Aseguramiento de La Validez I en Presentacion

ASEGURAMIENTO DE LA VALIDEZ DE
RESULTADOS DE ENSAYOS
FISICOQUÍMICOS Y MICROBIOLÓGICOS
Oficina Académica de Extensión y Proyección Social.

UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA
LA MOLINA
Expositor:
Lic. Quím. Edgar Nina Velásquez
edninav.28@gmail.com
Junio 2019
PROGRAMA
 UNIDAD I:
Conceptos Básicos.
 UNIDAD II:
Marco Normativo – Aseguramiento de la validez de los Resultados
 UNIDAD III:
Sistema de Aseguramiento de la validez de los Resultados Programa
 UNIDAD IV:
Herramienta Estadística: Gráficos de Control
 UNIDAD V:
Actividades de Control de la Calidad de los resultados.
UNIDAD I
Conceptos Básicos
EL LABORATORIO PRODUCE RESULTADOS
Plomo en
sangre
Salmonella en
Plaguicidas en
pescados
alimentos
Bacterias
ibuprofeno en
heterotróficas
comprimidos
en agua
potable
“LOS RESULTADOS DEBEN SER TÉCNICAMENTE VÁLIDOS”

RESULTADOS TÉCNICAMENTE VÁLIDOS
El resultado de un ensayo es válido cuando:
• El valor medido es veraz (tiene un sesgo no significativo) y

preciso (variabilidad aleatoria minimizada)
• Existe concordancia entre el resultado obtenido y el material
mayor de donde procede la muestra.
M ± N
MUESTREO
VERACIDAD PRECISIÓN
REPRESENTATIVIDAD EXACTITUD
VERACIDAD
• El grado de aproximación entre el valor

medio obtenido de una larga serie de
resultados del ensayo y un valor
aceptado como referencia.
(NTP-ISO 5725-1 – 3.7)
• La veracidad se expresa
cuantitativamente en términos de sesgo
__
Sesgo  X - μ
VERACIDAD
𝐗 µ
PRECISIÓN
2,25 2,31
mg/L mg/L
• Es el grado de concordancia existente
entre los resultados independientes
de un ensayo, obtenidos en
condiciones estipuladas.
(NTP-ISO 5725-1 - 3.12) 2,17 2,20
mg/L mg/L
 La expresión cuantitativa de la
precisión depende en forma crítica de
las condiciones estipuladas.
PRECISIÓN
Pruebas de Precisión
Condiciones de Repetibilidad
Condiciones de Reproducibilidad
Condiciones en las que un mismo Condiciones en las que se obtiene
operador obtiene resultados de ensayo resultados de ensayo con el mismo
independientes con el mismo método método en muestras idénticas, con
en muestras idénticas en el mismo operadores diferentes y utilizando
laboratorios y utilizando el mismo equipos diferentes.
equipo dentro de pequeños intervalos
de tiempo. ( ISO 5725-1, 3.18)
( ISO 5725-1, 3.14)

RESULTADOS TÉCNICAMENTE VÁLIDOS
INTRODUCCIÓN
Aseguramiento de la validez de los resultados en un Laboratorio

Analítico
Conjunto de principios y actividades generales planificadas que se
realizan y contrastan para garantizar que la información analítica
(resultados) que se generan poseen el nivel de calidad (exactitud y
representatividad fundamentalmente) que se ha establecido previamente
y, que por consiguiente se debe cumplir.
UNIDAD II
Marco Normativo - Aseguramiento de la

Validez de los Resultados
MARCO NORMATIVO – ASEGURAMIENTO DE LA
VALIDEZ DE LOS RESULTADOS
Norma ISO/IEC 17025: 2017 - Requisito 7.7

NORMA ISO/IEC 17025:2017 – 7.7 ASEGURAMIENTO DE LA
(7.7.1)
El laboratorio debe contar con un procedimientos para realizar el
seguimiento de la validez de los resultados.
Los datos resultantes se deben registrar de manera que las
tendencias sean detectables y cuando sea posible, se deben aplicar
técnicas estadísticas para la revisión de los resultados.
(7.7.1) Este seguimiento se debe planificar y revisar y debe incluir, cuando
sea apropiado, pero no limitarse a:
a) Uso de materiales de referencia o materiales de control de calidad.
b) Uso de instrumentos alternativos que han sido calibrados para obtener resultados
trazables.
c) Comprobaciones funcionales del equipamiento de ensayo y medición
d) Uso de patrones de verificación o patrones de trabajo con gráfico de control,

cuando aplique.
e) Comprobaciones intermedias en los equipos de medición.

(7.7.1)
f) Repetición del ensayo o calibración utilizando los mismos métodos o

métodos diferentes.
g) Reensayo o re calibración de los ítems conservados.
h) Correlación de los resultados para diferentes características de un ítem.
i) Revisión de los resultados informados.
j) Comparaciones Intralaboratorio.
k) Ensayos de muestras ciegas

(7.7.2)
El laboratorio debe hacer seguimiento Participación en

de sus desempeño mediante ensayos de aptitud
comparación con los resultados de

otros laboratorios, cuando estén
disponibles y sean apropiados. Este
Participación en
seguimiento se debe planificar y revisar comparaciones
y debe incluir, pero no limitarse a, una o interlaboratorio
diferentes de
ambas de las siguientes: ensayos de aptitud
(7.7.3)
Los datos de las actividades de seguimiento se deben analizar, utilizar para

controlar y, cuando sea aplicable, mejorar las actividades del laboratorio.
Si se detecta que los resultados de los análisis de datos de las actividades
de seguimiento están fuera de los criterios predefinidos, se deben tomar
acciones apropiadas para evitar que se informen resultados incorrectos.
Directriz para la Acreditación de Laboratorios de

Ensayo y Calibración: DA-acr-06D
DIRECTRIZ PARA LA ACREDITACIÓN DE LABORATORIOS DE
ENSAYO Y CALIBRACION: DA-acr-06D
Directriz de Criterios para la participación en Ensayos

de Aptitud / Comparaciones Interlaboratorio
DA-acr-13D
PRUEBAS INTERLABORATORIOS
ISO/IEC 17043: 2010 “Requisitos Generales
para los Ensayos de Aptitud”
Ensayo Bilateral Ensayos Interlaboratorios
Estudio Estudio de Ensayos de

Colaborativo Certificación Aptitud
Validación de Asignación de Competencia
metodologías valores a MR Técnica
Z-score
│Z│≤2
PRUEBAS INTERLABORATORIOS
ENSAYOS ESTUDIOS ESTUDIOS DE

DE APTITUD COLABORATIVOS CERTIFICACIÓN
Demostrar Asignar valor a

Validar métodos uno o varios
Objetivo competencia
analíticos propiedades de un
técnica MR
Laboratorios Seleccionados con

Abierto a
Seleccionados alto nivel
participantes todos
metrológico
Método Abierto/
Definido Abierto/definido
analítico definido
DIRECTRIZ DA-acr-13D
Directriz de Criterios para la Trazabilidad de

Mediciones DA-acr-12D
TRAZABILIDAD METROLÓGICA
INCERTIDUMBRE Patron
Primario
Patrón
Nacional
Patrón
Referencia
Patrón de
Trabajo
Instrumento
de medición
Calibración
U1 > U2 >U3>>Un
TRAZABILIDAD METROLÓGICA
Propiedad del resultado de una medición por la cual dicho

resultado puede relacionarse con una referencia mediante una
cadena ininterrumpida y documentada de calibraciones; cada
una de las cuales contribuye a la incertidumbre de medición
(VIM 2.41)
Para demostrar trazabilidad

hay que hacer
comparaciones
ORGANIZACIÓN METROLÓGICA
BIMP: Oficina Internacional de Pesas y Medidas
INM: Instituto Nacional de Metrología
ID: Instituto Designado

ORGANIZACIONES METROLÓGICAS REGIONALES
ILAC: Cooperación Internacional para la acreditación de Laboratorios

IAAC: Cooperación Interamericana de acreditación

APLAC: Cooperación de Acreditación de Laboratorio Asia Pacífico

Criterios para la Trazabilidad de Mediciones DA-acr-12D
UNIDAD III
Sistema de Aseguramiento de la validez de

los Resultados
Calificación del personal en
la ejecución de los métodos
Métodos Normalizado (personal competente) Instalaciones adecuadas y
confirmados o métodos no condiciones ambientales
normalizados validados. controlados.
ELEMENTOS DE UN SISTEMA
DE ASEGURAMIENTO DE Uso materiales de
Verificación, calibración y
LA VALIDEZ DE referencia, reactivos,
control de los equipos LOS RESULTADOS
medios de cultivos
utilizados.
apropiados.
Agua para análisis que

Control de calidad Integridad de las
cumplan las especificaciones.
de los resultados. muestras.
ELEMENTOS DE UN SISTEMA DE ASEGURAMIENTO
DE LA VALIDEZ DE LOS RESULTADOS
Personal Competente
Personal
Asegurar que el personal tiene la

competencia para realizar las actividades
del laboratorio
DA acr-06D:
El personal que supervisa los resultados de los ensayos y calibraciones debe
demostrar conocimiento y experiencia mínima de 03 años realizando
ensayos, calibraciones o muestreo según corresponda a la actividad a
supervisar
El personal encargado de autorizar los informes de ensayo/certificado de
calibración (ver numeral 7.8.2 de la NTP ISO/IEC 17025) debe demostrar
conocimiento del sistema de gestión de la organización, de la norma ISO/IEC
17025 y de los criterios de acreditación.
Personal
Documentar los requisitos de competencia
EDUCACIÓN
FORMACIÓN
Personal calificado
CONOCIMIENTO
TÉCNICO
HABILIDADES
EXPERIENCIA
Personal
Se debe tener procedimientos y conservar

registros para:
Determinar los requisitos de competencia
Seleccionar al personal
Formar al personal
Supervisar al personal
Autorizar al personal
Realizar el seguimiento de la competencia del personal

Personal
AUTORIZAR al personal que realiza actividades de laboratorio

especifica:
 Desarrolla, modifica, verifica y valida métodos.
 Analiza los resultados incluida opiniones e interpretaciones
 Informa, revisa y autoriza los resultados.
EVALUACIÓN DE LA COMPETENCIA TÉCNICA DEL
PERSONAL QUE EJECUTA ENSAYOS O CALIBRACIONES
Ingreso del
Personal
personal al
autorizado
laboratorio SUPERVICIÓN
DA acr-06D: Documentar los criterios para
TRABAJO
EVALUACIÓN
ENTRENAMIENTO BAJO DESEMPEÑO
ESTADÍSTICA
SUPERVISIÓN
Ejecución de ensayos
Registro de Registros
Registros autorización evaluación
Da-ACR-06D: Los registros que sustentan la autorización otorgada debe

precisar la actividad específica en la que se autorizó al personal
El seguimiento de la competencia del personal debe realizarse por
subdisciplina (DA-acr-13D – Anexo 1) con una frecuencia no mayor a 12 meses.
Herramientas estadísticas
PRUEBAS DE CONTRASTE DE HIPÓTESIS
¿Los datos se distribuyen normalmente?
SI NO
Pruebas Paramétricas Pruebas NO Paramétricas

•VERACIDAD •VERACIDAD
•Prueba t – Student 1 muestra. •Prueba de Wilcoxon
•Prueba t – Student 2 muestras. •Prueba de Mann Whitney.
•Análisis de Varianza (ANOVA). •Prueba de Kruskal Wallis.
•PRECISIÓN •PRECISIÓN
•Prueba F – Prueba Bartlett •Prueba de Levene.
CRITERIOS DE EVALUACIÓN DE LA COMPETENCIA TÉCNICA
ENSAYOS FISICOQUÍMICOS
Prueba de Normalidad de los Datos
Prueba de Atipicidad de los Datos

Prueba de Homogeidad de varianzas

Prueba de igualdad de medidas de tendencia central

Prueba de Veracidad
Prueba de Veracidad
Se determina por :
• Prueba T-Student 1 muestra
• Prueba de Wilcoxon 1 muestra
Pruebas de Veracidad
Pruebas de Precisión
ENSAYOS MICROBIOLÓGICOS
A. ÍNDICE DE DISPERSIÓN DE POISSON : D2
DISTRIBUCIÓN DE POISSON
Cuando los microorganismos están distribuidos aleatoriamente en la
muestra y no existen interferencias, los recuentos bacterianos siguen
una distribución de Poisson.
Evalúa la COMPETENCIA del analista para homogeneizar la muestra

ensayada y para determinar errores en la ejecución del
procedimiento.
A.1. Lectura de Recuentos (Paralelos) en una dilución (02 Placas):
(A  B) 2
D2 
(A  B)
A: Recuento 1° placa
B :Recuento 2° placa
Criterio de aceptación:
D2≤ 3,84 (valor de tabla)
A.1. Lectura de Recuentos (paralelos) en una dilución (03 ó más Placas):
n X i2  ( X i )2
D2 
X i
Xi : Recuento de cada placa

n : N° de placas Criterio de aceptación:
D2≤ X2(0,05;v) (valor de tabla)
V=n-1
B. DIFERENCIA RELATIVA; DR
Este Criterio es usado para evaluar la variabilidad en recuentos
duplicados. Se trata de comparar los recuentos de microorganismos
obtenidos en una misma dilución de muestra
C1  C2
DR   LnC1  LnC2
C
C1: Recuento 1
C2: Recuento 2

C: Promedio de Recuento
Si se considera adecuado, ambos se pueden expresar como

porcentajes tras su multiplicación por 100
B. DIFERENCIA RELATIVA; DR
Evalúa la COMPETENCIA del analista para realizar el procedimiento

de recuento y calificar su capacidad para diferenciar las colonias de
las partículas más pequeñas de muestra.
El recuento duplicado puede ser realizado por el mismo personal

(evalúa repetibilidad) o puede ser realizado por diferente personal: el
instructor y el de entrenamiento (evalúa precisión intermedia)
Criterio de aceptación:
Leída por el mismo por el mismo personal DR ≤ 5%
Leída por diferente personal DR ≤ 10%
C. EFICIENCIA DE RECUPERACIÓN (E)

Se dispone entre 10 a 15 muestras (entre positivas y negativas para un
patógeno determinado), las cuales son analizadas para determinar el
porcentaje de recuperación del microorganismo ensayado. De esta manera
se calcula la Eficiencia de recuperación del analista y la cual generalmente
no debe ser menor al 100%
(a  d)x100
E
N
Donde:
a: Número de resultados positivos coincidentes con el resultado teórico
d: Número de resultados negativos coincidentes con el resultado teórico
N: Número de muestras ensayadas
“TALLER N° 1”
Evaluación de Competencia del Personal

analista
Métodos adecuados para su uso

ELEMENTOS DE UN SISTEMA DE ASEGURAMIENTO DE
LA CALIDAD
Métodos de Ensayos
 Utilizar métodos normalizados y vigentes
 También métodos no normalizados pero

validados.
 Verificación de métodos normalizados

(exactitud, límites de detección,
Incertidumbre, rango de trabajo, etc..)
 Desviaciones documentadas y justificadas

técnicamente y autorizadas.
Tipos de Métodos de ensayo según su origen
A. Métodos Normalizados:
Son los mejores. Están desarrollados por organismos de Normalización
u otras organizaciones reconocidas nacional o internacionalmente; que
son aceptados por el sector técnico involucrado. Ejemplo: métodos de
AOAC, APHA-AWWA, ASTM, ISO, NTP, NOM, NCh, EPA, , etc.
Los laboratorios no los deben validar, pero sí verificar que pueden aplicarlos
correcta y adecuadamente.
Tipos de Métodos de ensayo según su origen
B. Métodos No Normalizados:
Son métodos de ensayo desarrollados por el
propio laboratorio u otras partes no
reconocidas.
Son ejemplo de métodos no normalizados; los

publicados y recopilados en revistas técnicas o
textos, métodos de ensayo de fabricantes de
bienes: equipos, kits de ensayos, instrumentos
portátiles, así como aquellos métodos de
ensayo normalizados modificados; ampliados
o aplicados para alcances diferentes al
originalmente establecido en la norma.
Instalaciones adecuadas y
condiciones ambientales
controlados
Instalaciones y Condiciones Ambientales
Las instalaciones y condiciones ambientales adecuadas para las

actividades del laboratorio
Contaminación Polvo Radiación Interferencias

microbiológica electromagnéticas
No afecten adversamente la validez

de los resultados
Humedad Suministro eléctrico Temperatura Ruido y Vibración

TEMPERATURA AMBIENTAL
TEMPERATURA AMBIENTAL
HUMEDAD RELATIVA
Documentar los requisitos para las instalaciones y condiciones

ambientales necesarias para realizar las actividades de laboratorio.
Seguimiento, control y registro de las

condiciones ambientales.
Implementar, realizar el seguimiento y revisar
periódicamente las medidas para controlar las instalaciones
Acceso y uso de las áreas que afectan las

actividades de laboratorio.
Separación eficaz entre áreas en las cuales hay

actividades de laboratorio incompatibles.
Prevención de contaminación, interferencias adversas

en las actividades de laboratorio.
Equipos calibrados, verificados y

con mantenimientos adecuados
(Instrumento de medición, patrones de medición,
MR, reactivos, consumibles, aparatos auxiliares)
Equipos
Laboratorio debe tener acceso al equipamiento que se requiere para el
correcto desempeño de las actividades de laboratorio y que puedan influir
en los resultados.
Verificar que el equipamiento cumple los requisitos especificados, antes de

ser instalado o reinstalado para su servicio.
El equipo utilizado para medición debe ser capaz de lograr

la exactitud y/o incertidumbre de medición requerida
El equipo de medición debe ser calibrado cuando:
La exactitud o Se requiera la calibración

incertidumbre de para establecer la
y/o
medición afectan la trazabilidad metrológica
validez de los resultados de los resultados
Equipos
Establecer un programa de calibración, el cual se debe revisar y
ajustar según se necesario, para mantener la confianza en el estado
de calibración.
Etiquetar, codificar o identificar los equipos que

requieran calibración o que tengan un periodo de
validez.
Poner fuera de servicio el equipo

sometido a sobrecarga o uso
inadecuado hasta que se hay
verificado que funcione
correctamente.
Equipos
Realizar comprobaciones intermedias para mantener la confianza en el
desempeño del equipo en base a un procedimiento definido.
Equipos
Conservar registros de los equipos que puedan influir en las

actividades de laboratorio. Incluir lo siguiente, cuando sea aplicable:
Identificación del equipo
Nombre del fabricante, identificación del equipo, número de

serie
Evidencia de la verificación de que el equipo cumple los

requisitos especificados.
Ubicación actual.
Equipos
Fechas y resultados de calibración, ajustes y criterios de aceptación,

fecha de próxima calibración o intervalo de calibración
Plan de mantenimiento y el mantenimiento llevado a cabo hasta

la fecha.
Detalles de cualquier daño, mal funcionamiento o reparaciones

realizadas.
Ciclo de vida de los Calificación de los
equipos equipos
Detección de la necesidad Calificación del Diseño

de un nuevo equipo (DQ)
Justificación de la necesidad y
Calificación de la
definición de las características
instalación (IQ)
Selección y compra
Preparación de las instalaciones Calificación operacional (OQ)
Recepción y puesta en servicio

Instalación Calificación de desempeño
Verificación características operacionales (PQ)
Elaboración de documentos
Formación del personal
Calibración / Verificación /
Mantenimiento de los
Utilización rutinaria
equipos
Integridad de las muestras

Manipulación de los Ítems de ensayo y calibración
Tener procedimientos para:
TRANSPORTE
RECEPCION
Proteger la integridad MANIPULACION

del ítem
PROTECCION
Proteger intereses del ALMACENAMIENTO

laboratorio y del
cliente DISPOSICION
91
Manipulación de los ítems de ensayo y calibración
Sistema de identificación de los ítems de ensayo o de calibración,

conservada durante toda la permanencia en el laboratorio.
En la recepción de los ítems registrar desviaciones en relación con

las condiciones especificadas.
Cuando exista dudas / no cumpla la descripción

suministrada
Consultar con el cliente

Registrar
para instrucciones
anomalías!
adicionales
DA acr-06D: En caso de que el laboratorio llegue a la conclusión de que el ítem de ensayo o

calibración no es idóneo y se haya acordado con el cliente la realización del servicio, este
quedará fuera del alcance de la acreditación y deberá registrar el acuerdo con el cliente
Manipulación de los ítems de ensayo y calibración
Cuando los ítems deban ser almacenados o

acondicionados bajo condiciones especificadas
Seguimiento y registro de
esas condiciones
Materiales de Referencia,
Reactivos y Medios de cultivo
apropiados.
Materiales de Referencia
“Fisicoquímica”
PATRONES ANALÍTICOS
METROLOGÍA QUÍMICA
Materiales de Referencia (MR)
MATERIAL DE
REFERENCIA
MATERIALES DE
REFERENCIA MRC- Puros
CERTIFICADOS
(MRC) MRC-Matriz
PATRONES PRIMARIOS
A. MATERIAL DE REFERENCIA (MR)
Material suficientemente homogéneo y estable con respecto a

propiedades especificadas, establecido como apto para su uso
previsto en una medición o en un examen de propiedades
cualitativas.
La calibración La atribución
Control de la
de un de valores a
Veracidad y precisión
instrumento materiales
(VIM 5.13)
 Los filtros de holmio (III) y didimio para la calibración y/o

verificación las medidas de Absorbancia y longitud de onda
en los espectrofotómetros UV/VIS.
Sustancia pura
Son materiales caracterizados por su alta pureza y el

conocimiento exacto de su composición estequiométrica. Se
utilizan para la estandarización de otras sustancias o para
calibrar instrumentos de medición.
Sustancia Pura
 Solución patrón de KCl (Conductividad eléctrica).

 Solución de ftalato ácido de potasio (pH).
 Solución patrón de cianuro de 1000 mg/L
Sustancia Pura
 Patrones Acido base:
 Ftalato ácido de potasio (KHC8H4O4)
 Carbonato de sodio (Na2CO3)

Sustancia Pura
 Patrones en Complexometría:
 Carbonato de calcio (CaCO3)
 Patrones de precipitación:
 Cloruro de sodio (NaCl)
 Patrones Redox:
 Yodato de potasio (KIO3)

 Dicromato de potasio (K2Cr2O7)
 Oxido de arsénico (As2O3)
B. MATERIAL DE REFERENCIA CERTIFICADO (MRC)
Materiales de Referencia Certificado

(MRC):
Material de Referencia acompañado por
la documentación emitida por un
organismo autorizado, que proporciona
uno o varios valores de propiedades
especificadas, con incertidumbres
asociadas y trazabilidades, empleando
procedimientos válidos. (VIM 5.14).
Organismos Certificadores de MRC
 NIST : Instituto Nacional de Estándares y Tecnología (EEUU)
 NRC: Consejo Nacional de Investigación (Canadá)
 IRMM: Instituto de Materiales de Referencia y Medidas

(Unión Europea).
 IAEA: Agencia Internacional de Energía Atómica (Australia)
 CENAM: Centro Nacional de Metrología (México)
 INSTITUTO NACIONAL DE LA CALIDAD – DIRECCIÓN DE METROLOGÍA

“INACAL-DM”
Hay diferentes tipos de material de referencia certificado:
 MRC-puros: que suelen ser sustancia puras sólido o

disueltas en un disolvente adecuado y después avalados por
organismos competentes mediante una serie de ensayo
previos (homogeneidad, estabilidad) y de análisis (pureza,
concentración u otra propiedad).
Este tipo de material son patrones primarios.
Ejemplo:
 Selenium ICP Standard 1000 mg/l Se Certipur® Certified Reference
Material
 ICP Multi Element Standard Solution XIII MRC
 MRC-Matriz: en los que se certifica determinados

componentes en matrices concretas (ya sea totalmente
natural o con los analitos añadidos). Caen dentro de la
categoría de patrones secundarios ya que la certificación
supone su contraste con patrones primarios.
Ejemplo:
 Metales pesados en suelo (CRM-141-143 del BCR)
 Elementos metálicos en plantas (CRM-281 del BCR)
 Metales traza en hola de espinaca (MRC 1570a del NIST, National Institute of
Standards and Technology, Estados Unidos)
 Contenido de proteínas en ostras (CRM 1566b del NIST)

Materiales de Referencia
“Microbiología”
Cultivo de Referencia
CULTIVOS DE REFERENCIA
¿Qué es un cultivo de referencia?

Término colectivo que se refiere a cepas
de referencia, cepas de reserva y cepas
de trabajo.
Requisitos:
Viabilidad: Que sean capaces de crecer
Pureza: Un solo tipo de microorganismo.
Estabilidad: Mantenimiento de
características genotípicas y fenotípicas.
TRAZABILIDAD DE CULTIVOS DE REFERENCIA
 Un cultivo de referencia es trazable si

cumple con los requisitos taxonómicos
definidos para esa especie microbiana y
con aquellas características propias de esa
cepa.
 Por tanto los resultados de estas

evaluaciones puedan ser reproducidos en
otros laboratorios de referencia.
CEPAS DE REFERENCIA
• Microorganismos definidos por lo menos al nivel de
género y especie, catalogados y descritos según sus
características y preferiblemente de origen conocido.
[ISO 11133-1:2000]
• Normalmente obtenidos directamente de una colección
nacional o internacional reconocida cuando exista alguna.
• Alternativamente también podrían utilizarse cepas
comerciales siempre que el laboratorio pueda demostrar
en el momento de su uso que todas las propiedades
relevantes son equivalentes – Ejemplo: ATCC
CEPAS DE REFERENCIA
Requisitos:
• Microorganismos definidos por lo menos a nivel de género y
especie.
• Distribuidas y presentadas comercialmente liofilizadas.
• El número de repiques a partir de las cepas de referencia a de ser
limitado, aceptándose como máximo 5 repiques
Proveedores:
CEPAS DE RESERVA
• Cepas idénticas obtenidas mediante un único subcultivo

de una cepa de referencia. [ISO 11133-1:2000]
• Las cepas de reserva las prepara y las maneja el
laboratorio.
CEPAS DE RESERVA
Requisitos:
• Lugar apropiado para el almacenamiento.

• Etiquetado correcto.
• Manipulación restringida.
• Criopreservación.
• Control de condiciones de almacenamiento
• Procedimiento de manejo.
CEPAS DE TRABAJO
• Subcultivo primario obtenido de una cepa de reserva.

[ISO 11133-1:2000].
• Es utilizado en el laboratorio como material para el
aseguramiento y control de calidad de los ensayos que lo
requieran.
• Los cultivos de trabajo se obtienen a partir de la cepas de
reserva sobre un medio sólido o líquido no selectivo
adecuado utilizando un asa estéril e incubando en
condiciones adecuadas.
Las cepas de trabajo no deben ser

subcultivadas
ESQUEMA DE UN CULTIVOS DE REFERENCIA
CEPA DE REFERENCIA
Reconstitución
(Sólo se acepta un único repique)
*
OBTENCIÓN DE LAS CEPAS DE RESERVA
CONSERVACIÓN MEDIANTE DISTINTOS MÉTODOS Se subcultiva

(Liofilización, nitrógeno líquido, ultracongelación rápida, etc.) una sola vez.
Especificar tiempo y condiciones de almacenamiento
* Descongelación / reconstitución
CEPAS DE TRABAJO
(Especificar tiempo y condiciones de
almacenamiento)
UTILIZACIÓN EN EL CONTROL DE CALIDAD DE LOS

MEDIOS, VALIDACIÓN DE MÉTODOS Y CONTROLES
INTERNOS DE CALIDAD
( * ) Deben realizarse los controles de pureza y pruebas bioquímicas de la cepa.

Empleo de MR en el laboratorio
Su uso se restringe, generalmente, a las siguientes aspectos
puntuales:
 Validación de un método analítico

 Comprobación de la equivalencia de métodos.
 Calibración de equipos.
 Demostración de la trazabilidad de los resultados
 Detección de errores al aplicar métodos normalizados.
 Control de calidad analítico
REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO
 Deben existir controles y registros del ingreso de

las materiales al laboratorio (consumibles,
reactivos, medios de cultivo).
 Deben existir certificado de calidad del fabricante

y conservar esta documentación.
 Se debe registrar la fecha de recepción apertura

del envase y caducidad del material.
 La preparación de soluciones reactivos y medios

de cultivo en el laboratorio, deba estar a cargo de
personal designado y debidamente entrenado.
MEDIOS DE CULTIVO
Son necesarios para el aislamiento,

mantenimiento, la reproducción y la identificación
de los microorganismos.
 Contienen sustancias nutritivas
 pH adecuado
 Deben estar estériles.
Incubación:
 Depende del metabolismo del
microorganismo a cultivar.
 La atmósfera empleada.(aerobio, anaerobio)
 Tiempo.
 Temperatura
CONTROLES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Control visual y registro
• Durante la recepción de medios de cultivo deshidratados o preparados se

debe verificar y registrar cualquier desviación.
• Registrar:
Fabricante
Nombre del producto
Cantidad
Número de lote
Fecha de Recepción
Fecha de apertura
Fecha de Caducidad
Almacenamiento
• Los medios de cultivo deshidratados deben almacenarse siguiendo las

instrucciones del fabricante.
• Los medios de cultivo preparados para su uso (líquidos o sólidos) se
conservarán en refrigeración (entre 4 °C – 6° C)
• El tiempo de almacenamiento de los medios de cultivo preparados deben
ser validados en el laboratorio.
Control de pH
• El control de pH puede realizarse durante la preparación.

• Se utiliza un pH metro ajustado y verificado y la medición se realiza a
temperatura ambiente.
• El pH no debe modificarse una vez esterilizado el medio.
Control de Calidad de medios de cultivo preparados
• Su objetivo es garantizar que los microorganismos objetivos se recuperen

con una sensibilidad adecuada (uso de materiales de referencia)
• En teoría todos los controles deben efectuarse sobre cada nuevo lote de
medio de cultivo (cada tubo o frasco preparado)
• Los controles efectuados en un lote de medio de cultivo deshidratado no
garantiza la calidad de los lotes de medios preparados.
Control de esterilidad de medios de cultivo
• El control debe efectuarse en el momento en que el lote se almacena.

• El control se realiza con varios tubos o frascos de cada lote de medio
preparado (por lo menos log n)
Agua para análisis

Desionizador de agua
AGUA PARA ANÁLISIS
 Evaluar el tipo de agua para análisis a utilizar:

agua destilada, bidestilada, desionizada,
ultrapura
 Se debe realizar un control de calidad del

agua para análisis y registrar.
Destilador de agua
 Conservación del agua para análisis en

recipientes de vidrio borosilicatado; también
en los de plástico.
Purificador de agua
AGUA PARA ANÁLISIS
UNIDAD IV
Herramienta Estadística –
Gráficos de Control

Aseguramiento de La Validez I en Presentacion

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ASEGURAMIENTO DE LA VALIDEZ DE

Oficina Académica de Extensión y Proyección Social.

“LOS RESULTADOS DEBEN SER TÉCNICAMENTE VÁLIDOS”

El resultado de un ensayo es válido cuando:

• El valor medido es veraz (tiene un sesgo no significativo) y

• El grado de aproximación entre el valor

( ISO 5725-1, 3.14)

Aseguramiento de la validez de los resultados en un Laboratorio

Marco Normativo - Aseguramiento de la

Norma ISO/IEC 17025: 2017 - Requisito 7.7

a) Uso de materiales de referencia o materiales de control de calidad.

c) Comprobaciones funcionales del equipamiento de ensayo y medición

d) Uso de patrones de verificación o patrones de trabajo con gráfico de control,

e) Comprobaciones intermedias en los equipos de medición.

f) Repetición del ensayo o calibración utilizando los mismos métodos o

g) Reensayo o re calibración de los ítems conservados.

h) Correlación de los resultados para diferentes características de un ítem.

i) Revisión de los resultados informados.

k) Ensayos de muestras ciegas

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A. ÍNDICE DE DISPERSIÓN DE POISSON : D2

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A. ÍNDICE DE DISPERSIÓN DE POISSON : D2

A.1. Lectura de Recuentos (paralelos) en una dilución (03 ó más Placas):

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Si se considera adecuado, ambos se pueden expresar como

Evalúa la COMPETENCIA del analista para realizar el procedimiento

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