CARRERA DE MEDICINA

PRÁCTICA: Extracción de DNA genómico

CÓDIGO GUÍA DE PRÁCTICA:
ASIGNATURA: BIOLOGÍA MOLECULAR
MÓDULO:
APOYO CURRICULAR:

Fecha de elaboración de la guía

Fecha de revisión de la guía 08/02/2022
Laboratorio asignado para la práctica Microscopía
(colocar una X en el laboratorio que corresponda)
Macroscopía

Microbiología

Biología Molecular, Genética e Inmunología X

Bioquímica

Farmacología y Fisiología

Simulación: Laboratorio virtual de anatomía

Simulación: Habilidades y destrezas

Simulación: Área quirúrgica

Simulación: Área crítica

Simulación: Área materno infantil

Simulación: Área de imagen

Especialidad médica del facilitador: Clínica
(colocar una X en la especialidad que corresponda)
Quirúrgica

Crítica

Radiológica
Personal técnico de apoyo Sí_______ No_____X__
(colocar una X en la opción que corresponda)

Tiempo de duración de la práctica (en horas) 2 horas

Número de estudiantes Máximo : 13
Tipo de práctica Formativa Simulada

Formativa No Simulada

Conductual ( toma de decisiones /integral)

1. INTRODUCCIÓN Para su estudio de los ácidos nucleicos éstos deben

aislarse del resto de los componentes celulares, como
lípidos y proteínas, más abundantes que los ácidos
nucleicos. Asimismo, dependiendo del objeto de estudio
debe aislarse de preferencia el DNA o RNA.

1

2. FUNDAMENTO TEÓRICO
3. OBJETIVO GENERAL
4. OBJETIVOS ESPECÍFICOS
5. RESULTADOS DE APRENDIZAJE
5.1. Resultado de aprendizaje de la carrera
5.2. Resultado de aprendizaje de la
asignatura
El procedimiento general de extracción de ácidos
nucleicos consiste en tres etapas consecutivas:
disgregación de las células o tejidos (lisis celular),
inactivación de las nucleasas intracelulares y en
separación de los ácidos nucleicos de los demás
componentes celulares.
La extracción de DNA a través del método PureLink®
Genomic DNA Kits, extracción por columna, permite una
rápida y eficiente purificación del DNA genómico. Éste
método de extracción está diseñado para extraer DNA
genómico de células y tejidos de mamíferos, muestras de
sangre, hisopos bucales, bacterias, levaduras. Luego de
la lisis celular, el DNA es rápidamente purificado del
lisado usando columnas a través de centrifugación.
Conocer y aplicar las técnicas de extracción de DNA.
1.- Seguir los pasos del protocolo de extracción de DNA
e identificar las etapas indispensables del proceso.
2.- Conocer la utilidad de la extracción de DNA.
3.- Conocer las aplicaciones y usos de la identificación de
DNA.
4.- Aprender el uso de los materiales de laboratorio de
biología molecular.
5.- Desarrollar el interés y la habilidad de los estudiantes
en las técnicas de Biología Molecular aplicadas
actualmente en el diagnóstico médico.
1.- Realizar correctamente los procedimientos que de
acuerdo a la norma vigente son competencia propia del
médico general de atención primaria en salud.
2.- Integrar con rigurosidad científica los fundamentos de
las ciencias básicas, clínicas y sociales en la práctica de
la medicina.
Definir los fundamentos de las técnicas de diagnóstico
molecular, interpretar los distintos tipos de pruebas,
describir las bases de la biotecnología aplicada a la
Medicina.
2
5.3. Resultado de aprendizaje del módulo NO APLICA
5.4. Resultado de aprendizaje de la Se obtendrá DNA que se podrá visualizar como una
práctica masa muy pequeña blanquecina que puede ser
sometido a varias pruebas, como electroforesis y PCR.
6. PRERREQUISITOS Conocimientos teóricos de las técnicas de laboratorio de
biología molecular.
7. PREGUNTAS MOTIVADORAS 1. ¿Cuál es el fundamento teórico de Extracción de
DNA?
2. ¿Para qué sirve el buffer de lisis celular de DNA?
3. ¿Qué tipo de extracciones de DNA se puede realizar?
4. ¿En qué consiste la extracción por columnas
8. MATERIALES  Muestra de sangre
 Tubos plásticos libres de DNAsas para microcentrífuga
de 1.5 mL
9. REACTIVOS  Kit de extracción PureLink Genomic DNA
 Proteinasa K
 RNAasa
 Etanol 96-100%
10. EQUIPOS  Centrífuga
 Vortex
 Baño maría
 Juego de micropipetas
11. MATERIAL QUE DEBE TRAER EL  Gafas de protección, pijama quirúrgico y mandil
ESTUDIANTE  Manual de laboratorio de BM impreso
12. PROCEDIMIENTO LISIS
1.- Calentar el baño maría a 55ºC. En un tubo plástico
libre de DNAsas para microcentrífuga de 1.5 mL y colocar
200 µL de sangre periférica con EDTA.
2.- Añada 20 µL de proteinasa K y 20 µL de RNAsa A.
Vortex breve y se incuba 2 minutos a temperatura
ambiente.
3.- Añada 200 µL de Lysis Buffer. Mezcle usando el
vórtex. Incubar a 55ºC por 10minutos.
4.- Anadir 200 µL de etanol 90-100%. Mezclar usando
vórtex hasta obtener una solución homogénea.

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 UNIÓN DEL DNA A LA COLUMNA
5.- Añadir el lisado anterior (~640 µL) a la columna.
Centrifugar la columna a 10000 xg durante 1 minuto a
temperatura ambiente. Desechar el tubo de colección y
colocar la columna en un tubo colector limpio.

LAVADO
6.- Añadir 500 µL de Wash Buffer 1. Centrifugar la
columna a 10000 xg durante 1 minuto a temperatura
ambiente.
7.- Desechar el tubo de colección y colocar la columna en
un tubo colector limpio. Añadir 500 µL de Wash Buffer 2.
8.- Centrifugar la columna a máxima velocidad durante 3
minutos a temperatura ambiente.

ELUCIÓN DEL DNA

9.- Colocar la columna en un tubo eppendorf de 1.5ml
estéril y rotulado. Añadir de 25 a 200 µL de Elution Buffer
a la columna. Incubar a temperatura ambiente por 1
minuto.
10.- Centrifugar a máxima velocidad por 1 minuto a
temperatura ambiente.

CONSERVACIÓN DEL DNA

1.- Conservar el DNA purificado a 4ºC hasta su uso.

13. EVALUACIÓN / LISTA DE COTEJO*

RÚBRICA DE EVALUACIÓN DE PRÁCTICAS

ESCALA DE CALIFICACIÓN
LISTA DE COTEJO DESEMPEÑO Y CUMPLIMIENTO DEL ESTUDIANTE
(Aspectos generales que se evalúan en el desempeño y cumplimiento del
estudiante y puntaje de calificación)

4
 Excelente 6 Muy bueno 4-5 Bueno 2-3 Malo 1
(Identifica, describe, (Identifica, describe, (Identifica, describe, (NO identifica,
12.1.Indicador aplica, emplea, aplica, emplea, aplica, emplea, describe, aplica,
comunica, integra: comunica, integra: comunica, integra: emplea, comunica o
TODO) LA MAYORÍA) ALGO) integra)
Conoce los fundamentos de
las técnicas de extracción de
ácidos nucleicos
Conoce las propiedades
físicas químicas de los ácidos
nucleicos
Conoce la utilidad o aplicación
de las pruebas de DNA
Conoce los diferentes
métodos de extracción de
DNA y cuándo se deben
utilizar
*CALIFICACIÓN DE LA
PRÁCTICA (PROMEDIO /6):
*La evaluación en base a la rúbrica establecida, constituye una participación del estudiante y aporta a la construcción del
60% de la calificación parcial de la asignatura.

14. ACTIVIDADES COMPLEMENTARIAS

1.- Realizar un informe de la práctica realizada (ver Informe Modelo) (4 ptos).

2.- Responder al siguiente cuestionario al final del Informe (2 ptos):
1. ¿Qué función cumplen la proteinasa K?
2. ¿Qué función cumplen la RNasa A?
3. De acuerdo a la literatura, ¿qué función cumple el Genomic Lysis / Binding Buffer?
4. ¿Qué función y componentes constituyen el Wash Buffer?
5. ¿Para qué se utiliza el Genomic Elution Buffer, cual es el fundamento de su acción?
6. ¿De qué tamaño molecular es el DNA que se puede obtener por la técnica aplicada?
7. ¿Qué factores pueden alterar la pureza del DNA extraído?
8. ¿Qué modificaciones hay que realizar al protocolo para extraer RNA?

15. BIBLIOGRAFÍA

Ausubel, F., Brent, R., Kingston, R., Moore D., Seidman, J. G., Smith, J., Struhl, K. (2002). Short
Protocols in Molecular Biology (Quinta ed.). New York: Wiley.

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GLOSARIO
Apoyo curricular: Grupo de contenidos teóricos o prácticos que forman parte del módulo que integra la asignatura modular.
Asignatura: Nombre de la asignatura que consta en la malla académica.

Bibliografía: Textos, artículos, ensayos que referencian la práctica.

Equipos: Todos los equipos que van a utilizarse en la práctica. Estos equipos se encuentran disponibles en los diferentes laboratorios de la
FCSEE.

Especialidad médica del facilitador: colocar una X en la especialidad que corresponda al docente (facilitador).

Evaluación / lista de cotejo: Actividades y competencias que el estudiante realiza y adquiere durante la práctica (se desprenden del
procedimiento). Son sujetas de evaluación mediante la utilización de una rúbrica.

Guía de práctica: Documento que contiene la planificación de la práctica y abarca los aspectos conceptuales, procedimentales y evaluativos.

Laboratorio asignado para la práctica: Laboratorio en que se realiza la práctica. Colocar una X en el laboratorio que corresponda.

Material que debe traer el estudiante: Todo material que el estudiante debe tener para realizar su práctica. Se constituye en material propio del
estudiante. El laboratorio no entrega este material.

Materiales: Todos los materiales que van a utilizarse en la práctica. Estos materiales serán entregados al docente.

Módulo: Nombre del módulo que forma parte de la asignatura modular.

Personal técnico de apoyo: Profesional técnico auxiliar. Colocar una X en la opción que corresponda de acuerdo a la necesidad o no de contar
con personal técnico auxiliar.
Práctica conductual: Práctica formativa con simuladores o equipos, que permite corregir la conducta del estudiante frente al paciente o situación
simulados. Esta práctica está reservada a aquellas prácticas integrales que evalúan varios procedimientos al mismo tiempo.
Práctica formativa no simulada: Toda práctica que se realice sin la utilización de simuladores.

Práctica formativa simulada: Toda práctica que se realice utilizando simuladores.

Preguntas motivadoras: Preguntas introductorias a la práctica y que el estudiante debe preparar para su discusión durante la práctica.

Prerrequisitos: Contenidos teóricos que el estudiante debe revisar y saber para presentarse a la sesión de práctica.

Procedimiento: Descripción en infinitivo de todos los pasos que deben seguirse durante la práctica.

Reactivos: Todos los reactivos que van a utilizarse en la práctica. Estos reactivos serán entregados al docente.

Resultado de aprendizaje de asignatura: Resultado de aprendizaje de la asignatura que aporta al resultado de aprendizaje de la carrera.

Resultado de aprendizaje de la carrera: Resultado de aprendizaje de la carrera que consta en el sílabo y al que aportan tanto la asignatura
como el módulo y la práctica y que se constituye en el perfil de egreso.
Resultado de aprendizaje de módulo: Resultado de aprendizaje del módulo que aporta al resultado de aprendizaje de asignatura y carrera.

Resultado de aprendizaje de práctica: Resultado de aprendizaje de la práctica y que aporta al resultado de aprendizaje del módulo, asignatura y
carrera.

Retroalimentación-Debriefing: Esto permanece sin cambios. Indica los dos tipos de retroalimentación que realiza el facilitador a sus estudiantes
al finalizar la práctica.

Rúbrica: Parámetros y escala de evaluación sobre los cuales el facilitador (docente) realizará la evaluación.