Transcripción

El flujo de la información genética de las células tienen lugar generalmente desde ADN al
ARN y las proteínas. El ADN sirve como molde para la síntesis de una molécula de ARN en
la mayoría de las casas dirige la síntesis de una proteína concreta. El principio del flujo
direccional de la información del ADN al ARN y proteína se conoce como dogma central de
la biología molecular.

El término transcripción se utiliza para referirse a la

síntesis de ARN usando el ADN como molde. La síntesis de
proteínas se denomina traducción porque implica un
cambio del lenguaje de una secuencia de nucleótidos a una
secuencia de aminoácidos en una cadena polipeptídica.

El ARN que se traduce a proteína se denomina ARN

mensajero (ARNm) ya que lleva en la información del ADN
a los ribosomas dónde se sintetizan proteínas.

Hay otros tipos de ARN implicados en la síntesis de proteínas: ARN ribosómico (ARNr),
que forman los ribosomas, ARN de transferencia (ARNt) qué transcribe en la secuencia
base codificada en el ARN mensajero y llevan el aminoácido adecuado al ribosoma.
ARNsn y otros, ARN pequeños que cumplen su función por sí solos.

Código genético
Existe una relación entre la secuencia de bases de
nucleótidos en el ADN y el orden lineal de aminoácidos
en una pregunta. Esta relación está basada en un
conjunto de reglas conocida como código genético, que
dice como el ADN puede codificar proteínas. Este código
es universal y se encuentra conservado en todos los
organismos vivos (con pequeñas excepciones). La
información genética para el ensamblaje de aminoácidos
se encuentra almacenada en pequeñas secuencias de
tres nucleótidos que en el ARNm se
denominan codones. Cada codón representa uno de los
veinte aminoácidos empleados en la fabricación de
proteínas. El código se representa en una tabla que
identifica el aminoácido codificado por cada codón. El
número de codones posibles es 64, de los cuales 61
codifican aminoácidos (siendo además uno de ellos el
codón de inicio, AUG) y los tres restantes son sitios de
parada (UAA, UAG, UGA).

El código genético es degenerado, lo que significa que puede haber más de un codón codificando para un mismo
aminoácido. La mayor parte de esta degeneración se debe a variaciones en el tercer nucleótido de un codón. De los 20
aminoácidos clásicos, sólo dos (metionina y triptófano) están codificados por un sólo codón. En el extremo contrario, tres
aminoácidos (leucina, serina y arginina) están codificados por seis codones cada uno. Los distintos codones que codifican
para un mismo aminoácido se denominan codones sinónimos.

La existencia de codones sinónimos permite que ciertas mutaciones puntuales (mutaciones silenciosas) carezcan de
consecuencias para el organismo, al afectar a los nucleótidos no coincidentes de codones sinónimos. Por ejemplo, si en la
secuencia del ARNm aparece un codón GCA, la mutación del tercer nucleótido (A) a cualquier otro (G, U, C), aunque altere
de manera permanente la secuencia hereditaria (el gen) no tendrá consecuencias, dado que el nuevo codón seguirá
codificando para el mismo aminoácido (alanina) y no se verá alterada la proteína final.
 Transcripción en procariontes
las células bacterianas tienen un tipo de ARN polimerasa que sintetiza los 3 tipos
fundamentales de ARN (ARNm, ARNt y ARNr). Esta enzima es una proteína
grande que consta de una subunidades α, dos subunidades β (β y β’) y una
subunidad disociable denominada factor sigma (σ). Aunque el núcleo
enzimático, que se encuentra en la subunidad sigma puede llevar al cabo la
síntesis de ARN, se requiere la holoenzima completa (α2 β β’ σ) para asegurar
la iniciación en los sitios adecuados. La subunidad sigma promueve la unión de
la ARN polimerasa a secuencias específicas del ADN denominadas promotores
que se encuentra en el principio de los genes. Una vez el factor Sigma ha llevado
a la AR de primeras al promotor adecuado de los factores Sigma se libera cuando
empieza la transcripción.

La transcripción consta de 3 pasos:

Iniciación, elongación y terminación.

La síntesis de ARN empieza con la unión de una ARN polimerasa a un

promotor del ADN que desencadena el desenrollamiento local de la doble
hélice de ADN para usar una hebra como molde. Generalmente la ARN
polimerasa se une a la caja TATA, que se encuentra aprox. 10 bases corriente
arriba de la secuencia de inicio (-10, es decir antes) y a la secuencia TTGACA
que se encuentra -35 bases del inicio (estas secuencias no son idénticas en
todos los promotores). El punto donde comienza la transcripción denominada
punto de inicio. Entonces, en la elongación, la ARN polimerasa inicia la
síntesis de una cadena de ADN moviéndose a lo largo de la hebra molde
polimerizando en dirección 5’ a 3’, alargando al mismo tiempo la cadena de
ARN. Durante este proceso la enzima cataliza la polimerización de los
nucleótidos en un orden complementario a la hebra molde.
En la etapa de termino la enzima transcribe una secuencia especial
denominada señal de término finaliza la síntesis de ARN y facilita la liberación
de la molécula de ARN completa y la disociación de la polimerasa del molde.

En bacterias se pueden distinguir dos tipos de señales de termino que difieren en el requerimiento o no de la participación
de una proteína denominada factor rho.

La terminación rho independiente contienen una

secuencia corta rica en GC seguida de varios residuos
U cerca del extremo 3’. Las región GC contiene
secuencias complementarias entre sí lo que genera un
plegamiento espontáneo de la RN formándose una
horquilla que tiende a liberar el ARN del ADN. Después
se rompen los puentes más débiles entre los residuos U
de la secuencia de ARN liberando la molécula de ARN
sintetizada y la ARN polimerasa.

La terminación rho dependiente no forman una horquilla, Sino

que el factor rojo según la secuencia determinación específica
localizada cerca del extremo 3’, actuando como una enzima
dependiente de ATP qué separa el híbrido de ADN-ARN al
encontrar a la ARN polimerasa.

Las bacterias no tienen compartimentos membranosos que

separen la transcripción de la traducción, es por esto que
ocurren de forma simultánea. A medida que se alarga el
transcrito, aparecen los ribosomas y comienza la síntesis de
proteínas Sin importar si la transcripción ha terminado.
Transcripción en eucariontes
Son 3 ARN polimerasas distintas que transcriben el ADN en eucariontes: ARN polimerasa I, II y III. Las ARN polimerasas
nucleares son sensibles a varios inhibidores, como la α-amanitina, una toxina mortal producida por el hongo Amanita
phalloides.

La RNA polimerasa I se encuentra en el nucleolo y es la responsable de la síntesis de una molécula de RNA que sirve
como precursor de tres de los cuatro tipos de rRNA encontrados en los ribosomas eucariotas. Esta enzima no es sensible
α-amanitina.

La RNA polimerasa II se encuentra en el nucleoplasma y sintetiza precursores del mRNA, la molécula de RNA que
codifica proteínas. Además, la RNA polimerasa II sintetiza la mayoría de los RNAsn (RNA pequeños nucleolares),
implicado en el procesamiento postranscripcional. Esta enzima es extremadamente sensible a α-amanitina, lo que explica
la toxicidad de este compuesto para los humanos y otros animales.

La RNA polimerasa III también es una enzima nucleoplásmica, pero sintetiza distintos tipos de pequeños RNAs,
incluyendo precursores del tRNA. La RNA polimerasa III es sensible a α-amanitina, pero sólo a niveles mayores de los
requeridos para inhibir a la RNA polimerasa II.

Los promotores a los que unen las ARN polimerasas se pueden agrupar en 3 categorías principales, una para cada tipo
de polimerasa.

El promotor que utiliza la ARN polimerasa I tiene dos partes. En la parte denominada núcleo del promotor, qué es la
secuencia mínima necesaria para controlar exactamente la iniciación de la transcripción, se prolonga hasta la secuencia
de nucleótidos que va a transcribir. Es suficiente para que se de iniciación de la transcripción adecuada, pero la
transcripción tiene lugar de forma más eficiente si está presente un elemento de control corriente arriba qué tiene longitud
bastante similar a la del núcleo promotor. El anclaje de los factores de transcripción ambas parte facilita la unión de la
enzima al ADN.

En la ARN polimerasa II hay 4 tipos de

secuencias implicadas en la función del núcleo
del promotor. 1) Secuencia corta de iniciación.
2) caja TATA, que se encuentra 25 nucleótidos
rio arriba (-25). 3) El elemento de
reconocimiento TFIIB (BRE). 4) El elemento
promotor corriente abajo (DPE) (+30).

Los promotores usados por todas las ARN

polimerasas deben ser reconocidos por los
factores de transcripción antes de que una ARN
polimerasa pueda unirse al ADN.
Un factor de transcripción general es una proteína que siempre es necesaria
para que la ARN polimerasa se una al promotor e inicie la síntesis de ARN (sus
nombres suelen incluir TF, un número romano para identificar a la polimerasa
que asisten y una letra mayúscula para identificarlas individualmente).

Los factores de transcripción generales se unen los promotores en un orden

definido, empezando por TFIID, que se une a la caja TATA o DPE. Luego se
unen TFIIA y TFIIB. El complejo resultante se une ahora a la polimerasa, a la
que ya se ha unido el factor TFIIF. El complejo de preiniciación se completa
con la adición de TFIIE y TFIIH. Después de un paso de activación que requiere
fosforilación de la RNA polimerasa, dependiente de ATP, a polimerasa puede
iniciar la transcripción.

El factor de transcripción TFIIH posee actividad helicasa y actividad kinasa

que cataliza la fosforilación de la ARN polimerasa II. La fosforilación cambia la
forma de la aerolínea polimerasa liberándola de los factores de transcripción
para poder iniciar la síntesis de ARN. La actividad helicasa el desarrollo del
ADN no para que la ARN polimerasa puede comenzar a moverse.

Luego de iniciar la transcripción, la elongación comienza cuando la ARN

polimerasa se mueve a lo largo de ADN polimerizando una hebra de ARN
mensajero en dirección 5’ a 3’.
Pueden ocurrir múltiples transcripciones en la misma hebra molde con múltiples
ARN polimerasa y varias rondas de transcripción, generando así muchas
copias de ARNm en poco tiempo. A 37 °C la velocidad promedio en que son
agregados los nuevos nucleótidos es de 42-54 nt/s en bacterias y 22-25 nt/s en
eucariontes.

La terminación comienza con una señal de poliadenilación (se agregan

muchas adeninas) en el transcrito de ARN. La secuencia poliA es reconocida
por una enzima que corta el ARNm liberándolo de la polimerasa. La ARN
polimerasa sigue transcribiendo hasta que se “suelta” del ADN. (el ARN
transcrito mas allá de la terminación, no es traducido)

Procesamiento del ARN

La conversión de moléculas de pre-ARNm a
moléculas de ARNm funcional requiere normalmente
la eliminación de secuencias de nucleótidos así como
la adición de casquetes en el extremo 5’ y colas en el
extremo 3’.

El casquete en el extremo 5’, es un nucleótido de

guanosina que ha sido metilado en la posición 7 del
anillo de purina, 7 metilguanosina. Esta característica
se añade al transcrito primario poco después de la
iniciación de la síntesis de ARN. Este casquete
contribuye a la estabilidad del ARNm, protegiéndolo
de la degradación por nucleasas.

Después de la transcripción la enzima poli A

polimerasa cataliza la adición de secuencias de poli A
al ARN sin la necesidad de un ADN molde en el
extremo 3’, formando la cola poli A. En la cola protege
el ARNm del ataque de nucleasas por lo que en longitud está con la influye en la estabilidad del ARNm.

El pre-ARNm contiene intrones, que son de ARNm que no codifican proteínas. Y para tener un ARNm funcional se deben
eliminar los intrones y empalmar los segmentos de ARN restantes que se codifican proteínas (Exones). Este proceso de
eliminación de internet y empalme de exones se denomina splicing.
La eliminación de internet se está catalizado grupo un complejo proteico
denominado espliceosoma.

El pre-ARNm se ensambla con las U1, U2(en la secuencia de ramificación,

UACUAAC) y U4/U6 y U5 formando el espliceosoma maduro. El pre-ARNm se
corta después en el sitio de empalme 5’ y el nuevo extremo 5’ liberado se une
al nucleótido de adenina (A) situado en la secuencia del punto de ramificación,
generando una estructura en forma de bucle (lazo). El sitio de empalme 3’ se
corta y se unen los dos extremos del exón, liberando el intrón para su posterior
degradación.

“el extremo 5' (izquierda) del intrón se corta (→) y se forma una estructura que
se parece a un lazo entre el extremo Gat 5 del intrón y una A cerca del extremo
3, en la secuencia consenso UACUAAC. Esta secuencia se denomina sitio de
ramificación, y es la 3' mas A que forma el enlace 5' – 2' con la G. El extremo
3'
(derecho) del intrón se corta (⇓). Esto libera el lazo, que se digiere, y el exón 1
se une al exón 2 en los residuos G. *Los intrones son removidos y los exones
son empalmados.”

𝛃-talasemia: un error de splicing

La secuencia de nucleótidos en la región de unión entre exones e
intrones determina el correcto funcionamiento del splicing. Si la
secuencia cambia en ARN no se procesará de forma adecuada y
la proteína resultante será defectuosa. Estas alteraciones también
podrían llevar a cáncer al generar transcritos extraños con
funciones potencialmente dañinas para la célula: existen
mutaciones somáticas que afectan el splicing del ARN del gen
NF1, un gen supresor de tumores. Una mutación en un único
nucleótido del primer intrón del gen de la cadena 𝛃hemoglobina
puede afectar el patrón de splicing. En este caso, se impide la
eliminación del intrón alterando el marco de lectura.

Empalme alternativo
Es el proceso donde los exones se ordenan de distinta forma,
se empalman de forma distinta, incluso con menos exones.

Permite la generación de diferentes ARNm (y proteínas) a

partir de distintos patrones, aumentando el potencial genético
de un organismo. Su ocurrencia es muy frecuente y se da en
más de la mitad de los genes humanos.

Promotor alternativo
El uso de un promotor alternativo en los genes de la
glucokinasa (GK) de las células 𝛃 del hígado y páncreas
permite la regulación diferencial y patrones de expresión
específicos. En el hígado, la expresión de GK es
controlada por la insulina y el AMPc mientras que en el
páncreas es regulada por la glucosa.
La Enfermedad de Duchenne
La distrofina es necesaria para que los músculos del cuerpo puedan protegerse al contraerse y relajarse. Los niños con
Duchenne no pueden producir la proteína distrofina, lo que hace que los músculos se debiliten con el tiempo. El ARNm de
la distrofina contiene 79 exones. Las alteraciones en esta enfermedad se producen por una deleción de uno o más exones,
lo que altera el marco de lectura.

Patologías Asociadas a splicing

Mutaciones que afectan a proteínas de splicing:

-Atrofia muscular espinal

-Retinitis pigmentosa

-Distrofia miotónica

Mutaciones que afectan al ARNm y alteran el patrón de splicing:

-𝛃-talasemia

-Distrofia muscular de Duchenne

-Fibrosis quística

-Síndrome de Prasier

-Demencia fronto-temporal y parkinsonismo.

Estructura de un gen
 Traducción
La traducción implica un cambio de lenguaje desde la secuencia de nucleótidos de un ARNm
a la secuencia de aminoácidos de una cadena polipeptídica. La maquinaria celular para la
traducción consta de 5 componentes: los ribosomas, ARNt, aminoacil-ARNt-sintetasas,
ARNm y los factores proteicos.

Los ribosomas están compuestos de ARNr y proteínas. Se pueden encontrar tanto en el

citosol, como unidos a la membrana del retículo endoplasmático. Los ribosomas constan de
dos unidades disociables: subunidad menor y subunidad mayor.

En el ribosoma existen 4 lugares importantes para la síntesis de proteínas: sitio

de unión del ARNm, un sitio A (aminoacil), donde se une cada nuevo ARNt que
llega portando un aminoácido, un sitio P (peptidil), donde reside el ARNt que lleva
la cadena polipeptídica en la formación, un sitio E (exit) desde el cual los ARNt
apuntó en el río zona después de haber descargado sus aminoácidos.

El ARN de transferencia es un intermediario entre el ARNm y los aminoácidos.

Cada ARNt une a un aminoácido específico y cada uno reconoce uno o más
codones de los ARNm ,cuando este es complementario al anticodón del ARNt,
qué especifican el aminoácido particular. Los ARNt se unen a sus aminoácidos
correspondientes por un enlace éster en su extremo 3’.

La aminoacil-ARNt sintetasa unen los aminoácidos a sus respectivos ARNt. El proceso de

aminoacilación de una molécula de ARNt se denomina activación del aminoácido. La
aminoacil-ARNt sintetasa reconoce nucleótido localizados en al menos dos regiones
distintas del ARNt posteriormente lo une al aminoácido correspondiente.

El aminoácido y una molécula de ATP entran en el sitio activo de la enzima.

Simultáneamente, el ATP pierde el pirofosfato, y el AMP resultante se une covalentemente
al aminoácido. El pirofosfato es hidrolizado a 2 Pi. El tRNA se une covalentemente al
aminoácido, desplazando al AMP. El aminoacil tRNA se libera después de la enzima.

El ARN mensajero, que lleva la información para formar la cadena de polipéptidos, posee
un codón de iniciación AUG que se traduce en metionina y un codón stop que puede ser
UAG, UAA o UGA.

Los factores proteicos necesarios para la iniciación de la traducción, otros para la

elongación de la cadena otros para el término de la
síntesis.

Mecanismo de traducción
La traducción de ARNm en dirección 5’ a 3’ consta de tres fases: la fase de
iniciación, la fase de elongación, y una fase de terminación.

Inicio en procariontes
Los 3 factores de iniciación, IF1, IF2 e IF3, se unen a la subunidad menor con un
GTP unido a IF2. El ARNm y el ARNt se unen a la subunidad ribosómica menor y se
liberan IF1 e IF3. El ARNm se une a esta subunidad gracias a la secuencia Shine-
Dalgarno (sitio de unión al ribosoma), La que consta de un conjunto de 3 a 9
nucleótidos de purina (AGGA) localizados por delante del codón de inicio (rio arriba).
La unión del ARNm a esta secuencia sitúa el codón de inicio AUG en el sitio P del
ribosoma (subunidad mayor). Una vez que el met-ARNt entre al sitio P, se produce
la hidrólisis del GTP asociado a IF2 y esta abandona el complejo ribosómico.
Formando el complejo de iniciación.
Inicio en eucariontes
El proceso de iniciación en eucariontes requiere un conjunto
diferente de factores de iniciación, denominados eIFs. El
factor de iniciación eIF2 ya unido con el GTP, se une al
iniciador met-ARNt para unirse a la subunidad menor del
ribosoma junto con otros factores de iniciación. El complejo
resultante se une después del extremo 5’ del ARNm,
reconociendo el casquete. Luego la subunidad menor con el
met-ARNt rastrea a lo largo del ARNm para hallar el codón
de inicio AUG.

Cuando el ARNt se aparea con el codón de inicio, la

subunidad mayor del ribosoma se une al complejo,
ubicando el met-ARNt en el sitio P. Luego lo eIFs se liberan
para dar paso a la elongación.

Elongación
La elongación de la cadena durante la síntesis de
proteínas requiere la presencia de un peptidil tRNA
o, en el primer ciclo de elongación un met-ARNt en
el sitio peptidil (P). (1) La elongación empieza con la
unión del segundo aminoacil-tRNA al sitio aminoacil
(A) del ribosoma. El tRNA es transportado al sitio A
por el factor de elongación EF-Tu, que también lleva
unido GTP. Cuando el tRNA se une se produce la
hidrólisis de GTP y se libera EF-Tu. EF-Ts facilita el
reciclaje de EF-Tu. (2) Se forma un enlace
peptídico entre el grupo carboxilo de la Met del sitio
P y el grupo amino del nuevo aminoácido situado en
el sitio A. Esta reacción está catalizada por la
actividad peptidil transferasa de la molécula de
rRNA 23S de la subunidad mayor del ribosoma. (3)
Tras la unión del EF-G-GTP al ribosoma, se
hidroliza el GTP y el tRNA que lleva el polipéptido
elongado se trasloca del sitio A al P. El tRNA
descargado se desplaza del sitio P al sitio E (salida)
y deja el ribosoma. La traslocación del peptidil tRNA
desplaza también al mRNA. En consecuencia, el
siguiente codón del mRNA se desplaza al sitio A,
que está abierto para el siguiente aminoacil tRNA.
Este ciclo se repite cada vez que se añade un nuevo
aminoácido.
Terminación
El codón de stop es reconocido por proteínas denominados uno de factores de
liberación/término, eRF3, que mimetizan la estructura de un ARNt, y llevando
un GTP se une al sitio A del ribosoma finalizan la traducción, puesto que separan
la cadena polipeptídica completa del peptidil ARNt.

La proteína sintetizada es hidrolizada y liberada por el eRF1 del ARNt. La

proteína recién formada y el factor de terminación se desprenden del ribosoma,
terminando así la traducción.

Wobble: apareamiento titubeante de bases

Si el apareamiento del codón con el anticodón siguiera las reglas de
Watson y Crick, se necesitarían 61 ARNt diferentes.

• En la célula suelen haber menos de 61 ARNt diferentes (∼40 ARNt)

aunque en E. coli K12 se han encontrado 84 ARNt.

• Francis Crick propuso en 1966 que la base 5’ del anticodón (que se

aparea con la posición 3’ del codón) es capaz de fluctuar por lo que
podían formarse puentes de hidrogeno alternativos entre G y U.

Como se puede observar en la imagen, el anticodón el ARNt y

el codón correspondiente del ARNm pueden aparearse bien
aun y cuando el ultimo nucleótido del codón del ARNm no se
aparee de manera correcta, es decir que esta posición quede
“tambaleando”.