del método no pueden ser modificados durante la
validación).
PROTOCOLO DE VALIDACIÓN DE MÉTODO ANALÍTICO(6):
DEBE ESPECIFICAR:

🠶 Lista de materiales y equipos.

🠶 Las características de desempeño que se evaluarán: especificidad,
linealidad, etc. y el Procedimiento para evaluarlas. Experimentos
para cada parámetro).
🠶 Análisis estadístico o fórmulas
🠶 Criterio de aceptación para cada parámetro de desempeño (los
criterios de aceptación no pueden cambiarse para ajustarse a los
datos).
DEFINICIONES(8):
1) Adecuabilidad del Sistema (System suitability): Verificación de que el sistema opera con
base a criterios que permitan asegurar la confiabilidad de los resultados de un método
analítico.
2) Analito: Componente específico de una muestra a medir.
3) Calibración: Conjunto de operaciones que determinan la relación entre los valores
indicados por un instrumento de medición y los valores conocidos correspondientes a un
patrón de referencia.
4) Documentación: Conjunto de información que sustenta una actividad realizada
5) Especificaciones: Descripción del material que incluye la definición de sus propiedades y
características, con las tolerancias de variación de los parámetros de calidad.
6) Especificidad: Capacidad de un método analítico para obtener una respuesta debida
únicamente al analito de interés.
7) Estudio colaborativo: Reproducibilidad realizada en distintos laboratorios, por diferentes
químicos.
 DEFINICIONES(8):
8) Exactitud: Concordancia entre un valor obtenido empleando el método y el valor de referencia.
9) Estabilidad analítica de la muestra: Propiedad de una muestra preparada, de conservar su
integridad fisicoquímica y la concentración del analito, después de almacenarse por un tiempo y
condiciones determinadas.
10) Intervalo: Concentraciones incluidas entre la concentración superior e inferior del analito
(incluyendo éstas), para las cuales se ha demostrado que el método es preciso, exacto y lineal.
11) Límite de cuantificación: Concentración mínima del analito que se puede determinar con
precisión y exactitud aceptables.
12) Límite de detección: Concentración mínima del analito que puede ser detectada, pero no
necesariamente cuantificada.
 DEFINICIONES(8):
13) Linealidad: Habilidad para asegurar que los resultados obtenidos directamente o por una
transformación matemática, son proporcionales a la concentración del analito.
14) Metodología de prueba: Procedimiento para determinar si un producto o materia prima cumple con
las especificaciones establecidas.
15) Método analítico: descripción de la secuencia de actividades, materiales y parámetros que se deben
cumplir para llevar a cabo el análisis de un componente específico de la muestra.
16) Método analítico desarrollado internamente: Método desarrollado por el propio laboratorio.
17) Método analítico indicativo de estabilidad: Método cuantitativo capaz de detectar variaciones en las
propiedades del material evaluado, debido a las condiciones de almacenaje.
18) Método analítico oficial: Método que aparece en la literatura oficial reconocida.
19) Método analítico no oficial: Método que no aparece en la literatura oficial reconocida.
DEFINICIONES(8):
20) Incertidumbre de medición: expresión cada vez más común de la exactitud.
21) Precisión: Medida de qué tan cercanos están los resultados unos con respecto a
los otros y, por lo general, se expresa mediante medidas tales como la desviación
estándar, la cual describe la dispersión de los resultados.
a) Precisión intermedia: Expresa las variaciones entre laboratorios: diferentes
días, diferentes analistas, diferentes equipos, etc.
b) Repetibilidad: da idea de la variabilidad esperada cuando un método se
ejecuta por un solo analista, con un equipo en un período corto de tiempo.
c) Reproducibilidad: si la muestra se analiza por varios laboratorios para fines
comparativos.
DEFINICIONES(8):
DEFINICIONES(8):
22) Muestra: Porción del material a evaluar.
23) Muestra analítica: Porción del material a evaluar de acuerdo al método analítico.
24) Muestra adicionada: Porción representativa del material a evaluar, a la que se le
adicionan cantidades conocidas del analito.
25) Parámetros de desempeño: Parámetro específico a estudiar en un protocolo de
validación.
26) Placebo analítico: Muestra que contiene todos los componentes de un producto a
excepción del analito.
27) Placebo adicionado: Muestra e un placebo analítico al cual se le adiciona una
cantidad conocida del analito.
 DEFINICIONES(8):
28) Procedimiento analítico: Se refiere a la forma de desarrollar los análisis. Debe describir en detalle las etapas
necesarias para realizar cada prueba analítica.
29) Protocolo de validación: Descripción de pruebas específicas para demostrar que un proceso da resultados que
cumplen con los criterios preestablecidos de manera consistente.
30) Recobro: Cantidad del analito determinada en el placebo adicionado, empleando el método analítico.
31) Revalidación: comprobación de que el método analítico mantiene su desempeño cuando existen cambios en la
composición del producto, en el método analítico.
32) Robustez: Capacidad del método analítico de mantener su desempeño al presentarse variaciones pequeñas pero
deliberadas, en los parámetros normales de operación del método.
33) Tolerancia: Reproducibilidad de los resultados analíticos obtenidos por el análisis de la misma muestra bajo
diferentes condiciones normales de operación. La robustez y la tolerancia son conceptos diferentes, ya que el primero
se refiere a la influencia de factores internos del método, mientras que la tolerancia se refiere a factores externos del
método.
34) Validación del método analítico: Proceso por el cual se demuestra, por estudios de laboratorio, que la capacidad
del método satisface los requisitos para la aplicación analítica deseada.
35) Valor de referencia: medida de la veracidad, en relación a valores conocidos.
Clasificación de Métodos Analíticos (8):

1) En función de su estado regulatorio: farmacopeicos y no

farmacopeicos.
2) En función de su aplicación: producto a granel, producto terminado,
mp, MAIE.
3) En función de la naturaleza de la respuesta analítica: FQ y
Biológicos.
4) En función de su propósito analítico: cuantitativos, pruebas límite,
identidad.
5) En función de la naturaleza del sistema de medición: cuantitativos y
cualitativos.
 Parámetros de desempeño (8):
Parámetro de desempeño Contenido/ Potencia/ Pruebas de Impurezas Identificación
Valoración
Contenido/ Límite
Valoración
Precisión/ Adecuabilidad del Sistema SÍ SÍ SÍ* *

Linealidad del Sistema SÍ SÍ NO NO

Especificidad SÍ SÍ SÍ SÍ

Exactitud y Repetibilidad SÍ SÍ NO NO

Linealidad del método SÍ SÍ NO NO

Precisión del método o precisión intermedia SÍ SÍ NO NO

Estabilidad analítica de la muestra * * NO NO

Límite de detección NO NO SI NO

Límite de cuantificación NO SÍ NO NO

Robustez * * * NO

Tolerancia * * * NO

* Puede ser requerido dependiendo de la naturaleza del método.

Determinaciones, metodología y
criterios de aceptación.
1. Precisión del Sistema:

Metodología.- Preparar por lo menos un sextuplicado de soluciones a la concentración del

analito que represente la concentración de la solución de referencia utilizada o en ciertos
casos, la concentración que represente el 100% de la muestra procesada para su medición;
preparadas por dilución o por pesadas independientes. Medir la respuesta analítica bajo las
mismas condiciones.
Calcular S y CV de la respuesta analítica;
Criterios de aceptación:
CV < 1.5% para métodos físico-químicos.
CV < 3% para métodos biológicos.
Valores superiores u otro criterio de aceptación deben ser justificados.
 Precisión
La precisión depende sólo de la distribución de errores
aleatorios y no tiene ninguna relación con el valor
verdadero o el valor especificado.
-Repetibilidad
-Precisión intermedia o reproducibilidad
intralaboratorio
-Reproducibilidad

(Norma ISO 5725-1 e ISO 3534-1)

2. Adecuabilidad del Sistema (Para todos los
métodos de medición):
Metodología.- Inyectar por quintuplicado la solución de adecuabilidad, reportar la respuesta
del analito, calcular el CV y para cada inyección:
Factor capacidad (K’),
resolución (si procede, R),
retención relativa (si procede, Rr),
factor de coleo (T),
número de platos teóricos (N).
Criterios de aceptación:
CV < 2% para respuesta analítica. Valores superiores deben ser justificados. Para cada
inyección, se recomienda:
K’>2 ;
R>2 ;
T<2
 3. Linealidad del sistema:
Metodología: Preparar por lo menos por triplicado 5 niveles de
concentración (intervalo) de la solución de referencia ya sea por dilución
o por pesadas independientes. La concentración central debe ser igual a la
que se prepara la solución de referencia en el método o la que represente
el 100% en la muestra procesada para su medición. Criterios de aceptación:
r 2 > 0.98
Medir la respuesta analítica bajo las mismas condiciones de medición,
IC(β1), no debe incluir el cero
reportar la relación concentración vs respuesta analítica.
Otro criterio de aceptación debe ser
Calcular b1, b0, r 2 , IC( bβ)1). justificado.
El intervalo esta en función del propósito del método y se expresa como Es conveniente trazar la gráfica de la
% de la concentración de la solución de referencia o en función del concentración (x) vs la respuesta analítica
contenido del analito en la muestra. (y), incluyendo en ella la ecuación, línea de
Para contenido/potencia/valoración se sugiere un mínimo de +20% Para ajuste y el coeficiente de determinación.
contenido/valoración de impurezas desde un nivel apropiado hasta un
20% por arriba de la especificación.
Para métodos indicadores de estabilidad desde un nivel apropiado hasta
un 120%
Es crítico que el intervalo no excluya valores de concentración que
potencialmente puedan dar lugar al contenido del analito en la muestra.
 3. Linealidad del sistema (9):
- LINEALIDAD
Capacidad del método analítico de obtener resultados linealmente proporcionales entre la
concentración del analito y su respuesta.

Análisis estadístico:
*Curva regresión y = a + b x
*Coeficiente de determinación r2
*Análisis de varianza (regresión) con
Si p>0,05 es
significativo y por ▪ Estimación falta de ajuste
ende los datos ▪ Error residual puro.
tienden a ser lineales.
 Etapas De La Regresión (9):
1 Selección del modelo: Normalmente una línea recta
● y=a +bx
● (donde a es la pendiente de la recta y b la ordenada al origen)

2 Establecimiento del diseño experimental:

▪ dominio experimental: rango de concentraciones
▪ distribución de las medidas
▪ número de medidas

3 Estimación de los parámetros del modelo.

Regresión por mínimos cuadrados.

4 Validación del modelo: ANOVA

4. Especificidad:
Metodología.- Establecer las posibles sustancias interferentes y adicionar cantidades conocidas de éstas, solas o
combinadas a la muestra y evaluar su respuesta bajo las mismas condiciones de análisis.
En métodos de identificación: seleccionar sustancias que potencialmente interfieran en la determinación con base en
la estructura del analito.
Para métodos de contenido/ potencia/ valoración, se analizan placebos del producto y cuando proceda:
🠶 sustancias relacionadas,
🠶 precursores,
🠶 homólogos y
🠶 una mezcla de ellos con el producto.
Para métodos de contenido/ valoración de impurezas, se adicionan éstas al analito en niveles que incluya la
especificación. Cuando no se dispone de las impurezas, el analito se somete a condiciones que generen su
inestabilidad química y aplicar el método.
Para métodos de límite de impurezas: se analizarán las muestras de impurezas individualmente, el producto y la
mezcla de éstos.
4. Especificidad:
Para métodos indicadores de inestabilidad: si se cuenta con los productos de degradación, preparar muestras con placebos adicionado
de éstos, el placebo adicionado de analito, el placebo adicionado de analito y productos de degradación y se analizan con el método.
Si no se cuenta con los productos de degradación se puede favorecer la inestabilidad del analito en la muestra:
1) Someter el analito, el placebo y la muestra a temperaturas de 20°C por debajo del punto de fusión del analito de 2 a 4 semanas.
2) Exponer el analito, placebo y muestra a luz UV, fluorescente y/o humedad relativa.
3) Hacer soluciones del analito, ajustando el pH de 1 a 2 y/o de 10 a 12 y someterlas a 60°C – 80°C.
4) Adicionar peróxido de hidrógeno para favorecer la oxidación del analito. El tiempo y las condiciones se seleccionan con el fin de
degradar al analito a niveles del 15 al 30%.
Estos estudios no se realizan en analitos con propiedades reactivas.
Para métodos no selectivos, la especificidad se sustenta con los resultados de exactitud y linealidad, si el método cumple con los
criterios de aceptación.

Criterios de Aceptación:
La respuesta del método únicamente debe ser debida al analito.
5. Exactitud y Repetibilidad del Método (8):
🠶 Metodología:
A)Se conocen los componentes de la muestra y es posible preparar un placebo
analítico:
🠶 A la cantidad de placebo analítico equivalente a una muestra analítica por
sextuplicado, se adicionará la cantidad de analito correspondiente al 100% de
éste en la muestra.
🠶 Seleccionar dos niveles, superior e inferior, de la cantidad por sextuplicado, se
adicionará la cantidad de analito correspondiente al 100% de éste en la muestra.
🠶 El mismo analista analizará los placebos adicionados utilizando de referencia la
sustancia empleada en la adición al placebo analítico en las mismas
condiciones.
🠶 Determinar la cantidad recuperada del analito.
 5. Exactitud y Repetibilidad del Método (8):
B) No se conocen los componentes de la muestra:
🠶 con el método se determina el contenido del analito y se preparan 6 muestras
adicionadas del analito hasta completar el 100% de éste en la muestra.
🠶 Las muestras adicionadas se analizan usando como referencia la sustancia empleada
en la adición de la muestra.
🠶 Determinar la cantidad recuperada del analito.
🠶 La adición del analito debe ser en las primeras etapas del método.
🠶 Calcular el porcentaje de recobro de cada placebo analítico, al obtener el cociente de
la cantidad recuperada respecto de la cantidad adicionada expresada en porcentaje.
🠶 Calcular ŷ, S, CV e IC(μ) del porcentaje de recobro.
5. Exactitud y Repetibilidad del Método (8):
Criterios de aceptación:
IC(μ) debe incluir el 100% o que el promedio aritmético del % de recobro se incluya en el
intervalo:
98-102% método cromatográfico
98-102% método volumétrico
97-103% método químico o espectrofotométrico
95-105% método microbiológico
CV del porcentaje de recobro:
🠶 No mayor de 2% en método cromatográfico
🠶 No mayor de 2% en método volumétrico
🠶 No mayor de 3% en método químico o espectrofotométrico
🠶 No mayor de 5% en método microbiológico
🠶 No mayor a una magnitud preestablecida, acorde a la especificación del analito en la
muestra.
 6. Linealidad del Método (8):
Metodología:
A) Conociendo los componentes de la muestra se preparará el placebo analítico.
🠶 A la cantidad de placebo analítico equivalente a una muestra analítica por triplicado, se adicionará
la cantidad de analito correspondiente al 100% de éste en la muestra.
🠶 Seleccionar dos niveles superior e inferior de la cantidad del analito (intervalo) y preparar el
placebo adicionado por triplicado a cada nivel manteniendo constante la cantidad de placebo
analítico en los tres niveles.
🠶 El mismo analista analizará los placebos adicionados utilizando de referencia la sustancia empleada
en la adición al placebo analítico en las mismas condiciones.
🠶 Determinar la cantidad recuperada del analito.
 6. Linealidad del Método (8):
B) Si no se conocen los componentes de la muestra,
con el método se determina el contenido del analito y se preparan 3 muestras
adicionadas del analito hasta completar el 100% de éste en la muestra.
🠶 Seleccionar dos niveles superior e inferior de la cantidad del analito (intervalo) y
preparar la muestra adicionada por triplicado a cada nivel manteniendo constante la
cantidad de muestra en los tres niveles
🠶 Las muestras adicionadas se analizan usando como referencia la sustancia empleada
en la adición de la muestra.
🠶 Determinar la cantidad recuperada del analito.
🠶 La adición del analito debe ser en las primeras etapas del método.
6. Linealidad del Método (8):
🠶 Criterios de aceptación:
a) Cantidad adicionada vs cantidad recuperada:
r 2 > 0.98
El IC(β1) debe incluir la unidad
El IC(β0) debe incluir el cero
El CVy/x del porcentaje de recobro:
No mayor de 2% en método es cromatográfico
No mayor de 2% en método volumétrico
No mayor de 3% en método químico o espectrofotométrico
No mayor de 5% en método microbiológico
No mayor a una magnitud preestablecida acorde a la especificación del analito
en la muestra
6. Linealidad del Método (8):
🠶 Criterios de aceptación:
b) % de recobro:
El IC(μ) debe incluir el 100% o el promedio aritmético del % de recobro se incluya en el intervalo:
98-102% método cromatográfico
98-102% método volumétrico
Es conveniente trazar la gráfica
97-103% método químico o espectrofotométrico
de la cantidad adicionada (x) vs
95-105% método microbiológico la cantidad recuperada (y),
CV del porcentaje de recobro: incluyendo en ella la ecuación,
línea de ajuste y el coeficiente
No mayor de 2% en método cromatográfico de determinación.
No mayor de 2% en método volumétrico
No mayor de 3% en método químico o espectrofotométrico
No mayor de 5% en método microbiológico
No mayor a una magnitud preestablecida acorde a la especificación del analito en la muestra.
Otro criterio de aceptación debe ser justificado.
 7. Precisión del Método (Precisión intermedia o
Tolerancia interdía/Interanalista (8):
🠶 Metodología: 🠶 Criterios de Aceptación:
Analizar por triplicado una muestra homogénea del producto CV < 2% para métodos cromatográficos y
que tenga un nivel cercano o igual al 100% (para volumétricos.
contenido/potencia/valoración) o una muestra cuyo contenido
CV < 3% para métodos químicos o
esté incluido en el intervalo lineal de concentración de
espectrofotométricos
linealidad de método (para impurezas) en dos días diferentes y
por dos analistas diferentes. CV < 5% para métodos biológicos.
Reportar el contenido/potencia/valoración del analito de todas No mayor a una magnitud preestablecida acorde a
las muestras. la especificación del analito en la muestra. Valores
superiores deben ser justificados.
Calcular ŷ, S, CV del contenido/potencia/ valoración,
utilizando todos los resultados obtenidos.
 8. Estabilidad analítica de la muestra (8):
🠶 Metodología:
Establecer la etapa de análisis en la cual se desea evaluar la
estabilidad, determinar si en dicha etapa es posible fraccionar
(muestras dependientes) o no (muestras independientes) y las
condiciones de almacenaje.
En muestras dependientes, determinar la estabilidad analítica
procesando hasta la etapa preestablecida por triplicado una
muestra homogénea, fraccionar cada preparación de acuerdo
a las condiciones de almacenaje de interés.
Terminar el análisis de una de las fracciones de cada
preparación (contenido/potencia/valoración), seguir el
análisis de cada una de las fracciones al término de cada
condición de almacenaje utilizando una solución de
referencia recientemente preparada.
Reportar el contenido/potencia/valoración de cada fracción.
🠶 En muestras independientes, determinar la estabilidad
analítica a partir de una muestra homogénea, analizando por
triplicado (contenido/potencia/valoración inicial).
🠶 Simultáneamente y de la misma muestra, procesar el
número de muestras necesarias para cada condición de
almacenaje hasta la etapa preestablecida (preparaciones) por
triplicado, seguir el análisis de cada una de las
preparaciones al término de cada condición de almacenaje
utilizando una solución de referencia recientemente
preparada.
🠶 Reportar el contenido/potencia/valoración de cada
preparación. Calcular ŷ0, ŷ1, |di|.
🠶 Criterios de aceptación:
|di| < 2% métodos cromatográficos y volumétricos
|di| < 3% para métodos químicos o espectrofotométricos
|di| < 5% para métodos biológicos
No mayor a una magnitud preestablecida acorde a la
especificación del analito en la muestra.
 9. Límite de detección (8):
9.1 Con base en señal de ruido:
🠶 Metodología:
🠶 Criterio de aceptación:
Se aplica en métodos que utilizan instrumentos para medir
la respuesta analítica y presentan una señal de ruido basal. El LD debe ser menor a la especificación de
la prueba de impurezas límite.
Determinar la respuesta de blancos (reactivos. Placebos
analíticos, etc.) y la respuesta de muestras analíticas
(analitos, placebos adicionados, etc.) en un intervalo del
analito que incluya la especificación de la prueba de
impureza limite.
Determinar la cantidad del analito que genere una
respuesta con respecto al blanco en una proporción de 3 a
1, lo que corresponde a la concentración asociada al límite
de detección.
9. Límite de detección (8):
9.2 Con base en curva de calibración y desviación estándar de
los blancos:

🠶 Metodología:
Se aplica tanto a métodos instrumentales como no instrumentales:
🠶 Criterio de aceptación:
• Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito,
placebos, etc.) a valores menores o que incluya la
especificación de la prueba de impurezas límite, ya sea por * r 2 > 0.98
dilución o pesada independiente del analito.
• IC(β1), no debe incluir el cero.
• Simultáneamente, preparar 5 blancos.
• El LD debe ser menor a la especificación
• Medir las respuestas analíticas.
de la prueba de impurezas límite.
• Para la curva de calibración, sin incluir los blancos, calcular
b1, r 2 e IC(b1). • Cualquier otro criterio de aceptación
deberá ser justificado.
• Para los blancos, calcular Sb de los blancos.
• Calcular el límite de detección:
LD=(3.3 x Sb) /b1
El valor estimado LD debe ser verificado utilizando el
procedimiento de la señal de ruido.
9. Límite de detección (8):
9.3 Con base en curva de calibración y desviación estándar de
regresión:
🠶 Metodología: 🠶 Criterios de aceptación:
Se aplica tanto a métodos instrumentales como no • r 2 > 0.98
instrumentales:
• IC(β1), no debe incluir el cero.
• Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés
(analito, placebos, etc.) a valores menores o que • El LD debe ser menor a la especificación
incluya la especificación de la prueba de impurezas de la prueba de impurezas límite.
límite, ya sea por dilución o pesada independiente
del analito. • Cualquier otro criterio de aceptación
• Medir las respuestas analíticas. deberá ser justificado.
• Calcular b1, r2 , Sy/x, IC(β1). Calcular el límite de
detección:
• LD=(3.3 x Sy/x) /b1
El valor estimado LD debe ser verificado
utilizando el procedimiento de la señal de ruido.
 9. Límite de detección (8):
9.4. Con base en curva de calibración y desviación estándar de la ordenada al
origen:

• Metodología: 🠶 Criterio de aceptación:

• Se aplica tanto a métodos instrumentales • r 2 > 0.98
como no instrumentales.
• IC(β1), no debe incluir el cero.
• Preparar 3 concentraciones de la sustancia • El LD debe ser menor a la especificación de la
de interés (analito, placebos, etc.) a valores
prueba de impurezas límite.
menores o que incluya la especificación de la
prueba de impurezas límite, ya sea por • Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser
dilución o pesada independiente del analito. justificado.
• Medir las respuestas analíticas.
• Calcular b1, r 2 , Sbo, IC(β1).
• Calcular el límite de detección:
LD=(3.3 x Sbo) /b1
* El valor estimado LD debe ser verificado
utilizando el procedimiento de la señal de ruido.
 10. Límite de cuantificación (8): Señal de
ruido:
Metodología: Criterio de aceptación:
• Se aplica en métodos que utilizan instrumentos para medir la respuesta El LC debe ser menor a la especificación
analítica y presentan una señal de ruido basal. del contenido/ valoración de la prueba
de impurezas.
• Determinar la señal de blancos (reactivos. Placebos analíticos, etc.) y la
señal de muestras analíticas (analitos, placebos adicionados, etc.) a
concentraciones conocidas del analito, inferiores o que incluya la
especificación del contenido / valoración de la prueba de impurezas.
• Determinar la cantidad del analito cuya señal sea similar o mayor al
blanco en una proporción de 10 a 1, lo que corresponde a la
concentración asociada al límite de detección.
• Verificar que dicha cantidad corresponda al límite de cuantificación,
evaluando la exactitud y Repetibilidad del valor estimado.
 10. Límite de cuantificación (8):
10.2 Con base en curva de calibración y desviación estándar
de los blancos:
🠶 Metodología:
Se aplica tanto a métodos instrumentales como no instrumentales:
• Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito, placebos, etc.) a
Criterio de aceptación:
valores menores o que incluya la especificación de la prueba de
contenido/valoración de la prueba de impurezas límite, ya sea por dilución o pesada * r 2 > 0.98
independiente del analito.
•IC(β1), no debe incluir el cero.
• Simultáneamente, preparar 5 blancos. •El LC debe ser menor a la
• Medir las respuestas analíticas. especificación del
• Para la curva de calibración, sin incluir los blancos, calcular b1, r 2 e IC(b1). contenido/valoración de la prueba
de impurezas límite.
• Para los blancos, calcular Sb de los blancos.
•Cualquier otro criterio de
• Calcular el límite de cuantificación con la siguiente ecuación: aceptación deberá ser justificado.
LD=(10 x Sb) /b1
El valor estimado LD debe ser verificado utilizando el procedimiento de la señal de
ruido.
 10. Límite de cuantificación (8):
10.3 Con base en curva de calibración y desviación estándar
de regresión:

Metodología:
Se aplica tanto a métodos instrumentales como no
instrumentales: Criterios de aceptación:
• Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés
(analito, placebos, etc.) a valores menores o que incluya la
especificación de contenido/ valoración de la prueba de r2 > 0.98
impurezas, ya sea por dilución o pesada independiente del IC(β1), no debe incluir el cero.
analito. El LC debe ser menor a la especificación del
• Medir las respuestas analíticas. contenido/ valoración de la prueba de impurezas.
• Calcular b1, r 2 , Sy/x, IC(β1). Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser
• Calcular el límite de cuantificación: justificado.
LC=(10 X Sy/x) /b1
• Evaluar la exactitud y Repetibilidad del valor estimado del
límite de cuantificación.
 10. Límite de cuantificación (8):
10.4 Con base en curva de calibración y desviación estándar de la
ordenada al origen:

Metodología:
Se aplica tanto a métodos instrumentales como no instrumentales:
• Preparar 3 concentraciones de la sustancia de interés (analito,
placebos, etc.) a valores menores o que incluya la especificación
Criterios de aceptación:
de contenido/ valoración de la prueba de impurezas, ya sea por
dilución o pesada independiente del analito. r 2 > 0.98
IC(β1), no debe incluir el cero.
• Medir las respuestas analíticas.
El LC debe ser menor a la especificación del
• Calcular b1, r 2 , Sbo, IC(β1). contenido/ valoración de la prueba de
• Calcular el límite de cuantificación: impurezas.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá
LC=(3.3 X Sbo) /b1
ser justificado.
• Evaluar la exactitud y Repetibilidad del valor estimado del límite
de cuantificación.
 11. Robustez:
Metodología:
• Establecer los factores instrumentales
(temperatura y presión de la columna) y/o no
instrumentales (pH de fases) relacionados al
método y sean críticos.
• En condiciones normales y distintas de
operación, analizar la muestra por triplicado.
• Reportar el contenido/ potencia/valoración del
analito en la muestra de condiciones normal y
distintas, expresadas como %.
• Calcular ŷ0, ŷ1, |di|.
Criterios de aceptación:
|di|< 2% métodos cromatográficos y volumétricos
|di| < 3% para métodos químicos o
espectrofotométricos
|di|< 5% para métodos biológicos
No mayor a una magnitud preestablecida acorde a
la especificación del analito en la muestra.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser
justificado.
 12. Tolerancia:

Metodología:
• Establecer los factores ajenos al equipo
(diferentes equipos, lotes de reactivos) que se
presentan al reproducir el método en otras
condiciones de uso.
• Fijar 2 condiciones de uso y analizar la muestra
por triplicado a cada condición.
• Reportar el contenido/potencia/ valoración del
analito en todas las muestras.
• Calcular y, S y CV del
contenido/potencia/valoración
Criterios de aceptación:
CV < 2% métodos cromatográficos y volumétricos
CV < 3% para métodos químicos y
espectrofotométricos
CV < 5% para métodos biológicos
No mayor a una magnitud preestablecida acorde a
la especificación del analito en la muestra.
Cualquier otro criterio de aceptación deberá ser
justificado.
Bibliografía:

1) Hernández-Jiménez María Esther. Validación de un Método Rutinario de Control de Calidad por CLAE para
la determinación de un antihistamínico no sedante en tabletas. Tesis de licenciatura para graduación como
QFB. México, D.F. 1994.
2) UE: Adoptado por CPMP, publicado como CPMP/ICH/381/95.
3) FDA: Registro Federal, volumen 60, N°. 40, 1° de marzo, 1995, páginas 11260-11262.
4) Addendum (datos experimentales requeridos, interpretación estadística): etapa 5, Nov 1995.
5) UE:Adoptado por CPMP, publicado como CPMP/ICH/281/95.
6) FDA: Registro Federal, volumen 62, N°. 96, 19 de mayo, 1997, páginas 27463-27467.
7) http://www.ich.org/cache/compo/276-254-1.html
8) CNQFBM, A.C. Guía de Validación de Métodos Analíticos. Edición 2002.
9) Validación Métodos Analíticos Cuantitativos, Cualitativos y SemiCuantitativos en el Lab. Clínico